Objetivo Introduccin a las separaciones cromatogrficas

Mtodos de Separacin Capitulo 26

Describir los mtodos para separar varios componentes de una muestra antes de su determinacin. Introduccin a la tecnologa y teora de la separacin con nfasis sobre la optimizacin de las variables experimentales para un anlisis eficiente tanto cualitativo como cuantitativo.

CROMATOGRAFIA

Descripcin General de la Cromatografa

Inventada por el botnico ruso Mikhail Tswett (1900) para separar los distintos pigmentos de la clorofila pasndola por una columna de carbonato de calcio Croma= color Graphein= escrito

Descripcin general

La muestra se transporta en una FASE MOVIL ( GAS, LIQUIDO O FLUIDO SUPERCRITICO). La FM se fuerza a pasar a travs de una FASE ESTACIONARIA INMISCIBLE. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la FE se mueven lentamente con el flujo de la FM. La distinta movilidad hace que los componentes se separen en bandas o zonas que pueden ser analizadas .

Clasificacin de los mtodos cromatogrficos

A) Cromatografa en columna.
FE=Columna FM eluye bajo presin

B) Cromatografa plana.
FE=Plato, FM eluye por gravedad

A) cromatografa liquida.
FM= liquido

B) Cromatografa de gases.
FM= gas

C) Cromatografa de fluidos supercrticos.

FM= fluido supercrtico

Cromatografa en columna

Cromatografa en Columna

Cromatografa en columna:

Velocidad de migracin y anchura de pico en la resolucin.

El movimiento del soluto puede solo ocurrir con la L.M. La velocidad promedio a la cual la banda del soluto migra en la columna depende de la fraccin de tiempo que pase en la F.E. El tamao de la banda del soluto aumenta con el tiempo debido al proceso de dilucin.

Velocidad de migracin del soluto

La velocidad de migracin se determina por la longitud de la K de equilibrio para las reacciones en las que los solutos se distribuyen entre la fase mvil y la F.S.

Constantes de distribucin:
Amvil Q Aestacionaria K= C
estacionar ia

C mvil

: C

CM

C=concentracin molar

K= constante de distribucin, razn de particin, coeficiente de particin.

Tiempo de retencin

Relacin entre tR y K

Tiempo que tarda la muestra inyectada, para el pico del analito, en alcanzar el detector. (tR)

tM: tiempo muerto para especies no retenidas. (tiempo requerido para que una molcula de la F.M. pase a las de la columna).
L tR

Expresamos la velocidad de migracin como una fraccin de la velocidad de la F.M.

v = u x fraccin de tiempo que el soluto pasa en la F.M. v=ux
moles de soluto en F .M moles totales de soluto

Velocidad lineal promedio de migracin del soluto

v= L = longitud de la columna

Numero total de moles de soluto en la F.M = CM X VM Numero de moles de soluto a la F.S = CS X VS V=ux

Velocidad lineal promedio del movimiento de las molculas en la fase mvil. = L tM

C MV M =ux C SV S + C M V M

1 +

1 C SV S C MV M

Relacin entre tR y K

Relacin entre tR y K
V=ux
1 1 + k' A
VS VM

Como K= C S CM

v=ux

1 1 + K

sustituimos velocidad por sus definiciones. despejamos KA

Designamos el parmetro KA como factor de retencin o factor de capacidad que describe la velocidad de migracin de un soluto A.

L L = X tR tM
tR tM

1 1 + k'A

K AV S KA = V M

1 + k A =

: kA =

tR - 1 ; kA = t R t M tM tM
Se obtienen del cromatograma

Relacin entre tR y K

Relacin entre tR y K

Si kA < 1 elucin muy rpida, poca fiabilidad de deteccin. kA 20,30 elucin muy lenta. kA 2-10 ideal. Definimos como factor de selectividad para dos especies A,B.
=
K K
B A

B: sustancia que se retiene fuertemente mas, que A.

Luego > 1

Si

KA VS KA = VM y KB =

K B V S VM

KA =

k ' A VM VS

KB =

k ' B VM VS

k ' B V M /V S k ' A VM /VS

; =

k' B k' A

si kA = t R t M tM

Relacin entre tR y K
=

(t ) (t )
R R

B A

tM tM

Veremos como utilizar el K y para incrementar la resolucin de una columna. Eficiencia Se utilizan dos trminos para medir cuantitativamente la eficiencia de una columna: Altura del plato terico : H Nmero del plato terico: N

Fig 30-10, p.928

Eficacia o eficiencia

Eficacia o eficiencia

Se utilizan dos trminos para medir cuantitativamente la eficiencia de una columna: Altura de plato terico H Numero de platos tericos N N =L/H L= longitud del relleno de la columna

H, N pueden ser obtenidas mediante el ancho de pico cromatogrfico. La eficacia aumenta cuanto mayor el numero de platos exista y cuanto menor es la altura de plato. Martin y Synge (1941) trataron a la columna como una columna de destilacin fraccionada formada por capas denominadas plato terico donde se establece el eq. del soluto entre la FE y FM. La teora de platos explica con xito la forma gaussiana de los picos cromatogrficos. Falla al intentar justificar el ensanchamiento de los pico , surge la terica de la velocidad

Definicin de altura de plato

Comparamos el pico con una distribucin gaussiana Definicin de altura de plato como:
H=

2 = varianza del pico del analito (cm2)

2 se puede obtener grficamente

Fig 30-12, p.931

Mtodos para describir la eficacia

Fig 30-11, p.929

Mtodos para describir la eficacia

Mtodos para describir la eficacia

N = 5.54 (
tR w1 / 2

W = 4 (base del tringulo) =

LW 4tR

grficamente

)2

Si H =

2
L

H=

LW 2 16 tR 2
R

usando la mitad de la anchura del pico usando la anchura del pico

N = 16 ( t )2 w1/2= 2.35
W

Table 30-5, p.932

Fig 30-13, p.933

Relacin entre H y las variables de la columna

Fig 30-15, p.936

A= Trayectoria mltiple.

Fig 30-14, p.935

Difusin longitudinal B/u

Coeficientes de transferencia de masa

Mtodos para describir la eficacia

Fig 30-16, p.936

Fig 30-8, p.923

Fig 30-17, p.937

Fig 30-19, p.941

Fig 30-20, p.942

Variables que afectan a la separacin cromatogrfica.

Segn la ecuacin Rs=

N 4

1 )

'B K ( ) 1+ K 'B

Existen unos parmetros que sirven de gua para elegir las condiciones cromatogrficas mas favorables para una separacin en un mnimo de tiempo.
p.946

Variables que afectan a la separacin cromatogrfica.

Variables que afectan a la separacin cromatogrfica.

Observando la ecuacin podemos decir que est constituida por 3 componentes

Dependiente de

Podemos ajustar mas o menos independientemente , y N para mejorar R.

y k
pueden variar mas fcilmente variando la T composicin de la fase mvil tipo de columna (empaquetamiento). puede variarse cambiando la longitud de la columna. alterando la velocidad de flujo de la fase mvil el tamao de partcula de empaquetamiento la viscosidad de la fase mvil el espesor de la pelcula absorbida de la FE

relacionada por la cintica. relacionadas con las propiedades de los solutos relacionadas con las propiedades del soluto y de la columna

Dependiente de

NyH

Dependiente de k

Variacin de N
Aumenta el nmero de platos, acompaados de una reduccin de H. (as se optimiza el tiempo requerido para completar la separacin)

Variacin de kB

Aumenta kB:
Rs=
k > B

Q k' B 1+ k' B

tR = Q

(1 + k' )3
B

Variacin de H
Reduccin de H disminuir el tamao de partcula en CL reducir la viscosidad del solvente (aumentar coeficiente de difusin de la FM).

10 deben ser evitados porque poseen poco incremento a la resolucin e incrementa marcadamente el tR. El mnimo tR ocurre a KB 2 El optimo kB [1-5] teniendo en cuenta R y tR. Para GC : k aumenta al aumentar T. Para LC : cambiar FM: ej. razn CH3CH2OH/H2O

k' B 2

Variacin en

Incremento manteniendo k 1-10

Cambiar la composicin de la FM, incluyendo cambios en pH principalmente para la separacin de cidos. Cambiar la temperatura de la columna. Cambiar la composicin de la fase estacionaria. Utilizar otros componentes qumicos.

Fig 30-18, p.940