INTRODUCCIN: La Drosophila Melanogaster es un insecto dptero de la familia Drosophilidae.

Es fcil de observar, con frecuencia se encuentra cerca de donde haya frutas dulces maduras. Por ello, tambin se le conoce como mosca de las frutas. Su uso en el laboratorio de Gentica empieza en 1906, cuando W.E. Castle y Woodworth de la Universidad de Harvard, se dan cuenta de que se pueden cultivar con facilidad. Morgan la utiliza en sus estudios acerca de la teora cromosmica de la herencia, y desde ese momento ha sido utilizada ampliamente en los laboratorios de Gentica de todo el mundo. Incluso ha sido usada por la NASA en pruebas en el espacio extraterrestre. El propsito del presente trabajo prctico es que usted se familiarice con la biologa general de la Drosophila Melanogaster y con sus principales tcnicas de manejo; para que de esta forma comprenda porque es utilizada como modelo biolgico. OBJETIVO GENERAL Valorar el uso de la Drosophila Melanogaster como modelo biolgico en la investigacin en Gentica. OBJETIVOS ESPECFICOS Entender los principios de la transmisin de los caracteres hereditarios y comprobar las leyes de Mendel. Determinar las caractersticas morfolgicas externas de la Drosophila Melanogaster adulta. Comparar las diferencias anatmicas entre hembras y machos de esta especie. Identificar las diferentes etapas del ciclo vital de D. Melanogaster. Analizar como es el proceso selectivo de las generaciones en F1 Y F2 de las leyes mendelianas.

MARCO TERICO El gnero Drosophila contiene unas 2000 especies, bastante diversas en cuanto a hbitat, morfologa, comportamiento, etc. Entre ellas la ms conocida es

Drosophila Melanogaster, que es una de las especies ms estudiadas. Su genoma fue secuenciado en el ao 2000 (fue el 2 organismo eucariota que se consigui obtener tras C. elegans) y actualmente estn llevndose a cabo las secuenciaciones del genoma de otras 20 especies del gnero. Se trata de un gnero parafiltico, que se divide en 2 subgneros: Drosophila y Sophophora. En este ltimo se encuentra el grupo Melanogaster, incluyndose en l la mayora de las especies que se usan en este estudio. Los drosoflidos estn distribuidos por todo el mundo, en hbitats tan variados como desiertos, ciudades, bosques, zonas alpinas... si bien hay mayor nmero de especies en las zonas tropicales.

Por qu se usa Drosophila en investigacin? es fcil de manipular y su coste de mantenimiento es bajo. su ciclo biolgico est muy bien definido, y su tiempo de generacin es corto, de unos 10 das. adems es un modelo eucariota, de alta complejidad, pero con slo 4 cromosomas y con estadios germinales equiparables a los de mamferos. su metabolismo tambin es parecido a mamferos. hay infinidad de mutantes descritos con multitud de manifestaciones fenotpicas. en el aspecto ms puramente gentico tambin presenta varias ventajas: su genoma est muy estudiado, se pueden obtener fcilmente los cromosomas politcnicos, que se ven fcilmente al microscopio y permiten un estudio detallado a nivel citogentico.

CICLO DE VIDA DE LAS DROSOPHILA Metamorfosis El desarrollo embrionario que sigue a la fertilizacin y a la formacin del cigoto se produce por Ovognesis La cual se lleva a cabo dentro de los ovarios femeninos. Cada ovario contiene ms de una docena de Germania que estn en una lnea de montaje para las cmaras de nuevo huevo: la maduracin del ovocito se lleva a cabo dentro de un germario rodeado de clulas foliculares. Duracin: La duracin de los estadios de la metamorfosis varia con la temperatura (cuadro 1). Dentro de ciertos lmites, las altas temperaturas disminuyen la duracin y las bajas la aumentan. Una exposicin continuada a temperaturas por encima de los 30 grados centgrados puede producir esterilizacin temporal en los machos o muerte de las moscas. A bajas temperaturas el ciclo vital se prolonga y la viabilidad disminuye. La temperatura dentro de un frasco de cultivo puede exceder un poco la del ambiente debido al calor, que se desarrolla por la fermentacin de las levaduras. La temperatura del laboratorio es muy adecuada. El ciclo de vida de la Drosophila pasa por 4 fases diferentes: Huevo: El huevo de Drosophila melanogaster, mide aproximadamente 0.5 mm de longitud, el lado dorsal es ms aplanado que el ventral. La membrana externa o corion, es opaca y tiene hexgonos dibujados en su superficie. En la regin anterodorsal se presenta un par de filamentos que evita que el huevo se hunda en la superficie blanda del alimento donde es depositado. El espermatozoide penetra a travs de una pequea abertura o micrpilo en la saliente cnica del extremo anterior, durante el recorrido que hace el huevecillo dentro del tero. Las divisiones meiticas se realizan inmediatamente despus de la penetracin del espermatozoide, integrndose el ncleo del vulo (proncleo femenino). Posteriormente el ncleo del espermatozoide y el del vulo se unen para integrar el ncleo del cigoto, que se divide para dar los dos primeros ncleos de segmentacin, lo que representa el estado inicial del desarrollo embrionario.

Estado larvario. Despus de salir del huevo, la larva sufre dos mudas, por lo que el estado larvario tiene tres estadios. En el ltimo (tercero), alcanza una longitud aproximada de 4.5 mm. Las larvas son tan activas y voraces, que el medio de cultivo en que viven, pronto se ve recorrido por surcos y canales, esto es la seal ms evidente de que la nueva generacin se est desarrollando con xito. Las estructuras anatmicas de la larva ms importantes para la experimentacin en gentica son:

1. Las gnadas; estn colocadas en los cuerpos grasos laterales de la porcin posterior de la larva. Los testculos tienen mayor tamao que los ovarios, por lo que pueden distinguirse con mayor facilidad a travs de la pared transparente del cuerpo. 2. El ganglio cerebral; est formado por tres lbulos, se localiza en la porcin anterior de la larva, puede identificarse con facilidad despus de disecar la larva. 3. Las glndulas salivales, son estructuras que se observan como dos sacos alargados, conectados al aparato mandibular de la larva. Sus clulas presentan cromosomas politnicos o cromosomas gigantes. 4. Los discos imagales de las alas, son estructuras de forma aplanada constituidas por clulas epiteliales que durante la metamorfosis forman las alas del adulto. Estn situados en el tercio anterior de la larva. 5. Los discos imagales de los ojos, son estructuras de forma aplanada constituidas por clulas epiteliales que durante la metamorfosis forman los ojos del adulto. Estn situados en el tercio anterior de la larva. Pupacion: La pupacin ocurre despus del tercer estado larvario. Cuando la larva se est preparando para pupar se retira del medio de cultivo fijndose a una superficie relativamente seca, que puede ser la pared del frasco. Drosophila pupa dentro de la ltima cubierta larvaria que al principio es suave y blanquecina, pero luego se hace dura y se obscurece. La pupa mide aproximadamente 5 mm. de

longitud, en este estado, la diferenciacin de todas las lneas celulares es muy intensa. Al finalizar la metamorfosis dentro del pupario, emerge el imago o adulto rompiendo el extremo anterior de la envoltura puparia. Al principio, la mosca es muy alargada, con las alas an sin extender, que en poco tiempo se extienden y gradualmente el cuerpo toma la forma definitiva. Las moscas adultas son de color relativamente claro despus de la emergencia y se obscurecen en las horas siguientes. LAS DIFERENCIAS ENTRE MACHO Y HEMBRA
ESTRUCTURAS SEXUALES SECUNDARIAS DE Drosophila melanogaster QUE AYUDAN EN EL RECONOCIMIENTO DEL SEXO CARACTERSTICA HEMBRA MACHO

Extremo del abdomen Aspecto del abdomen Nmero de segmentos abdominales Patas delanteras

alargado abultado en la hembra gestante 7 segmentos visibles al microscopio no presenta peine sexual

redondeado sin abultamiento 5 segmentos visibles al microscopio presenta peine sexual (10 cerdas gruesas)

PROBLEMAS Y PLAGAS EN LOS CULTIVOS DE DROSOPHILA Existen tambin dos tipos de plaga que pueden afectar a nuestros cultivos: Mohos: Pueden aparecer a los pocos das de empezar el cultivo, incluso antes de que lleguemos a ver larvas. Generalmente son mohos verdosos o ligeramente negros, que cubren toda la superficie de la papilla. Aunque las larvas se los comen en parte, nunca prospera un cultivo con moho igual que uno sin l. Es mejor utilizar las moscas para alimentar y luego tirarlo: no intentar hacer un cultivo nuevo con l: podran caer esporas de los mohos al nuevo cultivo.

 caros: sta s que es la gran plaga de los cultivos de Drosophila. Los caros adoran la comida y la humedad, y en nuestra papilla se encuentran en su mundo maravilloso. Las moscas adultas de un cultivo con caros pueden llevar pegados huevos de caros, as que aunque no los veamos, podemos tenerlos luego en el cultivo. Lo ideal es conseguir cultivos sin caros o usar algn acaricida. Debemos tapar bien los botes para que no puedan entrar y tener cuidado con dnde dejamos la tapa. EXPERIMENTOS DE CRUZA La Drosophila resulto ser un material experimental ideal para el trabajo que realizamos. Todo experimento de cruza debe ser previamente planificado, anotando el genotipo y fenotipo de los individuos a cruzar, lo que se espera obtener en F1, en F2 y en la cruza de prueba de la F1. Estos datos constituirn luego los "resultados esperados". Una vez establecidos los cultivos, deben vigilarse diariamente hasta la aparicin de las primeras pupas; en ese momento se retiran los adultos que han dado origen al cultivo. Al trmino de un experimento, cuando se ha completado el cuadro de datos, se procede a elaborar los resultados: los TOTALES obtenidos para cada FENOTIPO corresponden a los "resultados observados"; junto con las frecuencias correspondientes a los "resultados esperados", se confecciona un cuadro para aplicar un test de hiptesis (normalmente se utiliza Chi-Cuadrado). Se utilizarn las siguientes mutaciones: BAR" (L) produce el fenotipo cuerpo Largo, Alas Largas (A) "bar" (l) cuerpo corto, Alas Cortas (a). Donde la primera est formada por dos cromosomas iguales (XX) denominadas Autosomas y la segunda est formada por un cromosoma (X) y otro (Y), denominada cromosoma sexual. Normalmente se planifican cruzas recprocas, esto significa preparar dos frascos por cada cruzamiento, del siguiente modo: 1) hembras mutantes x machos normales y 2) hembras normales x machos mutantes. Esto permite controlar la influencia que el sexo puede tener sobre la herencia del carcter en estudio. No es necesario cuando se cruza F1 x F1 para obtener F2, en el caso en que exista un solo fenotipo en F1.

Ejemplo: se realizo un cruce de especies Drosophila Melanogaster que tienen:

Cuerpo Largo (L) Alas Largas (A) P1LLAA

Cuerpo Corto (l) Alas Cortas (a) llaa

G1F1

LA LA

x la la
LA LlAa LlAa LA LlAa LlAa

Macho/Hembra la la

Resultados:
Fenotipo 100% Genotipo 100% Cuerpo Largo, Alas Largas. Heterocigoto Dominante.

P2-

LlAa

LlAa

G2- LA La lA la F2
Macho/Hembra LA La lA la

x LA La lA la

LA LLAA LLAa LlAA LlAa

La LLAa LLaa LlAa Llaa

lA LlAA LlAa llAA llAa

la LlAa Llaa llAa llaa

Resultados:
Genotipos LLAA LLAa LlAA Heterocigoto Dominante LlAa LLaa Llaa llAA llAa Homocigoto Recesivo llaa Posicin 1/16 2/16 2/16 4/16 1/16 2/16 1/16 2/16 1/16 1/16 cuerpo Corto, alas cortas 3/16 cuerpo largo, alas cortas Fenotipos 9/16 cuerpo largo, Ala largas

Homocigoto Dominante:

3/16 cuerpo corto, Alas largas

CONCLUSIN Durante la realizacin de esta prctica se logro ampliar los conocimientos previos expuestos por Gregorio Mendel, mediante el planteamiento de las leyes y los principios de la transmisin de los caracteres hereditarios. Al mismo tiempo y gracias al refuerzo de la mosquita Drosophila Melanogaster, conseguimos extraer los resultados esperados bajo los parmetros estipulados al momento de hacer los cruces con dichas mosquitas. Despus de observar y conocer las caractersticas morfolgicas externas, conseguimos identificar los fenotipos y las diferencias que existen tanto en las hembras como en los machos. Al obtener los anlisis de resultado nos permitieron identificar las diferentes etapas en el ciclo vital de esta especie, conociendo el porqu de estos cambios y entendimos aun ms la importancia del estudio de las generaciones a medida que va transcurriendo el tiempo.