Practica No 3 Actividad enzimtica

Las enzimas son protenas complejas que producen un cambio qumico especfico en todas las partes del cuerpo. Por ejemplo, pueden ayudar a descomponer los alimentos que consumimos para que el cuerpo los pueda usar. La coagulacin de la sangre es otro ejemplo del trabajo de las enzimas. Las enzimas son necesarias para todas las funciones corporales. Se encuentran en la boca (saliva), el estmago (jugo gstrico), los lquidos intestinales, la sangre y en cada rgano y clula del cuerpo. FUNCIN Las enzimas son esenciales para todos los procesos biolgicos ya que son las responsables de las reacciones que mantienen la vida. Cualquier mutacin o disfuncin en un gen responsable de la codificacin de una enzima puede causar un enfermedad severa y hasta la muerte. Las enzimas son protenas que catalizan todas las reacciones bioqumicas. Adems de su importancia como catalizadores biolgicos, tienen muchos usos mdicos y comerciales. Un catalizador es una sustancia que disminuye la energa de activacin de una reaccin qumica. Al disminuir la energa de activacin, se incrementa la velocidad de la reaccin. La mayora de las reacciones de los sistemas vivos son reversibles, es decir, que en ellas se establece el equilibrio qumico. Por lo tanto, las enzimas aceleran la formacin de equilibrio qumico, pero no afectan las concentraciones finales del equilibrio. Las enzimas tienen una estructura tridimensional sin la que no pueden desarrollar su actividad. En esa estructura poseen el centro activo al que se unen los sustratos y en el que se produce la reaccin cataltica. Cuando el sustrato accede al centro activo, se produce un cambio en la estructura del conjunto enzima-sustrato pero una vez finalizada la catalizacin (catlisis: transformacin qumica motivada por sustancias que no se alteran en el curso de la reaccin) la enzima es recuperada sin ningn cambio en su estructura. ACTIVIDAD ENZIMTICA La sustancia sobre la cual acta una enzima se llama sustrato. Es el nmero de moles de sustrato que reaccionan para formar producto, por mol de enzima y por unidad de tiempo. Esto supone que la enzima est plenamente saturada con sustrato y por tanto que la reaccin se efecta con su mxima rapidez. El ndice de recambio muestra la eficiencia impresionante de la catlisis enzimtica Los sustratos son especficos para cada enzima: La sacarosa es el sustrato de la sacarasa que acta rompindola en sus componentes.

Las enzimas actan de acuerdo con la siguiente secuencia: La enzima (E) y el sustrato (S) se combinan para formar un complejo intermedio enzima sustrato (E-S), el cual se descompone formando un producto y regenerando la enzima.

El grado de especificidad de las enzimas es muy alto, pueden distinguir incluso entre diferentes tipos de ismeros. Se cree que la especificidad de la enzima es debido a la forma particular de una pequea parte conocida como sitio activo, la cual se fija a la contraparte complementaria en el sustrato. FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Concentracin del sustrato.- A mayor concentracin del sustrato, a una concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima. Despus de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentracin del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reaccin. Concentracin de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentracin de la enzima aumenta la velocidad enzimtica hacia cierto lmite. Temperatura.- Un incremento de 10C duplica la velocidad de reaccin, hasta ciertos lmites. El calor es un factor que desnaturaliza las protenas por lo tanto si la temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su actividad. pH.- El pH ptimo de la actividad enzimtica es 7, excepto las enzimas del estmago cuyo pH ptimo es cido. Presencia de cofactores.- Muchas enzimas dependen de los cofactores, sean activadores o coenzimas para funcionar adecuadamente. Para las enzimas que tienen cofactores, la concentracin del cofactor debe ser igual o mayor que la concentracin de la enzima para obtener una actividad cataltica mxima.

Practica

AMILASA
La amilasa, denominada tambin sacarasa o ptialina, es un enzima hidrolasa que tiene la funcin de catalizar la reaccin de hidrlisis de los enlaces 1-4 del componente -Amilasa al digerir el glucgeno y el almidn para formar azcares simples, se produce principalmente en las glndulas salivales(sobre todo en las glndulas partidas) y en el pncreas. Tiene actividad enzimtica a un pH de 7. Cuando una de estas glndulas se inflama, como en la pancreatitis, aumenta la produccin de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre (amilasemia). Fue la primera enzima en ser identificada y aislada por Anselme Payen en 1833, quien la bautiz en un principio con el nombre de "diastasa" PROCEDIMIENTO: a) Se rotularon 4 tubos de ensayo enumerados del 1 al 4 b) Se les puso 5ml de almidn a cada uno c) Se prepar una solucin de 4ml de saliva con 10ml de agua destilada, con la cual se aadi 5ml a los tubos 3 y 4 d) A los tubos 1 y 2 se les puso 5 gotas de lugol e) Se pusieron en bao mara los tubos 3 y 4 por 15 minutos a temperatura de 800C f) Despus del bao mara dado, se les puso a los tubos 5 gotas de lugol OBSERVACIONES: En el tubo 3 cuando se le puso las gotas de lugol despus del bao mara se oscureci ms que el tubo 4, en los tubos 1 y 2 tuvieron un color caf claro

JUSTIFICACION: El almidn es un polisacrido y la amilasa una enzima entonces esta romper los enlaces de almidn y dar como resultado la amilosa, amilopectina y finalmente glucosa. Las enzimas amilasa secretada en la saliva ayudan a descomponer los almidones en las molculas de azcar simples que pueden ser absorbidas en el torrente sanguneo. De esta manera, la actividad

amilasa influye en los niveles de glucosa en sangre, que deben ser mantenidos dentro de un intervalo ptimo para la buena salud. Sin la amilasa las largas cadenas de azucares que conforman los almidones no seran absorbidas y se desecharan del cuerpo de estos, sin brindar la energa que la glucosa del almidn proporcionan. Al poner las muestras con lugol se tiieron de color caf claro oscuro por que la amilasa degrada el almidn y lo reduce a maltosa que es un disacrido y como el lugol no lo reconoce tie de ese color. y se

CATALASA
La catalasa EC 1.11.1.6 es una enzima que se encuentra en organismos vivos y cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno (H202) en oxgeno y agua. 2 H2O2 2 H2O + O2

El perxido de hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos y tiene entre otras una funcin protectora contra microorganismos patgenos, principalmente anaerobios, pero dada su toxicidad debe transformarse rpidamente en compuestos menos peligrosos. Esta funcin la efecta esta enzima que cataliza su descomposicin en agua y oxgeno. Adems la catalasa se usa en la industria textil para la eliminacin del perxido de hidrgeno, as como en menor medida se emplea en la limpieza de lentes de contacto que se han esterilizado en una solucin de perxido de hidrgeno. La ausencia congnita de catalasa es causante de una acatalasemia (o acatalasia), la enfermedad de Takahara que se manifiesta por la ausencia de actividad de la catalasa en los glbulos rojos y con severas infecciones gangrenosas de la boca, pudiendo producir la prdida de los dientes y graves destrucciones de los maxilares y regiones blandas que los cubre. Enfermedad congnita del Japn (2 de 100.00 habitantes sufren de este trastorno). El mecanismo completo de la catalasa no se conoce, aun as la reaccin qumica se produce en dos etapas: H2O2 + Fe(III)-E H2O + O=Fe(IV)-E H2O2 + O=Fe(IV)-E H2O + Fe(III)-E + O2 donde Fe-E representa el ncleo de hierro del grupo hemo unido a la enzima que actun como cofactores. La enzima se presenta en forma de homotetrmero y se localiza en los peroxisomas. Esta enzima puede actuar como una peroxidasa para mucha sustancias orgnicas, especialmente para el etanol que acta como donante de hidrgeno. Las enzimas de muchos microorganismos, como el Penicillium simplicissimum, que exhiben actividad de catalasa y peroxidasa, son frecuentemente llamadas catalasas-peroxidasas

PROCEDIMIENTO No 1: a) Se rotularon los tubos y en cada uno se puso un pedazo de carne, hgado, papa, y tomate

b) Se les puso 5ml de agua oxigenada OBSERVACION: Los tubos que contenan la carne y el hgado se apreci que se producan burbujas, ms en el hgado lo que nos da a entender que contiene ms peroxidasa. La papa y el tomate casi no produjeron burbujas por lo consecuente casi no contienen peroxidasa JUSTIFICACION: El perxido de hidrgeno (H202), es un producto secundario del gran nmero de reacciones metablicas que ocurren en casi todos los seres vivos. Sin embargo, el perxido de hidrgeno es daino Como resultado, casi todos los organismos (vegetales y animales) sintetizan la enzima peroxidasa (catalasa), que descompone al perxido de hidrgeno a medida que ste se forma en los tejidos por eso la enzima procesa el perxido en agua y oxigeno para evitar el dao que puede producir. El hgado de pollo fresco es una fuente importante de peroxidasa que acelera el rompimiento del H202 en molculas de agua y oxgeno gaseoso. Esta reaccin se puede comprobar mediante el desprendimiento de burbujas de oxgeno que se libera de los tejidos vivos. PROCEDIMIENTO No 2: a) Los pedazos que quedaron de la carne, el hgado, la papa y el tomate se molieron en los morteros y se filtraron para poder utilizar el filtrado

b) Se rotularon 3 tubos para cada tipo de filtrado de las muestras biolgicas en total 12 tubos c) En tres tubos ya rotulados para cada filtrado a cada uno se le puso 1ml del filtrado, 3 tubos del filtrado de tomate, 3 de filtrado de papa, 3 tubos de filtrado de carne, 3 tubos del filtrado de hgado

d) Se tomaron 1 tubo de cada muestra de los filtrados para el bao mara a una temperatura de 800C e) Se tomaron otros tubos 1 de cada muestra de filtrado para el bao de hielo f) Los restantes se quedan a temperatura ambiente 00C OBSERVACION: Los tubos de temperatura ambiente 00C no se vio ningn cambio en ellos pero con ellos se pudieron

comparar los otros procedimientos de bao mara y de hielo. Los tubos que se pusieron en bao mara sufrieron cambios el de filtrado de carne y de hgado se tornaron en color blancuzco medio caf, el tubo de la papa quedo transparente ligeramente blancuzco, el tubo de filtrado de tomate los pedacitos se compactaron quedando separados del agua.

Los tubos de bao de hielo tambin cambiaron un poco el tubo de filtrado de hgado quedo un poco ms compactado y de color un poco ms fuerte que en temperatura ambiente, el filtrado de carne de igual manera ligeramente ms transparente pero no sufri cambio, el filtrado de tomate un poco ms transparente un poco adjunto los pedacitos pero no se separaron del agua como en el bao mara y el

filtrado de papa se juntaron algunos pedacitos quedando el agua media rojiza. JUSTIFICACION: La catalasa es una enzima presente en los peroxisomas, cuya funcin es transformar el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno lo que se hace es moler los trozos de las muestras, para que las clulas liberen su contenido, Un aumento en la temperatura provoca un aumento de la velocidad de reaccin hasta cierta temperatura ptima, La velocidad de muchas reacciones enzimticas se duplica aproximadamente por cada 10C que aumenta la temperatura. Como la funcin enzimtica depende de la estructura terciaria (o cuaternaria) la actividad de la enzima puede llegar a desaparecer si se producen cambios notables de temperatura. La mayora de las enzimas son, pues, muy termolbiles y habitualmente es suficiente aplicar una temperatura de 40 a 80C por 2 a 5 minutos, a fin de destruir su actividad. El descenso de la T disminuye la actividad enzimtica pero no llega a desnaturalizar las enzimas, pero no todas, se denaturan, y unas pocas muestran desnaturalizacin cuando se enfran aproximadamente a 5C. A temperaturas bajas, aunque la actividad enzimtica procede muy lentamente, ella no se detiene del todo, hecho que debe tenerse en cuenta en la industria congeladora de alimentos algunas reacciones enzimticas siguen teniendo lugar. Existe una temperatura ptima en que la actividad enzimtica es mxima; por encima de ella la actividad disminuye e incluso desaparece por desnaturalizacin del enzima (en general es un fenmeno que ocurre en todas las protenas).

CONCLUSION Como ya se pudo comprobar los diferentes procesos de las enzimas dado su capacidad de acelerar los procesos como vimos el perxido de hidrogeno es daino pero es el residuo de reacciones biolgicas y por la catalasa de los tejidos de los animales y de los vegetales. Debido a la accin de la enzima catalasa, el agua oxigenada o perxido de hidrgeno agregado se transformar en agua y oxgeno. El desprendimiento de oxgeno se pone de manifiesto como un intenso burbujeo. La desnaturalizacin de las enzimas se produce por medio de las temperaturas en temperatura alta se desactivan sus funciones y en bajas temperaturas las reacciones son ms lentas. Pues estos procedimientos son resultado de la actividad enzimtica que no es ms que cuando la enzima se une con un sustrato y en el sitio activo se da lugar a la reaccin y se desprende el sustrato de la enzima dando un producto como resultado ejemplo de ello como vimos con la amilasa que descompone al almidn produciendo maltosa o glucosa pero la enzima no cambia solo aceler el proceso de catalizacion

BIBLOGRAFIA http://www.medicalpress.es/enzima-en-la-saliva-ayuda-a-regular-la-glucosa-en-la-sangre
http://es.wikipedia.org/wiki/Catalasa http://es.wikipedia.org/wiki/Amilasa

http://genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm http://www.slideshare.net/cipresdecartagena/factores-que-regulan-la-actividad-enzimtica-5852800