Acta Farm.

Bonaerense 21 (1): 31-6 (2002)

Recibido el 16 de mayo de 2001 Aceptado el 18 de octubre de 2001

Trabajos originales

Efeito Protetor do Syzygium cumini contra Diabetes Mellitus induzido por Aloxano em Ratos
Andria Maria ZANOELLO, Cinthia MELAZZO-MAZZANTI, Jssica KERPEL GINDRI, Andreane FILAPPI, Danvia PRESTES & Marcelo CECIM * Departamento de Clnica de Grandes Animais, Universidade Federal, Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil Departamento de Clnica de Grandes Animais, Universidade Federal de Santa Maria, RS. Brazil. 97105-900

RESUMO. A influncia do uso profiltico de Syzygium cumini sobre a eficincia diabetognica do aloxano em ratos foi avaliada neste estudo. A infuso das folhas da planta foi oferecida como substituto da gua, antes e durante a administrao do aloxano. Aps 16 dias de tratamento profiltico a glicemia do grupo T estava significativamente maior que a do grupo C (p< 0,004). Sob estas condies foi realizada a induo do diabetes nos dois grupos experimentais. Os nveis glicmicos do grupo T sofreram uma elevao de 49,86 20,34 % em relao ao perodo anterior induo. Esta taxa foi significativamente maior no grupo C (p< 0,03), atingindo um ndice de 177,96 47,30 %. Estes resultados indicam que a ingesto ad libitum de Syzygium cumini tem um efeito hiperglicemiante em ratos no-diabticos e efeito protetor contra ao diabetognica do aloxano. SUMMARY. Protective Effect of Syzygium cumini Against Alloxan-induced Diabetes Mellitus in Rats. The study evaluated the effect of the prophylactic use of Syzygium cumini upon the diabetogenic efficiency of alloxan in rats. An infusion prepared with dried leaves of the plant was offered instead of water during 16 days prior to the administration of alloxan. After 16 days of treatment blood glucose was elevated in treated animals as compared to water fed controls (p< 0,004). After induction, blood glucose levels rose 49.86 20.34% in treated animals and 177.96 47.30% in the control group (p< 0.03). The results suggest that the ad libitum ingestion of the infusion has a hyperglycemic effect in non-diabetic rats and a protective effect against the diabetogenic action of alloxan.

INTRODUO O diabetes mellitus tipo 1 desenvolve-se quando mais de 90% das clulas pancreticas so destrudas, como resultado de um agresso qumica, viral ou auto-imune. A variabilidade na extenso da morte das clulas produtoras de insulina no somente determinada pela severidade da condio citotxica, mas tambm pela intensidade de mecanismos de defesa celular, que podem ser induzidos ou ativados nestas clulas pancreticas. Os mecanismos deste efeito protetor ainda no esto completamente elucidados, mas podem envolver a gera o de substncias intracelulares que so depletadas durante o processo de injria celular 1. A induo experimental do diabetes mellitus

em modelos animais permite a identificao de agentes teraputicos e preventivos da molstia, alm de um estudo detalhado dos eventos bioqumicos, hormonais e morfolgicos que ocorrem durante e aps a induo do estado diabtico. O aloxano um dos agentes diabetognicos mais comumente utilizados, por destruir especificamente as clulas das ilhotas de Langerhans, quando em doses adequadas 2. Segundo Malaisse et al. 3, essa citotoxicidade seletiva do aloxano condicionada pela grande capacidade da clula em acumular a droga, aliada ao fato desta clula demonstrar uma maior sensibilidade aos radicais perxidos, quando comparada a outros tecidos. Heikkila et al. 4 sugeriram que a toxicidade do aloxano resulta da sua habilidade

PALAVRAS-CHAVE: Jambolo, Plantas medicinais, Preveno do diabetes. KEY WORDS: Diabetes prevention, Jamun, Medicinal plants.
* Autor para correspondncia. E-mail: mcecim@lince.hcv.ufsm.br.

ISSN 0326-2383

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em gerar radicais de oxignio altamente reativos que, segundo Abdel-Rahman et al. 5, afetam o metabolismo oxidativo da clula, com subsequente morte celular. Desconsiderando-se a natureza farmacolgica do aloxano, o seu modo de ao suficientemente geral para que outras substncias, que ocorrem naturalmente, sejam diabetognicas por mecanismos similares 6. O desenvolvimento do diabetes mellitus induzido pelo aloxano pode ser prevenido atravs do tratamento prvio com diversas substncias, que diminuem a susceptibilidade das clulas-alvo ao agente agressor. Uma dessas substncias a superxido dismutase, potente enzima removedora de radicais livres, que age profilaticamente contra a citotoxicidade do aloxano sobre as clulas , in vitro 5, 6 e in vivo 7. Do mesmo modo, o cloreto de nquel tambm previne a hiperglicemia induzida pelo aloxano em ratos, devido a sua capacidade de aumentar a atividade da superxido dismutase no pncreas desses animais 8. Por fim, Pipeleers & Van De Winkel 1 demonstraram que o grau de destruio das clulas pancreticas provocado pelo aloxano in vitro reduzido em 80% pela adio de glicose ao meio, antes ou durante a exposio droga. Syzygium cumini (sinon mias: Syzygium jambolanum, Eugenia jambolana e Myrtus cumini) uma rvore originria da ndia, pertencente famlia das Mirtceas e vulgarmente conhecida no Brasil como jambolo 9. Essa planta amplamente utilizada, tanto na medicina popular 9-13 , como na teraputica homeoptica 14, 15 , para o tratamento do diabetes mellitus. O efeito do Syzygium cumini sobre os nveis de glicose sangunea vem sendo cientificamente avaliado, atravs de estudos realizados em animais com diabetes mellitus induzido por aloxano 16-18. O mecanismo de ao dos componentes do Syzygium cumini, bem como suas possveis inteiraes ainda no esto esclarecidos. Contudo, Prince et al. 17 demonstraram que a planta possui propriedades antioxidantes, elevando a atividade das enzimas removedoras de radicais livres no fgado, rim e corao de ratos induzidos com aloxano e, desta forma, protege esses tecidos do estresse oxidativo gerado pela hiperglicemia diabtica 19. Alm disso, alguns dos constituintes qumicos, biologicamente ativos, da planta, como o eugenol 11 , cido glico e tanino 12 , possuem atividade antioxidante 20 . Uma vez que a ao de radicais livres est envolvida na gnese do diabetes mellitus experimental, e o Syzygium cumini demonstrou ser capaz de aumentar o potencial de defesa antio32

xidante, este estudo foi conduzido para investigar a capacidade desta planta em proteger as clulas pancreticas, reduzindo sua susceptibilidade ao efeito txico do aloxano e, desta forma, evitando o desenvolvimento do diabetes mellitus induzido em ratos. MATERIAL E MTODOS Animais O estudo foi realizado em 30 ratas adultas da linhagem Wistar, pesando entre 123 e 160 g e provenientes do Biotrio Central da UFSM. A dieta slida (SUPRA LAB, Alisul Ind. Alimentos Ltda, So Leopoldo, RS), bem como a hdrica (gua ou infuso de Syzygium cumini), foram fornecidas ad libitum. Induo do diabetes mellitus Os ratos receberam uma dose diria de 60 mg/kg de aloxano (alloxan monohydrate, Sigma-Aldrich Inc, St Louis, MO), diludo a 2% em soluo de citrato 0,05 M, pH 4,5, por via intraperitoneal, durante trs dias consecutivos 18 . Um perodo de 48 horas de restrio alimentar foi respeitado antes da primeira dose de aloxano ser administrada. Material vegetal As folhas de Syzygium cumini foram coletadas em fevereiro de 2000, no municpio de Santa Maria (Rio Grande do Sul, Brasil), pelo bilogo Gilberto Zanetti (inscrito no Cadastro Tcnico Federal de Atividades e Instrumentos de Defesa Ambiental com o nmero 4131/98, conforme exigncia do Instituto Brasileiro de Amparo ao Meio Ambiente). Aps foi realizada a determinao botnica destas folhas e, s ento, a planta foi registrada no Herbrio de Plantas Medicinais e Txicas do Departamento de Farmcia Industrial da UFSM, pela exsicata de nmero 130. Preparao da infuso de Syzygium cumini A infuso foi obtida atravs da adio de 20 g de folhas secas e trituradas em 1 litro de gua a 80 C, conforme protocolo seguido por Soares et al. 18 . Esta soluo permanecia em repouso at o completo resfriamento e ento era filtrada e oferecida aos animais. Determinao da glicose sangunea Os nveis plasmticos de glicose foram determinados atravs de teste enzimtico colorimtrico (Glicose God Clin, Quibasa Qumica Bsica Ltda, Belo Horizonte, MG), a partir de amostras

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sanguneas coletadas do plexo retro-orbitrio, de animais em jejum slido de 24 horas e sob anestesia inalatria em campnula com ter. Anlise estatstica O teste t de Student no pareado foi utilizado para determinar as diferenas entre o grupo C e o grupo T nos diferentes momentos do estudo. O teste t de Student pareado foi utilizado para determinar as diferenas na glicemia, dentro do mesmo grupo, antes e aps a induo do diabetes. Os resultados foram expressos como mdia erro padro da mdia. Cronograma experimental Aps um perodo de 7 dias de adaptao, os animais foram divididos, de forma aleatria, em dois grupos (C e T), numericamente iguais. Os ratos do grupo C receberam gua e os do grupo T, ch das folhas Syzygium cumini como nica fonte hdrica. A induo do diabetes mellitus foi

realizada nos dias 17, 18 e 19, nos animais do grupo C e T. No dia 20 os animais do grupo T, assim como os do grupo C, passaram a ingerir somente gua. O peso corporal e o consumo slido dirio foram avaliados nos dias 1, 15 e 22. A glicemia de jejum foi avaliada nos dias 16 e 23 do experimento. RESULTADOS E DISCUSSO Aps a ingesto ad libitum do ch de Syzygium cumini durante 16 dias, os nveis glicmicos dos ratos do grupo T eram significativamente maiores (p < 0,004) que aqueles apresentados pelo grupo C, que no ingeriu a infuso durante esta fase do tratamento (Tabela 1). Uma vez que os valores normais da glicemia, em ratos, variam entre 47,7 a 107 mg/dl, pode-se observar que a ingesto da infuso da planta demonstrou elevar os nveis glicmicos do grupo T a valores prximos ao limite fisiolgico mximo definido para a espcie.

Grupo C Glicemia de jejum (mg/dl) Pr-induo Ps-induo Pr-induo

Grupo T Ps-induo

Mdia Erro padro da mdia Variao (%) Erro padro da mdia

73,83 a 4,72

192,67 b **** 33,45 177,96 e 47,30

112,00 c *** 11,46

145,75 d * 10,71 49,86 f ** 20,34

Tabela 1. Nveis de glicose sangunea de ratos que receberam gua (grupo C) ou Syzygium cumini (grupo T) durante 16 dias, previamente a administrao de aloxano, e 4 dias aps a induo do diabetes mellitus. * (p < 0,04) c vs d. Teste t pareado. ** (p < 0,02) e vs f. Teste t no pareado. *** (p < 0,004) a vs c. Teste t no pareado. **** (p < 0,001) a vs b. Teste t pareado.

A administrao de Syzygium cumini reduz a hiperglicemia induzida por aloxano em ratos, tanto em doses homeopticas 16, quanto em doses alopticas 17,18 . Contudo, a sua influncia sobre a glicemia de animais no-diabticos no foi avaliada em nenhum desses experimentos. Por outro lado, Syzygium cumini capaz de provocar o aparecimento de sinais clnicos indicativos de diabetes, quando ingerido em doses abundantes e concentradas 14. Considerando-se esses dados, a elevao da glicemia de jejum, no grupo T deste experimento, para valores prximos aos fisiolgicos mximos, poderia ser justificada. Entretanto, Soares et al. 18 demonstraram que a ingesto do ch de Syzygium cumini, na mesma concentrao utilizada neste

estudo, e tambm ad libitum e durante 16 dias, tem efeito hipoglicemiante em animais diabticos. Os nveis de hiperglicemia provocada pela administrao diria de 60 mg/kg de aloxano, durante 3 dias consecutivos, nos grupos C e T deste estudo, esto mostrados na Tabela 1. No quarto dia aps o trmino da aplicao da droga, os nveis de glicose sangunea estavam significativamente aumentados, tanto no grupo C (p < 0,001) quanto no grupo T (p < 0,04), quando comparados queles apresentados por estes animais antes do uso de aloxano. Contudo, a diferena percentual desta elevao foi significativamente maior (p < 0,02) no grupo C (177,96 %), quando comparado ao grupo T (49,86%).

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Os nveis de hiperglicemia induzidos pelo aloxano, tanto no grupo C, quanto no grupo T deste experimento podem ser considerados baixos, quando comparados a graus de hiperglicemia mais severos j obtidos com o uso desta droga 7,8,17. Esta menor severidade pode ser explicada em virtude das diferenas entre o protocolos de induo do diabetes utilizados. Grankvist et al. 7 e Soares et al. 18 demonstraram que o grau de destruio das clulas produtoras de insulina e, portanto, a severidade da hiperglicemia induzida em ratos pelo aloxano, dose-dependente. Entretanto, Pipeleers & Van De Winkel 1 verificaram que as clulas das ilhotas de Langerhans possuem mecanismos de defesa capazes de reduzir a sua susceptibilidade a um agente diabetognico em particular ou ao processo de destruio em geral. Segundo esses autores, a gerao de substncias intracelulares, que so consumidas durante o processo agressivo, estimula as clulas a neutralizarem o dano txico. A administrao profiltica de enzimas antioxidantes, cuja atividade se encontra diminuda aps o uso de aloxano 5,17, tem efeito protetor, impedindo o desenvolvimento do diabetes mellitus aloxano-induzido 5-7. O Syzygium cumini, assim como o cloreto de nquel, aumenta a atividade das enzimas removedoras de radicais livres, normalizando sua ao em diversos tecidos de ratos diabticos 8,17. Desta forma, a administrao da planta, antes do uso de aloxano poderia ter diminudo a susceptibilidade das clulas toxicidade deste agente txico neste estudo, da mesma maneira que o cloreto de nquel diminuiu, em estudo realizado por Novelli et al. 8. Essas consideraes poderiam justificar a menor eficincia diabetognica do aloxano, verificada pela menor ca-

pacidade deste agente elevar os nveis de glicose sangunea no grupo T, quando comparado ao grupo C deste experimento. Por outro lado, a glicose possui a capacidade de ativar os mecanismos de defesa celular, aumentando a sobrevivncia das clulas produtoras de insulina, aps administrao de aloxano, possivelmente por prevenir a oxidao celular que ocorre imediatamente aps a exposio das clulas a essa droga 1. Os nveis de glicose sangunea de jejum nos ratos do grupo T atingiram o limite fisiolgico mximo no dia anterior induo do diabetes, e eram significativamente maiores que os do grupo C, o que poderia ter minimizado o efeito txico do aloxano no grupo tratado com Syzygium cumini. A variao no consumo slido dirio e no peso corporal nos animais do grupo C e T, durante a realizao do experimento, demonstrada na Tabela 2. O peso corporal dos ratos do grupo C e T no apresentou diferena significativa, quando avaliado nos dias 1 e 15 do experimento, portanto antes da administrao do aloxano. Os animais de ambos os grupos aumentaram de peso durante estas duas primeiras semanas do estudo, independentemente da ingesto de gua ou do ch de Syzygium cumini. Contudo, no dia 22 do experimento, trs dias aps a induo do diabetes mellitus, o peso corporal do Grupo T era significativamente maior (p < 0,02) que o do Grupo C. Os animais do grupo C apresentaram perda de peso aps a administrao do aloxano, um sinal clnico clssico do diabetes. Por outro lado, os ratos do grupo T mantiveram o peso corporal do perodo anterior ao da induo do estado diabtico, o que poderia ser justificado pela menor severidade da hiperglicemia apresentada por este grupo.

Peso corporal (g) Grupo Dias M EPM

Consumo slido (g) M EPM

C T C T C T

1 1 15 15 22 22

142,20 143,67 170,73 176,53 164,73 a 177,50 b *

2,70 3,16 3,07 2,73 4,07 3,37

17,4 16,7 17,7 c 20,0 d ** 20,1 19,85

5,14 0,87 0,46 0,81 0,27 0,82

Tabela 2. Peso corporal e consumo slido individual de ratos que receberam gua (Grupo C) ou Syzygium cumini (Grupo T), antes (dias 1 e 15) e aps (dia 22) a induo do diabetes mellitus. M= Mdia. EPM= Erro Padro da Mdia. * (p < 0,02) a vs b. Teste t no pareado. ** (p < 0,007) c vs d. Teste t no pareado.

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A nica diferena significativa detectada no consumo slido dirio entre os grupos C e T foi no dia 15 do experimento, quando os ratos do grupo T consumiram uma maior quantidade de ra o quando comparado ao grupo C (p < 0,007). Da mesma forma que a elevao na glicemia, o aumento do apetite tambm outro sinal clnico do diabetes mellitus que, segundo Quezada 14 , pode ser induzido pelo Syzygium cumini. Assim sendo, este resultado poderia ser justificado pela ingesto ad libitum da infuso das folhas da planta pelo grupo C durante um perodo de 15 dias.

CONCLUSES Com base nos resultados obtidos no presente estudo, pode-se concluir que a ingesto do ch das folhas de Syzygium cumini tem um efeito protetor contra a ao diabetognica do aloxano. A planta possui um efeito hiperglicemiante em ratos no-diabticos, no entanto, no se pode afirmar que o efeito protetor do Syzygium cumini foi induzido pela elevao na glicemia provocada pela planta em ratos normais.

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