5.1 MULTIPLICACION DE UN FAGO A.

Fagos Lticos o Virulentos

1. Definicin Los fagos lticos o virulentos son fagos que solo pueden multiplicarse en bacterias y matan a la clula debiso a la lisis al trmino del ciclo de vida. 2. Cclo de replicacin viral El ciclo de vida de un fago ltico a. Periodo de eclipse Durante la fase de eclipse las partculas de fago no infeccioso se pueden encontrar ya sea en el interior o en el exterior de la clula bacteriana. El cido nucleico del fago se apodera de la maquinaria biosintticas del husped y se elaboran los mRNAs y las protenas fago especficas. Existe una expresin ordenada de la sntesis macromolecular dirigida por el fago, tal como se observa en las infecciones por virus animales. Los mRNAs tempranos codifican para las protenas tempranas, las cuales se necesitan para la sntesis del DNA de fagos y para apagar la biosntesis del DNA, RNA y protenas del husped. En algunos casos las protenas tempranas literalmente degradan el cromosoma del husped. Luego de que el DNA del fago se sintetiza, entonces los mRNAs y las protenas tardas se fabrican. Las protenas tardas son las protenas estructurales que conforman al fago, tambin son las protenas necesarias para causar la lisis de la clula bacteriana. b. Fase de acumulacin intracelular En esta fase el cido nuclico y las protenas estructurales de que estn hechos, se ensamblan y las partculas infecciosas se acumulan dentro de la clula. c. Lisis y Fase de liberacin Despus de un tiempo la bacteria empieza a sufrir lisis y los fagos intracelulares se liberan al medio. El nmero de partculas liberadas por bacteria infectada puede ser tan alto como 1000. 3. Ensayos para determiner fagos lticos. a. Ensayo en placa Los fagos lticos se cuentan mediante ensayos de formacin de placas. Una placa se define como el rea clara que resulta de la lisis de bacterias. (Cada placa se origina de un solo fago infeccioso). A la partcula infecciosa que da origen a la placa se le llama una unidad formadora de placa (ufp o en ingls pfu).

B. Fago lisognico o Temperado

1. Definicin Los fagos lisognicos o temperados son aquellos que bien pueden multiplicarse via el ciclo ltico o entran en un estado quiescente en la clula. En este estado quiescente la mayora de los genes del fago no se transcriben; el genoma del fago existe en un estado reprimido. Al DNA del fago en este estado reprimido se le conoce como profago porque no es un fago pero posee el potencial para producir fagos. En la mayora de los casos el DNA de fago realmente se integra en el cromosoma del husped y se replica junto con el cromosoma del husped y se transmite a las clulas hijas. La clula que alberga un profago no se ve negativamente afectada por la presencia del profago y el estado lisognico puede persistir indefinidamente. A la clula que alberga un profago se le conoce comolisgena. 2. Eventos que conducen a la lisogenia El fago prototipo: Lambda a. Circularizacin del cromosoma del fago- El DNA de Lambda una molcula lineal de doble cadena con pequeas regiones de cadena sencilla en los extremos 5. Estas cadenas sencillas de los extremos son complementarias (extemos cohesivos) de manera que pueden aparearse y producir una molcula circular. En la clula, los extremos libres del crculo se pueden ligar para formar un crculo covalentemente cerrado

b. Recombinacin Sitio-especfico Un evento de recombinacin catalizado por una enzima codificada por el fago, ocurre entre un sitio particular en el DNA del fago circularizado y un sitio particular en el cromosoma del husped. El resultado es la integracin del DNA del fago en el cromosoma del husped c. Represion del genoma del fago Una protena codificada por el fago, la llamaremos el represor es una protena que presenta afinidad y se une con un sitio particular en el DNA del fago que llamaremos el operador y apaga la transcripcin de la mayora de los genes del fago, EXCEPTO la del gene que d lugar al represor. El resultado es un genoma del fago pero reprimido estable el cual est integrado dentro del cromosoma de la clula husped. Cada fago temperado solamente reprimir la expresin de su propio DNA y no la de otro fago, as que la represin es muy especfica (inmunidad a la superinfeccin con el mismo fago).

3. Eventos que conducen a la terminacin de la Lisogenia En cualquier momento en que la bacteria lisognica quede expuesta a condiciones adversas, el estado lisognico puede ser terminado. Este proceso se le llama induccin. Las condiciones que favorecen la terminacin del estado lisognico incluyen: desecacin, exposicin al la luz UV o radiacin ionizante, exposicin a qumicos mutagnicos, etc. Las condiciones adversas que conducen a la produccin de proteasas (protena recA) la cual destruye a la protena llamada represor. Esto a su vez conduce a la expresin de los genes del fago, al proceso inverso al proceso de integracin, llamado escisin y al proceso de multiplicacin ltica. 4. Ciclo Ltico vs Ciclo Lisognico La decisin de lambda de entrar en el ciclo ltico o en el ciclo lisognico cuando este penetra en la clula inicialmente est determinada por la concentracin dentro de la clula, tanto del represor, como de otra protena del fago llamada cro. La protena cro del fago, apaga la sntesis del represor y por lo tanto previene el establecimiento de la lisogenia. Las condiciones ambientales que favorecen la produccin de cro conducirn al ciclo ltico mientras que aquellas que favorecen la produccin del represor favorecern la lisogenia. 5. Importancia de la of Lisogenia a. Modelo de la transformacin por virus animales La lisogenia es un sistema modelo para la transformacin que llevan a cabo los virus de clulas animales. b. Conversin Lisognica Cuando la clula est lisogenizada ocasionalmente hay genes extra que el fago lleva y que se empiezan a expresar en la clula. Estos genes pueden cambiar las propiedades en la clula. Estos genes pueden cambiar las propiedades de la clula bacteriana. Este proceso se le llama conversin lisognica o conversin por fago. Esto puede tener importancia clnica, por ej. Se ha demostrado que los fagos lisognicos llevan genes que pueden modificar al antgeno O de Salmonella, el cual es uno de los antgenos principales ante los cuales est dirigida la respuesta inmune. La produccin de toxina por Corynebacterium diphtheriae est mediada por un gen que es acarreado por un fago. Solo aquellas cepas que se han convertido por lisogenia son patgenos.