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PRCTICA DE ESPECTROFOTOMETRA Objetivo: Cuantificar el contenido de dos colorantes en una mezcla utilizando espectrofotometra UV/Visible, en un espectrofotmetro Jenway modelo

6405 Materiales: Verde de Malaquita. Rojo de Metilo. Matraz de 250 ml y matraces de 25 ml para las disoluciones. Esptula Espectrofotmetro UV/visible y cubetas para colocar muestra. Pipetas de 10 ml.

Metodologa: 1.- Preparacin de soluciones: Se preparar las siguientes soluciones de estndares con cada colorante con agua de la llave: Rojo de metilo 2.0X10-5 g/ml 3.0X10-5 g/ml 4.0X10-5 g/ml 5.0X10-5 g/ml 6.0X10-5g/ml Verde de malaquita 2X10-6 g/ml 4X10-6 g/ml 6X10-6 g/ml 8X10-6 g/ml 10X10-6 g/ml

nota: se puede preparar la solucin ms concentrada en un matraz ms grande y tomar alcuotas para hacer las disoluciones menos concentradas en los matraces ms pequeos. 2.- Se determin la longitud de onda ptima (max): Aqu se determin la mejor longitud de onda para cuantificar los colorantes. a) Encender el espectrofotmetro. b) Seleccionar el modo espectro. c) Introducir una cubeta llena con agua destilada hasta 1/3 de su capacidad en la cmara (Esto ser nuestra lnea base o seal del blanco).

d) Buscar en el men y seleccionar la opcin Lnea Base. Aqu comenzar un barrido de longitudes de onda sobre la muestra para generar la lnea base. e) Tomar cualquiera de las soluciones del verde de malaquita y llenar la cubeta con ella hasta 2/3 partes. Colocar la cubeta en la cmara. f) Seleccionar la opcin barrido para hacer un scan de todas las longitudes de onda. Esto determinar el espectro de absorcin de la sustancia que estudiamos. g) Observar y apuntar la longitud de onda donde se present la mayor absorbancia. h) Repetir los incisos f), g) y h) para el rojo de metilo. i) Escribir la longitud de onda donde los colorantes tuvieron mayor absorbancia. En el men estadstica se puede ver una lista de todas las longitudes de onda en las que hubo absorbancia. Usted puede verlas oprimiendo PagArr o PagAb. j) Elabore un esquema aproximado de la forma del espectro de absorcin para cada colorante.

3.- Generacin de la curva de calibracin: a) Seleccione del men principal la opcin Fotomtrico. b) Fije la longitud de onda en la que hubo un mximo de absorbancia para el verde de malaquita, esto lo puede hacer oprimiendo la tecla GoTo, tecleando el valor y luego Enter. c) Coloque la celda con agua destilada en la cmara y oprima la tecla Cal. d) Retire la celda. e) Coloque en celdas las soluciones que prepar con el verde de malaquita (una solucin por celda). f) Coloque las celdas en la cmara y registre los datos de absorbancia que obtenga. g) Construya la curva de calibracin graficando Concentracin vs. Absorbancia, ajuste a una lnea recta. El valor de la pendiente es la absortividad molar . Reporte dicho valor. h) Repita los pasos b) a g) para el rojo de metilo.

4.- Se determin la concentracin en una muestra problema: a) Coloque la muestra problema en una cubeta y genere su espectro de absorcin. Comprelo con los de las soluciones estndar. b) Observe donde ocurre la absorbancia mxima para ambos componentes. c) Seleccione Estadstica y observe cuanto es la absorbancia en las longitudes de onda mximas. d) Vaya al men Fotomtrica y fije la longitud de onda que corresponda al mximo de cada componente en cada curva de calibracin efecte la lectura. e) Pregunte a su maestro la concentracin de la muestra problema y compare con su resultado.

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