CINTICA ENZIMTICA

Liliana Patricia Henao R Ingeniera Qumica

Reaccin qumica Reactivos

transformacin Productos

Condiciones T, P, pH, estados agregacin, catalizadores

ENZIMAS
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Molculas proteicas que actan como catalizadores biolgicos Son altamente especficos y eficientes bajo las condiciones apropiadas

Reaccin enzimtica E + S ES E: Enzima S: Sustrato P: Producto ES: Complejo activado

E + P

ENZIMAS
Ventajas
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Efectivos cantidad moderada No cambian durante la reaccin Especficos naturaleza del sustrato y tipo de reaccin Generalmente funcionan condiciones moderadas No afectan equilibrio reacciones qumicas reversibles, solo aceleran la velocidad

ENZIMAS
Segn tipo de reaccin
# # # # #

Oxireductasas Transferasas Hidrolasas Liasas Isomerasas Ligasas

Redox transferencia grupos funcionales hidrlisis rompen C-O, C-C, C-N reagrupar grupos funcionales juntan 2 molculas

ENZIMAS
# #

Sustrato:
el enzima

reactivo que se une con cavidad a la que se

Sitio activo:

une el sustrato # Coenzimas (cofactores): sustancias necesarias actividad cataltica *iones metlicos: Zn2+, Cu2+, Fe2+, Co2+ *grupos prostticos: estn fuertemente unidos al enzima # Apoenzima: parte proteica no activa

ENZIMAS

Anatoma de una enzima

ENZIMAS
Reaccin Enzimtica E + S ES

ES

EP

EP

E + P

ENZIMAS
Modelos de interaccin E-S
#

Modelo cerradura-llave sustrato especfico

Modelo fijacin inducida flexibilidad centro activo

ENZIMAS
Factores afectan velocidad reaccin enzimtica
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# # #

Concentraciones: *enzima *sustrato *activadores *inhibidores pH Temperatura Fuerza inica

CINTICA ENZIMTICA
#

Reacciones no catalizadas: velocidad de reaccin las concentraciones incrementa con

Reacciones catalizadas enzimaticamente: velocidad solo incrementa alcanza un cierto valor hasta que

Velocidad mxima:

Vmx

CINTICA ENZIMTICA
#

Reaccin Enzimtica E + S ES

P + E

e n e r g a reaccin

CINTICA ENZIMTICA
#

Ecuacin Michaelis-Menten
k1 E + S k2 Velocidadforma = k1[E][S] Velocidaddisoc = -k2[ES] Velocidaddesco
=

k3 ES P + E

-k3[ES]

[E] = [E0-ES]

CINTICA ENZIMTICA
#

Ecuacin Michaelis-Menten
En el estado estacionario [ES] alcanza valor constante Velocform+Velocdisoc+Velocdescom = 0 [E0][S] [ES]= (k2 + k3) k1 + [S]

CINTICA ENZIMTICA
#

Si, KM =

k2 + k3 ,

k1 y como velocprod = k3[ES], k3[E0] Vprod = 1 + KM/[S] Si, Vmx= k3[E0], Vmx Vprod = 1 + KM/[S]

CINTICA ENZIMTICA
# Ecuacin
v e l o c i d a d Concentracin sustrato

Michaelis-Menten

CINTICA ENZIMTICA
#

Ecuacin Michaelis-Menten
KM = k2 + k3 , k1 KM = k2/k1 complejo dbil complejo fuerte

Si, k2>>>k3
# #

Valores Valores

KM KM

Ecuacin Michaelis-Menten
Vmx [S]
#V

KM + [S] #Orden 1 [S]<<KM Vmx V = [S] KM #Orden 0 [S]>>KM V = Vmx

CINTICA ENZIMTICA
Clculo de parmetros cinticos
1/V
#

Ecuacin de Lineweaver-Burk 1 V = KM Vmx 1 [S] + 1 Vmx -1/KM KM/Vmx 1/Vmx 1/[S]

CINTICA ENZIMTICA
Clculo de parmetros cinticos
Representacin Eadie-Hofstee (Ecn L-B x VVmx)
#

Vmx -KM Vmx/ -KM V/[S]

-KM V + Vmx V = [S]

CINTICA ENZIMTICA
Influencia del pH
# #

Parmetro crtico Enzimas son activos rango limitado, su actividad decrece al aumentar o disminuir notoriamente el pH Cada enzima tiene un pH ptimo

Log Vmx

7 pH

CINTICA ENZIMTICA
Influencia de la temperatura
#

La reaccin cintica global sigue la expresin:

K = A

(-Ea/RT)

CINTICA ENZIMTICA
Influencia de la temperatura

INHIBICIN DE ENZIMAS
#

Inhibicin competitiva Inhibicin no competitiva Inhibicin incompetitiva

ACTIVADORES ENZIMTICOS
Cofactores (A)
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Interaccin con el enzima E + A EA EA + S EAS SA ESA E + PA A + P EA + P

Interaccin con el sustrato S + A SA + E PA

ANLISIS DE ACTIVIDAD ENZIMTICA

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Actividad enzimtica: medida cantidad enzima presente medio reaccin

de de

U.I.: cantidad enzima cataliza formacin de mol de producto por minuto Catal: cantidad enzima cataliza 1 mol sustrato por segundo 1 catal = 6x107 U.I.

ANLISIS DE ACTIVIDAD ENZIMTICA

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Medida de la velocidad reaccin enzimtica

Variacin absorbancia (A) con el tiempo desde la adicin del enzima

Velocidad reaccin en funcin cantidad de enzima empleada

ANLISIS DE ACTIVIDAD ENZIMTICA

Mtodos
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Del punto final o de equilibrio: evalan [S]. Cambio producido al finalizar la reaccin utilizando especie indicadora Cinticos: V constante e independiente de [S]. Determinar actividad enzimtica, concentraciones de activadores y/o inhibidores