PREPARACIN Y LECTURA DE MEDIOS DE CULTIVO PARA ENTEROBACTERIACEAS

1. Introduccin:
Las enterobacteriaceas son bacterias Gram negativas no fotosintticas. Sus clulas son pequeas, de forma bacilar, recta o curva, con un ancho que no excede los 0,5 m. Algunas son permanentemente inmviles, otros se mueven mediante flagelos peritricos, polares o con ambas localizaciones (polarperitrica). Estas bacterias se pueden distinguir del resto de las bacterias Gram negativas de estructura similar por la propiedad de la anaerobiosis facultativa. En condiciones anaerbicas obtienen energa por fermentacin de carbohidratos, mientras que en condiciones aerbicas pueden utilizar una amplia gama de compuestos orgnicos como sustratos para la respiracin. (Stanier, 1984). Esta familia se caracteriza desde el punto de vista bioqumico por la capacidad de reducir los nitratos a nitritos y fermentar la glucosa con la produccin de cido o cido y gas. No requieren de altas cantidades de cloruro de sodio para crecer, y son negativas a la oxidasa. Se recurre a muchas pruebas bioqumicas para distinguir entre las especies que componen este grupo. (Jawetz, 1999). El representante clsico es Escherichia coli, que forma parte de la flora intestinal normal de los mamferos. Las bacterias Coliformes de los gneros Salmonella y Shigella se relacionan estrechamente con la anterior. En este caso se trata de bacterias patgenas, responsables de infecciones intestinales como la disentera bacilar, la fiebre tifoidea o la intoxicacin alimentaria bacteriana. (Stanier, 1984).

En el agar Mc Conkey, las sales biliares y el violeta cristal inhiben considerablemente la flora Gram positiva. La lactosa, junto con el indicador de pH Rojo neutro, sirven para la comprobacin de la degradacin de dicho azcar.

En el agar Salmonella-Shigella, el verde brillante, la bilis de buey y la elevada concentracin de tiosulfato y de citrato inhiben considerablemente la flora acompaante. Con el tiosulfato e iones de hierro se pone de manifiesto la formacin de sulfuro por el ennegrecimiento de las correspondientes colonias. Las colonias de Coliformes quedan sealadas por la demostracin de la degradacin de la lactosa a cido, a cargo del indicador de pH Rojo neutro. El medio de cultivo agar Desoxicolato-Citrato contiene concentraciones tan altas de desoxicolato y citrato, que la flora Gram positiva queda totalmente reprimida e inhibidos ms o menos Intensamente los Coliformes. Las Salmonellas crecen sin obstculo; algunas Shigellas son ligeramente inhibidas (por ejemplo, Shigella shigae). En el agar Sulfito de Bismuto, esta sustancia inhibe el crecimiento de la flora acompaante para permitir slo el crecimiento de Salmonella. En el agar Lisina-Hierro, la lisina puede ser descarboxilada por microorganismos LD-positivos, que la transforma en la amina cadaverina. Esto produce un viraje al violeta del indicador de pH Prpura de bromocresol. Puesto que la descarboxilacin slo tiene lugar en medio cido (pH inferior a 6,0), es necesario que se produzca previamente la acidificacin del medio de cultivo, por fermentacin de la glucosa. Por este motivo, este medio de cultivo slo puede utilizarse para la diferenciacin de cultivos que fermentan la glucosa. Los microorganismos LD-negativos, pero fermentadores de glucosa, producen un viraje al amarillo de la totalidad del medio de cultivo, la incubacin prolongada puede ocasionar una alcalinizacin en la zona de la superficie del medio de cultivo y en consecuencia, se produce un viraje al violeta. La formacin de H2S produce una coloracin negra debido al sulfuro de hierro producido. En el Caldo Selenito, el selenito inhibe el crecimiento de bacterias Coliformes y Enterococos en las primeras 6-12 horas siguientes al inicio de la

incubacin. Despus el efecto inhibidor disminuye lentamente. Por el contrario, Salmonella, Proteus no son inhibidas. (Merck, 2000). La prctica tiene como objetivo identificar a los diferentes gneros de enterobacteriaceas mediante su crecimiento y comportamiento en los medios de cultivo mencionados anteriormente.

2. Material y Mtodo:
Agar Mc Conkey: Peptona de casena.17 g Peptona de carne. 3 g NaCl 5 g Lactosa..10 mL Sales biliares.1,5 g Rojo neutro.0,03 g Cristal violeta0,001 g Agar13,5 g Agua destilada1000 mL

Disolver 50 g de agar Mc Conkey en un litro de agua destilada y calentar, llevar a autoclave por 15 minutos a 121 C, pH 7,1 0,1 a 25 C. Agar Salmonella-Shigella: Extracto de carne. 5 g Proteosa peptona. 5 g Bacto lactosa 10 g Sales biliares N 38,5 g Citrato de sodio8,5 g Tiosulfato de sodio..8,5 g Citrato frrico.1 g Bacto agar. 13,5 g Verde brillante.0,33 mg Rojo neutro.. 0,025 g

Suspender 60 g en 1000 mL de agua destilada fra y calentar para disolver. No esterilizar en autoclave. Repartir en placas Petri. Dejar secar por dos horas. Incubar por 24 horas a 37 C. Agar Desoxicolato-Citrato: Peptona.10 g Lactosa..10 g NaCl... 5 g Citrato frrico. 1 g Citrato de sodio.. 1 g Fosfato dipotsico.. 2 g Desoxicolato de sodio 1 g Agar...15 g Rojo neutro. 0,03 g pH 7,2 0,1 a 25 C.

Hacer una suspensin de 45 g en un litro de agua destilada. Calentar hasta disolver el medio completamente. No esterilizar en autoclave. Repartir 20 mL en placas Petri y dejar secar por dos horas. Incubar a por 24 horas a 37C. Agar Sulfito de Bismuto: Extracto de carne. 5 g Peptona...10 g Dextrosa5 g Fosfato disdico4 g Sulfato ferroso0,3 g Indicador Sulfito de Bismuto8 g Agar20 g Verde brillante...0,025 g pH 7,7 a 25 C

Disolver 52 g en 1000 mL de agua destilada y calentar hasta ebullicin para disolver el medio. No debe ser esterilizado.

Agar Tres Azcares: Extracto de carne. 3 g Extracto de levadura.....3 g Bacto peptona.15 g Bacto peptona proteosa 5 g Bacto dextrosa..1 g Bacto lactosa..10 g Bacto sacarosa10 g Sulfato ferroso...0,2 g NaCl.5 g Tiosulfato de sodio0,3 g Bacto agar..12 g Rojo de fenol 0,024 g Agua destilada. 1000 mL pH 7,4 0,2 a 25 C.

Aadir 65 g en un litro de agua destilada y calentar para disolver. Esterilizar a 121-124 C por 15 minutos. Agar Lisina-Hierro: Bacto peptona 5 g Extracto de levadura.. 3 g Bacto dextrosa.1 g L-lisina HCl...10 g Citrato Frrico de Amonio0,5 g Tiosulfato de sodio..0,04 g Bacto prpura de bromocresol.0,02 g Bacto agar15 g pH 6,7 0,2 a 25 C.

Hacer una suspensin de 34,5 g en un litro de agua destilada y calentar hasta disolver. Esterilizar a 121-124 C por 12 minutos. Caldo Selenito: Bacto tristona. 5 g Bacto lactosa.. 4 g

Selenito de sodio 4 g Fosfato de sodio10 g pH 7,0 0,2 a 25 C.

Disolver 23 g en un litro de agua destilada. Calentar hasta ebullicin para pasteurizar. No Autoclavar. Medio de transporte Cary & Blair: Tioglicolato de sodio1,5 g Fosfato disdico1,1 g NaCl..5,0 g Agar...5,0 g Agua destilada991,0 mL pH 8,4

3. Resultados:
Agar Mc Conkey:

Colonias Incoloras,

Microorganismos Shigellas y mayora

transparentes. de Salmonellas. Rosadas, hasta rojas Escherichia coli.

Agar Salmonella-Shigella:

Agar Desoxicolato-Citrato:

Colonias A las 18 horas: Rosa plidas hasta incoloras, de 1 mm de dimetro. Al principio incoloras, luego rosa plidas (ligera degradacin de lactosa). A las 18 horas: planas, de 1 mm de dimetro aprox. A las 38 horas: aprox. de 2 mm de dimetro.

Microorganismos Salmonella Shigella

Agar Sulfito de Bismuto:

Colonias Centro negro, borde claro, precipitado negro con brillo metlico

Microorganismos Salmonella, con excepcin de S. paratyphi A y S.pullorum

Identificacin Bioqumica TSI-LIA:

E. coli

Klebsiella

Enterobacter

Citrobacter

S. typhi

Shigella

Proteus

Proteus vulgaris

S. paratyphi A Grupo I: H2S (+) Anaerognicos: K/A- + K/KAerognicos: K/A++ +++ K/KSalmonella Citrobacter Proteus A/A++ ++++ K/AK/A++ ++++ R/AS. typhi

Otras Salmonellas Grupo II: H2S (-) Anaerognicos: K/A- K/A- + Shigella

Aerognicos: A/A++ - K/K+ E. coli A/A++++ - K/K- + K/A+ K/AKlebsiella S. paratyphi A A/A+++ - K/K- Enterobacter

4. Comentario:
La mayor parte de los miembros de este grupo pueden usar un nmero considerable de sustancias orgnicas simples como sustratos para su metabolismo respiratorio: cidos orgnicos, aminocidos y carbohidratos son de amplia utilizacin. En condiciones aerbicas, todas estas bacterias crecen bien en los medios bacteriolgicos complejos comnmente empleados, sirviendo sus integrantes nitrogenados (aminocidos y pptidos) como sustratos oxidables. Sin embargo, en condiciones anaerbicas su crecimiento depende estrictamente de la aportacin de un carbohidrato fermentable. Algunos monosacridos, disacridos y polialcoholes son fermentados por todos los integrantes del grupo entrico. La utilizacin de polisacridos es menos frecuente; sin embargo, la pectina es atacada por muchos de los patgenos de plantas (Erwinia). (Stanier, 1984).

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO PARA EL AISLAMIENTO POR UROCULTIVO Y HEMOCULTIVO

1. Introduccin:
En el gnero Salmonella el anlisis detallado de los antgenos O y H (incluyendo la variacin de fase de estos ltimos) ha hecho posible establecer cientos de serotipos; estos anlisis, en el caso de Escherichia y Shigella, son ms limitados. La utilidad principal de estos sistemas de clasificacin antignica no es taxonmica, sino epidemiolgica. El serotipo de una cepa patgena de Salmonella es un marcador que permite su reconocimiento (y posibilita, por tanto, seguir su transmisin), imposible de realizar por otros caracteres fenotpicos. Los gneros Salmonella y Shigella incluyen patgenos que dan lugar a gran cantidad de enfermedades entricas en el hombre y otros animales. (Stanier, 1984). En las fiebres tifoidea y paratifoidea (fiebres entricas), ocasionadas por Salmonella typhi, Salmonella paratyphi A y S. paratyphi B, el microorganismo llega al intestino delgado por medio del agua y los alimentos contaminados, luego se aloja en el intestino delgado y causa necrosis de tejido linfoide, sobre todo en las placas de Peyer; tambin ocasionan inflamacin en la vescula biliar, luego pasa al torrente circulatorio en donde se disemina por todo el organismo. En la enterocolitis (intoxicaciones alimentarias) ocasionada por S. typhimurium, S. enteritidis entre otras; existe inflamacin violenta por presencia de endotoxinas. No pasan al torrente circulatorio, se manifiesta por fiebre de grado bajo, nuseas, vmitos y diarrea.

En el caso de fiebres entricas se hace necesario un diagnstico por hemocultivo, utilizando para este diagnstico el medio bifsico compuesto por Agar Soya Trptica (TSA) y Caldo Soya Trptica (TSB). Para el diagnstico de otros microorganismos en muestras como orina, se realiza el urocultivo, utilizando para ello agar Mc Conkey y agar sangre para la siembra de la muestra (orina). El objetivo de esta prctica es demostrar la presencia de

microorganismos mediante el diagnstico por hemocultivo y urocultivo, para despus identificar dicho microorganismo mediante pruebas bioqumicas (TSILIA).

2. Material y Mtodo:
Medio Bilis de Buey: Bilis de buey fresca100 mL Glucosa........1 g

Disolver y Autoclavar. Servir en frascos a razn de 9 mL por frasco. Medio Bifsico: a. Fase Slida: Puede estar constituido por Agar de Soya Trptica (TSA) o Caldo Infusin Cerebro-Corazn (BHI) con agar. b. Fase Lquida: Puede estar constituido por Caldo de Soya Trptica (TSB) o Caldo Infusin Cerebro Corazn (sin agar) Para preparar este medio, la fase lquida se prepara en otro frasco y se autoclave, despus se le agrega a frasco con fase slida. Este medio puede estar constituido por: TSA-TSB BHI + agar-BHI (lquido) TSA-BHI (lquido)

3. Resultados: LECTURA DE HEMOCULTIVO

Medio Bilis de Buey:

Despus de incubada la sangre, se observa una coloracin chocolate del medio. Medio Bifsico: Se observa turbidez en la fase lquida, mientras que en la fase slida se observa un crecimiento en manto.

LECTURA DE UROCULTIVO
3.3.Agar Mac Conkey:

Urocultivo positivo Enterobacterias gram negativas, son lactosa positiva

3.4.Agar Sangre:

Urocultivo positivo. Enterobacterias gram positivas, son lactosa negativos.

3.5. Conteo de microorganismos en medio PCA: 1 + 3 + 3 + 1 + 4 = 12 bacterias 12 : 5 (campos) = 2.4 2.4 : 64 x 10-7 (rea) = 153.6 x 10-7 = 15 x 10-8

4. Comentario:
Para el diagnstico de Salmonella en caso de fiebres entricas: Muestra: Sangre (1 mL en caso de nios y 3 mL en caso de adultos), heces, suero. Finalidad: Hemocultivo, coprocultivo, reacciones sexolgicas (reaccin de Widal) Periodo de tiempo: Primera semana, segunda y tercera semana. Aislamiento en cultivo puro. Identificacin bioqumica. Identificacin serolgica Para el diagnstico de Salmonella en caso de Enteritis: Muestra: Heces. Finalidad: Coprocultivo. Periodo de tiempo: Primera semana. Aislamiento en cultivo puro. Identificacin bioqumica. Identificacin serolgica.

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO PARA Pseudomonas

1. Introduccin:
El grupo de Pseudomonas est constituido por bastoncillos aerobios Gram negativos mviles, algunos de los cuales producen pigmentos solubles en agua. Las Pseudomonas se encuentran distribuidas con amplitud en el suelo, en el agua, las plantas y los animales. Pseudomona aeruginosa se encuentra a menudo en nmeros pequeos en la flora intestinal normal y en la piel del ser humano. P. aeruginosa es mvil y tiene forma de bastoncillo, mide aproximadamente 0,6 x 2 m. Es una bacteria Gram negativa y se encuentra de manera aislada, en parejas y ocasionalmente en cadenas cortas. P. aeruginosa es un aerobio obligado que crece con facilidad en muchos tipos de medios de cultivo, y produce en ocasiones un olor dulzn a uvas. Algunas cepas hemolisan sangre. Con frecuencia produce el pigmento azuloso no fluorescente piocianina; otras especies de Pseudomonas no producen piocianina. Elabora tambin el pigmento fluorescente pioverdina, que imparte un color verdoso al agar. P. aeruginosa crece bien a una temperatura que oscila entre 37 a 42 C (Jawetz, 1999), esta caracterstica hace que pueda resultar patgeno para el hombre. Estos microorganismos pertenecen a la categora de los patgenos oportunistas, que normalmente no estn presentes en sus hospederos, pero que pueden producir infecciones en individuos con sus defensas debilitadas. Por tanto, P. aeruginosa da lugar a infecciones, con cierta frecuencia fatales, en personas que han sufrido quemaduras graves o en enfermos de cncer, sometidos a tratamientos con frmacos inmunosupresores. (Stanier, 1984). El agar Cetrimide presenta como componente principal al Cetrimide (cetiltrimetilamoniobromuro), que sirve para conseguir una notable inhibicin de

la flora acompaante. De acuerdo a una proposicin hecha por Lowbury y Collins (1955), una concentracin de 0,3 g/L ejerce una suficiente inhibicin de los organismos acompaantes, perjudicando mnimamente el crecimiento el crecimiento de P. aeruginosa. (Merck, 2000). El objetivo de esta prctica es demostrar la capacidad de pigmentacin de P. aeruginosa y observar sus caractersticas en los diferentes medios de cultivo.

2. Material y Mtodo:
Agar Cetrimide: Peptona.22 g MgCl20,14 g K2SO4.1 g Cetrimide..0,03 g Agar... 1,5 g Agua destilada100 mL

Disolver y agregar 1 mL de glicerol. Autoclavar y servir en placas estriles, pH 7,2 0,2. Caldo Glutamato: K2HPO4.0,5 g MgSO4.. 1 g Glicerol. 5 g Glutamato monosdico. 5 g Agua1000 mL pH 7,0

Autoclavar y servir en placas estriles. Agar Glutamato: K2HPO4.0,5 g MgSO4.. 1 g Glicerol. 5 g

Glutamato monosdico. 5 g Agar.. 15 g Agua1000 mL pH 7,0

Autoclavar y servir en placas estriles. 2.4 Prueba de la Oxidasa: Reactivo Oxidasa: Solucin A: Solucin alcohlica (etanol al 95%) al 1% de -naftol. Solucin B: Solucin alcohlica al 1% de p-aminodimetilanilina clorhidrato (HCl). Agregar la solucin A en las tiras de papel de filtro y luego en la misma tira agregar el ingrediente B Hacer una asada en cultivo de Pseudomonas y pasarla en un extremo de la tira de papel de filtro. En el otro extremo agregar una asada de E. coli.

3. Resultados:
Agar Cetrimide:

Colonias de Pseudomona aeruginosa forman un pigmento verde azulado (piocianina).

Caldo Glutamato:

P. aeruginosa Pelcula, turbidez y sedimento

P. fluorescens Pelcula, turbidez y sedimento

Al agregar cloroformo se observa al fondo del tubo al pigmento piocianina (que es soluble en agua y cloroformo), mientras que en parte superficial se observa a la fluorescena o pioverdina (soluble slo en agua).

fluorescena

piocianina

Caldo Comn:

P. aeruginosa Pelcula, turbidez y sedimento

P. fluorescens Pelcula, turbidez y sedimento

Agar Mc Conkey:

P. fluorescens

P. aeruginosa

Agar Glutamato:

P. aeruginosa Agar Nutritivo:

P. fluorescens

P. aeruginosa TSI-LIA:

P. fluorescens

P. aeruginosa

P. fluorescens

Prueba de la Oxidasa: Oxidasa (+) V. cholerae Oxidasa (+): Pseudomonas Oxidasa (-) E. coli

4. Comentario:
Otros pigmentos que pueden elaborar algunas cepas de Pseudomonas son la piorrubina (color rojo) y la piomelanina (color negro). En cultivo, P. aeruginosa puede producir muchos tipos de colonias, y da la impresin de un cultivo de especies mixtas de bacterias. P. aeruginosa de tipos diferentes de colonias puede tener tambin actividades bioqumicas y enzimticas distintas y diversos patrones de sensibilidad a los agentes

antimicrobianos. Los cultivos de pacientes con fibrosis qustica producen con frecuencia P. aeruginosa que forman colonias muy mucoides. (Jawetz, 1999).

LECTURA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO PARA Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus y V. alginolyticus

1. Introduccin:
Los vibriones se encuentran entre las bacterias ms comunes en aguas superficiales en todo el mundo. Son bastoncillos aerobios curvos que tienen motilidad, y poseen un flagelo polar. No forman esporas. Vibrio cholerae serogrupo O1 y los vibriones relacionados con ste, producen clera en el hombre, en tanto que otros vibriones pueden producir sepsis o enteritis. V. cholerae fermenta con regularidad la sacarosa y la manosa, pero no la arabinosa. Una prueba a la oxidasa es un paso crtico en la identificacin preliminar de V. cholerae y otros vibriones. Las especies de Vibrio son susceptibles al compuesto O/129, que los diferencia de otras especies de Aeromonas, las cuales son resistentes al O/129. La mayor parte de las especies de Vibrio son halotolerantes y el NaCl con frecuencia acelera su proliferacin. Algunos vibriones son halfilos y requieren la presencia de cloruro de sodio para crecer. Otra diferencia entre vibriones y Aeromonas es que las

primeras proliferan en caldo que contiene 6% de cloruro de sodio, en tanto que las ltimas no. (Jawetz, 1999). El objetivo de esta prctica es observar el crecimiento de V. cholerae y otros vibriones en diferentes medios de cultivo como: Agar Mc Conkey, Agar BHI, TSI-LIA, APA y TCBS.

2. Material y Mtodo:
Agua Peptonada Alcalina (APA): NaCl5 g Peptona.10 g Agua destilada.1000 mL

Para enriquecimiento selectivo, la selectividad a este medio se la da el pH (8,6).

Prueba de Strig Test: Reactivo de String Test: Desoxicolato de sodio al 0,5%. Sobre una lmina, agregar gotas de desoxicolato de sodio al 0,5%. Sobre la gota de Desoxicolato de sodio, hacer una extensin de la suspensin de V. cholerae. Al levantar con el asa la suspensin, se observa que sta puede estirarse y presenta forma de rosario. Prueba Serolgica de V. cholerae: Sobre una lmina se hacen tres suspensiones en SSF de V. cholerae. Luego agregar los antisueros Ogawa, Inaba y Polivalente (que contiene a Ogawa, Inaba e Hikojima). Tolerancia a la Sal:

Se siembra V. cholerae, V. parahaemolyticus y V. alginolyticus a diferentes concentraciones de Cloruro de sodio (0%, 1%, 7% y 10%) en Agua Peptonada Alcalina.

3. Resultados:
Agua Peptonada Alcalina:

V. cholerae Pelcula, turbidez

Prueba de String Test:

Forma arrosariada (V. cholerae) Prueba Serolgica de V. cholerae:

Despus

de

hacer rotaciones se observ que era V. cholerae Tolerancia a la Sal: NaCl al 0%:

V. cholerae

V. parahaemolyticus

V. alginolyticus

NaCl al 1%:

V. cholerae

V. parahaemolyticus

V. alginolyticus

NaCl al 3%:

V. cholerae NaCl al 7%:

V. parahaemolyticus

V. alginolyticus

V. cholerae NaCl al 10%:

V. parahaemolyticus

V. alginolyticus

V. cholerae [NaCl] V. cholerae V. parahaemolyticus V. alginolyticus 0% +

V. parahaemolyticus 1% + + + 3% + + +

V. alginolyticus 6% + + + 7% + + 8% + + 10% +

Agar Mc Conkey:

Colonias amarillas (lactosa ) V. cholerae

Agar TCBS:

Colonias amarillas (sacarosa +) V. cholerae

Colonias azul verdosas (sacarosa -) V. parahaemolyticus

V. alginolyticus

Agar Comn:

V. cholerae

TSI-LIA:

A/A- K/A- - K/K+ 8-12 hs 18-24 hs V. cholerae

K/A- - K/K+ V. parahaemolyitcus

A/A- - K/K+ V. alginolyticus

3.10. Observacin Microscpica:

Observacin: Vibrio Coloracin: Gram Aumento: 1000 X Forma caracterstica: Curvados

4. Comentario:

V. cholerae produce colonias convexas, lisas y redondas que son opacas y granulosas bajo luz transmitida. V. cholerae y la mayor parte de los otros vibriones crecen bien a 37 C en muchas clases de medios, incluso los definidos que contienen sales minerales y asparragina como fuentes de carbono y nitrgeno. Crece bien en agar con tiosulfato, citrato, bilis y sacarosa (TCBS) en el que produce colonias amarillas. Los vibriones son positivos a la oxidasa, lo que los distingue de las bacterias Gram negativas intestinales que crecen en agar sangre. En las regiones en que el clera es endmico, son apropiados los cultivos directos en medios selectivos, como TCBS y los de enriquecimiento en peptona alcalina y agua. Sin embargo, por lo general no se requiere ni se justifica la proporcin entre costos y beneficios de los coprocultivos sistemticos en medios especiales como TCBS en las regiones en que es rara esta enfermedad. (Jawetz, 1999).

OBSERVACIN DEL CRECIMIENTO EN MEDIOS DE CULTIVOS DE Aeromonas

1. Introduccin:
Las especies de Aeromonas son bacilos Gram negativos de vida libre que se encuentran en agua dulce, y en ocasiones en reptiles, anfibios, peces y en el suelo o los alimentos. Su presencia se relaciona con diarrea y a veces causan

infecciones en heridas expuestas a agua dulce o en personas inmunodeficientes y, rara vez, otro tipo de infecciones no intestinales. Aeromonas hydrophila es la especie ms importante que causa enfermedad en el hombre. Los microorganismos de A. hydrophila tienen de 1 a 4 m de longitud y son mviles. La morfologa de las colonias es semejante a la de los bacilos intestinales Gram negativos y producen zonas grandes de hemlisis en agar sangre. A. hydrophila cultivada en muestras de heces, prolifera con facilidad en los medios diferenciales usados para cultivar bacilos intestinales Gram negativos y puede confundirse con stos. La presente prctica tuvo como objetivo observar el crecimiento de estos microorganismos en los diferentes medios de cultivo que se mencionan ms adelante.

2. Resultados:
Agar Sangre:

Aeromonas Colonias de aspecto hmedo y pequeas, hemolticas grisaceas , brillantes Mac Conkey:

Aeromonas

Lactosa positiva

3. Comentario:
Las especies de Aeromonas se distinguen de las bacterias intestinales Gram negativas por la reaccin positiva a la oxidasa en las colonias obtenidas en placas de agar sangre. Las especies de Aeromonas se diferencian de los vibriones por la resistencia que muestran al complemento O/129 y porque no proliferan en caldo con 6% de cloruro de sodio. (Jawetz, 1999). Aeromonas hydrophila lleva a cabo fermentacin butanodilica, con produccin de H2 y CO2, similar a la de Enterobacter. Aeromonas punctata y A. shigelloides realizan fermentacin cido-mixta, sin produccin de gas, similar a la de Shigella. A. shigelloides tambin se parece estrechamente al grupo Shigella en composicin de bases del ADN y se ha demostrado que comparte ciertos antgenos somticos con este grupo de bacterias entricas. (Stanier, 1984).

OBSERVACIN EN MEDIOS DE CULTIVO DE Yersinia

1. Introduccin:
El gnero Yersinia incluye dos o tres especies patgenas de roedores. Yersinia pestis puede transmitirse por pulgas, a partir de los roedores, al hombre; es el agente causal de la peste bubnica, enfermedad que ha aparecido con caracteres epidmicos y mortalidad muy elevada a lo largo de la historia de la humanidad. En el hombre, tambin puede transmitirse la infeccin por va respiratoria. Tanto por su forma de transmitirse como por los sntomas que originan, las enfermedades causadas por especies de Yersinia resultan totalmente diferentes de las principales infecciones entricas. La peste es una enfermedad de roedores domsticos y salvajes, transmitida al hombre por la picadura de la pulga. La enfermedad se llama peste bubnica porque los ganglios linfticos infectados aumentan su tamao (bubones). En los casos graves el organismo es diseminado a otros rganos; cuando se infectan los pulmones, la enfermedad se hace directamente transmisible al hombre por infeccin por gotitas. Esta forma de infeccin se conoce como peste pneumnica y es muy contagiosa. (Stanier, 1984). El objetivo de esta prctica es observar la forma de crecimiento de Yersinia pestis en los diferentes medios de cultivo.

2. Material y Mtodo:
Colorante de Wayson:

Fucsina bsica..0,2 g Azul de metileno.0,75 g Etanol..20 mL

Filtrar y agregar 200 mL de una solucin acuosa de fenol al 5%. Guardar a temperatura ambiente en frascos oscuros.

Resultados:
Agar Sangre:

Y. pestis

Y. pseudotuberculosis

Agar Comn Enriquecido:

Y. pestis Agar Mc Conkey:

Y. pseudotuberculosis

Y. pestis Lactosa () Observacin Microscpica:

Y. pseudotuberculosis Lactosa ()

Observacin: Y. pestis Colorante: Wayson Aumento: 1000 X

Medio BHI:

Y. pestis

Y. pseudotuberculosis

3. Comentario:

Los miembros del gnero Yersinia llevan a cabo fermentacin cido mixta sin produccin de H2 ni CO2; en este aspecto se parecen al grupo Shigella. Producen -galactosidasa y poseen una potente ureasa. La movilidad es un carcter variable; Y. pestis es permanentemente inmvil. El contenido de G + C en su ADN es significativamente ms bajo que el de los grupos Escherichia, Salmonella y Shigella. Una caracterstica de su cultivo que las distingue del resto de las enterobacterias es su crecimiento relativamente lento en medios complejos. (Stanier, 1984).

Prueba de Movilidad: Medio Movilidad: Extracto de carne3 g Peptona.10 g NaCl.. 5 g Agua destilada..100 mL Agar....... 4 g Gelatina.10 g pH 7,4

4.2.MEDIO SIM - Tripsina .. 20g - Peptona ..6,1g - Sulfato de hierro y...0,2g - Tiosulfato de sodio. 0,2g - Agar ....3,5g - pH final 7,3 + 0,2

Prueba de Movilidad:

Mvil (V. cholerae)

Inmvil

MEDIO SIM

S.paratyphi A mvil

E. coli mvil

P. mirabilis mvil

Klebsiella no mvil

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS ESCUELA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

INFORME DE PRCTICAS DE LABORATORIO

Curso: Bacteriologa Alumna: Claudia Salinas Cepero Docentes: Milciades Chvez Castillo Icela Rodrguez Haro Ciclo: VII

Trujillo-Per

2002
Referencias Bibliogrficas:
Jawetz, E. 1999. Microbiologa Mdica. 16 Edic. Editorial El Manual Moderno. Mxico D.F., Mxico. Merck. 2000. Manual de Medios de Cultivo. Stanier, R. 1984. Microbiologa. 4 Edic. Editorial Revert. Barcelona, Espaa.