MANUAL DE PRACTICAS DE INMUNOHEMATOLOGIA

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INDICE

INTRODUCCION. 2 OBJETIVO GENERAL. 4 INDICE DE PRACTICAS. 5 CREDITOS DE ELABORACION42 VALIDACION.43

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1.INTRODUCCIN

Los conocimientos tericos de la respuesta inmunolgica se han empleado desde su funcin protectora contra la infeccin hasta su papel como causa de varias enfermedades inmunolgicas importantes. Estas enfermedades pueden deberse a interacciones con antgenos extrnsecos (enfermedades alrgicas y por inmunocomplejos) autoinmunes). La falla de la respuesta inmunolgica o un cambio maligno puede producir enfermedades. La inmunidad protectora y la produccin de la enfermedad en cierto modo son productos coincidentes de una funcin biolgica aun mas fundamental de la inmunidad como el proceso fisiolgico bsico que permite distinguir las molculas extraas de los constituyentes del propio ser. Todas las clulas tienen cierta capacidad de reconocimiento, y en los vertebrados sta funcin reside en un rgano especial, el aparato inmunolgico. Este se ha especializado para desempear su funcin con gran eficacia interactuando diferentes tipos de clulas. Esta gran aceptacin de la Inmunologa se debe al lugar creciente que ocupan los conceptos y tcnicas de la
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intrnsecos(

enfermedades

Inmunologa en las ciencias biolgicas y en todos los sectores de la medicina. Este manual de prcticas para alumnos de cuarto semestre de la especialidad de Laboratorio Clnico, tiene la finalidad de que cuenten con las tcnicas inmunolgicas que les ayuden a encontrar las causas probables de enfermedades infecciosas, dotndolos de datos valiosos para dar un diagnstico del estado actual del paciente, apoyndose en parmetros ya establecidos de valores normales de referencia.

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I.

OBJETIVO GENERAL

Aplicar las tcnicas Inmunohematolgicas accesibles de laboratorio Que ayude al alumno a tener un conocimiento mas completo de las reacciones inmunolgicas.

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II.

INDICE DE PRACTICAS
Titulo de la Prctica Determinacin de Grupo Sanguneo Reacciones Febriles Factor Reumatoide HGC Determinacin de VDRL Determinacin de PCR Determinacin de Antiestreptolisinas Pgina 6 11 16 21 25 30 36

Prctica No. 1 2 3 4 5 6 7

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Prctica No. 1

Titulo de la Prctica: Determinacin de Grupo Sanguneo

Fecha de realizacin: Marzo 2013

Ubicacin: Tcnicas Inmunohematolgicas Unidad: II Temas:

Mtodos de Aglutinacin activa directa.

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA: Aplicar la metodologa de los grupos sanguneos para conocer los diferentes aglutingenos encontrados en los glbulos rojos del individuo. 2.- INTRODUCCIN: Los antgenos de grupos sanguneos son de naturaleza proteica, casi siempre forman parte integral de la membrana del glbulo rojo. Se les llaman tambin aglutingenos y representan una caracterstica hereditaria, y no cambian durante la vida. Se han descubierto muchsimos aglutingenos diferentes. 3.- FUNDAMENTO DEL MTODO La prueba se basa en la unin de un aglutingeno presente en la superficie de los eritrocitos con un anticuerpo especfico que da como resultado la aglutinacin de los eritrocitos.

4.- MATERIALES A UTILIZAR: CANTIDAD DESCRIPCIN

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1 1 1 1 1 1 1 2 5

Placa de vidrio para grupo sanguneo Torunda con alcohol Torniquete Jeringa de 3 ml Tubo vacutainer de BH Pipeta pasteur bulbo Aplicadores Tubos de ensaye

5.- EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Centrfuga DESCRIPCIN

6.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD DESCRIPCIN 3 ml. Sangre con anticoagulante

7.- REACTIVOS: CANTIDAD 1 1 1 1 1 DESCRIPCIN Suero hemotipificador anti A Suero hemotipificador anti B Suero hemotipificador anti AB Suero hemotipificador anti D Solucin salina fisiolgica al 0-85%

8.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLGICO): Sangre Venosa Se extrae sangre venosa por las tcnicas conocidas y se deposita en un tubo

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de ensaye con anticoagulante y se mezcla suavemente. 9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA 1.- Obtener 3 ml de sangre venosa. .2-- Se puede usar sangre total o bien una suspensin de glbulos rojos al 25% en solucin salina fisiolgica o en su propio suero plasma. 3- Colocar una gota de sangre total a cada uno de los 4 crculos marcados en la placa de vidrio. 4.- Adicionar a cada gota de sangre una de cada uno de los antisueros en el siguiente orden: anti A, anti B, anti AB, anti D. 5.- Usando un aplicador de madera distinto para cada suero mezcle bien e incline suavemente la placa a uno y a otro lado. 6.- Observe si hay aglutinacin. No lea por mas de dos minutos. Mtodo en tubo: 1.- Prepare una suspensin de glbulos rojos al 2-5% usando solucin salina fisiolgica al 0.85% o bien el propio suero o plasma de la muestra desangre2.- Marcar cada uno de los tubos como anti A, anti B, antiAB Y anti D respectivamente3.- Colocar una gota de la suspensin de eritrocitos a cada uno de los cuatro tubos. 4.- Adicionar una gota de cada uno de los antisueros en el orden antes mencionados. 5- Mezcle y centrifugue a 1500 rpm durantes un minuto o bien a 3400 rpm por 20 segundos. 6.- Resuspender suavemente cada uno de los cuatro tubos. 7.- Observar si hay aglutinacin. 10.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS Las reacciones posibles son las siguientes: Suero hemoclasificador Anti A Anti B Anti AB + + + + + + +

Grupo O A B AB

11.- OBSERVACIONES Existen causas de reacciones falsas + en la determinacin del grupo ABO: . Cuando la placa de vidrio est sucia , con grasa. .Es indispensable prevenir el crecimiento bacteriano en el suero, ya que esto ocasiona aglutinacin bacteriognica inespecfica.

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12.- NOTAS IMPORTANTES Recordar que existen dentro de los mismos grupo sanguneos, subtipos de los mismos.

13.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compaeros. Contesta el siguiente cuestionario. Completa el glosario de trminos.

CUESTIONARIO 1.- Que tratas de identificar en un grupo sanguneo? 2.- Cuantos sistemas tiene el sistema ABO?Cuales son? 3.- Cuantos sistemas de grupo sanguneo existen?Menciona al menos 5 de stos. 4.- Cual es la importancia de realizar el grupo sanguneo en un paciente? 5.- Una persona que es del grupo O que tipo de aglutingenos y de aglutininas tiene en su sangre? 14- GLOSARIO DE TERMINOS Aglutinogeno.Aglutininas.Reaccin Ag-Ac.-

15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA AUTOR

1.- INMUNOLOGIA.

TTULO
1.- J.R. Regueiro Gonzlez.

EDITORIAL 1.- .- 3. Edicin

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Biologa y Patologa del sistema inmune.

C. Lpez Larrea S. Gonzlez Rodriguez. Editorial Panamericana.

2.- INMUNOLOGIA

2.- Oscar Rojas Espinoza

2.- 2 Edicin 2001. Editorial Panamericana.

3.- Trillas Mxico 2003 4.- Mc Graw Hill Espaa 2002.

3.- FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGIA 4.- INMUNOLOGIA CELULAR y molecular

3.- Nemirovsky Mario S. 4.- Abbas Abul K.

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Prctica No. 2

Titulo de la Prctica: Reacciones Febriles Fecha de realizacin: Marzo 2013

Ubicacin: 2.1 Aplicar tcnicas de laboratorio Unidad: 2 Temas: 2.1- 2.4

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA: Conocer la metodologa de las reacciones febriles. 2.- INTRODUCCIN: Las reacciones febriles son tiles para el diagnstico de muchas enfermedades tales como: fiebre tifoidea, paratifoidea, tifo y enfermedades producidas por otras rickettsias. Los procesos febriles provocados por distintos microorganismos pueden diagnosticarse por el laboratorio sea por el descubrimiento del agente causal o por el hallazgo de los anticuerpos generados durante el transcurso de la infeccin. Las reacciones de aglutinacin se emplean con frecuencia en el estudio de infecciones provocadas por distintos grmenes: Salmonellas, Brucellas, etc. La temperatura aumenta considerablemente y aparecen otros sntomas igualmente inespecficos, dificultando enormemente el diagnstico de la enfermedad. Tal es el caso de la fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi; las paratifoideas causadas po S. paratyphi A y S. paratyphi B; la fiebre de malta causada por Brucella melitensis y tifo causado por rickettsia prowasekii. Cada uno de stos microorganismos inducen una respuesta humoral produciendo anticuerpos que se identifican fcilmente con antgenos especficos. En el caso de Rikettsia prowasekii es muy difcil contar con antgenos provenientes de ella, pero se utiliza Proteus OX 19 el cual posee determinantes antignicos comunes con la rikettsia. Para la determinacin de los anticuerpos se utiliza el suero del enfermo y antgenos purificados. El ttulo de anticuerpos depende del tipo y curso de la enfermedad.

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3.- FUNDAMENTO DEL MTODO Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos aglutinantes contra ellos, los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el antgeno especfico. 4.- MATERIALES A UTILIZAR: CANTIDAD 1 1 1 4 2 1 1 1 DESCRIPCIN Lmpara Agitador mecnico Placa de vidrio Aplicadores Torundas Torniquete Jeringa de 5 ml Tubo vacutainer de tapn rojo

5.- EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 4 Cronmetros 6.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD Suero humano 7.- REACTIVOS: CANTIDAD 1 1 1 1 1 1 DESCRIPCIN Antgeno O ( somtico) Antgeno H ( flagelar) Antgeno paratyphi A Antgeno paratyphi B Antgeno Brucella Antgeno Proteus OX 19 DESCRIPCIN DESCRIPCIN

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8.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLGICO): Sangre por puncin venosa. 9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA: 1.- Realizar la toma de muestra y obtener 5 ml de sangre total. 2. Dejar coagular y centrifugar el tubo a 3400 rpm durante 3 minutos. Separa el suero en otro tubo de ensaye limpio. 3.- En la placa de vidrio colocar 0.02 ml ( 20 microlitros) de suero problema en cada una de las 6 divisiones circulos de la placa. 4.- Adicionar a cada divisin o circulo una gota de cada uno de los 6 antgenos en el orden siguiente: Antgeno O , Antgeno H , Antgeno paratyphi A, Antgeno paratyphi B, Antgeno Brucella , Antgeno Proteus OX 19. 5.- Mezclar bien todas las divisiones o crculos con aplicadores diferentes. 6.- La placa se oscila en un agitador mecnico durante 4 minutos. 7.- Observar si hubo aglutinacin en cada uno de los crculos ayudndose con la luz de una lmpara. 8.- En caso de que aparezca aglutinacin de alguno de los antgenos con alguno de los sueros, se toma otra placa y en ella se depositan los siguientes volmenes de dicho suero y antgeno: _______________________________________________________________ No Div. 1 2 3 4 Ml de suero 0.02 0.01 0.005 0.0025 Volmen de antgeno 1 gota 1:80 1 gota 1:160 1 gota 1: 320 1 gota 1:640 Titulo

9.- Se agrega una gota del antgeno positivo a cada dilucin, mezclar bien con aplicadores diferentes y agitar 4 minutos. 10.- Observar la aglutinacin . La lectura de la misma no debe de exceder de 2 minutos. 10.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS El ttulo del suero se informa como la recproca de la dilucin mas alta en la que todava se observa aglutinacin. Las lecturas se harn con una fuente de luz indirecta observando la aglutinacin macroscpica. El criterio de positividad se determina por la menor cantidad de suero capaz de producir 50% de aglutinacin. Cualquier ttulo mayor de 1: 160 debe ser considerado como positivo.

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11.- OBSERVACIONES La mayora de los sueros considerados como normales pueden mostrar ttulos de 1:20, 1:40 y casualmente 1:80. 12.- NOTAS IMPORTANTES La presencia de ttulos bajos pueden deberse a vacunaciones infecciones pasadas o subclnicas del paciente.La mejor indicacin de un proceso activo lo marca dos titulaciones sucesivas con una diferencia importante entre el primer y segundo ttulo aunque tambin se observe esto en personas convalescientes.

13.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compaeros. Contesta el siguiente cuestionario. Completa el glosario de trminos.

CUESTIONARIO 1.- D un concepto de las reacciones febriles. 2.- Explique el fundamento de la prctica de las reacciones febriles. 3.- Qu tipo de enfermedades identificamos al realizar sta prueba de laboratorio. 4.- Como se llama la enfermedad que resulta de dar positivo en proteus OX19. 5.- Interprete el siguiente resultado: Tifico O 1:160, Tfico H 1: 320

14- GLOSARIO DE TERMINOS

.15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA

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AUTOR

TTULO EDITORIAL

1.- INMUNOLOGIA. Biologa y Patologa del sistema inmune.

1.- J.R. Regueiro Gonzlez. C. Lpez Larrea S. Gonzlez Rodriguez.

1.- .- 3. Edicin
Editorial Panamericana.

2.- INMUNOLOGIA 3.- FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGIA 4.- INMUNOLOGIA CELULAR y molecular

2.- Oscar Rojas Espinoza 3.- Nemirovsky Mario S. 4.- Abbas Abul K.

2.- 2 Edicin 2001. Editorial Panamericana.

3.- Trillas Mxico 2003 4.- Mc Graw Hill Espaa 2002.

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Prctica No. 3

Titulo de la Prctica Factor Reumatoide

Fecha de realizacin: Mar2013

Ubicacin: Manejar tcnicas de laboratorio de aglutinacin pasiva indirecta. Unidad: 2 Temas: 2.1- 2.2

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA: Aplicar la metodologa de la tcnica adecuada para realizar tcnicas de laboratorio para detectar la presencia de anticuerpos en pacientes con Artritis Reumatoide.

2.- INTRODUCCIN: Es el anticuerpo mas importante detectado en la artritis reumatoide . Puede ser de tipo IGM, IgG e IgA, principalmente. El FR no es especfico de la Artritis reumatoide y se encuentra con distinta incidencia y con ttulos no muy elevados en pacientes con Lupus eritemataoso sistmico, tuberculosis, lepra, sfilis, leishmaniasis y an en individuos normales. Para estudiar la presencia del FR se emplea una metodologa variada, del cual el mas simple es el que utiliza la aglutinacin de partculas de ltex, bentonita o glbulos rojos cubiertos con globulina humana. 3.- FUNDAMENTO DEL MTODO En la artritis reumatoide, otras enfermedades vasculares de la colgena, endocarditis infecciosa activa y algunos padecimientos distintos, el factor reumatoide est presente en el suero. Es una IgM o IgG con reactividad de anticuerpo para la IgG humana.

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El factor reumatoide se detecta en los pacientes por medio de partculas de ltex que estn cubiertas con la fraccin gammaglobulina humana, que precipitan en contacto con el suero del pacientes con artritis reumatoide que contiene una sustancia parecida a un anticuerpo de alto peso molecular, llamado Factor reumatoide.

4.- MATERIALES A UTILIZAR: CANTIDAD DESCRIPCIN 1 Cronmetro 1 Lmpara de luz intensa

5.- EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD DESCRIPCIN

6.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD DESCRIPCIN 3 ml. Sangre con anticoagulante 7.- REACTIVOS: CANTIDAD 1 1 1 1 1 DESCRIPCIN Antgeno adsorbido a partculas de ltex Suero control positivo Suero control negativo Diluyente Concentrado(regulador glicina-salina concentrado Placa de reaccin

pH

8.2

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8.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLGICO): Sangre Venosa Se extrae sangre venosa por las tcnicas conocidas y se deposita en un tubo de ensaye con anticoagulante y se mezcla suavemente. 9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA METODO CUALITATIVO: El ltex debe de estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado 1.- Colocar en una gradilla 1 tubo de13x100 2.- Depositar 1 ml del frasco No 4( diluyente concentrado) diluido. 3.- Aadir 0.05 ml de suero problema. 4.- Despus de haber agregado el suero problema, la dilucin obtenida es 1:20 y est lista para su uso. 5.- En un anillo de la placa depositar 0.05 ml del suero diluido. 6.- En otro anillo depositar una gota del frascoNo 2 ( suero control positivo) 7.- En un tercer anillo depositar una gota del frasco No 3 ( suero control negativo) 8.- Aadir a cada uno de los 3 anillos una gota del frasco No 1( ltex) previamente resuspendido. 9.- Mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2 minutos. 10.- Realizar la lectura del resultado en este momento bajo una fuente de luz directa. VALORES DE REFERENCIA: Negativo. 10.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS RESULTADO POSITIVO: Presencia de agregados macroscpicos ( aglutinacin comparable al control positivo) RESULTADO NEGATIVO: Ausencia de agregados macroscpicos ( sin aglutinacin comparable al control negativo) 11.- OBSERVACIONES Deben tomarse en cuenta las posibles causas de aglutinacin inespecficcas tales como: .Lecturas posteriores a los 3 minutos de efectuada la mezcla de suero y el ltex .Suero con fibrina. .Suero alto en contenido de lpidos.

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12.- NOTAS IMPORTANTES Sueros provenientes de personas sanas pueden presentar reacciones falsas positivas. 13.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compaeros. Contesta el siguiente cuestionario. Completa el glosario de trminos.

CUESTIONARIO 1. Qu es el factor reumatoide? 2.- Que tipo de enfermedades tambin nos dan un ttulo de anticuerpos elevado al realizar sta tcnica? 3. Qu tipo de inmunoglobulina representa el anticuerpo del Factor reumatoide? 4. Menciona algunas caracteristicas de la artritis reumatoide como enfermedad.

14- GLOSARIO DE TERMINOS Factor Reumatoide.-

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15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA AUTOR

1.- INMUNOLOGIA. Biologa y Patologa del sistema inmune.

TTULO
1.- J.R. Regueiro Gonzlez. C. Lpez Larrea S. Gonzlez Rodriguez.

EDITORIAL 1.- .- 3. Edicin

Editorial Panamericana.

2.- INMUNOLOGIA 3.- FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGIA 4.- INMUNOLOGIA CELULAR y molecular

2.- Oscar Rojas Espinoza 3.- Nemirovsky Mario S. 4.- Abbas Abul K.

2.- 2 Edicin 2001. Editorial Panamericana.

3.- Trillas Mxico 2003 4.- Mc Graw Hill Espaa 2002.

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Prctica No. 4

Titulo de la Prctica:
Determinacin de Pregnosticn ( Prueba de Embarazo)

Fecha de realizacin: Marzo2013

Ubicacin: Unidad: 2 Temas: 2.1-2.4 Manejar tcnicas de laboratorio de aglutinacin pasiva indirecta.

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA: Conocer la tcnica para determinar la glucoprotena gonadotropina corinica humana. 2.- INTRODUCCIN: La HGC es una glucoprotena producida por las clulas trofoblsticas despus de aproximadamente 10 das de la concepcin. Despus de la concepcin se produce un rpido aumento en la cantidad de HGC en la orina aproximadamente a las cinco semanas de gestacin ( 5 semanas despus del ltimo periodo menstrual), que alcanza los niveles mximos en un tiempo aproximadamente de 10 semanas de gestacin. Las semanas de gestacin se refieren a las semanas despus de la concepcin, ya que sta fecha es mas difcil de determinar con certeza. A medida que la produccin de estrgenos y progesterona aumenta por la placenta durante el segundo trimestre, los niveles de HGC descienden. Este nivel constituye constituye la medida mas lgica para la pronta confirmacin de un embarazo. 3.- FUNDAMENTO DEL MTODO Los eritrocitos, previamente son sometidos a un tratamiento especial con gonadotrofina corinica humana( antgeno), actan com portadores de ste antgeno. Al adicionar el antisuero correspondiente se produce una reaccin inmunoqumica dando lugar a un patrn de sedimentacin homognea de los eritrocitos. La adicin simultnea del antgeno libre en forma de HGC, tal como se presenta en la orina de mujeres embarazadas, bloquea los anticuerpos e impide la reaccin con los eritrocitos.

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4.- MATERIALES A UTILIZAR: CANTIDAD DESCRIPCIN Tubo de ensaye de 13x 100 Pipetas de 1 ml Gradilla Papel filtro Papel filtro suave Whatman

5.- EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD DESCRIPCIN

6.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD Orina 7.- REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCIN Suero anti HGC Eritrocitos contenidos en el tubo para la prueba 8.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLGICO): Sangre Venosa Recolectar orina , de preferencia la primera de la maana por ser la mas concentrada, en un frasco perfectamente limpio. 9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA 1.- Filtre una pequea cantidad de orina (5-8 ml). Se aconseja emplear papel filtro suave, de preferencia Whatman. Como otra alternativa, la orina puede centrifugarse durante 5-10 minutos a 3000 4000 rpm. DESCRIPCIN

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2.- Con una pipeta introdzcase 0.1 ml de sta orina en un tubo abierto,( una vez abierto un tubo, debe utilizarse de inmediato para garantizar la estabilidad de los reactivos) 3.- Adase a continuacin con una pipeta de 0.4 ml de solucin amortiguadora. 4.- Agtese el tubo durante 1 minuto y colquese en la gradilla con espejo inferior 5.- Deje reposar la gradilla con el tubo( o tubos) durante dos horas, sin cambiarla de lugar, ni moverla. 6.- A continuacin puede leerse el resultado de la prueba en el espejo de la parte inferior de la gradilla. VALORES DE REFERENCIA: El resultado es un patrn de sedimentacin especfico en forma de un anillo claramente definido( resultado positivo). Si en la orina no hay gonadotrofina corinica humana o si la hay en cantidad insuficiente, aparece un patrn de sedimentacin difuso, de color amarillo pardo ( la prueba es negativa). 10.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS Si la mujer est embarazada aparece un anillo claramente definido. Si el dimetro del anillo es mayor y ste anillo es mas vago y de contornos menos definidos, se considera el resultado como dudoso y debe repetirse la prueba aproximadamente al cabo de una semana.

POSITIVO
11.- OBSERVACIONES

NEGATIVO

Se debe hacer la lectura despus de 2 horas de realizada la prueba. Sin embargo puede ocurrir que algunas horas despus de la lectura de un resultado negativo, aun se forme un anillo mas o menos vago. Este fenmeno puede indicar que la cantidad de HGC presente en la muestra de orina se encuentra en el lmite de las cantidades demostrables; sin embargo en tal caso no puede sacarse ninguna conclusin.

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12.- NOTAS IMPORTANTES El tubo o los tubos ( segn sea el nmero de pruebas) deben colocarse en un lugar completamente libre de vibraciones, y hacer la lectura sin mover la gradilla. 13.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compaeros. Contesta el siguiente cuestionario. Completa el glosario de trminos.

CUESTIONARIO 1.- Hacer un breve resmen de la HGC. 2.14- GLOSARIO DE TERMINOS

Traumatismo. Lesin que sufre la vena durante la extraccin dela sangre. 15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA AUTOR
1.- INMUNOLOGIA. Biologa y Patologa del sistema inmune.

TTULO
1.- J.R. Regueiro Gonzlez. C. Lpez Larrea S. Gonzlez Rodriguez.

EDITORIAL 1.- .- 3. Edicin

Editorial Panamericana.

2.- INMUNOLOGIA 3.- FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGIA 4.- INMUNOLOGIA CELULAR y molecular

2.- Oscar Rojas Espinoza 3.- Nemirovsky Mario S. 4.- Abbas Abul K.

2.- 2 Edicin 2001. Editorial Panamericana.

3.- Trillas Mxico 2003 4.- Mc Graw Hill Espaa 2002.

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Prctica No. 5

Titulo de la Prctica:
Determinacin de VDRL

Fecha de realizacin: Marzo2013

Ubicacin: Unidad: 2 Temas: 2.1-2.4

Manejar tcnicas de laboratorio de aglutinacin pasiva indirecta.

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA: Determinar la presencia de reaginas en el organismo de personas que padecen sfilis y otras enfermedades. 2.- INTRODUCCIN: La sfilis es una enfermedad generalizada, producida por Treponema pallidum, transmitida habitualmente por contacto sexual. El diagnstico descansa en la serologa; los mtodos determinan dos clases de anticuerpos: 1) tipo cardiolipina, no treponema inespecficos y 2) Los antitreponemas especficos. La facilidad para su determinacin ha hecho que los del tipo cardiolipina se utilicen universalmente en las exploraciones iniciales ya sean exmenes individuales o encuestas de poblacin; la variante tcnica mas comnmente empleada es la llamada VDRL( Venereal Disease Reseach Laboratory) que determina la floculacin en placa( cualitativa) del antgeno con cardiolipina y lecitina. 3.- FUNDAMENTO DEL MTODO La cardiolipina y la lecitina son dos sustancias reactivas que se aslan a partir del msculo del corazn del buey, conduciendo al antgeno mas especfico utilizado en la actualidad en la prueba de VDRL. La reagina es una sustancia que aparece en la sangre y LCR de personas que padecen sfilis y otras enfermedades como el mal de pinto, lepra y paludismo. Cuando se mezcla un suero que contiene reaginas con el antgeno no treponmico, las partculas de emulsin floculan formando agregados fcilmente que podemos observar a travs del microscopio.

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4.- MATERIALES A UTILIZAR: CANTIDAD DESCRIPCIN Placa cncava ( indispensable) Agitador mecnico Cronmetro Pipetas automticas de 50 microlitros Pipeta volumtrica de 1ml

5.- EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Microscopio DESCRIPCIN

6.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD DESCRIPCIN 3 ml. Sangre por puncin venosa. Centrifugar y separa el suero. 7.- REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCIN Antgeno en suspensin estabilizado Control positivo Control negativo Aguja No 21 sin bisel

8.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLGICO): Sangre Venosa Se extrae sangre venosa por las tcnicas conocidas.

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9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA Mtodo cualitativo: 1.- En un anillo de una placa cncava deposite o.05 ml de un suero problema ( 50 microlitros). 2.- En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otra por separado una gota de suero control negativo. 3.- Aadir una gota del antgeno en suspensin estabilizado previamente resuspendido, en cada una de las 3 muestras, utilizando la aguja No 21 sin bisel. 4.- Colocar la placa sobre un agitador mecnico a 180 rpm DURANTE 4 MINUTOS. Las pruebas realizadas en un clima extremadamente seco puede provocar la evaporacin de las muestras, por lo tanto la placa en rotacin puede ser cubierta con una tapa de caja petri humedecida previamente con una gasa. 5.- Leer inmediatamente al microscopio con objetivo y ocular 10X. Valores de Referencia: NEGATIVO 10.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS No se observan grumos.Negativo Pequeos agregados..Positivo dbil Agregados medianos o grandesPositivo

Mtodo cuantitativo: 1.- Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa. 2.- Colocar en una gradilla 6 tubos de 12x75mm y numerarlos. 3.- Agregar a cada uno 0.5 ml de solucin salina isotnica al 0.9% 4.- Depositar 0.5 ml de suero al tubo No 1 y mezclar. 5.- Pasar 0.5 ml del tubo No1 al Tubo No2 y mezclar. 6.- Pasar 0.5 ml del tubo No2 al al tubo No 3, mezclar 7.- Continuar sta operacin hasta el tubo No 6.Eliminar 0.5 ml del ltimo tubo para que todos tengan el mismo volumen. 8.- Depositar 0.5 ml de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos del la placa cncava. 9.- Aadir una gota del antgeno en suspensin estabilizado(VDRL) utilizando la aguja No 21 sin bisel a cada una de las diluciones. 10.- Colocar la placa sobre un agitador mecnico a 180 rpm durante 4 minutos. 11.- Leer al microscopio con objetivo ocular 10X.

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Interpretacin de resultados:

El ttulo del suero problema ser la ltima dilucin que presente el resultado positivo, de acuerdo al cuadro siguiente: No TUBO 1 2 3 4 5 6 11.- OBSERVACIONES El suero con exceso de reaginas pueden ocasionar reaccin atpica ( grumos de tamao irregular). Es recomendable diluir el suero en solucin salina y probar nuevamente. DILUCION 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64

12.- NOTAS IMPORTANTES Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insastifactorios para la prueba. 2. Sueros dbiles positivos y con fuertes evidencias clnicas de la enfermedad es conveniente efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente pueden presentar el fenmeno de prozona. 3.- El antgeno en suspensin debe de estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.

13.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compaeros. Contesta el siguiente cuestionario. Completa el glosario de trminos.

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CUESTIONARIO 1.- Qu significan las siglas VDRL? 2.- Porqu decimos que la prueba de VDRL es una prueba inespecfica? 3.- Qu otras tcnicas podemos utilizar para determinar la presencia de reaginas y/o al agente causal de la enfermedad venrea? 4.- Menciona el agente causal de la sfilis? 5.- Describe brevemente lo que es la sfilis. 14- GLOSARIO DE TERMINOS Prueba especfica.Prueba inespecfica.15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA AUTOR
1.- INMUNOLOGIA. Biologa y Patologa del sistema inmune.

TTULO
1.- J.R. Regueiro Gonzlez. C. Lpez Larrea S. Gonzlez Rodriguez.

EDITORIAL 1.- .- 3. Edicin

Editorial Panamericana.

2.- INMUNOLOGIA 3.- FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGIA 4.- INMUNOLOGIA CELULAR y molecular

2.- Oscar Rojas Espinoza 3.- Nemirovsky Mario S. 4.- Abbas Abul K.

2.- 2 Edicin 2001. Editorial Panamericana.

3.- Trillas Mxico 2003 4.- Mc Graw Hill Espaa 2002.

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Prctica No. 6

Titulo de la Prctica:
Determinacin de Protena C. Reactiva

Fecha de realizacin: Marzo 2013

Ubicacin: Unidad: 2 1.- Objetivo: Temas: Manejar tcnicas de laboratorio de aglutinacin pasiva indirecta

Aprender a manejar tcnicas de laboratorio de aglutinacin pasiva indirecta. 2.- INTRODUCCIN: Tillet y Francis concluyeron en 1930 que la reaccin que se origina en el suero de pacientes que sufren de enfermedades inflamatorias precipita con un extracto de pneumococo noproteico llamado polisacrido C. La protena que causa este tipo de reaccin fue llamada Protena C Reactiva. Como un fenmeno no especfico, el incremento en lconcentracin de Protena C Reactiva se puede presentar en cualquier proceso inflamatorio agudo (ya sea infeccioso o no infeccioso). La concentracin de Protena C Reactiva generalmente se encuentra por debajo de 6 mg/L en el suero de adultos sanos y en enfermedades inflamatorias estos valores frecuentemente se incrementan en un lapso de 4 a 8 horas despus de presentarse un evento agudo alcanzando niveles aproximadamente de 20 a 500 mg/L. Varios mtodos de inmunoprecipitacin se han desarrollado para la deteccin de Protena C Reactiva. El principio del procedimiento presentado involucra una reaccin inmunolgica entre la Protena C Reactiva (como antgeno) y el anticuerpo correspondiente adsorbido a las partculas de ltex (ltex sensibilizado con anti-Protena C Reactiva).

3.- FUNDAMENTO DEL MTODO

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La protena C. Reactormal que aparece en la sangre de personas que han pasado por una fase aguda producida por distintas enfermedades inflamatorias. Se valora por reacciones de precipitacin usando como reactivo suero anti protena C reactiva. bien con partculas de ltex revestidas de antisuero antiprotena C.

4.- MATERIALES A UTILIZAR: CANTIDAD - Cronmetro Lmpara de luz intensa Placa de vidrio aplicadores DESCRIPCIN

5.- EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD Agitador mecnico DESCRIPCIN

6.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD DESCRIPCIN 5 ml. Obtener 3.0 mL de sangre por puncin venosa. Centrifugar y separar el suero. 7.- REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCIN Antisuero adsorbido a partculas de ltex. (ltex antiPCR) Suero Control Positivo Suero Control Negativo Diluyente Glicina Salina, concentrado, pH 8.2 Placa de reaccin

8.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLGICO): Sangre Venosa

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Se extrae sangre venosa por las tcnicas conocidas.

9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA Preparacin del Diluyente Glicina Salina Concentrado: El frasco de Diluyente Glicina Salina Concentrado se afora con agua destilada al volumen suficiente segn corresponda la presentacin. Ejemplo: - 50 mL (para 50 pruebas) - 100 mL (para 100 pruebas) - 40 mL (para 40 pruebas), etctera MTODO CUALITATIVO: NOTA: El ltex Anti-PCR debe estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado. 1. Colocar en una gradilla un tubo de 13 x 100 mm. 2. Agregar 0.95 mL del frasco No. 4 (Diluyente glicina-salina concentrado pH 8.2) diluido. 3. Aadir 0.05 mL del suero problema. 4. Despus de haber agregado el suero problema, la dilucin obtenida ser 1:20 y estar lista para su uso. 5. En un anillo de la placa depositar 0.05 mL del suero diluido. 6. En otro anillo depositar una gota del frasco No. 2 (suero control positivo). 7. En un tercer anillo depositar una gota del frasco No. 3 (suero control negativo). 8. Aadir a cada uno de los 3 anillos una gota del frasco No. 1 (Ltex antiProtena C Reactiva) previamente resuspendido. 9. Mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2 minutos. 10. Realizar la lectura del resultado en este momento bajo una fuente de luz directa.

Interpretacin Resultado Positivo Presencia de agregados macroscpicos (aglutinacin comparable al control positivo).

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Resultado Negativo Ausencia de agregados macroscpicos (sin aglutinacin, comparable al control negativo). La no aglutinacin o una ligera aparicin de granulocidad que no exceda a la observada en el control negativo indican un resultado negativo.

MTODO SEMICUANTITATIVO 1. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa. 2. Colocar en una gradilla 5 tubos de 12 x 75 mm y numerarlos. 3. Depositar al tubo No. 1, 0.95 mL del frasco No. 4 (Diluyente glicina-salina concentrado, pH 8.2) diluido. 4. Depositar del tubo No. 2 al 5, 0.5 mL del frasco No. 4 (Diluyente glicinasalina concentrado pH 8.2) diluido. 5. Aadir al tubo No. 1, 0.05 mL del suero problema dilucin 1:20. Mezcle. 6. Pasar 0.5 mL del tubo No. 1 al tubo No. 2. Mezcle. 7. Pasar 0.5 mL del tubo No. 2 al tubo No. 3. Mezcle. 8. Continuar esta operacin hasta el tubo No. 5. 9. Depositar 0.05 mL de cada una de las diluciones en anillos diferentes de la placa. 10. Aadir una gota del frasco No.1 (ltex Anti-Protena C Reactiva) a cada una de las diluciones. 11. Mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2 minutos. 12. Realizar la lectura del resultado en este momento.

Valores de Referencia:

NEGATIVO

10.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS El ttulo del suero problema ser la ltima dilucin que presente agregados macroscpicos (aglutinacin). Ejemplo :

TUBO/Dil

1 1:20 + + +

2 1:40 + +

3 1:80 +

4 1:160 -

Resultado positivo1:20 positivo1:40 positivo1:80

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11.- OBSERVACIONES 1. No deben utilizarse sueros turbios, hemolizados o contaminados para realizar la prueba. 2. Para evitar falsos resultados NO es recomendable realizar la lectura despus de los 2 minutos.

12.- NOTAS IMPORTANTES El plasma no es recomendable para la determinacin. 13.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compaeros. Contesta el siguiente cuestionario. Completa el glosario de trminos.

CUESTIONARIO 1Qu significado clnico tiene la presencia de sta protena C en el organismo de un individuo? 2.- Cual es el fundamento de la prctica? 3.- La PCR es una prueba especfica inespecfica? Porque?

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4.- La fiebre reumtica se considera una enfermedad autoinmune? 5.- Describe brevemente sta enfermedad. 14- GLOSARIO DE TERMINOS PCR.- .

15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA

AUTOR
1.- INMUNOLOGIA. Biologa y Patologa del sistema inmune.

TTULO
1.- J.R. Regueiro Gonzlez. C. Lpez Larrea S. Gonzlez Rodriguez.

EDITORIAL 1.- .- 3. Edicin

Editorial Panamericana.

2.- INMUNOLOGIA 3.- FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGIA 4.- INMUNOLOGIA CELULAR y molecular

2.- Oscar Rojas Espinoza 3.- Nemirovsky Mario S. 4.- Abbas Abul K.

2.- 2 Edicin 2001. Editorial Panamericana.

3.- Trillas Mxico 2003 4.- Mc Graw Hill Espaa 2002.

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Prctica No. 7

Titulo de la Prctica: Determinacin de Antiestreptolisinas

Fecha de realizacin: Marzo 2013

Ubicacin: Unidad: 2 Temas: Aplicar metodologa de Reacciones de Neutralizacin.

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA: Aplicar la metodologa de la tcnica adecuada para realiza 2.- INTRODUCCIN: Casi todas las cepas de estreptococos grupo serolgico A producen dos factores hemolticos, estreptolisina O y S. Ambas son capaces de dividir( hemolizar) glbulos rojos. Cuando un individuo tiene una infeccin estreptoccica grupo A la estreptolisina O estimula el desarrollo de anticuerpos especficos. Los ttulos sricos de antiestreptolisina O pueden tener valor diagnstico en pacientes que tienen o han tenido recientemente una infeccin estreptoccica grupo A. La estreptolisina O es una hemolkisina de origen lbil, activa frente a los eritrocitos humanos y a los del conejo. Esta estreptolisina es producida en su mayora por las cepas Lancefield de estreptococos del grupo A, as por algunas cepas de los grupos C y G. 3.- FUNDAMENTO DEL MTODO En las infecciones causadas por estreptococo Betahemoltico, se libera estreptolisina-O de la bacteria estimulando la produccin de anticuerpos antiestreptolisina- O (ASO). La presencia y el nivel de estos anticuerpos en una muestra de suero pueden reflejar la naturaleza y severidad de la infeccin. Esta prueba de estreptolisina utiliza una suspensin buffer estabilizada de partculas de ltex de poliestireno recubiertas con estreptolisina-O. Cuando el reactivo de ltex se mezcla con una muestra de suero que contenga anticuerpos hacia estreptolisina-O, ocurre la aglutinacin. El reactivo de ltex es producido de manera de que la aglutinacin tome lugar nicamente cuando el nivel de anticuerpos hacia estreptolisina-O sea igual o mayor a 200 IU/mL, este es un nivel indicativo de enfermedad por estudios clnicos y epidemiolgicos.

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4.- MATERIALES A UTILIZAR: CANTIDAD Cronmetro Fuente de luz Tubos de prueba y gradillas (para la prueba semicuantitativa) Pipetas serolgicas (para la prueba semicuantitativa) Agitador mecnico (opcional) Placa - 6 anillos Pipetas/agitadores desechables 5.- EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 6.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD DESCRIPCIN 5 ml. Sangre sin anticoagulante. 7.- REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCIN ASO Reactivo de Ltex (Tapa Blanca) Suspensin de partculas de ltex de poliestireno recubiertas con estreptolisina-O en un buffer salino ASO Control Positivo (Tapa Roja) Suero humano estabilizado, conteniendo ms de 200 IU/mL de antiestreptolisina-O Control Negativo (Tapa Verde) Suero humano estabilizado, conteniendo menos de 100 IU/mL de antiestreptolisina-O. Buffer Glicina-Salina (20x) Concentrado Solucin de glicina y cloruro de sodio, pH 8.2 0.1. DESCRIPCIN DESCRIPCIN

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8.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLGICO): Sangre Venosa

9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA A. Mtodo Cualitativo 1. Lleve los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. 2. Agite suavemente el frasco del reactivo de ltex para dispersar y resuspender las partculas de ltex. No agitar excesivamente. 3. Aada una gota de la muestra del paciente no diluida utilizando una de las pipetas desechables, en un crculo de la placa. Tambin coloque una gota de los controles positivo y negativo en otros crculos separados dentro de la misma la placa. 4. Agite suavemente el frasco de ltex. Coloqueuna gota del reactivo de ltex junto a la gota de la muestra de suero en cada una de los crculosocupados. 5. Mezcle ambas gotas con el agitador/mezclador desechable incluido, cubriendo por completo toda la superficie del crculo. 6. Agite manualmente la placa por 2 minutos de manera que la mezcla rote suavemente y despacio dentro de los crculos coloque la placa en un rotor automtico a 80-100 r.p.m. 7. Despus de 2 minutos, examine cada crculo para observar la ausencia presencia de aglutinacin. B. Mtodo Semi-Cuantitativo 1.- Esta reaccin puede ser utilizada para estimar la concentracin de ASO utilizando una serie de diluciones. La muestra del paciente se diluye con un Buffer de Glicina-Salina como se muestra a continuacin:

Despus, cada dilucin se prueba con el ltex como se describi en la seccin A. Mtodo Cualitativo.

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10.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS A. Mtodo Cualitativo: La presencia de aglutinacin indica una concentracin de ASO mayor a 200IU/mL 20% en la muestra. Aquellas muestras en las que no haya presencia de aglutinacin contienen concentraciones de ASO menores a 200 IU/mL.

B. Mtodo Semi-Cuantitativo: Se reporta la dilucin mayor hasta que se observe aglutinacin. El contenido de ASO de la muestra del paciente se toma de la siguiente tabla: Dilucin de la Concentracin de Aglutinacin ASO IU/mL ( 20%) 1 :2 > 400 1 :4 > 800 1 :8 > 1600 1 :16 > 3200 VALORES ESPERADOS Un nivel detectable de 200IU/ml de anticuerpos de Antiestreptolisina-O usualmente es el lmite normal superior, ya que menos del 15-20% de los individuos sanos presentan ttulos mayores de 200IU/mL al probar sus sueros. Los ttulos elevados de ASO pueden estar asociados con espondilitis anquilosante, glomerulonefritis, fiebre escarlatina y tonsilitis. Generalmente no se encuentra incremento de losniveles de ASO en el suero de pacientes con Artritis Reumatoide excepto durante episodios agudos.

11.- OBSERVACIONES Los tiempos de reaccin mayores a 2 minutos pueden dar resultados falsos positivos (debido al efecto de secado). Los sueros muy lipmicos pueden tambin causar reacciones no-especficas. La fuerza de la aglutinacin no es indicativa de la concentracin de ASO en la muestra. En el procedimiento de prueba cualitativo, pueden presentarse reacciones dbiles con concentraciones elevadas muy marcadas. En los casos de un ttulo de ASO con gran incremento (ms de 2000 IU/mL), la aglutinacin puede ser inhibida debido a un exceso de anticuerpo (efecto de prozona). Cuando se esperan estas altas concentraciones de ASO, la muestra se debe probar diluida. Los resultados de esta prueba siempre debern de interpretarse en conjunto con el perfil clnico y con los otros resultados de las pruebas de laboratorio. Un resultado negativo no excluye por completo el diagnstico de

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una fiebre reumtica exactamente o de una glomerulonefritis postestreptococcica

12.- NOTAS IMPORTANTES

13.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compaeros. Contesta el siguiente cuestionario. Completa el glosario de trminos.

CUESTIONARIO 14- GLOSARIO DE TERMINOS 15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA AUTOR

1.- INMUNOLOGIA. Biologa y Patologa del sistema inmune.

TTULO
1.- J.R. Regueiro Gonzlez. C. Lpez Larrea S. Gonzlez Rodriguez.

EDITORIAL 1.- .- 3. Edicin

Editorial Panamericana.

2.- INMUNOLOGIA 3.- FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGIA 4.- INMUNOLOGIA CELULAR y molecular

2.- Oscar Rojas Espinoza 3.- Nemirovsky Mario S. 4.- Abbas Abul K.

2.- 2 Edicin 2001. Editorial Panamericana.

3.- Trillas Mxico 2003 4.- Mc Graw Hill Espaa 2002.

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IV.

CREDITOS DE ELABORACIN

ESTE CUADERNO DE TRABAJO FUE ELABORADO

ACADEMIA DE LABORATORIO CLINICO

Q.F.B. XOCHITL DEL CARMEN RIOS OCHOA Q.B.P. EDGARDO ACEVEDO CASARRUBIAS Q.F.B. MARIA ESTHER SANCHEZ SERRA Q.F.B. MIGUEL ANGEL QUIJANO QOUOH Q.F.B. PEDRO PERALES SABIDO Q.F.B. ANDRES BARRIENTOS ACOSTA Q.F.B. ESLY HERNANDEZ TORRES DR. MARIO ALBERTO LOPEZ Q.F.B. ALEJANDRA GARCIA PANTOJA MVZ RAMON PICHARDO HERNANDEZ

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V. VALIDACIN DEL CUADERNO DE PRCTICAS PLANTEL: C.B.T.i.s. No. 32 ESCOLAR: FEB-JULIO 2013 PERODO

MDULO III: SUBMDULO 3.- APLICAR TECNICAS INMUNOHEMATOLOGICAS

SEMESTRE: IV ACADEMIA LOCAL DE: Laboratorista Clnico Q.F.B. MIGUEL A. QUIJANO COUOH PRESIDENTE DE LA ACADEMIA
(nombre y firma)

ACADEMIA ESTATAL DE: Laboratorista Clnico Q.F.B. MARIA ESTHER SNCHEZ SERRA PRESIDENTE DE LA ACADEMIA
(nombre y firma)

Villahermosa, Tabasco a 30 enero de 2013

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