*

ENDOSPORAS BACTERIANAS

Diferenciacin: Los microorganismos ajustan actividades para sobrevivir o prosperar, crecimiento coordinado en respuesta a estrs ambiental
Cesan su crecimiento Se tornan mas robustas en cierta etapa de ciclo de vida ENDOSPORAS: Se forman dentro de la clula Agentes de sobrevivencia NO DE REPRODUCCIN; NO ACTIVIDAD METABLICA EXTRAORDINARIAMENTE RESISTENTES Sobreviven en edo. dormancia, latencia, por largo tiempo (cientos e incluso miles de aos) http://www.nature.com/nlink/v407/n6806/abs/407897a0_fs.html

Formadas en consecuencia de privacin de nutrientes (C, N, P)

SEAL PERIODO ESTRS NUTRICIONAL

CAMBIOS GENTICOS

CAMBIOS FENOTPICOS

*
*

ENDOSPORAS BACTERIANAS

ALTA RESISTENCIA A: Temperatura, radiacin, formas reactivas oxgeno cido, lcali

Distribucin filogentica: Filum: Firmicutes Gram-positivos

Gnero Bacillus

Propiedades Aerobios y facultativos, ms estudiado grupo de esporulados, patgenos (B. anthracis; B. cereus); biotecnologa (B. subtilis, B. thuringensis) Anaerobios, varios patgenos ( C. tetani, C. botulinum, C. perfringens) Termoflicos aerobios, relacionados a Bacillus LAB formadoras de esporas Cocos aerobios estrictos (nico coco formador de esporas), clulas en tetradas u octetos Anaerobios con respiracin anaerobia, SO4 ltimo aceptor eAnaerobio, formador de acetato Anaerobia, resistente a sal, aislada del Mar Muerto

Clostridium Thermoactinomyces Sporolactobacillus Sporosarcina Sporotomaculum Sporomusa Sporohalobacter

ENDOSPORAS BACTERIANAS

* CARACTERSTICAS MICROSCPICAS * Cuerpos ovoides, esfricos, cilndricos en el interior de la clula vegetativa o

libres * Muy refringentes, difciles de teir

* ESPORANGIO = clula madre + espora * FORMA Y LOCALIZACIN ESPORA

CRITERIOS TAXONMICOS

* Segn dimetro mayor o no a clula vegetativa: * Esporas deformantes * Esporas no deformantes

* Segn localizacin dentro del esporangio: * Terminal * Subterminal * Central * Los esporangios deformantes de Clostridium son caractersticos: * en forma de cerilla o palillo de tambor (plectridios) * en huso (clostridios)

1. 2.

Espora central; No deformante Espora terminal; no deformante; con cuerpo parasporal (Protena)

3. 4.
5. 6.

Espora terminal deformante, Clostridios (agujas)

Espora central deformante, fusiforme, aguja (forma de Clostridios) Espora terminal, forma de cerillos o batacas = Plectridio Espora lateral deformante, bacilo fusiforme

ENDOSPORAS BACTERIANAS

ENDOSPORAS BACTERIANAS

* Exosporio (no universal: las esporas de algunas especies carecen de l). * Cubiertas proteicas * Corteza o crtex, (peptidoglicano de unin laxa) rodeado externamente de
la membrana esporal externa.

* Pared de la espora (= Germen de la pared de la futura clula vegetativa). * Protoplasto o ncleo (core, en ingls), con la membrana citoplsmica de
la espora (membrana esporal interna).

ENDOSPORAS BACTERIANAS / EXOSPORIO

* B. cereus: estructura membranosa transparente, (saco cerrado,

delgado y flojo), envuelve al resto de la espora de forma suelta, despegado en principio respecto de las cubiertas (tras la liberacin de la espora, al perderse el contenido acuoso que haba entre exosporio y cubiertas, aquel se pega a stas).

* B. subtilis y B. megaterium, envuelve a espora de una forma ms

estrecha, establece algunos contactos fsicos con superficie de cubiertas.

* Composicin qumica: protenas, polisacridos complejos, y

lpidos.

* Propiedades: muy resistente enzimas proteolticas, barrera de

defensa externa de la espora?

ENDOSPORAS BACTERIANAS / CAPAS PROTEICAS

* Composicin y estructura:
Vara entre especies Una o varias protenas tipo queratina, Ricas en cistena y a.a. hidrfobos (60% en peso seco de la espora). Propiedades: Insolubles e impermeables Impiden entrada de numerosos agentes qumicos, incluyendo sustancias txicas. Abundancia de puentes S-S las hace muy compactas y muy estables qumicamente

ENDOSPORAS BACTERIANAS / CORTEZA O CRTEX

Composicin: peptidoglicano especial, diferente al de clula vegetativa: 30% del NAM con tetrapptidos normales, grado de entrecruzamiento muy bajo (6%). 15% del NAM tiene solo la L-ala inicial, en lugar de tetraptido. 55% de una modificacin del cido murmico (lactama del cido murmico; condensacin del -COOH lactilo con el -NH2, para formar la lactama) Origen: A partir de clula madre, intermediarios ensamblados a nivel de la membrana externa que rodea a la corteza. Propiedades de la corteza: 1) Bajo grado de puentes entre tetrapptidos (slo un 6%). Genera: a) estructura ms laxa, floja y flexible que el peptidoglucano normal, se expande en ausencia de cationes que neutralicen sus grupos negativos (sobre todo del mDAP y del glutmico de los tetrapptidos) apariencia de gel. b) rpida autolisis, durante la germinacin de la espora. 2) lactama del murmico :gran resistencia a lisozima.

La corteza limitada por la membrana esporal externa, (invaginacin de membrana citoplsmica de la clula madre). Polaridad opuesta a la de la membrana esporal interna.

ENDOSPORAS BACTERIANAS / PARED DE LA ESPORA

*Localizacin: Encima de membrana interna de

la espora

*Composicin: peptidoglucano similar al de la

clula vegetativa,

*Funciones: *Resistencia osmtica *Durante germinacin, ser finalmente pared

celular de la nueva clula vegetativa

*Origen: a partir de la prespora, atravesando los

precursores la membrana interior

ENDOSPORAS BACTERIANAS / NCLEO O PROTOPLASTO

* Deshidratado (alta termoresistencia, inactiva enzimas, resistencia H2O2) * Componentes inmovilizados con Ca 2+ y acido dipicolnico * DIPICOLINATO CALCIO Ca 2+ 1-3% peso espora; Dipicolinico (10% peso espora) * Durante formacin espora Funcin quelante (deshidratacin) * Durante germinacin se libera Ca 2+ (fundamental para germinar) * PROTOPLASTO Con cromosoma completo condensado, aparato metablico
completo para iniciar actividad tan pronto germine * Carece de componentes tpicos de clula vegetativa * Posee ribosomas pequeos * ARN polimerasa * Nucleotidos mono y difosfatados NO TRIFOSFATADOS (NO ATP) * carece de componentes inestables: ARNm, enzimas biosintticas, aminocidos, bases nitrogenadas libres, cofactores reducidos (NADH; CoA) * Alta concentracin de SASPs; protegen ADN vs. Desecacin y rayos (unin fuerte) * Fuente de carbono para soportar estrs por nutrientes * pH citoplasma: 1 unidad inferior al de clula vegetativa

*
protoplasto,

ENDOSPORAS BACTERIANAS / NCLEO

* Energa qumica: 3-fosfoglicerato, otra molcula estable del * Se convierte rpidamente a 2-fosfoglicerato, y luego a PEP al
germinar la espora (dona P para generar ATP)

* Membrana citoplsmica (membrana interna de la espora); rodea

al protoplasto. Bicapa lipdica carente de fluidez, resultado de su estructura policristalina?

ENDOSPORAS BACTERIANAS / ESPORULACIN

* CARACTERSTICAS * Cultivos en buenas condiciones * Cesa crecimiento (clulas con crecimiento diferente) * Proceso no sincrnico * Estado de inanicin (nutriente limitante) * B. subtilis y B.megaterium: Completa esporulacin en 7-8 h a 37

ENDOSPORAS BACTERIANAS / ESPORULACIN / FASE 0

* Clula vegetativa: Al final de replicar contiene 2 cromosomas

ENDOSPORAS BACTERIANAS / ESPORULACIN / FASE I

Filamento axial ancho en centro de clula: Se forma con los 2 cromosomas Cada nucleoide se une a cada extremo de la clula Se forman dos espculas de la pared celular cerca de los polos hacia el interior, rodeadas de la correspondiente invaginacin de la membrana citoplsmica, no hay septo divisional como en fisin binaria Cada espcula est formando anillo de la protena FtsZ (tubulina) Sntesis de antibiticos y exoenzimas que degradan protenas de clula vegetativa, los monmeros se usarn en protenas de espora

ENDOSPORAS BACTERIANAS / ESPORULACIN / FASE II

* Forma septo transversal acntrico, cerca de polo de clula, por

invaginacin de membrana citoplsmica, y deposicin de nuevo peptidoglucano entre dos membranas adyacentes. * Cada nucleoide queda segregado en uno de los dos compartimentos que se han formado: * un cromosoma va al compartimento pequeo (compartimento de la preespora); * la otra copia del cromosoma va al compartimento grande (clula madre). * Contina sntesis de antibiticos y exoenzimas (serina-proteasas, metaloproteasas, ribonucleasas, -amilasa, etc).

ENDOSPORAS BACTERIANAS / ESPORULACIN / FASE III

* Protoplasto de preespora se independiza de clula madre. * Degradacin selectiva de peptidoglicano del septo en fase II (degradacin
comienza por el centro, donde se haba cerrado, y sigue hacia periferia). alrededor de preespora, sta queda libre en citoplasma del esporangio. opuesta: la interior tiene la polaridad normal, la exterior, derivada del crecimiento de la membrana de la clula madre, tiene polaridad invertida detenindose en compartimento de la preespora

* Membrana citoplsmica de clula madre crece unidireccionalmente

* Citoplasma de preespora queda rodeado por dos membranas de polaridad * La renovacin de protenas slo tendr lugar en la clula madre,

ENDOSPORAS BACTERIANAS / ESPORULACIN / FASE IV

* Formacin casi por completo de corteza de espora, por deposicin de

peptidoglicano entre las dos membranas. An no est maduro (no tiene todava las caractersticas de peptidoglicano de espora). futura clula vegetativa).

* Se deposita el peptidoglicano de pared celular (futura pared celular de

* Preespora adquiere su aspecto refrctil al microscopio ptico en fresco. * Sntesis del cido dipicolnico (DPA), as como la acumulacin de Ca2+. * Sntesis del exosporio.

ENDOSPORAS BACTERIANAS / ESPORULACIN / FASE V

* Materiales de cubiertas (sintetizados en fases II y III en compartimento de

la clula madre), comienzan a depositarse fuera de membrana esporal externa.

* Al final de esta fase se adquiere la resistencia al octanol. * Contina acumulacin de DPA, que sigue secuestrando iones Ca2+
(formacin del quelato de dipicolinato clcico, DPC).

ENDOSPORAS BACTERIANAS / ESPORULACIN / FASE VI

* Preespora madura hasta espora. * Madura la corteza (genera el caracterstico PG cortical, ms laxo, con su * Maduran las cubiertas. * El citoplasma de la espora ms homogneo y denso a electrones. * La espora se hace resistente al calor y al cloroformo. * Resistencia a las
radiaciones (UV).

bajo porcentaje de entrecruzamientos -por actuacin de endopeptidasas- y la lactama del NAM).

* Resistencia a la
lisozima.

ENDOSPORAS BACTERIANAS / ESPORULACIN / FASE VII

* Liberacin de la espora madura autolisis de la clula madre. * Exosporio, pierde contenido de citoplasma (procedente de la clula

madre), quedando un saco vaco y plegado, unido a las cubiertas (al salir espora al exterior)

* endospore formation

ENDOSPORAS BACTERIANAS / ESPORULACIN / FASE I

* Esporulacin se puede revertir si en las 4 primeras fases se suministra

nutriente, a partir de Fase V es irreversible, CLULA COMPROMETIDA A ESPORULAR

* Proceso muy ordenado, operones esporulacin spo * Localizados en 4 regiones cromosoma * 125 genes en total, actan de forma secuencial * Inactivados en crecimiento vegetativo * Mecanismo regulatorio seales madre - espora en formacin * Codifican factores alternativos de la ARN polimerasa * Quorum sensing activa genes spo * Sntesis de protenas Spo

ESPORULN

*
forman

ENDOSPORAS BACTERIANAS / CUERPOS PARASPORALES

* Bacillus thuringiensis, B. popiliae y algunas especies de Clostridium,

cristales proteicos en el esporangio simultneamente a la formacin de la endospora: cuerpos parasporales

*
IMPORTANCIA

ENDOSPORAS BACTERIANAS / CUERPOS PARASPORALES

Salud: Toxina botulnica (C. botulinum), Toxina B. cereus, Tetanospamina (C. tetani), Gangrena gaseosa, intoxicacin alimentaria (C. perfringens)

Biotecnologa agrcola: Protena BT (epitelio intestinal lepidpteros, hemolinfa, parlisis y muerte)

ENDOSPORAS BACTERIANAS / GERMINACIN

* Proceso en el que una espora retorna a su etapa vegetativa * Ms rpida que esporulacin (90 min) * ETAPAS * 1. preactivacin * 2. activacin * 3. iniciacin (o germinacin en sentido estricto) * 4. crecimiento ulterior (entrada en fase vegetativa)

ENDOSPORAS BACTERIANAS / GERMINACIN / PREACTIVACIN

*Requiere que sus cubiertas se alteren. *Naturalmente ocurre por erosin por envejecimiento
progresivo.

*Artificialmente, en laboratorio, se puede recurrir a:

*Aplicar altas temperaturas a espora, (pero inferiores a

su inactivacin): 100C durante unos minutos

*por radiaciones ionizantes; *por pH bajos; *por tratamiento con sustancias que posean grupos -SH
libres (p. ej., mercaptoetanol).

ENDOSPORAS BACTERIANAS / GERMINACIN / ACTIVACIN

* Proceso reversible, desencadena un agte. Qumico externo como: * iones inorgnicos (Mn2+, Mg2+); * L-alanina en B. subtilis; * glucosa u otros azcares; * adenina u otras bases nitrogenadas * Receptor alostrico en membrana esporal interna detecta

germinante * Se activa y adquiere capacidad proteoltica especfica romper una proenzima unida covalentemente al peptidoglucano de la corteza * La enzima resultante reconoce la lactama del NAM y comienza a hidrolizar el peptidoglucano cortical. * Comienza a entrar agua al protoplasto de la espora * La espora pierde su caracterstica refringencia * Comienza a perder la resistencia al calor. * Durante toda esta etapa el metabolismo est an latente

ENDOSPORAS BACTERIANAS / GERMINACIN / INICIACIN

* Etapa irreversible, se rompe definitivamente el estado de

dormancia, metabolismo es endgeno (no depende todava de sustancias externas). * se pierde DPA, lo que supone prdida de Ca++; * Ca++ pasa al crtex, neutraliza las cargas negativas rehidratacin del protoplasto y su hinchamiento * Contraccin del crtex, * Contina y se completa rpidamente la hidrlisis del PG cortical; * 3-fosfoglicrico (3-PG) se convierte en 2-PG, y ste en PEP, que a su vez dona su fosfato de alta energa para producir ATP; * pequeas protenas SASPs se hidrolizan por proteasa especfica. * Los aminocidos constituyentes se reutilizan para la sntesis de nuevas protenas por parte de la pequea dotacin de ribosomas y dems molculas accesorias; * La ARN polimerasa comienza a sintetizar ARN (comienza la transcripcin de genes vegetativos).

*
exterior y metabolizarlos

ENDOSPORAS BACTERIANAS

* Aparece metabolismo exgeno: Bacteria puede tomar nutrientes del * Eventos * se sintetiza ADN; * el protoplasto crece an ms; * pared de la espora sirve como cebador (germen) para la produccin
de la pared de la clula vegetativa naciente; polar o ecuatorial.

* clula vegetativa sale por rotura de las cubiertas, puede ser tipo * Al salir, esta clula vegetativa se tie como Gram-negativa, y slo
adquirir su tpica grampositividad despus de la primera divisin.

*
vegetativa (algunas especies),

QUISTES BACTERIANOS

* Se producen por engrosamiento de la pared celular de la clula * Por deposicin de nuevos materiales sobre la membrana citoplsmica, al * Poseen metabolismo endgeno * Resisten al calor, a la desecacin y a agentes qumicos ms que la
correspondiente clula vegetativa (pero menos que las endosporas). mismo tiempo que se acumulan materiales de reserva en el citoplasma.

* Ejemplos: * Quistes de Azotobacter y Bdellovibrio * Mixosporas de los cuerpos fructificantes

de las mixobacterias

EXOSPORAS

* clulas diferenciadas de tipo reproductivo, genricamente

conocidas como esporas Agentes de dispersin o proliferacin celular

* Se liberan al aire a partir de hifa de hongos filamentosos o actinomicetos * Inician otro crecimiento tipo filamentosos * EN HONGOS FILAMENTOSOS: CONIDIAS * ACTINOBACTERIAS * Bacterias Gram-positivas * crecimiento micelial y un estilo de vida similar a los hongos * GENERO ACTINOPLANES * micelios vegetativos de sustrato (subterrneos). * generan hifas verticales que sobresalen a la superficie. * Extremo de cada hifas se diferencia y forma esporangio (sco) * Saco se fragmenta en esporas mviles (flageladas) llamadas zigosporas o
esporangiosporas.

EXOSPORAS

* Gnero Streptomyces (Actinobacteria) * MICELIO sustrato ramificado, * interrumpido por pared transversal
(cenocticos, contienen varios cuerpos nucleares).

* Limitacin de nutrientes: Se forma

micelio areo a partir de ramificaciones de las hifas subterrneas.

* En los extremos se diferencian en

cadenas esporas.

* Durante la formacin de estos micelios

areos y esporas micelios subterrneos sufre lisis masiva.

EXOSPORAS BACTERIANAS / Streptomyces

* Propiedades de las esporas de estreptomicetos: * Pared celular de espora ms gruesa que clula vegetativa * No cambio cualitativo en peptidoglucano; no hay crtex, ni cubiertas * Muy hidrofbicas: se resisten a ser suspendidas en agua (por vaina que * Resisten ms al calor y a la desecacin en comparacin a las clulas
vegetativas, pero menos que las endosporas.

rodea a la pared celular, compuesta a base de tbulos auto-ensamblables)

* son metablicamente durmientes (clulas en reposo).

HETEROCISTOS = HETEROQUISTES

* Clulas trmino, sin funcin reproductiva, * Especializadas en la fijacin de nitrgeno molecular (N2), * Mayor tamao que las clulas vegetativas. * Conexin entre clulas vegetativas heteroquistes: Estrangulamiento de
polos. * Unin atravesada por microplasmodesmos : finos canales llamados, que reducen al mnimo el intercambio de sustancias entre ambas clulas. * Exterior de pared celular (Gram-negativo), existen tres cubiertas: * capa laminada interna: glucolpidos exclusivos de cianobacterias; * capa homognea central a base de polisacridos * capa fibrosa externa, tambin polisacardica, pero menos compactada.

HETEROQUISTES

* Capas evitan difusin O2 al interior del heteroquiste, * Mecanismo de proteccin de la nitrogenasa (complejo enzimtico: reduce
el N2 a NH4+, y que es muy sensible al oxgeno).

* Otras estrategias para la proteccin de nitrogenasa en heteroquistes: * Tapones de cianoficina; Tilacoides colocados como retculo polar y
perifrico aparte de los microplasmodesmos,

* Uniones con clulas vegetativas adyacentes se forman sendos, carecen de

ficobilisomas, por lo que no realizan Fase II de la fotosntesis.
fotofosforilacin cclica.

* Por lo tanto, los heteroquistes no generan oxgeno, slo realizan la