Universidad Nacional Mayor de San Marcos Facultad de Medicina Escuela Acadmico Profesional de Tecnologa Mdica rea de Laboratorio Clnico

y Anatoma Patolgica

ESTANDARIZACIN DEL TRABAJO EN INMUNOHEMATOLOGA Y LECTURA E INTERPRETACION DE LA REACCIN ANTGENO-ANTICUERPO EN TU

CURSO: Inmunohematologa y hemoterapia ALUMNA: Corman Huamn Sonia Victoria

2012
ESTANDARIZACIN DEL TRABAJO EN INMUNOHEMATOLOGA

I.- DETERMINACIN EN PLACA: Fundamento: La presencia de antgenos en la superficie de los glbulos rojos se puede detectar por la hemoaglutinacin producida cuando se aade un antisuero con anticuerpos frente a dichos antgenos. La aglutinacin en placa o lmina se utiliza como prueba de tamizaje. Materiales: Reactivo, que contiene anticuerpos x Muestras , muestra sangunea que contiene glbulos rojos con sus respectivos antgenos Muestra , muestra sangunea que contiene glbulos rojos con sus respectivos antgenos Laminas portaobjetos

Procedimiento En una placa de vidrio, aplicar por duplicado una gota de la muestra y rotular cada una como prueba y testigo por separado. Aadir a la primera (prueba) una gota del Reactivo. Aadir a la segunda (testigo) una gota de solucin salina Fisiolgica. Mezclar muestra con reactivo, con la ayuda de una baqueta, en un rea no mayor de 1 x 2 cm. Levantar la placa de la mesa y aplicar movimientos ondulatorios, hasta por 30 segundos. Anotar su resultado teniendo en cuenta la nota adjunta.

 Repetir el mismo esquema con la muestra

Resultados MUESTRA Muestra

IMAGEN

NOMBRE ALGLUTINACIN

FUNDAMENTO DEL RESULTADO

Testigo Negativa No se observ la Al observarse grumos en presencia de grumos ya la lamina indica que hay que al no agregar reactivo aglutinacin debido a que no hubo anticuerpos que hubo una reaccin reaccionaran con los Antgeno-Anticuerpo, esto antgenos presentes en los quiere decir que la glbulos rojos de la muestra posee glbulos muestra . Si en caso se rojos que estn observara aglutinacin recubiertos con antgenos positiva indicara que la que son reconocidos por muestra o la solucin los anticuerpos del salina estn reactivo. contaminadas. Muestra

Prueba Positiva 4 +

MUESTRA

IMAGEN

NOMBRE ALGLUTINACIN

Prueba Negativa

FUNDAMENTO DEL RESULTADO

No se observ presencia de grumos, esto quiere decir que no hubo aglutinacin ya que la muestra no posee antgenos que sean reconocidos por los anticuerpos que contiene el reactivo.

Testigo Negativa No se observ la presencia de grumos ya que al no agregar reactivo no hubo anticuerpos que reaccionaran con los antgenos presentes en los glbulos rojos de la muestra . Si en caso se observara aglutinacin positiva indicara que la muestra o la solucin salina estn contaminadas.

II.- DETERMINACIN EN TUBO Fundamento: La presencia de antgenos en la superficie de los glbulos rojos se puede detectar por la hemoaglutinacin producida cuando se aade un antisuero con anticuerpos frente a dichos antgenos. La aglutinacin en tubo se utiliza como prueba confirmatoria. Materiales: Reactivo, que contiene anticuerpos x Muestras , muestra sangunea que contiene glbulos rojos con sus respectivos antgenos

Muestra , muestra sangunea que contiene glbulos rojos con sus respectivos antgenos Tubos de ensayo de vidrio de 12 x 75 Centrifuga de 3500 rpm.

Procedimiento: Basal: Rotular 2 tubos de vidrio 12 x 75 como muestra ; a uno de ellos rotular como prueba y al segundo como testigo, agregar a cada uno una gota de la muestra. Aadir al primero una gota del Reactivo. Aadir al segundo una gota de Solucin Salina. Centrifugar a 3500 r.p.m. por 15 segundos. Retirar los tubos y leer las reacciones, anotar sus resultados. Repetir el mismo esquema con la muestra

Resultados MUESTRA Muestra

IMAGEN

NOMBRE ALGLUTINACIN

FUNDAMENTO DEL RESULTADO

OBSERVACIN

Testigo Negativa No se observ presencia de botn, ni grumos, solo Al observarse un botn en se vio un fondo turbio y el fondo del tubo indica homogneo, esto que hubo aglutinacin aglutinacin negativa, ya debida a la reaccin que al no agregar reactivo Antgeno-Anticuerpo, esto no hubo anticuerpos que quiere decir que la reaccionaran con los muestra posee glbulos antgenos presentes en los rojos que estn glbulos rojos de la recubiertos con antgenos muestra si los hubiera. que son reconocidos por Si en caso se observara los anticuerpos del aglutinacin positiva reactivo. indicara que la muestra o la solucin salina estn contaminadas. Se observ que el botn tena un dimetro aproximado de 5 mm. Se debe aclarar que para la visualizacin de resultados los tubos deben estar en posicin horizontal y previamente removidos con suavidad para poder observar bien si hay aglutinacin

Prueba Positiva 4 +

MUESTRA

Muestra

IMAGEN

NOMBRE ALGLUTINACIN

FUNDAMENTO DEL RESULTADO

OBSERVACIN

Testigo Negativa No se observ presencia de botn, ni grumos, solo se vio un fondo turbio y No se observ presencia homogneo, esto de botn, ni grumos, solo aglutinacin negativa, ya se vio un fondo turbio y que al no agregar reactivo homogneo, esto indica no hubo anticuerpos que que la aglutinacin reaccionaran con los negativa debido a que la antgenos presentes en los muestra no posee glbulos rojos de la antgenos que sean muestra . Si en caso se reconocidos por los observara aglutinacin anticuerpos que contiene positiva indicara que la el reactivo. muestra o la solucin salina estn contaminadas. Se debe aclarar que para la visualizacin de resultados los tubos deben estar en posicin horizontal y previamente removidos con suavidad para poder observar bien si hay aglutinacin

Prueba Negativa

Preparacin I - Empacado de hemates Colocar 10 gotas de la muestra en un tubo de vidrio 12 x 75, rotularlo como tal; con la ayuda de la pisceta de plstico y sin tocar las paredes del tubo, agregar Solucin Salina Fisiolgica, hasta 5 mm del borde del tubo, colocar un Parafilm y mezclar por inversin. Hacer lo mismo con la muestra . Centrifugar a 3,500 r.p.m. por 2 minutos. Con la ayuda de una pipeta pasteur y un chupn de goma, aspirar todo el sobrenadante, sin levantar los hemates (clulas lavadas).

 Con la ayuda de una pipeta pasteur, transferir una gota de las clulas lavadas, a un nuevo tubo, aadir 19 gotas de Solucin Salina Fisiolgica, rotular adecuadamente: suspensin de trabajo. Con esta preparacin repetir los 5 pasos del procedimiento anterior (basal).

Resultados MUESTRA Muestra

IMAGEN

NOMBRE ALGLUTINACIN

Testigo Negativa No se observ presencia de botn, ni grumos. Al observarse un botn en Esto indica aglutinacin el fondo del tubo indica negativa, ya que al no que hubo aglutinacin agregar reactivo no hubo debida a la reaccin anticuerpos que Antgeno-Anticuerpo, esto reaccionaran con los FUNDAMENTO quiere decir que la antgenos presentes en los DEL RESULTADO muestra posee glbulos glbulos rojos de la rojos que estn muestra . Si en caso se recubiertos con antgenos observara aglutinacin que son reconocidos por positiva indicara que la los anticuerpos del muestra o la solucin reactivo. salina estn contaminadas. El lavado se realizo para eliminar la mayor parte de las protenas plasmticas, micro-agregados, OBSERVACIONES leucocito y plaquetas. Al agregar 19 gotas adicionales de de solucin

Prueba Positiva 4 +

salina a 1 gota de las clulas lavadas re realizo una dilucin de 1/20, esto quiere decir que la muestra est al 5% Se observ que el botn tena un dimetro menor a 5 mm, esto no debe ser as y se concluye que hubo error al retirar el sobrenadante para obtener las clulas lavadas, dejando sobrenadante lo que produjo que la concentracin de las clulas lavadas sea menor al 100%. Se debe aclarar que para la visualizacin de resultados los tubos deben estar en posicin horizontal y previamente removidos con suavidad para poder observar bien si hay aglutinacin MUESTRA Muestra

IMAGEN

NOMBRE ALGLUTINACIN

FUNDAMENTO DEL RESULTADO

Testigo Negativa No se observ presencia de botn, ni grumos. No se observ presencia Esto indica aglutinacin de botn, ni grumos, esto negativa, ya que al no indica que la aglutinacin agregar reactivo no hubo es negativa ya la muestra anticuerpos que no posee antgenos que reaccionaran con los sean reconocidos por los antgenos presentes en los anticuerpos que contiene glbulos rojos de la el reactivo. muestra . Si en caso se observara aglutinacin

Prueba Negativa

OBSERVACIONES

positiva indicara que la muestra o la solucin salina estn contaminadas. El lavado se realizo para eliminar la mayor parte de las protenas plasmticas, micro-agregados, leucocito y plaquetas. Al agregar 19 gotas adicionales de de solucin salina a 1 gota de las clulas lavadas re realizo una dilucin de 1/20, esto quiere decir que la muestra est al 5% Se debe aclarar que para la visualizacin de resultados los tubos deben estar en posicin horizontal y previamente removidos con suavidad para poder observar bien si hay aglutinacin CUESTIONARIO

1.- Que volumen tiene una gota? El volumen de una gota que es dispensada con un gotero es de 50 ul. 2.- Qu puede comentar de los resultados obtenidos en placa con la muestra y la muestra ? En la lamina de prueba de la muestra se observ presencia de grumos lo que indica que hubo aglutinacin debido a una reaccin Antgeno-Anticuerpo, esto quiere decir que la muestra posee glbulos rojos que estn recubiertos con antgenos que son reconocidos por los anticuerpos del reactivo. Mientras que en la lmina prueba de la muestra no se observo grumos, esto quiere decir que no hubo aglutinacin ya que la muestra no posee antgenos que sean reconocidos por los anticuerpos que contiene el reactivo. En las laminas testigo de ambas muestras y no se observ la presencia de grumos ya que al no agregar reactivo no hubo anticuerpos que reaccionaran con los antgenos presentes en los glbulos rojos de las muestras si es que los hubieran. Si en caso se observara aglutinacin positiva indicara que la muestra o la solucin salina estn contaminadas. 3.- Cul es la concentracin de la preparacin I, y cual la de la preparacin II? La concentracin de la preparacin I es 5% La concentracin de la preparacin II es 1%.

4.- Qu puede comentar de los resultados de la determinacin en tubo Basal? En el tubo de prueba de la muestra se observ presencia de botn lo que indica que hubo aglutinacin debido a una reaccin Antgeno-Anticuerpo, esto quiere decir que la muestra posee glbulos rojos que estn recubiertos con antgenos que son reconocidos por los anticuerpos del reactivo. Mientras que en el tubo de prueba de la muestra no se observo botn, solo se vio un fondo turbio y homogneo, esto indica aglutinacin negativa debido a que la muestra no posee antgenos que sean reconocidos por los anticuerpos que contiene el reactivo. En los tubos testigo de ambas muestras y no se observ la presencia de botn ya que al no agregar reactivo no hubo anticuerpos que reaccionaran con los antgenos presentes en los glbulos rojos de las muestras si es que los tuviera. Si en caso se observara aglutinacin positiva indicara que la muestra o la solucin salina estn contaminadas. 5.- Qu puede comentar de los resultados obtenidos con la preparacin I, tanto con la muestra as como con la muestra ? Al agregar 19 gotas adicionales de de solucin salina a 1 gota de las clulas lavadas tanto de la muestra como de la muestra re realizo una dilucin de 1/20, esto quiere decir que la concentracin de las muestras estn al 5%. El lavado de glbulos rojos con solucin salina se realizo para eliminar la mayor parte de las protenas plasmticas, micro-agregados, leucocito y plaquetas. En el tubo de prueba de la muestra se observ presencia de botn bien definido y fondo claro lo que indica que hubo aglutinacin debido a una reaccin Antgeno-Anticuerpo, esto quiere decir que la muestra posee glbulos rojos que estn recubiertos con antgenos que son reconocidos por los anticuerpos del reactivo. Mientras que en el tubo de prueba de la muestra no se observo botn, solo se vio un fondo turbio y homogneo, esto aglutinacin negativa debido a que la muestra no posee antgenos que sean reconocidos por los anticuerpos que contiene el reactivo. En los tubos testigo de ambas muestras y no se observ la presencia de botn ya que al no agregar reactivo no hubo anticuerpos que reaccionaran con los antgenos presentes en los glbulos rojos de las muestras si es que los tuviera. Si en caso se observara aglutinacin positiva indicara que la muestra o la solucin salina estn contaminadas. Se debe resaltar que el botn observado tena un dimetro menor a 5 mm, y se concluye que hubo error al retirar el sobrenadante para obtener las clulas

lavadas, dejando sobrenadante lo que produjo que la concentracin de las clulas lavadas sea menor al 100%. 6.- Qu puede comentar de los resultados de la determinacin con la preparacin II? En mi grupo la preparacin II no se realizo, por lo tanto no se tienen resultados, no obstante se puede indicar que al adicionar 4 gotas de solucin salina a 1 gota del preparado de glbulos rojos al 5%, la concentracin de la muestra para el procedimiento de la preparacin II seria 1%. Y que la visualizacin del botn ser ms dificultosa pues habr menor cantidad de hemates. 7.- Cules seran sus conclusiones? Como conclusin se tendra que los anticuerpos presentes en el reactivo son anti-muestra ya que solo que con esta muestra hubo aglutinacin tanto en la determinacin en lamina como en tubo. Esto quiere decir que si se decidiera hacer una transfusin se elegira la muestra como donante ya que la muestra de sonde se obtuvo el suero del reactivo es incompatible con la muestra mientras que con la muestra no lo es. Tambin se llega a la conclusin de que cuando se realiza la determinacin en tubo es recomendable trabajar con una dilucin al 5% de glbulos rojos ya que esta permite una mejor visualizacin del botn de aglutinacin al eliminar la mayor parte de las protenas plasmticas, micro-agregados, leucocito y plaquetas, mientras que si se trabaja con la concentracin basal el resultado pueda dar un falso negativo en caso de que el antisuero tenga muy poca cantidad de anticuerpos; y si la concentracin de los glbulos rojos es menor no se visualizara el botn ya que habr menos glbulos rojos con los cuales reaccionaran los anticuerpos del antisuero. Se debe aclarar que para la visualizacin de resultados los tubos deben estar en posicin horizontal y previamente removidos con suavidad para poder observar bien si hay aglutinacin Por ltimo se debe mejorar la prctica del procedimiento al realizar el lavado de glbulos rojos para que se pueda observar un resultado ptimo.

LECTURA E INTERPRETACION DE LA REACCIN ANTGENO-ANTICUERPO EN TUBO. Fundamento: La presencia de antgenos en la superficie de los glbulos rojos se puede detectar por la hemoaglutinacin producida cuando se aade un antisuero con anticuerpos frente a dichos antgenos. La aglutinacin en tubo se utiliza como prueba confirmatoria y la lectura se reporta en cruces de la siguiente manera: 4 + Un botn slido de glbulos rojos, fondo claro. 3 + Un grumo grande y varios muy pequeos, varios grumos grandes, fondo claro. 2 + Varios grumos de tamao mediano, fondo claro. 1 + Grumos pequeos y muchos glbulos rojos libres, fondo turbio. + Escasos grumos muy pequeos, como arenilla, fondo turbio. 0 Negativo. HP Hemlisis parcial. HT Hemlisis total. Materiales: - Reactivo, que contiene anticuerpos anti-glbulos rojos - Reactivo 2, que contiene anticuerpo anti-glbulos rojos - Muestras , muestra sangunea que contiene glbulos rojos con sus respectivos antgenos - Muestra , muestra sangunea que contiene glbulos rojos con sus respectivos antgenos - Tubos de ensayo de vidrio de 12 x 75 - Centrifuga de 3500 rpm.

Procedimiento En un tubo de vidrio 12 x 75, colocar una gota de Glbulos rojos al 5% de la MUESTRA , rotularlo como 1. Agregar 2 gotas del REACTIVO. En otro tubo de vidrio 12 x 75, rotulado como 3, dispensar una gota de hemates del frasco gotero MUESTRA (el cual ya se encuentra al 5%) Agregar a este segundo tubo 2 gotas del REACTIVO 2. Centrifugar a 3500r.p.m. x 15 seg. Retirar los tubos de la centrfuga, leer e interpretar el resultado. Tomar nota de sus resultados.

Resultados N TUBO MUESTRA IMAGEN ALGLUTINACIN Positiva 1+ Se observ presencia FUNDAMENTO Se observ un botn slido de grumos pequeos y muchos DEL RESULTADO glbulos rojos y fondo claro. glbulos rojos libres, fondo turbio. Positiva 4 + Tubo 1 Muestra Tubo 3 Muestra

CUESTIONARIO 1. Qu diferencias encuentra entre las lecturas de los resultados de los tubos 1 y 3? En los resultados del tubo 1 y 3 se observa una marcada diferencia por la presencia de un botn claramente definido en el tubo 1 y por el contrario solo la presencia de pequeos grumos en el tubo 3, adems hay una notable diferencia en la claridad del fondo pues en el tubo 1 se observa un fondo transparente mientras que en el tubo 3 se observ un fondo turbio a causa de los glbulos rojos disgregados. 2. Qu pasa cuando al tubo se le aplica movimientos muy bruscos? Si al tubo se le aplica movimientos muy bruscos se disgregar el botn en caso de que hubiera aglutinacin, lo cual influir en que la lectura sea errnea.