ENZIMAS

Profa. Denise Villas Bas Saleh

Enzimas

As enzimas so protenas especializadas na catlise de reaes biolgicas.

Possuem alta especificidade e poder cataltico que so superiores aos catalisadores produzidos pelo homem.
Praticamente todas as reaes que caracterizam o metabolismo celular so catalisadas por enzimas. Como catalisadores, as enzimas aceleram a velocidade de uma reao, sem, no entanto, participar como reagente ou produto.

Enzimas
Catalisadores biolgicos.

Enzimas
Enzimas so Protenas.

Protenas so compostos formados por polmeros de aminocidos.

Estrutura Geral de um Aminocido

NH2
amina

Ca
R

OH

carboxila cido carboxlico

Cadeia lateral

Aminocidos

Unidades fundamentais das protenas Apresentam pelo menos um grupo carboxlico e um grupo amino
Aminocidos tm como frmula geral:

COO H N - C - H 3

Aminocidos proticos so determinados geneticamente: cdigo gentico

os aminocidos se diferenciam entre si quanto ao tipo de cadeia lateral, ou grupo radical R, que apresentam.
carboxila

Cadeia lateral

amino

Existem 20 aminocidos que ocorrem naturalmente em protenas de todos os tipos de organismos. Estes aminocidos so determinados por cdons especficos (triplets de nucleotdeos) presente no material gentico dos seres vivos.

Abreviaturas dos aminocidos

Abreviaturas Aminocido Alanina Arginina Asparagina Asparato Cistena Fenilalanina Glutamato Glutamina Glicina Histidina Isoleucina Leucina Lisina Metionina Prolina Serina Treonina Triptofano Tirosina Valina Trs letras Ala Arg Asn Asp Cys Phe Glu Gln Gly His Ile Leu Lys Met Pro Ser Thr Trp Tyr Val Uma letra A R N D C F E Q G H I L K M P S T W Y V

O papel que os aminocidos desempenham nas protenas est relacionado s propriedades qumicas dos radicais. Os aminocidos proticos so classificados de acordo com as propriedades de suas cadeias laterais.

Classificao dos Aminocidos

Aminocidos bsicos (3)

Aminocidos cidos (2) Aminocidos polares neutros (4)

Aminocidos especiais (3)

Aminocidos hidrofbicos apolares (8)

Aminocidos bsicos

Aminocidos cidos

Aminocidos polares neutros

Serina (Ser S) cido Asprtico (Asp D) Lisina (Lys K) Arginina (Arg R) Histidina (His H) cido Glutmico (Glu E)

Treonina (Thr T)

Aminocidos especiais

Os 20 aminocidos protecos

Cistena (Cys C)

Glicina (Gly G)

Prolina (Pro P)

Asparagina (Asn N)

Glutamina (Gln Q)

Aminocidos hidrofbicos - apolares

Alanina (Ala A)

Valina (Val V)

Isoleucina (Ile I)

Leucina (Leu L)

Metionina (Met M)

Fenilalanina (Phe F)

Tirosina (Tyr Y)

Triptofano (Trp W)

Os aminocidos especiais possuem caractersticas intermedirias entre os grupos dos aminocidos polares e apolares.

Alm disso: a cistena o nico aminocido cuja cadeia lateral capaz de fazer ligaes covalentes e com isso, pode contribuir para a estrutura da protena. a prolina no um aminocido tpico, e sim um iminocido, uma vez que sua Cadeia lateral e seu grupo amina fazem parte de um anel heterocclico da molcula.
OBS: A classificao dos aminocidos pode diferir, conforme o autor. O importante em cada caso entender os critrios para a classificao.

Os 20 aminocidos com outra classificao

20 L-Aas
A A B B C C

sntese

Todas as protenas

B C A C A
B

C B C A B
A

20 Aa = 2,4 x 10 18 molculas diferentes

Formao da protena - Ligao peptdica

A ligao peptdica ocorre entre os grupamentos amina e carboxila ligados ao carbono alfa dos aminocidos, com a sada de uma molcula de gua.
As ligaes peptdicas possuem propriedades especiais, tais como um carter de dupla ligao parcial, rgida e planar, e configurao quase sempre "TRANS". Apesar disso, o peptdeo tem grande mobilidade rotacional, pois as ligaes entre o carbono alfa do resduos do aminocido e seus radicais carboxila e amina possuem giro livre sobre seus eixos.

Formao da ligao peptdica

A ligao peptdica ocorre entre os grupamentos amina e carboxila ligados ao carbono alfa dos aminocidos, com a sada de uma molcula de gua.

Organizao estrutural das protenas

As protenas possuem complexas estruturas espaciais, que podem ser
organizadas em 4 nveis, crescentes em complexidade: Estrutura primria; Estrutura secundria; Estrutura terciria; Estrutura quaternria .

Estrutura primria
Dada pela sequncia de aminocidos e ligaes peptdicas da molcula.
o nvel estrutural mais simples e mais importante, pois dele deriva todo o arranjo espacial da molcula. Pode variar em 3 aspectos, definidos pela informao gentica da clula:
Nmero de AA. Seqncia de AA. Natureza dos AA.

Caractersticas da estrutura primria

A estrutura primria da protena resulta em uma longa cadeia de AA
semelhante a um "colar de contas", com uma extremidade AMINO TERMINAL e uma extremidade "CARBOXI TERMINAL"

A estrutura primria de uma protena pode ser destruda por HIDRLISE

qumica ou enzimtica das ligaes peptdicas, com liberao de peptdeos

menores e aminocidos livres

Estrutura Secundria
dada pelo arranjo espacial de aminocidos prximos entre si presente na sequncia primria da protena. Ocorre graas possibilidade de rotao das ligaes entre os carbonos dos aminocidos e seus grupamentos amina e carboxila.

So estruturas longas que se enrolam. So 2 os tipos principais de arranjo secundrio:

Alfa hlice Beta pregueada

Estrutura Secundria: Alfa-Hlice

a forma mais comum de estrutura secundria Caracteriza-se por uma hlice em espiral formada por 3,6 resduos de aminocidos por volta. As cadeias laterais (R) dos aminocidos se distribuem para fora da hlice.

A principal fora de estabilizao da a - Hlice a ponte de hidrognio, realizada entre um aminocido e o terceiro depois dele.

Estrutura Secundria: Alfa-Hlice

Estrutura Secundria: Beta-pregueada ou folha-b

Ao contrrio da a - Hlice, a folha - b envolve 2 ou mais segmentos polipeptdicos da mesma molcula ou de molculas diferentes, arranjados em paralelo ou no sentido anti-paralelo; Os segmentos em folha - b da protena adquirem um aspecto de uma folha de papel dobrada em pregas

As pontes de hidrognio mais uma vez so a fora de estabilizao principal desta estrutura

Estrutura Secundria Estrutura beta-pregueada

Pontes de Hidrognio na beta-pregueada

Estrutura terciria
Dada pelo arranjo espacial de aminocidos distantes entre si na sequncia polipeptdica; a forma tridimensional como a protena se "enrola; A estrutura terciria de uma protena determinada e estabilizada por foras, tais como:

Pontes Dissulfeto
Pontes de hidrognio

Interaes hidrofbicas
Interaes eletrostticas

Estrutura quaternria
Essa estrutura constituida por mais de uma cadeia polipeptdica, ocorrendo a associao de subunidades polipeptdicas.

So duas ou mais protenas unidas.

funo da distribuio espacial de mais de uma cadeia polipeptdica no espao. A estrutura quaternria determinada e estabilizada por foras, tais como: Pontes Dissulfeto

Pontes de hidrognio
Interaes hidrofbicas

Interaes eletrostticas

Caractersticas da estrutura quaternrio

Uma protena com subunidades pode ser constituida por cadeias polipeptdicas idnticas ou no.

Protenas com mais de uma subunidade so denominadas de OLIGMEROS, e suas subunidades idnticas so denominadas de PROTMEROS (o qual pode ser uma cadeia polipeptdica ou vrias cadeias polipeptdicas idnticas).
EXEMPLO: HEMOGLOBINA

Composio: a2b2 Dmero de protmeros: ab

Estrutura quaternria da Protena

Resumindo:

Enzimas so Protenas
Enzimas so protenas especializadas na catlise da maioria das reaes que ocorrem nos diferentes processos metablicos de todos os seres vivos. Grande diferena entre o tamanho da enzima e seus substratos. Ex: Urease que catalisa a reao de hidrlise da uria Urease 50000 Daltons Uria 60 Daltons

gua 18 Daltons

Velocidade e Especificidade das Enzimas

Velocidade de catlise: grande, alta. Reaes catalisadas por enzimas so 107-1014 vezes mais rpidas que as correspondentes reaes espontneas.

Especificidade por substratos: varivel. A maioria especfica.

Algumas enzimas reconhece L-Asp),

apresentam seletividade (ex. Aspartase s

Outras enzimas - so menos especficas (ex. Hexoquinase - fosforila

qualquer hexose, seja: glicose, frutose, ou galactose)

Enzimas - Velocidade
Os Aminocidos presentes no stio ativo determinam: a especificidade e a velocidade de catlise.

Em muitos casos, co-fatores (molculas orgnicas ou ons metlicos) participam do stio ativo.

Enzimas - Stio ativo

a regio da enzima onde efetivamente ocorre a reao catalisada.

Somente uma poro muito pequena dos aminocidos da enzima participam da reao. A interao entre a enzima e o substrato no centro ativo promove a formao do estado de transio.

Enzimas - Stio ativo

Generalizaes sobre o stio ativo das enzimas:
O stio ativo uma estrutura tridimensional formados por grupamentos que vm de diferentes partes da sequncia linear de aminocidos. O stio ativo ocupa uma parte relativamente pequena do volume total de uma enzima. O Stio ativo so fendas ou frestas.

Os substratos so ligados as enzimas por atraes fracas mltiplas( pontes de hidrognio). A especificidade da ligao depende do arranjo precisamente definido dos tomos no centro ativo.

Enzimas - Stio ativo

Ocorre uma alterao da conformao da enzima aps o acoplamento do substrato.

Enzimas e Co-fatores
As vezes necessrio a associao de outras molculas ou ons metlicos para que a enzima exercer seu papel cataltico. Co- fatores.
Localiza normalmente no stio ativo juntamente com o substrato.

Se liga antes que o substrato

Podem ser: ons metlicos ou pequenas molculas orgnicas Co-fatores ons metlicos ligam-se ao grupo R de aminocidos
Ex: Ca+2, Mg+2 ou Mn+2 (pode ser qual um) Ex2: Fe, Cu,Ni, Co, Zn, Se ( mais especfico)

Coenzimas molculas orgnicas pequenas

Essas enzimas so chamadas de apoenzimas. A enzima completa Holoenzima.

Co-fatores e coenzimas

Coenzimas

Coenzimas

Inibio da Atividade Enzimtica

Catlise enzimtica impedida devido compostos que ligam-se enzima e impedem a sua ao.

Pode ser :
Inibidores Competitivos forma estrutural semelhante ao substrato ligamse no stio ativo de modo reversvel. O efeito revertido aumentando-se a concentrao de substrato Este tipo de inibio depende das concentraes de substrato e de inibidor Inibidores No Competitivos- ligam-se geralmente fora do sitio ativo alterao da estrutura.

Este tipo de inibio depende apenas da concentrao do inibidor. Inibio enzimtica irreversvel - h modificao covalente e definitiva no stio de ligao ou no stio cataltico da enzima.

Inibidores

Inibidores

Regulao da Atividade Enzimtica

Algumas enzimas podem ter suas atividades reguladas, atuando assim como moduladoras do metabolismo celular. Esta modulao essencial na coordenao dos inmeros processos metablicos da clula.
Alm dos mecanismos j citados de modulao de atividade enzimtica - por variao da concentrao do substrato, ou por inibio enzimtica, por exemplo - existem 2 mecanismos de regulao enzimtica mais conhecidos: Regulao alostrica Modificao Covalente

Regulao Alostrica

a inibio por "feed-back", onde o prprio produto da reao atua como modulador da enzima que a catalisa
Muitas das enzimas celulares so alostricas, isto , possuem um stio de ligao alostrico. A atividade enzimtica pode ser aumentada ou diminuda.

Modulador alostrico positivo - Quando a ligao do modulador promove aumento da atividade enzimtica. Modulador alostrico negativo - Quando a ligao do modulador promove diminuio da atividade enzimtica

Modificao Covalente
Ocorre quando h modificao covalente da molcula da enzima, com converso entre formas ativa/inativa. A regulao ocorre devido a ligao covalente de um grupo qumico sua estrutura. O processo ocorre principalmente por adio/remoo de grupamentos fosfato de resduos especficos de serina.
Exemplo: transferncia de um grupo fosfato, proveniente do ATP. Isso provoca um mudana da conformao espacial da enzima e pode formar um stio ativo funcional.

Influncia do Meio sobre a atividade Enzimtica

Sistema de classificao - Enzimas

As enzimas so divididas em seis Classes principais e subclasses de acordo com o tipo de reao catalisada. Cada enzima designada por um Nome Recomendado, usualmente pequeno e apropriado para o uso dirio, um Nome Sistemtico, o qual identifica a reao catalisada, e um Nmero de Classificao, o qual usado quando uma identificao precisa necessria. Exemplo: ATP + creatina ADP + fosfocreatina

O Nome Recomendado para esta enzima - Creatininaquinase. Nome Sistemtico, baseado na reao catalisada, : ATP:creatinafosfotransferase. Nmero de classificao EC 2.7.3.2. EC representa Enzyme Commission of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology - IUBMB. Primeiro dgito: 2 - Classe (transferase), Segundo dgito: 7 - Subclasse (fosfotransferase), Terceiro dgito: 3 - Sub-subclasse em que a fosfotransferase apresenta um grupo nitrogenado como aceptor Quarto dgito: 2 - designa uma creatina quinase.

Classificao das ENZIMAS

Cdigos utilizados para a aplicao do nmero de identificao das enzimas.

1. Oxido-redutases (reaes de oxidao-reduo ou transferncia de eltrons Desidrogenases e Oxidases) 1.1.atuando em CH-OH 1.2.atuando em C=O 1.3.atuando em C=O1.4.atuando em CH-NH2 1.5.atuando em CH-NH1.6.atuando em NADH, NADPH 2.Transferases (transferem grupos funcionais como amina, fosfato, acil, carboxil Quinases e Transaminases) 2.1.grupos com um carbono 2.2.grupos aldedo ou cetona 2.3.grupos acil 2.4.grupos glicosil 2.7.grupos fosfatos 2.8.grupos contendo enxfre 3.Hidrolases (reaes de hidrlise de ligao covalente - Peptidases) 3.1.steres 3.2.ligaes glicosdicas 3.4.ligaes peptdicas 3.5.outras ligaes C-N 3.6.anidridos cidos 4.Liases (catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de molculas de gua, amnia e gs carbnico Dehidratases e Descarboxilases) 4.1. =C=C= 4.2. =C=O 4.3. =C=N5.Isomerases (reaes de interconverso entre ismeros ticos ou geomtricos - Epimerases) 5.1.racemases 6.Ligases (catalisam reaes de formao de novas molculas a partir da ligao entre duas pr-existentes, sempre s custas de energia - Sintetases) 6.1. C-O 6.2. C-S 6.3. C-N 6.4. C-C

Energia de Ativao
A energia de ativao a menor quantidade de energia necessria que deve ser fornecida aos reagentes para a formao do complexo ativado e para a ocorrncia da reao. A energia de ativao um obstculo para que a reao ocorra e ela necessria para romper as ligaes dos reagentes. Com isso, a reao ocorre e novas ligaes so feitas para a formao dos produtos. Quando a coliso entre as partculas dos reagentes com orientao favorvel ocorre com energia igual ou superior energia de ativao, antes da formao dos produtos, forma-se um estado intermedirio e instvel, denominado complexo ativado, em que as ligaes dos reagentes esto enfraquecidas e as ligaes dos produtos esto sendo formadas. A energia de ativao a energia necessria para formar o complexo ativado. A energia de ativao uma barreira para a efetivao da reao. O que ocorre com essa energia quando h uma enzima?

Concentrao de Enzima
A velocidade da reao diretamente proporcional quantidade de enzima presente no meio de reao, quando h quantidade saturante de substrato. O substrato deve estar em concentrao suficiente (saturante) para assegurar que todas as molculas de enzimas estejam na forma do complexo enzima substrato (ES).
Inclinao inicial = Vo= dP/dt

dP dt

Relao entre velocidade e concentrao de substrato

As reaes que so catalisadas por enzimas ocorrem em duas etapas, como mostradas abaixo:

K1
K2

K3
K4

Substrato interage com a enzima, forma (ES) K1 e K2 (constantes de formao e dissociao do complexo ES) Transformao em P que se dissocia da enzima K3 e K4 (constantes de velocidade da segunda fase da reao)
K3 <<<<<< K1 e K2 . Portanto, uma constante crtica, responsvel por determinar a velocidade da reao

Essa curva tem a forma de uma hiprbole retangular. Em concentrao muito baixa de substrato, a velocidade diretamente proporcional concentrao de substrato. Em alta concentrao de substrato, a velocidade torna-se independente e atinge uma velocidade mxima.

Cintica Enzimtica

v =V max. _[S]__ Km + [S]

Consideraes que levaram definio da equao de Michaelis Menten

1. A concentrao de substrato muito grande em relao a concentrao da enzima. Deste modo, a formao de ES no altera significativamente a concentrao de substrato. 2. No incio da reao, a concentrao de produtos significativamente baixa. Logo, a velocidade da reao descrita pelo K4 pode ser ignorada. 3. A velocidade na qual ES transformada em E + P a etapa limitante, mais lenta da reao. Portanto define que Vmax ocorre quando toda enzima existente no meio a reao esta associada a seu substrato, ou seja, quando (Etotal) = (ES).

4. A formao do complexo ES rpida e reversvel, e a velocidade na qual ES formada igual velocidade na qual ES desaparece do meio de reao. Isso permite que a concentrao de ES possa ser expressa em termos de parmetros que possam ser facilmente determinados.

Cintica Enzimtica

Cintica Enzimtica

NO LABORATRIO
Atividade Enzimtica a quantidade de enzima que catalisa a transformao de 1 mmol de substrato por minuto em condies padro.

Logo, a ATIVIDADE ENZIMTICA REPRESENTA UMA VELOCIDADE DE REAO

Normalmente : Utilizar uma concentrao de substrato para a cintica de ordem zero.

NO LABORATRIO