UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE FURG Instituto de Oceanografia Laboratrio de Oceanografia Geolgica Programa de Recursos Humanos n 27 ANP

A CONTRIBUIO DOS BIOMARCADORES NA GEOQUMICA MARINHA

Monografia apresentada Fundao Universidade Federal de Rio Grande, como parte dos requisitos para a obteno do ttulo de Formao em Oceanologia.

Acadmica: vellin Keith Da Collina Orientador: Paulo Roberto M. Baisch Co-orientadora: Maria Isabel Machado

Rio Grande, dezembro de 2011.

Sumrio
RESUMO ......................................................................................................................... 1 1 INTRODUO ............................................................................................................. 2 1.1 Matria orgnica ..................................................................................................... 2 1.2 Biomarcadores geoqumicos .................................................................................. 3 1.3 Principais biomarcadores e suas relaes ............................................................... 6 1.4 Cone do Rio Grande ............................................................................................. 10 1.5 Laboratrio de Oceanografia Geolgica LOG/FURG....................................... 11 1.6 Justificativa ........................................................................................................... 12 2 OBJETIVOS ................................................................................................................ 13 3 METODOLOGIA ........................................................................................................ 14 3.1 Sedimentos do Cone do Rio Grande .................................................................... 14 3.1.1 rea de estudo ............................................................................................... 14 3.1.2 Amostragem .................................................................................................. 15 3.1.3 Coleta de sub-amostra ................................................................................... 16 3.1.4 Analise granulomtrica .................................................................................. 17 3.1.5 Analise dos biomarcadores ............................................................................ 17 3.2 Analise do leo ..................................................................................................... 23 3.3 Elaborao do guia ............................................................................................... 23 4 RESULTADOS E DISCUSSES ............................................................................... 24 4.1 Implementao da analise ..................................................................................... 24 4.1.1 Comparao das Rampas ............................................................................... 24 4.1.2 Quantidade extrada ....................................................................................... 25 4.1.3 Tipo de extrao ............................................................................................ 26 4.2 Cone do Rio Grande ............................................................................................. 27 4.2.1 Colorao dos sedimentos ............................................................................. 27 4.2.2 Granulometria ................................................................................................ 28 4.2.3 Interpretao dos cromatogramas .................................................................. 29 4.3 Anlise do leo ..................................................................................................... 31 4.3.1 Centrifugao................................................................................................. 31 4.3.2 Diluio ......................................................................................................... 31 4.3.2 Interpretao dos cromatogramas obtidos ..................................................... 32 5 GUIA ....................................................................................................................... 34

Maturao ............................................................................................................... 35 Condies Paleoambientais .................................................................................... 38 Origem .................................................................................................................... 38 Contaminao por leo ........................................................................................... 41 6 CONCLUSO ............................................................................................................. 43 7 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ........................................................................ 44

Lista de Figuras
Figura 1: Fase da evoluo da matria orgnica sedimentada. Fonte: Tissot & Welte (1984), apud Silva (2007)................................................................................................. 2 Figura 2: Isopreno, unidade estrutural bsica dos biomarcadores. ................................... 4 Figura 3: Transformao diagentica do percursor Colesterol no biomarcador Colestano, um esterano de 27 carbonos. Fonte: Silva, 2007. ............................................................. 9 Figura 4: Diagrama de propores de HC saturados, aromticos e heterocompostos (NSO), para inferncia da evoluo trmica da MO. Fonte: Silva (2007). .................... 10 Figura 5: Indicao de uma feio caracterstica de escape de gs, encontrada no Cone do Rio Grande. Fonte: Rosa et al. (2006). ...................................................................... 11 Figura 6: Extenso da Bacia de Pelotas com seus limites, e localizao do Cone do Rio Grande. Fonte: Rosa et al., 2006. ................................................................................... 14 Figura 7: Testemunhos selecionados para anlise. Fonte: Google Earth, acesso em 10/10/2011 ...................................................................................................................... 15 Figura 8: Testemunho aberto e amostra em placa de petri. ............................................ 16 Figura 9: Extrao por ultra-som (A); extrao em soxhlet (B); amostra em rotavapor (C). .................................................................................................................................. 19 Figura 10: Coluna de cromatografia lquida, para separao das fraes F1 e F2. ........ 20 Figura 11: Rampa de temperatura para analise dos compostos alifticos. ..................... 21 Figura 12: Rampa 1 para analise da frao F2. .............................................................. 21 Figura 13: Rampa 2 para analise de F2. ......................................................................... 21 Figura 14: Esquema de um terpano pentacclico mostrando regio mais frgil da molcula, que ir gerar os ons lidos no espectro de massa. Fonte: Hunt (1995), apud Silva (2007). ................................................................................................................... 22 Figura 15: Cromatogramas gerados pelas diferentes rampas. Rampa 1 esquerda e rampa 2 direita. ............................................................................................................ 24 Figura 16: Colorao comum aos testemunhos analisados, olive-gray na poro central e light olive-gray nas margens. ....................................................................................... 27 Figura 17: Diagrama de Shepard para as amostras U1, U2, U3 e U4 acima, e para as amostras S1, S2 e S3, abaixo. ......................................................................................... 28

Figura 18: A composio sedimentar fina do Cone do Rio Grande e a proximidade com gros de areia que podem ter originado os grnulos encontrados nos testemunhos. Fonte: Martins et al. (2003). ........................................................................................... 29 Figura 19: Cromatograma m/z 85 da amostra S1. .......................................................... 29 Figura 20: Cromatograma m/z 217 da frao F1, da amostra S3, o pico refere-se ao padro interno (5--colano). ........................................................................................... 30 Figura 21: Cromatograma da frao F2, m/z 231 da amostra U4, o pico indicado referente ao padro o-terfenil. ........................................................................................ 30 Figura 22: Cromatogramas do leo sem diluio (A) e diludo 5 (B), 10 (C) e 50 (D) vezes. .............................................................................................................................. 31 Figura 23: Distribuio dos n-alcanos, no m/z 85 da frao F1 do leo. ....................... 32 Figura 24: Comparao do cromatograma m/z 191 do leo com leo venezuelano identificado. .................................................................................................................... 33 Figura 25: Correlao dos parmetros de origem pristano, fitano e n-alcanos de 17 e 18 carbonos. Adaptado de Regato (2008). .......................................................................... 37 Figura 26: Diagrama ternrio dos esteranos regulares, indicando possvel fonte de matria orgnica. Fonte: Adaptado de Peters et al. (2005). ........................................... 40

RESUMO
Os biomarcadores geoqumicos, ou marcadores moleculares, so molculas orgnicas presentes em rochas, sedimentos e leos, que guardam semelhana com sua molcula precursora, sintetizada por organismos vivos. Seu estudo na geoqumica orgnica tem sido amplamente utilizado, por serem capazes de gerar informaes que auxiliam no estudo da origem e da maturao da matria orgnica. Sua presena pode ser determinada por meio de cromatografia gasosa acoplada a espectometria de massas GC/MS. O Cone do Rio Grande (uma feio geomorfolgica localizada ao sul da Bacia de Pelotas), apesar de apresentar condies para formao e acumulo de gs, despertando o interesse da indstria do petrleo, apresenta poucos estudos relacionados geoqumica orgnica de seus sedimentos. O Laboratrio de Oceanografia Geolgica (LOG) da Universidade Federal do Rio Grande FURG realiza diversas pesquisas no ramo da geoqumica ambiental, entretanto, nunca realizou pesquisas relacionadas biomarcadores, apesar de apresentar estrutura para tanto. Portanto, devido necessidade da implementao da anlise de biomarcadores no LOG, tendo em vista todas as potencialidades que esse tipo de anlise permite aos estudos dos hidrocarbonetos e do meio ambiente, somada a escassez do conhecimento geoqumico no Cone do Rio Grande, realizou-se o presente trabalho. Os procedimentos da analise de biomarcadores foram considerados satisfatrios, uma vez que conseguiu-se identificar a presena de alguns biomarcadores em amostras de um leo pesado. No entanto, no foram identificados biomarcadores nas amostras de sedimentos superficiais do Cone do Rio Grande.

Palavras chave: Biomarcadores geoqumicos, Cone do Rio Grande, cromatografia gasosa aplicada a esctrometria de massas.

1 INTRODUO
1.1 Matria orgnica
A matria orgnica (MO) a matria-prima geradora de combustveis fsseis. A busca por esses combustveis em ambiente ocenico faz-se cada vez mais presente, uma vez que a demanda alta e reservas terrestres so escassas no Brasil. A principal fonte de MO nos sedimentos marinhos so os organismos vivos autotrficos, que atravs da fotossntese transformam o carbono inorgnico em orgnico, disponibilizando-o para os demais nveis trficos. A contribuio dos organismos eutotrficos no incremento da MO se d por meio do crescimento e reproduo (Killops & Killops, 2005). Aps a morte, parte da biomassa dos organismos (normalmente menos de 0,1%) sedimentada (Holser et al., 1988, apud Killops & Killops, 2005) e passa a sofrer alteraes causada por fatores fsicos, qumicos e biolgicos (ao bacteriana). Dependendo das condies de sedimentao a MO pode ser totalmente oxidada na forma de gs carbnico (CO 2), ou ser enterrada e preservada, o que corresponde a uma pequena poro (Hedges & Keil, 1995). Essa MO preservada nos sedimentos fica submetida a variaes de presso e temperatura, devido ao aumento gradual do pacote sedimentar e estar sujeita a diversas transformaes, que podem ser conceitualmente separadas em trs estgios evolutivos, diagnese, catagnese e metagnese (Figura 1).

Figura 1: Fase da evoluo da matria orgnica sedimentada. Fonte: Tissot & Welte (1984), apud Silva (2007).

A diagnese corresponde, principalmente, atividade microbiana sobre a matria orgnica em sedimentos recm depositados (temperaturas normalmente inferiores a 65C). As

protenas e carboidratos so quebrados em aminocidos e aucares, os lipdeos em glicerois e os cidos graxos e ligninas em fenis e cidos aromticos. Alm disso, as mudanas qumicas mais presentes nessa fase consistem na perda de grupos funcionais e polimerizao, que aumentam a condensao e insolubilizao da matria orgnica, formando o querognio e o betume (Killops & Killops, 2005). nessa fase em que h produo significativa de metano (CH4). A catagnese inicia-se quando h aumento significativo da temperatura (at aproximadamente 120C), relacionado ao grau geotrmico, o qual consiste no aumento da presso devido deposio sedimentar. Nessa etapa o querognio perde suas cadeias alifticas e transformado em hidrocarbonetos lquidos, leo (janela do leo), condensado e gs mido (janela do gs). O crescente aumento da temperatura (a partir de 210C) ocasiona a fase de metagnese, incio do metamorfismo, onde a matria orgnica se restringe a gs seco e resduo carbonoso, que corresponde facie xisto-verde (Tissot & Welte, 1984). Os fatores mais favorveis preservao e acmulo de MO nos sedimentos so: um alto aporte de matria orgnica (a qual pode ser tanto alctone como autctone geradas distantes ou no prprio local de deposio, respectivamente), pouco oxignio dissolvido na coluna de gua e nos sedimentos, baixa hidrodinmica local, granulometria fina e alta taxa de sedimentao (Meyers, 1997; Demaison & Moore, 1980). O estudo da MO em sedimentos, tanto a identificao de sua fonte como o estgio de maturao trmica em que se encontra, pode ser feito pelo ramo da geoqumica orgnica que estuda os biomarcadores geoqumicos.

1.2 Biomarcadores geoqumicos

Biomarcadores geoqumicos (tambm denominados marcadores moleculares ou fsseis geoqumicos) so molculas orgnicas complexas e estveis, presentes em rochas, leos e sedimentos, que podem ser analisadas (identificadas e at quantificadas) em cromatgrafos gasosos com espectmetro de massas acoplado (CG-MS). So derivados de molculas da membrana plasmtica dos organismos vivos (procariticos ou eucariticos), chamadas de precursoras e que apresentam alto grau de especificidade (Brocks & Summons, 2003). A unidade estrutural bsica da maioria dos biomarcadores o isopreno ou metilbutadieno (Figura 2). Os grupos de biomarcadores mais estudados podem ser divididos em acclicos (n-alcanos,

com destaque aos isoprenides - pristano e fitano), cclicos (esteranos e terpanos) e aromticos (esteranos aromticos e fenantrenos).

Figura 2: Isopreno, unidade estrutural bsica dos biomarcadores.

A semelhana entre os biomarcadores e suas molculas precursoras (sintetizadas pelos organismos vivos) e a relao entre os diversos biomarcadores fornecem subsdios para inferncia de informaes, como origem da MO, caractersticas paleoambientais, grau de evoluo trmica, identificao de leos (fingerprint) e relao rocha-leo. Entretanto, as informaes separadas no so absolutamente confiveis, necessitando o maior nmero de relaes possveis para se obter uma boa interpretao. Abaixo ser descrito as inferncia possveis de serem obtidas atravs dos biomarcadores.

Origem da matria orgnica:

A origem da MO pode ser inferida devido ao fato que organismos distintos sintetizam molculas semelhantes em funo, mas com estrutura ligeiramente diferente. Isto , apesar de todos os organismos sintetizarem esteris, o nmero de carbonos na cadeia principal varivel conforme o habitat. Pode-se inferir, basicamente, se a MO oriunda de organismos terrestres, marinhos ou lacustres (Peters et al., 2005; Brocks & Summons, 2003).

Caractersticas Paleoambientais:

Dependendo das caractersticas ambientais no momento de deposio, as molculas podem sofrer alteraes diferenciadas (Peters et al., 2005; Cmiel & Fabianska, 2004; Brocks & Summons, 2003; Holba et al., 2003), como no caso dos isoprenides que fornecem informaes acerca do pH no ambiente durante sua deposio. As alquenonas so sintetisadas por organismos com mais insaturaes quanto menor a temperatura, gerando informaes para inferncia da palotemperatura local (Loureno, 2007).

Ainda, a evoluo das espcies indica que os diferentes grupos de organismos (algas, vegetais superiores, bactrias e fitoplancton) ocuparam determinado ambiente ao longo do tempo geolgico. Consequentemente, muitos biomarcadores so caractersticos de determinado tempo cronolgico e podem ser utilizados como ferramenta geocronolgica (Lima, 2005). Grau de evoluo trmica (maturao):

Com o aumento da temperatura causado pelo grau geotrmico, os biomarcadores sofrem alteraes estruturais (isomerizao e aromatizao dos compostos) e degradao trmica (compostos menos estveis desaparecem se quebram em molculas menores sem identificao e os mais estveis se sobrepujam). Assim, o monitoramento dessas alteraes e a relao de compostos estveis e instveis permitem estabelecer o grau de maturao trmica da MO em leos, sedimentos e rochas (Killops & Killops, 2005; Brocks et al., 2003; Miles, 1989). Entretanto, a maturao pode variar conforme a litologia da rocha fonte, por exemplo os minerais de argila apresentam stios ativos que podem catalisar algumas reaes de isomerizao, assim, relaes que utilizam ismeros em sua interpretao acusaro uma MO mais madura do que a realidade, isso ressalta a importncia de se utilizar o mximo de biomarcadores e suas relaes quanto for possvel, assim como, sua integrao com informaes adicionais a cerca do ambiente de estudo, possibilitando uma interpretao mais real.

Identificao de leos (fingerprint):

A composio dos leos, principalmente, referente aos biomarcadores, muito particular, gerando cromatogramas especficos para cada rocha-fonte, e seu leo gerado. Essa caracterizao chamada de fingerprint, exatamente por ser um tipo de impresso digital. O que pode ser aplicado no caso de identificar responsvel por derrames.

Relao rocha-leo:

O leo apresentar composio semelhante a seu stio gerador. Assim, amostras de leo podem fornecer informaes acerca da rocha geradora, e o oposto tambm ocorre, quando podese inferir a qualidade do leo a ser extrado com analise geoqumica do stio de explorao. Existem ainda os biomarcadores indicadores de migrao, os quais em conjunto com o conhecimento geolgico da bacia permitem conhecer as vias de migrao, chegando-se a sua rocha geradora (Lima, 2005).

Grau de degradao:

A degradao de orgnicos, tanto em leos como em rochas e sedimentos altera a concentrao e composio dos biomarcadores. Ortiz e Gallego (2003) aplicam terpanos e esteranos como forma de acompanhar a recuperao ambiental, por emprego de microorganismos aplicados na degradao de leo, em ambientes contaminados. Lima (2005) destaca a importncia de se identificar em uma bacia, a regio menos passvel de biodegradao, aumentando as chances de localizar leo em melhores condies de explorao.

1.3 Principais biomarcadores e suas relaes

Assim, para obteno das informaes supracitadas necessita-se identificar e quantificar molculas chave, ou grupos de molculas e estabelecer relaes entre elas. A descrio dos diversos grupos de biomarcadores, a forma de aplic-los e interpret-los seguem abaixo:

1.3.1 Acclicos
- n-alcanos Os n-alcanos em geral constituem um grupo de hidrocarbonetos de cadeia aberta. Podem ser originrios, principalmente, de fito e zooplancton, algas, plantas superiores ou bactrias. Os n-alcanos de baixa massa molecular (de 12 a 20 carbonos) apontam uma origem marinha da MO, e os de alta massa molecular, com predominncia par (C24 a C32) so derivados de ceras vegetais de plantas superiores, apontando uma origem continental. Os nalcanos leves e mpares so de origem alglica (Cmiel et al., 2004; Fabianka et al., 2003; Simons et al., 2003; Peters & Moldowan, 1993; Brassell et al., 1978; Cranwell, 1978;), entretanto em material mais maduro essa interpretao deve ser mais cautelosa, uma vez que molculas mais pesadas podem ser craqueadas (Tissot & Welt, 1984). O ndice preferencial de carbonos (IPC, ou CPI em ingls) aplicados aos n-alcanos a razo entre molculas com quantidade mpar de carbono sobre as pares, na faixa de 22 a 34 tomos. Este ndice fornece o grau de transformao da MO e pode ser utilizado como um

indicativo de maturao (Han & Calvin, 1969). Pode ser obtido de trs formas distintas (Bray & Evans, 1961; Philippi, 1965):

Equao 1: ndice preferencial de carbono.

Com o aumento da maturao a concentrao de n-alcanos pares tende a aumentar, em detrimento das mpares. Portanto, razes de IPC maiores que 1 acusam MO imatura, e tendem a unidade, conforme se aumenta a maturidade (Killops & Killops, 2005; Bray & Evans, 1961). Bourbonniere e Meyers (1996) propuseram o ndice TAR (razo entre material terrgeno e aqutico) para averiguao da fonte da MO. Em que valores mais altos apontam contribuio terrgena.

Equao 2: Razo TAR.

- isoprenides Os isoprenindes so alcanos ramificados, dentre os quais, os mais utilizados como biomarcadores so o pristano (1, 6, 10, 14 tetrametil-pentadecano) e o fitano (2, 6, 10, 14 tetrametil-hexadecano). Estas molculas se originam da clorofila A de organismos fotossintticos. Podem fornecer subsdio para investigao de condies paleoambientais, uma vez que a cadeia lateral da clorofila clivada e origina o fitol, o qual em condies anxicas ou sub-xicas (isto , com pouco oxignio disponvel) reduzido diidrofitol e ento em fitano, mas em condies oxidantes oxidado cido fitnico, descarboxilado a pristeno e ento reduzido a pristano (Peters et al., 2005; Regato, 2008; Brooks, 1969). Temos assim que, altos valores (prximos a 3) da razo pristano/fitano acusam um ambiente deposicional xico, caracterstico de matria orgnica terrestre, enquanto que para ambientes anxicos, comumente hipersalinos ou carbonticos, a razo pristano/fitano menor que 0,8 (Peters et al., 2005). Existe ainda, relao entre os isoprenides e n-alcanos de 17 e 18 carbonos, capazes de sugerir origem, grau de biodegradao e maturao da MO. Em que, pristano/n-C17 e fitano/nC18 > 1 sugerem MO imatura; ainda, altos valores de P/n-C17 indicam matria orgnica de

origem terrestre, enquanto que os altos valores para F/n-C18 acusam MO de origem marinha (Peters & Moldowan, 1993).

1.3.2 Alifticos Cclicos

Os biomarcadores cclicos mais conhecidos e aplicados so os grupos dos terpanos e esteranos. Dentre os terpanos os mais utilizados em estudos geoqumicos so os tricclicos e os pentacclicos, neste ltimo inclui-se o importante grupo dos hopanos e oleananos.

- terpanos tricclicos Os terpanos tricclicos contm, como o nome indica, 3 anis e apresentam de 19 at 54 (de Grande et al., 1993) tomos de carbono, sendo mais comum os de 25 tomos, ou menos. Sua origem se d a partir de membranas procariticas de bactrias distintas das que originam os pentacclicos. So mais resistentes que os pentacclicos, assim a razo entre os mesmos pode ser um indicativo da maturidade da MO (Silva, 2007). Logo, a razo terpanos tricclicos/hopanos pode ser utilizada como um parmetro de correlao, e apresenta maiores valores em funo do aumento da maturao trmica (Peters & Moldowan, 1993; Seifert & Moldowan, 1981)

- terpanos pentacclicos So molculas de 29 a 35 carbonos, distribudos em 4 anis de seis e um de cinco carbonos. So derivados de reaes de reduo e desidratao (durante a diagenese) do bacteriohopanotetrol, presente nas membranas celulares dos organismos procariticos (como por exemplo, bactria e cianobactrias) (Waples & Michihara, 1991). Os hopanos mais utilizados so o 17(H)-Trisnorhopano (Tm) e seu ismero 18(H)Trisnornehopano (Ts), esse ltimo apresenta configurao mais estvel, sendo mais abundante em MO mais madura. Logo a razo Ts/(Ts+Tm) apresentar maiores valores quanto maior a maturao da MO, entretanto, essa relao sofre grande influncia do tipo de rocha geradora (carbontica e siliciclstica) e do ambiente deposicional (xico, anxico ou hipersalino), exigindo cautela em sua aplicao (Peters & Moldowan, 1993). Dentre os oleananos tem-se que o composto 18(H)-oleanano, apresenta seu precursor oriundo de plantas superiores terrestres da famlia das Angiospermas, assim sua presena alm

de indicar uma origem terrestre da MO, indica que a deposio s pode ter ocorrido no final do cretceo, quando surgiram as primeiras angiospermas (Waggoner, 2001; Philip, 1985). - esteranos Os esteranos so derivados dos colesteris (Figura 3), presentes na membrana plasmtica de todos os organismos eucariontes (Killops & Killops, 2005).

Figura 3: Transformao diagentica do percursor Colesterol no biomarcador Colestano, um esterano. Fonte: Silva, 2007.

O nmero preferencial de carbono na cadeia principal varivel, conforme a origem do organismo que os sintetizou. Os organismos planctnicos sintetizam esteris de 27 e 28 carbonos, com destaque ao colesterol (Figura 3), os dinoflagelados so os nicos capazes de sintetizar o dinosterol (Kooke et al., 1982; Boon et al., 1979), entre os esteris que compe as plantas superiores os mais representativos so o -sitosterol e o estigmasterol, ambos de 29 carbonos (Saliot et al., 1991; Volkman, 1986; Huang & Meinschein, 1979). Com base nesse conhecimento, Waples & Michihara (1991) elaboraram um diagrama ternrio muito aplicado no estudo da origem da MO. A razo colesterol/-sitosterol, utilizada por Mudge & Lintern (1999), indica MO de origem terrestre quando apresentar valores prximos a zero, ou planctnica para valores maiores que 1.

1.3.3 Aromticos
A utilizao de razes relativas de compostos homlogos no substitudos e alquilados, ou entre homlogos de mesmo peso molecular, pode fornecer informaes adicionais sobre a origem dos HPAs no meio marinho, por poluio com leo (Loureno, 2003). A razo entre a soma da concentrao dos metil-fenantrenos e de fenatreno (mfenantreno/fenantreno) indica origem petrognica ou de leos derivados quando apresenta valores entre 2 e 6, ao passo que valores prximos a 1, acusam origem piroltica (Medeiros,

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2000). O mesmo se segue com a razo entre a soma da concentrao metil-naftalenos por naftaleno (m-naftaleno/naftaleno) (Martins, 2001). Outras relaes empregadas so a razo benzo[a]antraceno/criseno que, fornecendo valores entre 0,06 e 0,40 indica contaminao por petrleo, e a razo fluoranteno/pireno, que quando resulta valores entre 0,60 e 1,40 tambm indicativo de poluio (Medeiros, 2000). Alm da aplicao dos HPAs em sedimentos contaminados, a relao entre fenantrenos e seus metilados (MPI) pode ser utilizada em leos, a fim de investigar sua maturao e at sua origem (Budzinski et al., 1995). leos com predominncia de 9-metilfenantrenos sugerem origem marinha, enquanto o 1-metilfenantreno predomina em leos oriundos de rocha continental (Alexander et al., 1987; apud Budzinski et al., 1995). Ainda, pode-se traar uma relao entre hidrocarbonetos aromticos, saturados e compostos polares (heterocompostos, ou NSO), atravs de um diagrama ternrio (Figura 4) para obter-se informaes relevantes a evoluo trmica da MO em estudo.

Figura 4: Diagrama de propores de HC saturados, aromticos e heterocompostos (NSO), para inferncia da evoluo trmica da MO. Fonte: Silva (2007).

1.4 Cone do Rio Grande

Apesar da formao da Bacia de Pelotas, como um todo, no ter apresentado uma fase evaportica, que favoreceria a gerao de petrleo, a regio chamada Cone do Rio Grande contou em sua formao, no tercirio com uma fase de intenso aporte sedimentar, propiciando a preservao da MO e a formao de gs biognico, que pode ter originado uma reserva de hidratos de gs (Oliveira et al., 2010; Bizzi et al., 2003; Sad et al, 1998; Sad et al 1997; Fontana & Mussumeci, 1994). Rosa et al. (2006) identificaram, em estudos geofsicos, feies caractersticas de escape de gs (Figura 5) na regio estudada. Segundo Martins e colaboradores

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(2005) a formao do cone est associada a um antigo delta do Rio da Prata, quando o nvel do mar se encontrava abaixo do presente. Tendo em vista esse potencial, a Agncia Nacional do Petrleo, Gs Natural e biocombustveis ANP realizou rodadas de licitao para explorao no local, e ainda, coletou diversos testemunhos ao longo de toda Bacia. Entretanto, estudos geoqumicos na regio so escassos, o pioneiro foi realizado por Correia (2009), buscando uma caracterizao geoqumicas dos sedimentos, mas no contempla os biomarcadores geoqumicos.

Figura 5: Indicao de uma feio caracterstica de escape de gs, encontrada no Cone do Rio Grande. Fonte: Rosa et al. (2006).

1.5 Laboratrio de Oceanografia Geolgica LOG/FURG

O Laboratrio de Oceanografia Geolgica da FURG LOG est capacitado para realizar diversas anlises geoqumicas. Adquiriu em 2009 um cromatgrafo gasoso com espectrmetro de massas acoplado, modelo clarus 600 da PerkinElmer, ocorrendo sua instalao, em maio desse mesmo ano, sendo realizadas algumas anlises de hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPAs). No entanto, as analises de biomarcadores, apesar de muito difundidas e importantes em estudos geoqumicos, so ainda inditas nesse laboratrio. Em 2008, a ANP contratou a Fugro Brasil Servios Submarinos e Levantamentos LTDA para coleta de testemunhos de toda Bacia de Pelotas. De cada testemunho, a agncia utilizou apenas 20 cm do topo e 20 cm da poro central, doando o restante ao LOG, onde ficaram armazenados em container refrigerado.

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1.6 Justificativa
A ANP, por meio do Programa de Recursos Humanos (PRH), capacita acadmicos de diversas universidades para atuarem na indstria petrolfera, por meio da concesso de bolsas, taxa de bancada, participao em congressos, entre outros. O presente trabalho est dentro da linha de pesquisa do programa PRH-27, denominado Estudos ambientais em reas de atuao da indstria do petrleo. O Cone do Rio Grande, como j elucidado anteriormente, possui pouqussimos estudos referentes sua geoqumica orgnica, causando insegurana quanto ao seu potencial como gerador de leo ou gs. O conhecimento da sua composio quanto aos biomarcadores podem gerar informaes cruciais na interpretao de sua poro orgnica. Esse conhecimento, anterior ao incio de atividades humanas fundamental para o acompanhamento da qualidade ambiental. O estudo de biomarcadores pode ser aplicado para diversas reas, no apenas correlatas leo e gs. Podem indicar poluio por esgoto, ou hidrocarbonetos, variao de temperatura ao longo dos anos e condies paleoceanogrficas. Assim, a implantao dessa anlise no LOG ser fundamental para ampliar a gama de pesquisa oferecida pelo laboratrio, a fim de aumentar o conhecimento geoqumico sedimentar da regio, que conta com diversos corpos hdricos em seu entorno. Portanto, a carncia de conhecimento da regio, dada sua potencial importncia econmica, unida a enorme gama de informao que pode ser extrada a partir de estudos de biomarcadores, foram cruciais para realizao do presente trabalho.

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2 OBJETIVOS
O principal objetivo do presente trabalho implementar a analise de biomarcadores geoqumicos orgnicos, em sedimentos recentes, no LOG. Os objetivos secundrios so: - avaliar a adequao da metodologia nos sedimentos do Cone do Rio Grande; - testar a metodologia de anlise de biomarcadores em um leo pesado; - elaborar um guia de procedimentos para interpretao ambiental por meio da analise de biomarcadores;

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3 METODOLOGIA
3.1 Sedimentos do Cone do Rio Grande
3.1.1 rea de estudo
A Bacia de Pelotas encontra-se no extremo sul do Brasil, sendo seu limite ao norte no Alto de Florianpolis, e ao sul o Cabo de Polnio (Figura 6). Esses limites foram estipulados com base nas caractersticas estratigrficas e geolgicas, para o limite norte e por questes geopolticas ao sul, pois, essas mesmas caractersticas se seguem at o Alto embasamento de La Coronilla, no Uruguai, onde, essa poro da bacia denominada Bacia do Leste. Sua formao est relacionada abertura do oceano Atlntico, a partir do jurssico. Durante esse processo, houve inicialmente a formao de um proto-mar (fase de formao megassequncia ps-rifte) em que a constante sedimentao proporcionou a configurao atual, de uma bacia extensa com baixa declividade.

Figura 6: Extenso da Bacia de Pelotas com seus limites, e localizao do Cone do Rio Grande. Fonte: Rosa et al., 2006.

O Cone do Rio Grande est localizado na poro sul da Bacia de Pelotas, entre as latitudes 31 e 34 sul e longitudes 48 e 51 oeste. Gerando uma rea de aproximadamente, 28.900 km com volume sedimentar de 5x10 m (Lopz, 2009). Correia (2009) identificou para essa regio sedimentos compostos, predominantemente, de silte argiloso, encontrando

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ainda, maiores valores de carbono orgnico total para amostras oriundas da poro sul do cone. Segundo os estudos realizados por Santos (2011) a formao do Cone do Rio Grande remonta ao Holoceno Mdio, e apesar de sua composio ser francamente marinha este apresenta influncias de correntes (paleocanais ou paleorios), que proporcionaram aporte continental feio.

3.1.2 Amostragem
A coleta dos testemunhos foi realizada entre os meses de janeiro e fevereiro de 2008, com testemunhador do tipo piston-core. Os testemunhos foram armazenados em container refrigerado at sua abertura em janeiro de 2011. Apesar de se tratar de molculas orgnicas, os biomarcadores so molculas extremamente resistentes e estveis, entretanto, o longo tempo de estocagem pode ter alterado algumas caractersticas do sedimento. Os testemunhos utilizados para analise foram selecionados de forma aleatria, buscando-se contemplar toda rea do Cone. Inicialmente, foram selecionados 4 testemunhos, os nomeados com a letra U, que foram extrados por ultra-som, e posteriormente, mais 3, os que apresentam a letra S e que foram extrados por soxhlet (Figura 7).

Figura 7: Testemunhos selecionados para anlise. Fonte: Google Earth, acesso em 10/10/2011

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3.1.3 Coleta de sub-amostra

Por se tratar da anlise de compostos trao, tem-se a necessidade de realizar rigorosa limpeza na vidraria e demais material utilizados, a fim de se diminuir uma possvel contaminao, e ainda, por ser analise de molculas orgnicas, materiais plsticos foram evitados ao mximo. Todo material utilizado foi colocado de molho no extran, por 24 horas, enxaguado com gua em abundncia e depois com gua destilada. Em seguida o material foi seco em estufa a 105C (exceto o material volumtrico), e enxaguado, com auxlio de pipeta Pasteur, com acetona e n-hexano, por 3 vezes. Os testemunhos foram abertos com auxlio de mesa apropriada, com serra acoplada. Imediatamente identificou-se a cor do sedimento, com auxlio da tabela Damuth (1984) e analise com agulha histolgica. Separou-se, uma poro dos sedimentos para anlise granulomtrica armazenando-os em sacos plsticos identificados. As amostras para analises geoqumicas foram retiradas da parte central do testemunho, a Tabela 1 indica a profundidade da coluna dgua e a poro sedimentar acima de onde retirou-se a amostra. Amostra U4 U3 U2 U1 S3 S2 S1 Lmina d'gua (m) 2197 313 1598 1192 1600 1020 1340 Camada sedimentar (cm) 128 192 185 104 66 125 108

Tabela 1: Profundidade da lmina de gua e da camada sedimentar de onde foram retirada as amostras.

As amostras foram distribudas em placas de Petri (Figura 8), as quais foram imediatamente postas na estufa (60C) at que estivessem totalmente secas, o que demorou em torno de uma semana. Esse sedimento seco foi ento desagregado com almofariz de cermica e armazenado em potes de vidro.

Figura 8: Testemunho aberto e amostra em placa de petri.

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3.1.4 Analise granulomtrica

Para obteno dos dados granulomtricos seguiu-se mtodos tradicionais de peneiragem/pipetagem descritos por Suguio (1973). Aproximadamente 500 gramas de sedimento foram lavados, para retirar todo sal, sendo em seguida secos em estufa a 60C e separados em quatro partes iguais (quarteados). Os sedimentos grosseiros (>0,063 mm) foram peneirados e os finos (<0,063 mm) separados por decantao e pipetagem. Com o auxlio do programa Sysgram montou-se o digrama de Shepard.

3.1.5 Analise dos biomarcadores

A analise geoqumica pode ser dividida em trs etapas principais: extrao, separao e cromatografia gasosa (injeo e interpretao dos cromatogramas).

3.1.5.1 Extrao
Durante os procedimentos laboratoriais pode haver perda dos analitos, portanto necessita-se quantificar essa perda para que os valores finais no sejam subestimados. Assim, ainda no sedimento adiciona-se os padres internos (PI), com concentrao conhecida e comportamento semelhante s molculas de interesse. O clculo de recuperao pode ser feito por meio da seguinte equao:

Equao 3 : Clculo de recuperao por padro.

Em que R(PI) representa a recuperao do padro interno e deve estar entre 40% e 120%, CobPI a concentrao obtida do PI, ao final de todo procedimento e CrPI a concentrao real do PI. A extrao consiste na retirada da poro orgnica do sedimento. Para tanto, podem ser utilizadas duas tcnicas distintas, soxhlet ou ultra-som. Inicialmente, utilizou-se ultra-som, para 10g de sedimento. Entretanto, no se pode identificar os biomarcadores satisfatoriamente. Portanto, testou-se em maiores quantidades, e aplicou-se a metodologia soxhlet em novas amostras (Tabela 2).

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Amostra U1 U2 U3 U4a U4b S1 S2 S3

Massa 10g 10g 10g 10g 100g 100g 100g 100g

Extrao Ultra-som Ultra-som Ultra-som Ultra-som Ultra-som Soxhlet Soxhlet Soxhlet

Tabela 2: Massa de cada amostra e a tcnica de extrao utilizada.

Para ambas as tcnicas, o sedimento foi pesado em filtro de papel, previamente extrado. Adicionou-se os padres, 400 L do 5--colano (da Chiron, de modo a obtemos concentrao final de 1,2 ppm) para os alifticos e 100 L do o-terfenil (Supelco, para obteno final de 0,4 ppm). Um intervalo de 4 horas foi realizado antes de iniciar a extrao. Os procedimentos de extrao foram realizados conforme descritos nos mtodos da EPA 3550C e 3540C, para as extraes por ultra-som e soxhlet, respectivamente. No procedimento em ultra-som (Figura 9-A) os filtros com os sedimentos pesados foram postos em bquer e completados com aproximadamente 40 mL de solvente (diclorometano e n-hexano 1:1), ficando em ultra-som por 15 minutos, em seguida retirou-se o extrato e repetiu por duas vezes o procedimento. Por fim, os extratos foram filtrados (com filtro extrado) em balo de fundo chato. Esse extrato final foi ento, rotaevaporado 1 mL (Figura 9C). A extrao por soxhlet (Figura 9-B) foi feita com os mesmos solventes supracitados, sendo necessrio um volume de aproximadamente 250 mL, e teve durao de 12 horas (tempo para que se complete aproximadamente 50 refluxos). Como nas amostras de ultra-som, os extratos foram rotaevaporados 1 mL.

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Figura 9: Extrao por ultra-som (A); extrao em soxhlet (B); amostra em rotavapor (C).

3.1.5.2 Cleanup
O cleanup, refere-se a separao do extrato em duas fases: alifticos e aromticos. Para tanto, utilizou-se a cromatografia lquida por gravidade (Figura 10), adaptada do mtodo 3611B da EPA. O adsorvente, ou fase estacionria composto por 3,2 g de slica e 1,8 g de alumina, calcinadas e ativadas. A calcinao foi feita em forno de mufla 500 C por 4 horas e posterior reserva em dessecador por 2 horas, e, por fim, a ativao se deu com a adio, de 5% do peso do material, de gua livre de orgnicos, agitados por 2 horas em mesa agitadora prpria para esse fim. A coluna foi inicialmente lavada com n-hexano, colocou-se em seguida a slica diluda em n-hexano, lentamente e batendo com um artefato de borracha de forma a compact-la bem de modo que no haja formao de bolhas (visando evitar o surgimento de caminhos preferenciais, pelos quais a amostra pudesse escoar sem ser adsorvida). O mesmo procedimento foi realizado com a alumina, tomando-se o cuidado de no deix-la em contato com o ar, e por fim, foi posta uma camada de aproximadamente 1 cm de sulfato de sdio, para garantir que a alumina no entrasse em contato com o ar. Lavou-se novamente a coluna com n-hexano.

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Figura 10: Coluna de cromatografia lquida, para separao das fraes F1 e F2.

O extrato foi colocado na coluna em seguida eluido com 10 mL de n-hexano, para remoo dos alifticos (F1), seguido de 10 mL de n-hexano/diclorometano (1:1), para obteno da frao aromtica (F2). Os solventes so variveis na bibliografia, o importante o fato de a polaridade do solvente F1 ser semelhante a das molculas orgnicas alifticas, e o do F2 s molculas aromticas, para que essas sejam eluidas, ou fiquem adsorvidas conforme o interesse. Para estudo de resinas e asfaltenos em leo ou ambientes contaminados faz-se uma terceira eluio, com solvente ainda mais polar, tal como tolueno ou metanol, obtendo-se uma terceira frao (F3). No presente estudo por se tratar de sedimento recente, e de local possivelmente livre de contaminao optou-se por no analisar essa frao.

3.1.5.3 Cromatografia Gasosa

Injeo A rampa de temperatura para injeo dos alifticos no cromatgrafo iniciou-se a 80C, aps 4 minutos aumentou numa taxa de 2C/min at 200C, que foram mantidos por 10 minutos, sendo recomeado o aumento a 1C/min at que se atingisse 300C, mantidos por 20 minutos (Figura 11). As rampas apresentam a variao de temperatura, em graus celsius no eixo das coordenadas e a variao do tempo, em minutos no eixo das abscissas.

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Figura 11: Rampa de temperatura para analise dos compostos alifticos.

Para analise dos aromticos, testou-se duas rampas diferentes: Rampa 1 Aromticos (Figura 12)

Figura 12: Rampa 1 para analise da frao F2.

Na rampa 1, a temperatura inicial de 50C foi mantida por 1 minuto, a partir do qual houve aumento de 20C/min at 190C, passando taxa de 1C/min at 250C, seguindo com aumento de 2C/min at 300C, mantidos por 12 minutos. Rampa 2 Aromticos (Figura 13).

Figura 13: Rampa 2 para analise de F2.

Temperatura inicial de 50C foi mantida por 1 minuto, seguida de aumento gradual de 3C/min at o limite de 310C, que foi mantido por 10 minutos.

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Interpretao dos cromatogramas gerados Para quantificao exata das molculas, necessita-se injetar uma curva de calibrao com os compostos que se pretende quantificar, em diferentes e conhecidas concentraes. No LOG existe padres para curva de hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA), composta por um mix com os 16 compostos prioritrios da EPA. No entanto, os trabalhos envolvendo biomarcadores, normalmente, no utilizam quantificao pois os padres so muito caros, sendo as relaes baseadas apenas na rea dos picos. A quantificao utilizada apenas para o clculo de recuperao atravs dos padres internos. Os cromatogramas foram gerados no modo full scan para que se pudesse obter um panorama geral de todos os compostos presentes. Entretanto, dentro desse cromatograma geral o programa Turbo Mass capaz de gerar um cromatograma especfico com as molculas de interesse. Para tanto, se faz necessrio o conhecimento da relao massa-carga (m/z) das molculas buscadas, isso porque a identificao de molculas se d pela quebra da mesma em diversos ons, ou fragmentos de molcula que iro gerar um espectro de massa particular a cada composto. A relao m/z obtida atravs da relao da massa molecular pela carga eltrica do on. A identificao dos picos encontrados feita pela espectrometria de massa (Medeiros & Simoneit, 2007). Um espectrmetro de massa (MS, do ingls) um instrumento utilizado para medir valores de m/z e a abundncia relativa dos ons de uma molcula (IUPAC), como cada molcula possui seu espectro de massa particular, pode-se identific-las. Por exemplo, os terpanos pentacclicos se quebram em dois fragmentos identificveis, correspondentes ao m/z 191 e 148 (Figura 14), sendo que em seu espectro poder haver outro fragmento, correspondente a sua cadeia lateral, que varivel (Silva referencia 22).

Figura 14: Esquema de um terpano pentacclico mostrando regio mais frgil da molcula, que ir gerar os ons lidos no espectro de massa. Fonte: Hunt (1995), apud Silva (2007).

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3.2 Analise do leo

comum utilizar cromatogramas de leos conhecidos para identificao de compostos que no apresentem padro disponvel. H ainda a possibilidade de utilizar-se do leo como matriz de estudo. Portanto, faz-se necessrio analisar biomarcadores, tambm em leo. Devido a natureza do leo necessrio que seja feira uma centrifugao. Sendo assim, adicionou-se 10 mL de metanol a 10 mL de leo deixando em centrfuga mdia por cerca de 10 minutos. Retirou-se o extrato e repetiu-se o procedimento por mais duas vezes. Foram testadas 3 diluies do leo, de 5, 10 e 50 vezes, para melhorar a resoluo dos cromatogramas gerados. As diluies foram feitas em metanol. O restante da analise seguiu o exposto acima.

3.3 Elaborao do guia

O guia foi montado a partir dos diversos trabalhos consultados, objetivando concentrar e resumir as informaes bsicas para dinamizar e facilitar a analise de MO por meio dos biomarcadores. Para tanto, separou-se em tpicos de aplicao, isto , a informao que se pretende obter como Maturao, Condies Paleoambientais, Origem e Contaminao por leos. A partir da, inseriu-se as relaes mais utilizadas, denominando as molculas relacionadas e a relao massa/carga (m/z) utilizada para sua identificao.

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4 RESULTADOS E DISCUSSES
4.1 Implementao da analise
4.1.1 Comparao das Rampas
Os testes para implementao da analise foram realizados com um leo pesado em processo de degradao. A aplicao de um eficiente programa de temperatura garante a boa separao dos compostos da amostra a ser analisada, e consequentemente uma boa visualizao no cromatograma. As duas rampas de temperatura testadas no leo esto referidas na metodologia e os respectivos cromatogramas, referentes a frao F2 (compostos aromticos) encontram-se abaixo (Figura 15):

Figura 15: Cromatogramas gerados pelas diferentes rampas. Rampa 1 esquerda e rampa 2 direita.

A temperatura se relaciona com a presso de vapor do analito, o aumento brusco na temperatura acarreta o aumento da presso de vapor, causando diminuio no tempo de reteno, isto , o composto passa menos tempo na fase estacionria e se volatiliza mais rapidamente (Urias, 2002). Assim, quanto maior for a taxa de aumento (maior inclinao na rampa de temperatura) mais rpida se dar a analise, e menor ser a diferena entre os tempos de reteno, dificultando a analise do cromatograma. A rampa 2 apresenta inicialmente uma menor inclinao, a taxa de aumento da temperatura menor, o que permite aos inmeros compostos presentes no leo uma volatilizao mais gradual, consequentemente os tempos de reteno apresentaram um intervalo mais amplo. A resoluo do cromatograma gerado pela 2 rampa foi melhor e os picos se apresentam melhor resoluo. Sendo assim, essa rampa de temperatura foi a escolhida para analise dos biomarcadores.

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4.1.2 Quantidade extrada

A quantificao de hidrocarbonetos aromticos uma analise j implementada no LOG, na qual realizada inicialmente a construo de uma curva de calibrao, atravs da injeo de um mix desses compostos de concentrao conhecida, pode-se quantificar esses compostos. A Tabela 3, abaixo, apresenta a concentrao dos compostos passveis de serem quantificadas, em ppb, referentes a amostra U4. Ambas foram extradas por ultra-som, porm com massas diferentes. Composto Naftaleno 1 metilnaftaleno 2 metilnaftaleno Bifenil 2,6 dimetilnaftaleno Acenaftileno Acenafteno Fluoreno Dibenzothiophene Fenantreno Antraceno Fluoranteno Pireno Benzo(a)antraceno Criseno Benzo(b)fluoranteno Benzo(k)fluoranteno Benzo(a)pireno Perileno Benzo(e)pireno Indeno(1,2,3-cd)pireno Dibenzo(a,h)antraceno Benzo(g.h.i)perileno U4 (10g) U4 (100g) 7,9 44,66 24,54 15,88 56,03 N.D. 5,34 13,53 N.D. 30,88 N.D. 14,75 32,82 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. 299,37 N.D. N.D. 52,53 6,35 40,29 21,75 16,89 33,17 N.D. 6,63 15,91 N.D. 35,71 N.D. 20,12 25,76 N.D. 69,79 N.D. 20,55 N.D. N.D. 2316,83 N.D. N.D. 86,01

Tabela 3: Quantificao (em ppb) de compostos aromticos de uma mesma amostra, extrada por ultra-som, com massas diferentes. N.D. indica que no houve a deteco do composto.

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O aumento na massa de amostra extrada deve apresentar concentrao semelhante, uma vez que se trata da mesma amostra, entretanto, como as anlises prvias de carbono orgnico total efetuadas nessas amostras foram baixas, indicando se tratar de material pobre em matria orgnica, optou-se por aplicar a metodologia para maiores quantidades de amostra, com a expectativa de que a quantia de composto disponvel para analise seja maior, acarretando maior sucesso na leitura do cromatograma. De modo geral os compostos apresentaram concentrao semelhante, nota-se que alguns compostos apresentaram concentraes ligeiramente maiores na primeira amostra, o que pode ser explicado baseado na recuperao, calculada com base no o-terfenil, que foi 8,17% menor na segunda analise (Tabela 4). Os hidrocarbonetos mais pesados se caracterizam por compostos de difcil deteco. A amostra com maior massa extrada forneceu uma quantificao mais satisfatria desses compostos, em especial o benzo(e)pireno, mostrando para esses casos mais indicado o uso de maior massa. No entanto para sedimentos, ou fragmentos de rocha com alto teor de MO, acredita-se que 10 g sejam suficientes para anlise.

4.1.3 Tipo de extrao

A recuperao das amostras encontra-se na Tabela 4, a seguir, na qual a sigla Cob se refere concentrao obtida: Amostra U1 U2 U3 U4 (10g) U4 (100g) S1 S2 S3 Cob o-terfenil Recuperao % 211,2 262,7 166,1 185,85 153,16 408,46 329,38 183,03 52,80 65,68 41,53 46,46 38,29 102,12 82,35 45,76

Tabela 4: Concentrao obtida (Cob) do o-terfenil e a recuperao para cada amostra.

Segundo Ribani e colaboradores (2004) os intervalos aceitveis de recuperao esto entre 70 e 120%, com preciso de at 20%. Porm, dependendo da complexidade analtica e da amostra, este valor pode ser de 50 a 120%, com preciso de at 15%. Por se tratar de uma anlise consideravelmente complexa, os nveis de recuperao se mostram satisfatrios. Nota-se

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que de modo geral, a extrao por soxhlet obteve melhores recuperaes, apresentando uma mdia de 76,74% contra 48,95% das amostras extradas por ultra-som. Entretanto, a extrao por ultra-som chega a ser at oito vezes mais rpida do que a extrao por soxhlet, e o gasto com solvente tambm sensivelmente menor (menos da metade), o que alm de tornar o processo mais barato o torna menos prejudicial ao meio ambiente. Ademais, Emdio e Drea (2010) concluram em seus estudos que a extrao via ultra-som apresenta eficincia comparvel via soxhlet. Como esse foi um teste preliminar, recomenda-se aplic-lo a maior numero de amostras da mesma regio e com repetio.

4.2 Cone do Rio Grande

4.2.1 Colorao dos sedimentos
Os testemunhos mostraram-se muito semelhantes entre si e homogneos, apresentando predominantemente a cor olive-gray na poro central e light olive-gray nas margens (Figura 16), esse padro sugere uma possvel interao entre o plstico do testemunho e o sedimento. A colorao olive-gray comumente encontrada em argilas marinhas, e indica que sua gerao pode estar relacionada ambientes redutores de baixa energia (Sanders et al., 1970).

Figura 16: Colorao comum aos testemunhos analisados, olive-gray na poro central e light olive-gray nas margens.

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4.2.2 Granulometria
A anlise granulomtrica indicou predominncia de argila sltica e silte argiloso (Figura 17), que representam sedimentos com granulometria fina. Esse resultado vem de encontro ao relatado por Martins e colaboradores (2003), elucidado na Figura 18. Segundo esses autores a origem do corpo lamoso que compe o Cone do Rio Grande est relacionada a uma contribuio pretria do Rio da Prata e das Terras Altas do Rio Grande do Sul que depositavam ali sua carga sedimentar quando o nvel do mar econtrava-se abaixo do atual. Os sedimentos finos so extremamente sucetveis a transportes, assim, os ambientes que premitem sua deposio so, necessariamente, caracterizados por baixa energia. A hogeneidade dos testemunhos pode ser explicada pelo significativo retrabalhamento e boa seleo dos sedimentos terrgenos que chegam ao talude, pela bacia de drenagem.

Figura 17: Diagrama de Shepard para as amostras U1, U2, U3 e U4 acima, e para as amostras S1, S2 e S3, abaixo.

Com auxlio de agulha histolgica pde-se identificar em alguns testemunhos, pequenos grumos de areia, que podem ter sido carreados por fluxos gravitacionais, trazem sedimentos mais grosseiros (que compe a poro mais interna da plataforma) para regies mais distais.

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Figura 18: A composio sedimentar fina do Cone do Rio Grande e a proximidade com gros de areia que podem ter originado os grnulos encontrados nos testemunhos. Fonte: Martins et al. (2003).

4.2.3 Interpretao dos cromatogramas

Hidrocarbonetos Alifticos Os cromatogramas gerados a partir da frao F1 das amostras, no exibiram os compostos procurados (n-alcanos, isprenides, esteranos e terpanos alifticos). Abaixo se encontra o cromatograma correspondente ao m/z 85 (Figura 18) da amostra S1. O padro de distribuio dos n-alcanos em sedimento, no to caracterstico quanto em leos, dificultando sua identificao por comparao com a bibliografia.

Figura 19: Cromatograma m/z 85 da amostra S1.

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As amostras foram analisadas por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (GC-MS), entretanto, os n-alcanos, apresentam melhor resoluo quando analisados com detector de ionizao em chama (FID), em que no h quebra de molculas, sendo mais indicado para compostos que apresentem fragmentos com baixo peso molecular (Peters et al., 2005). O cromatograma referente ao m/z 217, que corresponde aos esteranos alifticos, exibe apenas o pico referente ao padro injetado, o 5--colano (Figura 20), o que indica a ausncia destes compostos.

Figura 20: Cromatograma m/z 217 da frao F1, da amostra S3, o pico refere-se ao padro interno (5--colano).

Hidrocarbonetos Aromticos Quanto a frao F2, tambm no se conseguiu identificar a presena de esteranos ou terpanos aromticos, correspondentes ao m/z 231 e 253, apenas o padro o-terfenil (Figura 21).

Figura 21: Cromatograma da frao F2, m/z 231 da amostra U4, o pico indicado referente ao padro o-terfenil.

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4.3 Anlise do leo

4.3.1 Centrifugao
O leo contm uma grande proporo de compostos orgnicos. Entretanto, os compostos mais pesados devem ser separados, pois sua injeo causaria danos a coluna do cromatgrafo. Assim, considerou-se a necessidade de realizar a centrifugao do leo. A principio realizou-se a centrifugao apenas uma vez por dez minutos, mas o extrato final, correspondente a frao F2 (obtido aps o clean up) apresentou colorao demasiadamente escura. Ento, realizou-se a centrifugao por trs vezes, obtendo por fim o extrato final mais claro, permitindo mais segurana para sua injeo no cromatgrafo.

4.3.2 Diluio
Foi injetado 1 L do extrato do leo, mas o cromatograma obtido apresentou baixa resoluo (Figura 22-A). Sendo assim diluiu-se o extrato a diversas concentraes, com metanol, obtendo os cromatogramas exibidos na Figura 22, abaixo:

Figura 22: Cromatogramas do leo sem diluio (A) e diludo 5 (B), 10 (C) e 50 (D) vezes.

Nota-se que o cromatograma referente ao extrato sem diluio (Figura 22-A) no resolve satisfatoriamente os compostos analisados. Sendo o cromatograma que permite melhor

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analise e comparao com cromatogramas da literatura o correspondente ao do leo diludo 50 vezes (Figura 22-D).

4.3.2 Interpretao dos cromatogramas obtidos

Hidrocarbonetos Alifticos O cromatograma abaixo (Figura 23) referente ao m/z 85 da frao F1 do leo, nele foi possvel identificar, atravs da biblioteca do equipamento alguns biomarcadores da famlia dos n-alcanos e o pristano.

Figura 23: Distribuio dos n-alcanos, no m/z 85 da frao F1 do leo.

A correta identificao dos demais picos, atravs da biblioteca do aparelho, no foi possvel. Demonstrando a necessidade de injeo de padres conhecidos. Entretanto, pelo padro de distribuio esperado pelo aumento do tempo de reteno conforme o tamanho da molcula, pode-se inferir os demais picos.

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Hidrocarbonetos Aromticos O cromatograma referente ao m/z 191, apresentou alguma semelhana com o de leo venezuelano (Figura 24), gentilmente cedido pela professora Liliana Lpez da Universidad Central de Venezulela, Faculdad de Ciencias Instituto de Ciencias de la Tierra. Tal cromatograma, traz identificado compostos de interesse.

Figura 24: Comparao do cromatograma m/z 191 do leo com leo venezuelano identificado.

Apesar dos picos no apresentarem reas idnticas, a semelhana entre eles pode auxiliar na identificao de compostos.

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5 GUIA
O guia foi elaborado pela necessidade de se compilar as diversas relaes de biomarcadores utilizadas nos diversos trabalhos consultados, de forma a facilitar e agilizar a consulta das mesmas. Pode haver a descoberta de novas relaes, exigindo uma atualizao constante do guia. As relaes so feitas com base na rea do pico dos compostos indicados. A utilizao das relaes deve ser feita com cautela, necessitando-se o maior numero de relaes possveis casadas a outros conhecimentos (como geologia) do material de estudo buscando a melhor interpretao possvel.

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Guia para Interpretao de Biomarcadores

Maturao
- Razo de isomerizao dos homohopanos 22S/(22S+22R): Interpretao: O hopano produzido biologicamente possui a configurao 22R, sendo convertido gradualmente mistura dos diastereismeros 22R e 22S. As amostras cuja razo se encontra na faixa de 0,50 a 0,54, mal entraram na faixa de gerao de leo, enquanto razes entre 0,57-0,62 indicam que a fase principal de gerao foi alcanada; Molculas: Pode ser realizada com quaisquer par de epmeros de homopanos (que so caracterizados por apresentarem a configurao 17(H),21(H)-hopano), de 31 35 carbonos, normalmente utiliza-se as molculas com 31 ou 32 carbonos. m/z: 191.

-Razo Moretanos/Hopanos: Interpretao: Decresce com a maturao trmica de aproximadamente 0,8 em betumes imaturos para menos que 0,15 em rochas maturas e leos, at um mnimo de 0,05; Molculas: 17, 21(H)-29-homohopano e soma dos hopanos. m/z: 191.

- Ts/Tm Interpretao: aumenta a relao proporcionalmente ao aumento da maturidade. Molculas: 18(H)-22,29,30-trisnorneohopano, 17(H)-22,29,30-trisnorhopano. m/z: 191, entretanto, por haver a possibilidade de co-eluio com terpanos tri e tetracclicos, pode-se utilizar o cromatograma de massas m/z 370, que corresponde ao on molecular de ambos os compostos.

- C29Ts/ (C29 hopano+C29Ts) Interpretao: Aumentam com o aumento da maturao trmica (Hughes et al., 1985; Sofer et al., 1986). Molculas: C29 18(H)-22,29,30-trisnorneohopano, 18-30-norneohopano, C29 17hopano. m/z: 191. - Razo de isomerizao dos C29 /( +) esteranos,

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Interpretao: A razo aumenta com o progressivo aumento da maturao. A plotagem conjunta desta razo e da razo 20S/(20S+20R) para os C29 esteranos uma das formas mais usadas na descrio da maturao trmica de rochas geradoras e leos; Molculas: 5,14,17 - Estignastano 20S e 20R; 5,14,17 - Estigmastano 20S e 20R. m/z: 217.

- ndice Preferencial de Carbono (IPC) Interpretao: Maturao: apresenta ndices maiores quanto menor o grau de maturao; Origem: ambientes lacustres favorecem a formao de n-alcanos mpares, IPC>1, leos marinhos apresentam predominncia de n-parafinas pares, logo IPC<1, entretanto essa relao tende a desaparecer com o aumento da maturao (Peters & Moldowan, 1993; Mello et al., 1988). Molculas: n-alcanos de 22 34 carbonos m/z: 85 Equaes:

- Grfico pristano/n-C17 por fitano/n-C18 Interpretao: A relao entre n-alcanos de 17 e 18 carbonos e pristano e fitano, onde pristano/n-C17 e fitano/n-C18 > 1 indicam MO imatura; ainda, altos valores de P/n-C17 indicam matria orgnica de origem terrestre, enquanto que os altos valores para F/n-C18 acusam MO de origem marinha. Pode-se ainda plotar essas equaes em grfico. Molculas: n-alcanos de 17 e 18 carbonos e 1, 6, 10, 14 tetrametil-pentadecano; 2, 6, 10, 14 tetrametil-hexadecano. m/z: 85, 99 ou 113. Grfico:

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Figura 25: Correlao dos parmetros de origem pristano, fitano e n-alcanos de 17 e 18 carbonos. Adaptado de Regato (2008).

- Razo terpanos tricclicos/pentacclicos Interpretao: Aumenta com a maturao (Seifert & Moldowan, 1981). Molculas: Soma dos terpanos tricclicos; soma dos hopanos (terpanos pentacclicos). m/z: 191.

- MNR (2-metilnaftaleno/1-metilnaftaleno) Interpretao: Com o aumento da maturao h uma mudana da metila da posio - para a posio dos naftalenos que termicamente mais estvel (Milligan et al, 1956). Assim, essa relao ser maior quanto mais matura a MO (Radke et al, 1984). Molculas: 1 e 2-metilnaftaleno. m/z: 142

- DNR Interpretao: Aumenta com o aumento do maturidade. Molculas: 1,5; 2,6 e 2,7 -dimetilnaftalenos m/z: 156 Frmula:

- DPR Interpretao: Os ismeros -substitudos so menos estericamente impedidos que os ismeros -substitudos com o aumento da maturao. Molculas: 1,6; 2,6; 2,7; 2,10 dimetilfenantreno m/z:156. Frmula:

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Condies Paleoambientais
- relao pristano/fitano Interpretao: Altos valores acusam um ambiente deposicional xido, os valores desta razo normalmente se encontram na faixa entre 0,8 e 3,0, sendo que para ambientes xicos caractersticos de matria orgnica terrestre a razo pristano/fitano maior que 3,0, enquanto que para ambientes anxicos, comumente hipersalinos ou carbonticos, a razo pristano/fitano menor que 0,8 (Peters et al., 2005). Em geral, valores menores que 1 podem indicar condies anxicas sugerindo uma origem marinha para MO, enquanto valores maiores que 1 indicam condies xicas, relacionada a origem terrestre da MO (Mello et al., 1988; Maxwell, 1990). Molculas: 1, 6, 10, 14 tetrametil-pentadecano; 2, 6, 10, 14 tetrametil-hexadecano m/z: 99 ou 113

- Relao Ts/(Tm+Ts) Interpretao: Baixos valores indicam ambiente xidos, provavelmente oriundo de rochas carbonticas, enquanto que valores mais altos esto relacionados a ambientes anxidos onde a deposio ocorreu em condies hipersalinas. Molculas: 17(H)-22, 29, 30-trisnorhopano; 18(H)-22, 29, 30 -trisnorneohopano. m/z: 191 ou 370.

Origem
- colesterol/-sitosterol Interpretao: Indica MO de origem terrestre quando apresentar valores prximos a zero, ou planctnica para valores maiores que 1 (Mudge & Lintern, 1999). Molculas: colesterol e -sitosterol m/z: 217

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- Razo diasteranos/esteranos Interpretao: Baixos valores indicam matria orgnica anxica pobre em material argiloso, como rochas carbonticas ou hipersalinas. J altos valores, so tpicos de rochas geradoras ricas em argila como por exemplo, ambientes lacustres e marinho deltico Molculas: 13,17(H)-Diacolestano 20R e 20S; soma dos esteranos. m/z: 217

- Razo hopano/esteranos Interpretao: Em geral, altas concentraes de esteranos e baixos valores de razo hopano/esteranos (menor ou igual a 4) indicam deposio de matria orgnica marinha com maior contribuio de organismos planctnicos e/ou algas. Diferentemente, baixas concentraes de esteranos e altos valores de razo hopano/esteranos (maior que 7) indicam deposio de matria orgnica terrestre e/ou microbialmente retrabalhada. Molculas: 17(H), 21(H)-hopano; 5(H), 14(H), 17(H)-colestano 20S e 20R m/z: 191 e 217 - 18 (H)-oleanano Interpretao: Por ser oriundo de vegetais superiores da famlia das angiospermas, sua presena indica origem vegetal da MO, com idade do final do cretcio. Molculas: 18 (H)-oleanano m/z: 191.

- Relao Esteranos Regulares C29-C28-C27 Interpretao: A predominncia dos C29 esteranos indica contribuio terrestre enquanto a predominncia dos C27 esteranos maior contribuio de plncton marinho, os C28 esteranos, quando em maior proporo, indicam maior contribuio de algas lacustres (Moldowan et al., 1985). Molculas: Colestano, Ergostano e Sitotano. m/z: 217 Grfico:

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Figura 26: Diagrama ternrio dos esteranos regulares, indicando possvel fonte de matria orgnica. Fonte: Adaptado de Peters et al. (2005).

- TAR Interpretao: A relao de n-alcanos TAR ser maior quanto maior for a influncia terrestre na MO (Bourbonniere e Meyers, 1996). Molculas: n-alcanos de 15 31 carbonos m/z: 99 ou 113 Frmula:

- Tr/17-hop Interpretao: Razes altas sugerem origem de ambientes lacustres salinos e marinhos carbonticos (Regato, 2008). Molculas: Soma dos terpanos tricclicos; soma dos hopanos com configurao 17(H), de 19 a 33 carbonos. m/z: 191. - Tet24/17-hop Interpretao: Altos valores esto relacionados a uma origem terrestre (Aquino Neto, 1983) Molculas: Soma dos terpanos tetracclicos de 24 carbonos; soma dos 17(H) hopanos de 19 a 33 carbonos. m/z: 191.

- C34/C35-hop

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Interpretao: Altos valores esto relacionados a ambientes lacustres, enquanto valores menores acusam ambiente marinho para formao da MO (Mello, 1988) Molculas: Soma dos hopanos de 34 carbonos e dos de 35, de mesma configurao. m/z: 191.

- TPP/Dia27 Interpretao: Altos valores sugerem leo de origem lacustre, enquanto valores menores indicam uma origem marinha (Holba, 2000). Molculas: soma dos tetracclicos polipernides; diasterano de 27 carbonos. m/z: 217

- Dibenzotiofeno/Fenantreno Interpretao: Indicam a litogia da rocha geradora. Valores maiores que um indicam ambientes carbonticos, enquanto valores menores que um, xisto. Molculas: Dibenzotiofeno e fenantreno. m/z: 178 e 195.

Contaminao por leo

-25-NH/17-Hop Interpretao: Maior ser o valor da razo quanto mais biodegradado estiver o leo. Molculas: 25-norhopano; 17(H)-hopanos. m/z: 191. - m-fenantrenos/fenantrenos e m-naftalenos/naftalenos Interpretao: Valores entre 2 e 6 indicam origem petrognica ou de leos derivados, enquanto que valores prximos a 1 possvel origem piroltica ou leos (Martins, 2001; Medeiros, 2000). Molculas: Fenantrenos, naftalenos e seus metilados. m/z: 142 e 192.

- Benzo[a]antraceno/criseno Interpretao: Indica poluio por petrleo na faixa entre 0,06 e 0,4 (Medeiros, 2000) Molculas: benzo(a)antraceno e criseno m/z: 228.

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- Fluoranteno/perileno Interpretao: Indica poluio por petrleo na faixa entre 0,6 e 1,4 (Medeiros, 2000) Molculas: Fluoranteno e perileno. m/z: 202 e 252.

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6 CONCLUSO
O presente trabalho veio como uma proposta de iniciar uma linha de pesquisa no LOG, bem como contribuir na investigao dos sedimentos do Cone do Rio Grande por meio dos biomarcadores. A identificao da presena de biomarcadores no leo sugerem que a implantao do mtodo no LOG foi satisfatria, identificando a necessidade da obteno de padres e material certificado para a melhor identificao dos mesmos. Nos cromatogramas das amostras do Cone do Rio Grande no foi possvel identificar a presena dos biomarcadores buscados, impossibilitando a aplicao das relaes apontadas no guia. Tal fator pode ser devido ao baixo teor de matria orgnica no sedimento, ou ao longo tempo de estocagem que pode ter alterado as condies naturais. Recomenda-se a utilizao de tcnicas mais sensveis para essa investigao, tal como MS/MS, bem como coleta de novas amostras. As analises de granulometria e colorao sugerem um ambiente deposicional estvel de baixa energia, de acordo com os resultados elucidados na literatura consultada.

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