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CARACTERIZACIN QUMICA DE LA STEVIA REBAUDIANA

M. Bravo A.1, N. Ale B.2, D. Rivera C.3, J. Huamn M.4, D. Delms R.5, M. Rodrguez B.6, M. Polo S.7, M. Bautista C8.

RESUMEN Se realizaron extracciones acuosas, controlando el pH con CaCO3 e Ca(OH)2, se utilizaron como clarificantes carbn activado y arcillas activadas en soluciones fras y calientes; de ello se obtuvo los mejores resultados con bentonita en fro, arcilla activada y carbn activado en caliente. Los resultados analticos se comparan con una muestra de Stevia comercial. Palabras clave: Extraccin, clarificante, edulcorante, intercambio inico, estevisido. CHEMICAL CHARACTERIZATION OF THE STEVIA REBAUDIANA ABSTRACT Aqueous extractions were performed controlling the pH with CaCO3 and Ca (OH)2, using as clarifiers activated coal and activated clays in cold and warm solutions to obtain best results with cold bentonite, warm activated clay and warm activated coal. Analytical results were compared with a commercial sample of stevia. Keywords: Extraction, clarifier, sweetener, ion exchange, stevioside.

I. INTRODUCCIN En el momento actual, en el que todo el mundo mira a los productos naturales como una alternativa de alimentacin sana, nos vemos en la necesidad de estudiar las hojas de esta planta. La Stevia rebaudiana crece en ceja de selva del Per, as como en las regiones de Cajamarca y Arequipa. Esta planta es usada como edulcorante natural no calrico, recomendada para personas diabticas y personas obesas. Por referencias bibliogrcas se conoce que tiene muchas propiedades beneciosas: digestiva, antibacteriana, diurtica, anticida y cardiotnica, antioxidante, desintoxicante, cosmtica y antidiabtica.
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Es usada como infusin, en extracto y como cristales solubles, para estas dos ltimos es necesario hacer una puricacin y claricacin.

Figura N. 1. Estructura del estevisido.

Departamento de Qumica Analtica, FQIQ, UNMSM, mmbravoa@hotmail.com Departamento de Qumica Analtica, FQIQ, UNMSM, alesbunmsm@yahoo.es Departamento de Qumica Analtica, FQIQ, UNMSM, riverl@hotmail.com Departamento de Qumica Orgnica, FQIQ, UNMSM, jmariah25@hotmail.com Departamento de Qumica Analtica, FQIQ, UNMSM, dines_13delmas@yahoo.com Departamento de Qumica Analtica, FQIQ, UNMSM, angelrodbest@yahoo.com Departamento de Qumica Inorgnica, FQIQ, UNMSM, aproinsac@yahoo.com Departamento de Procesos, FQIQ, UNMSM, mabutistac@unmsm.edu.pe

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En el presente trabajo se enfatiz en la extraccin del estevisido, identicando al metabolito primario responsable del poder edulcorante. Figura N. 1. II. PARTE EXPERIMENTAL Material biolgico. Las hojas de Stevia rebaudiana fueron adquiridas en Lima pero proceden de la regin de Cajamarca. Los anlisis se realizaron con muestras deshidratadas. Las muestras para la extraccin del estevisido se prepararon segn Figura N. 2. Etapas del proceso 1era etapa: Seleccin, molienda y tamizado en malla 200. 2da etapa: Extraccin acuosa con CaCO3 por 24 horas, posterior ltracin cuidadosa. 3ra etapa: Extraccin regulando el pH con Ca (OH)2 en fro y en caliente para denir el mtodo ms ptimo y posterior ltracin cuidadosa. 4ta etapa: Regular el pH del extracto 10 12 y posterior ltracin. 5ta etapa: Claricacin usando en unos casos carbn activado y en otras arcillas activadas. Regulando a un pH 7,5. 6ta etapa: Puricacin usando resinas de intercambio inico y obtencin de cristales. Procedimiento experimental Seleccin, molienda y tamizado en malla 200, posterior extraccin acuosa regulando el pH con CaCO3 por 24 horas con agitacin constante. (Extracto Bruto 1). Se ltra el extracto obtenido separando los gruesos de los nos (Extracto 2), se adiciona Ca (OH)2 regulando el pH. Se realiza la ltracin ade-

cuada del extracto para eliminar impurezas realizando mltiples ltraciones (Extracto 3) y luego precipitndolo a un pH de 10 con H3PO4 al 2% para eliminar interferentes persistentes (Extracto 4). Se procede a la claricacin, usando carbn activado y en otros casos arcilla activada (Extracto claricado) con un pH 7,5 regulando con una temperatura mxima de 45 C para los procesos en caliente. Finalmente, se purica usando resinas de intercambio inico, para su posterior cristalizacin.
EXTRACCIN
H2O CACO3 - Agitacin

EXTRACTO BRUTO (1) Filtracin gruesas - finas

Lavados
H2O

EXTRACTO (2)
CA(OH)2 Agitacin 30 minutos

Filtracin fina

Lavados

EXTRACTO (3)
pH = 10 12 Clarificantes - Agitacin

Filtracin fina

Lavados

EXTRACTO (4)

Filtracin fina

Lavados

EXTRACTO CLARIFICADO pH = 7,5

Intercambio inico Eluyente Fluido en mezcla hidroalcohlica Evaporacin 45 - 50 C

Cristalizacin (ESTEVISIDO)

Figura N. 2. Diagrama de flujo para la obtencin del estevisido.

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III. RESULTADOS
Cuadro N. 1. Anlisis cualitativo de iones: Ca2+ y PO43- , en extractos y cristales. Muestra Referencia Extracto acuoso Cristales
Donde: X: XX: enturbiamiento. precipitacin.

Cuadro N. 5. Bandas caractersticas de la muestra de referencia (FTIR). Bandas (cm-1), 3350,07 2929,98 1727,99 1447,90 1074,52 Grupos Funcionales O-H C-H C=O C-H C-O-C

Ca2+ X XX X

PO43X (solucin verde) No hay No hay

Cuadro N. 6. Bandas caractersticas de la muestra (cristales obtenidos) (FTIR). Bandas (cm-1), 3377,21 2935,53 1726,56 1447,81 1073,74 Grupos Funcionales O-H C-H C=O C-H C-O-C

Cuadro N. 2. Pruebas cualitativas en el extracto acuoso. Reactivo Reactivo de Fehling Reactivo de Cloruro Frrico Reactivo de Molisch
(++) : (+) : Buena cantidad Poco

Resultado Positivo ( ++) Positivo (++) Positivo (+)

Cuadro N. 3. Estudio de la clarificacin-efecto del pH.

Muestra (molida) M1 M2 M3 M4 M5 M6 Mtodo de extraccin Fro Caliente Fro Caliente Caliente Caliente pH (despus de claricacin) 7,5 7,5 7,5 7,5 7,5 7,5

IV. DISCUSIN De los resultados obtenidos mostrados en el Cuadro N. 2, con las reacciones de Fehling, cloruro frrico y reactivo de Molisch se determina la presencia de grupos OH, grupos C=O y azcares. El mtodo ptimo para la extraccin del estevisido comprende varias etapas entre las ms importantes: extraccin acuosa (temperatura de extraccin), ltracin, claricacin, puricacin, precipitacin, recristalizacin y secado del estevisido. De acuerdo a los espectros IR, se nota la presencia de los grupos funcionales caractersticos, tanto en la muestra de referencia como la de los cristales obtenidos. V. CONCLUSIONES Segn las pruebas analticas cualitativas, los extractos nales presentan calcio y un pH promedio de 7,5; mientras que en los extractos puricados por cromatografa de intercambio inico disminuye la presencia de calcio y el pH promedio es 6. La muestra utilizada como referencia presenta calcio en menor proporcin y un pH 6,5.

pH

Claricante

10,0 Bentonita + Gelatina 10,0 Bentonita + Gelatina 10,0 A A + Gelatina 10,0 Carbn activado 12,0 A A + Gelatina + C A 10,0 A A + Gelatina

Fro: Temperatura ambiente. A A: Arcilla activada Clarificante: 2%

Caliente: T = 40 - 45 C C A: Carbn activado Gelatina: 0,1%

Cuadro N. 4. Estudio cromatogrfico del estevisido.

Muestras: Extractos claricados y producto cristalino.

Rf (Muestra) 0,64 0,63 0,63 0,64 0,63 0,64 0,67 Rf: Referencia 0,65 0,64 0,63 0,64 0,63 0,64 0,67

M1 M2 M3 M4 M5 M6 C

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Los Rf de la muestra de referencia y de las muestras de trabajo extractos claricados tienen valores entre 0,63 y 0,67, lo que indica la presencia del estevisido. En cuanto al barrido de longitudes de onda por espectrofotometra visible, podemos notar que la muestra utilizada como referencia y todas las muestras trabajadas tienen un mximo de absorbencia de 660 nm, en tanto que sus menores absorbencias se encuentran entre 620-625 nm. Las muestras claricadas con bentonita en fro y con arcilla activada y carbn activado en caliente presentan los mayores niveles de absorcin en 660 nm al igual que la muestra utilizada como referencia. El espectro FTIR de la muestra de referencia muestra bandas caractersticas de la molcula de estudio obtenida. La muestra aislada presenta bandas similares que conrman la presencia del estevisido. VI. AGRADECIMIENTO Los autores agradecen la nanciacin otorgada por el Consejo Superior de Investi-

gaciones (CSI) de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS [1] Lock de Ugaz O. Investigacin fitoqumica, 2da. ed. Lima: Fondo Editorial PUCP, 1994; pp. 255-279. Gibaja Oviedo S. Pigmentos naturales. Lima: Fondo Editorial UNMSM, 1998; pp. 145-149. Soto A, Del Val S. Revista de Ciencias Agrarias y Tecnologa de los alimentos. 2002 20: 5-9. Mosetting E. et al. J. Am. Chem. Soc. 1963 85: 2305. Tanaka O. Trends in Analytical Chemistry 1982 1 (11):246-248. Kobayashi, M. et al. Phytochemistry 1977 16: 1405. United Status Patent, Patent. Number: 5, 962,678, Oct. 5, 1999. www.miski/perusac.com www.paraguayvende.com.py

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