Operaciones y procesos biotecnolgicos I Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas Universidad Nacional del Litoral

Tema 5

Bio-reactores Enzimticos

Dr. Juan Manuel Peralta

Instituto de Desarrollo Tecnolgico para la Industria Qumica (INTEC) Edificio INTEC 1, Paraje el Pozo, Predio UNL-CONICET, Ruta 168 (colectora). Tel: 0342-4511595 ext: 1090, E-mail: jmperalta@intec.unl.edu.ar

Bio-reactores Enzimticos

Contenidos
1. Breve revisin de conceptos fundamentales de cintica enzimtica. 2. Derivacin de expresiones cinticas a partir de diferentes mecanismos e hiptesis simplificatorias: etapa determinante y estado estacionario. 3. Enzimas inmovilizados. 4. Interferencia de los procesos de transferencia de materia (difusin) con la velocidad de reaccin enzimtica. 4.1. Caso de la enzimas inmovilizados en placas porosas. 4.2. El nmero de Damkhler. 4.3. Difusin y reaccin enzimtica en el interior de matrices porosas esfricas. 4.4. El factor de efectividad y el mdulo de Thiele.

Bibliografa
1. Dutta, R. 2008. Fundamentals of biochemical engineering. Springer Science + Business Media. Berlin. Germany.

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Dr. J. M. Peralta

1. Conceptos fundamentales de cintica enzimtica

Bio-reactores Enzimticos

Enzima
Catalizador biolgico (en su gran mayora protenas). En general, trabajan mejor en condiciones ptimas para los seres vivos. La palabra en griego significa en la levadura y fue usada por primera vez por W. Khne en 1877 para describir la actividad que Pasteur observ en las fermentaciones.

Que hacen?
A E B G (energa libre)
Sin enzima

G+
AB EAB Con enzima AB A+B A+B

A E B

A E B

Reaccin

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Dr. J. M. Peralta

1. Conceptos fundamentales de cintica enzimtica

Bio-reactores Enzimticos

Nomenclatura
1. Nombres no descriptivos
Renina: cataliza el cuajado de la leche para producir quesos Pepsina: hidroliza protenas a pH acido Tripsina: hidroliza protenas a pH medio y alcalino

2. Adicin del prefijo asa

Basado en el sustrato: Lactasa (lactosa) Basado en la reaccin: Glucosa isomerasa (isomerizacion de la glucosa)

3. Cdigo numrico (EC number)

Se usa un cdigo de 4 nmeros Clase (x.1.1.1) 1. Oxidoreductasas 2. Transferasas 3. Hidrolasas 4. Liasas 5. Isomerasas 6. Ligasas (sintetasas)

EC 1. 1. 1. 1
Sub-sub (1.1.x.1) 1. NAD o NADP 2. aldehdo 3. oxigeno 4. bisulfuro 5. quinonas
Sub-sub-sub (1.1.1.x) 1. OH- desidrogenasa 2. OH- deshid. NADP+ 3. Homoserina deshid. 4. Butanediol deshid. 5. Acetoina deshid. 6. Gliserol deshid. 7.

Sub (1.x.1.1) 1. CH-OH 2. aldehido 3. CH-CH 4. CH-NH2 5. CH-NH 6. NADH y NADPH 7. Otros comp N 8. S9. Grupos hemo

Por ejemplo: EC.1.1.1.1 = alcohol dehydrogenasa Base de datos: http://expasy.org/enzyme/ Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Dr. J. M. Peralta

1. Conceptos fundamentales de cintica enzimtica

Bio-reactores Enzimticos

Sitio activo
Estos polmeros son usualmente grandes molculas pero sin embargo solamente una porcin pequea cataliza la reaccin.

Carboxipeptidasa

Catalasa

Los sitios activos suelen estar compuestos por dos componentes: 1. Sitio de enlace o unin: rea que sostiene al sustrato 2. Sitio cataltico: rea donde sucede la reaccin.

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Dr. J. M. Peralta

1. Conceptos fundamentales de cintica enzimtica

Bio-reactores Enzimticos

Formacin complejo Enzima-sustrato (ES)

Para explicar la formacin del compuesto intermedio ES se plantearon varias teoras: 1. El modelo de llave-cerradura de Hemil y Fisher El complejo ES se forma debido a la complementariedad geomtrica entre el enzima y el sustrato.

A E B E

A B

2. El modelo del ajuste inducido de Koshland El complejo ES se forma debido a que el enzima cambia su conformacin a medida que se acerca el sustrato para obtener la complementariedad geomtrica.

A E E B E

A B

3. Uso de otros compuestos (ej. Cofactores y/o coenzimas) Algunos enzimas forman el complejo ES por la ayuda de compuestos no proteicos cofacores (ej. Mg, Zn, Fe, etc) o moleculas organicas complejas coenzimas (ej. NAD, FAD, CoA, vitaminas, etc.).

E Co-E

B E

A B

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Dr. J. M. Peralta

2. Expresiones cinticas a partir de diferentes mecanismos e hiptesis

Bio-reactores Enzimticos

Cintica enzimtica
Henri (1902) observ que, en general, las reacciones enzimticas presentaban las siguientes particularidades: 1. La velocidad de reaccin es proporcional a la concentracin del sustrato (esto es, cintica de primer orden) cuando la misma es baja. 2. La velocidad de reaccin no depende de la concentracin del sustrato cuando la misma es alta debido a que la velocidad cambia de una reaccin de primer orden a una de orden cero a medida que la concentracin de sustrato aumenta. 3. La velocidad mxima de reaccin es proporcional a la concentracin de enzima dentro del rango experimentado. Se propuso la expresin:

rP = rmax C
Producto

rP =

rmaxCS K M + CS

rP =

rmax C KM S
Sustrato

Tiempo Brown (1902) propuso el siguiente mecanismo de reaccin:

S+E

k1 k2

ES

k3

P+E
Dr. J. M. Peralta 7

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

2. Expresiones cinticas a partir de diferentes mecanismos e hiptesis

Bio-reactores Enzimticos

Cintica enzimtica (cont.)

La ecuacin propuesta por Henri puede ser obtenida a partir del mecanismo propuesto por Brown efectuando las siguientes suposiciones: 1. La concentracin total de enzima permanece constante durante la reaccin: CEo = CES + CE 2. La cantidad de enzima es muy pequea en comparacin con la cantidad de sustrato. Por lo tanto, la formacin del complejo ES no reduce significativamente a la cantidad de sustrato. 3. La concentracin de producto es tan baja que la reaccin no se ve afectada por su concentracin. A partir de estas suposiciones existen tres formas diferentes de obtener la ecuacin para la velocidad de reaccin: Michaelis Menten (1913) Se asume que la etapa de formacin de producto es mucho mas lenta que la de formacin del complejo ES, la cual est en equilibrio. Brigs Haldane (1925) Se asume que la concentracin del complejo ES se mantiene constante (pseudo estado estacionario) Solucin numrica Operaciones y procesos biotecnolgicos I Dr. J. M. Peralta 8

2. Expresiones cinticas a partir de diferentes mecanismos e hiptesis

Bio-reactores Enzimticos

Propuesta de Michaelis Menten

La velocidad de formacin de productos es mucho mas lenta que la velocidad de formacin del complejo ES. Esto puede pensarse debido a que la formacin del complejo ES esta basada en interacciones dbiles. Si la reaccin mas lenta determina la velocidad global de la reaccin, la velocidad de formacin de producto y consumo de sustrato es proporcional a la concentracin del complejo ES:

r =

dC dCP = S k3CES dt dt

La concentracin del complejo ES puede relacionarse con la concentracin de S y de E a travs de la suposicin de que la primera reaccin esta en equilibrio:

k1CSCE k3CES
Sustituyendo esta ecuacin en la anterior y teniendo en cuenta la suposicin de que la concentracin total de enzima se mantiene constante:

CE0 = CES + CE
Se obtiene:

CES

CE0 CS = k2 + CS k1

dCS k3CE0 CS rmaxCS dCP = = r = k2 dt dt K M + CS + CS k1

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

rmax = k3CE0
k2 KM = k1
9

Dr. J. M. Peralta

2. Expresiones cinticas a partir de diferentes mecanismos e hiptesis

Bio-reactores Enzimticos

Propuesta de Michaelis Menten (cont.)

KM : es conocida como la constante de Michaelis-Menten y es igual a la constante de disociacin K1 o la reciproca de la constante de equilibrio Keq:

CSCE k2 1 KM = = K1 = = k1 CES K eq
y tiene las mismas unidades que S. Es importante destacar que cuando KM es igual a S, la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad mxima. Por lo tanto, este parmetro caracteriza la interaccin de un enzima con un dado sustrato. rmax : es la velocidad mxima de reaccin. Este parmetro usualmente no se expresa como el producto de una constante por la concentracin CEo, debido a la dificultad de expresar la concentracin de un enzima en unidades molares (necesidad de conocer el peso molecular del enzima).

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Dr. J. M. Peralta

10

2. Expresiones cinticas a partir de diferentes mecanismos e hiptesis

Bio-reactores Enzimticos

Propuesta de Briggs Haldane

Teniendo en cuenta el mecanismo propuesto por Brown, la reaccin puede ser expresada como:

dCP = k3CES dt dCS = k1CS CE k2CES dt

Asumiendo que la variacin de CES es despreciable (dCES / dt = 0) en comparacin con las variaciones de CP y CS:

dCES = k1CS CE k2CES k3CES 0 dt

Sustituyendo esta ecuacin en la anterior, confirma que:

r=

dC dCP = S k3CES dt dt
CES CE0 CS = k 2 + k3 + CS k1

Nuevamente, asumiendo que CEo permanece constante:

CE0 = CES + CE
Se obtiene:

k3CE0 CS dCS rmaxCS dCP r = = = k 2 + k3 dt dt K M + CS + CS k1

Operaciones y procesos biotecnolgicos I Dr. J. M. Peralta 11

2. Expresiones cinticas a partir de diferentes mecanismos e hiptesis

Bio-reactores Enzimticos

Propuesta de Briggs Haldane (cont.)

donde:

rmax = k3CE0

k 2 + k3 KM = k1

Estas expresiones son similares a las obtenidas por Michaelis Menten excepto por KM. Esta expresin puede ser simplificada a la de Michaelis - Menten si:

k2 >> k3
Lo cual significa que la produccin de P es mucho mas lenta que la etapa de disociacin del complejo ES. Esto es esperable debido a que las interacciones enzima sustrato involucran interacciones dbiles y por lo tanto su disociacin ser rpida en comparacin a los enlaces covalentes involucrados en la produccin de P.

Solucin numrica
Las expresiones de las velocidades de reaccin para el mecanismo propuesto por Brown son:

dCES = k1CS CE k2CES k3CES dt dC S = k1CS CE k2CES dt

Operaciones y procesos biotecnolgicos I Dr. J. M. Peralta 12

dCP = k3CES dt

2. Expresiones cinticas a partir de diferentes mecanismos e hiptesis

Bio-reactores Enzimticos

Evaluacin de los parmetros cinticos

Los parmetros, rmax y KM, pueden ser evaluados mediante: 1. Se realiza una serie de experimentos batch con diferentes concentraciones de sustrato para una concentracin inicial constante de enzima. 2. Se estima la velocidad inicial de reaccin a partir de CS y CP versus el tiempo para las diferentes concentraciones de sustrato. 3. Se estiman los parmetro cinticos usando tcnicas graficas, el mtodo de mnimos cuadrados o ajustes no lineales. Para aplicar el mtodo planteado, se puede linealizar la ecuacin de Michaelis-Menten (o Briggs-Haldane) por diferentes mtodos: Grfico de Langmuir

CS K M CS = + r rmax rmax
Grfico de Lineweaver-Burk

CS r

1 KM rmax rmax
CS

KM 1 1 1 = + r rmax rmax CS
Grfico de Eadie-Hofstee

1 r

1 rmax

KM rmax

1 CS

rmax
r

r = rmax

r +K M CS

K M

r CS
Dr. J. M. Peralta 13

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

2. Expresiones cinticas a partir de diferentes mecanismos e hiptesis

Bio-reactores Enzimticos

Inhibicin en reacciones enzimticas

Un modulador es una sustancia que se combina con los enzimas para alterar su actividad cataltica. Un inhibidor es un modulador que disminuye la actividad cataltica en forma competitiva, no competitiva o parcialmente competitiva. Inhibicin competitiva El inhibidor tiene una estructura similar a la del sustrato, por lo tanto, ambos compiten por el sitio activo. La formacin del complejo EI reduce la cantidad de enzima disponible para reaccionar con el sustrato Inhibicin no competitiva El inhibidor puede interactuar con el enzima en varias formas. Estas pueden ser reversible o irreversiblemente en el sitio activo o en otra regin. En cualquier caso el complejo resultante es inactivo.

S+E + I

k1 k2 k3 k4

ES EI

k5

E+P S+E E+Q + I

k1 k2 k3 k4

I + ES EI + S

k7 k8 k9

ESI E+P E+Q

k5 k6

EIS

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Dr. J. M. Peralta

14

2. Expresiones cinticas a partir de diferentes mecanismos e hiptesis

Bio-reactores Enzimticos

Inhibicin competitiva
Si la reaccin mas lenta, la de produccin de producto, determina la velocidad de reaccin (de acuerdo con la suposicin de MichaelisMenten), la velocidad puede ser descripta como:

S+E + I

k1 k2 k3 k4

ES EI

k5

E+P E+Q

rP = k5CES CE0 = CE + CES + CEI CECI k 4 = = KI CEI k3

El balance de enzima:

A partir de las dos reacciones en equilibrio:

CECS k 2 = = KS CES k1

Combinando estas ltimas 4 ecuaciones se obtiene:

k5CE0 CS rP = CS K MI
De aqu:

donde

C K MI = K S 1 + I KI

K MI KS
1 rmax CS
Langmuir

K MI

CS r

1 KM

1 r

1 rmax 1 CS
15

KM

1 K MI Lineweaver-Burk

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Dr. J. M. Peralta

2. Expresiones cinticas a partir de diferentes mecanismos e hiptesis

Bio-reactores Enzimticos

Inhibicin no competitiva
Debido a que el sustrato y el inhibidor no compiten por el sitio activo para la formacin de los complejos ES o EI, se puede asumir que las const. de disociacin para las especies I y S en donde intervienen van a ser iguales:

S+E + I

k1 k2 k3 k4

I + ES EI + S

k7 k8 k9

ESI E+P E+Q

k5 k6

EIS

k6 k2 = KS = = K IS k1 k5

k8 k4 = KI = = KSI k3 k7

Usando la suposicin de Michaelis-Menten (la velocidad de formacin de productos es mas lenta que la de formacin de complejos):

rI ,maxCS rP = CS + K S

donde

rI ,max

rmax = 1 + CI K I

Por lo tanto, rmax disminuir por la presencia del inhibidor mientras que KM no ser afectada.

CS r

1 rI ,max
1 rmax CS
Langmuir

1 r

1 rI ,max
1 rmax 1 CS
Lineweaver-Burk Dr. J. M. Peralta 16

K M

K M

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

2. Expresiones cinticas a partir de diferentes mecanismos e hiptesis

Bio-reactores Enzimticos

Inhibicin parcialmente competitiva

Pueden existir muchas variaciones al mecanismo de inhibicin no competitiva. Un caso es la descomposicin del complejo EIS en P y EI. Este caso se conoce como inhibicin parcialmente competitiva.

S+E + I

k1 k2 k3 k4

I + ES EI + S

k7 k8 k9

ESI E+P E+Q

k5 k6

EIS
k10

EI + P

Otras influencias en la actividad enzimtica

Existen otros factores que pueden modificar la actividad enzimtica durante la reaccin. pH: Existe un pH ptimo para cada enzima porque: 1) En general, los enzimas son protenas que tienen residuos de AA, los cuales tienen grupos cidos, bsicos y neutrales de acuerdo al pH, 2) los sitios activos funciona para una dada carga de estos grupos. Temperatura: La velocidades de reaccin y de desnaturalizacin de los enzimas siguen una dependencia tipo Arrhenius con la temperatura. Tensiones de corte en el fluido Operaciones y procesos biotecnolgicos I
Actividad rel. -NH3+ -COOH -COO-

pHopt.

-NH2 pK2 pH

pK1 Actividad rel.

ve lo ci da d

k = A0e E RT

Dr. J. M. Peralta

at sn De

17

3. Enzimas inmovilizados

Bio-reactores Enzimticos

Enzimas inmovilizados
Debido a que la mayora de los enzimas son protenas globulares, estas son solubles en agua. Por lo tanto, es muy difcil o inviable su separacin de la corriente de proceso para su reutilizacin. Ventajas 9 Reduccin de costos, comparado con los sistemas con enzimas libres donde se requiere un proceso de purificacin. 9 Algunos mtodos de inmovilizacin pueden incrementar la actividad. Desventajas 9 Muchos enzimas inmovilizados presentan una reduccin en su actividad. 9 Pueden ser mas costosos que los enzimas libres. 9 Puede existir reduccin en la actividad debido a la transferencia de materia.

Mtodos de inmovilizacin
Entrampada En matriz E E E E
E E E E

Ligada Adsorbida
(fsica o inica)

En membrana Microencapsulacin Macroscpicas E E

E E E E E E E E E E E E E E E E E

Covalente Soporte E E E E E Enzima E E

E E E

Mtodos fsicos Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Mtodos qumicos Dr. J. M. Peralta 18

3. Enzimas inmovilizados

Bio-reactores Enzimticos

Mtodos de inmovilizacin (cont.)

Mtodos fsicos Entrampamiento en matriz: La solucin que contiene el enzima se mezcla con un fluido polimrico que solidifica en varias formas (usualmente en pequeas partculas). El material polimrico es semipermeable provocando que los enzimas con alto peso molecular no difundan hacia el exterior pero permitiendo que los sustratos pequeos difundan. Las matrices usadas son: Alginato de calcio, agar, polyacrilamida, colageno. Entrampamiento en membrana: Las soluciones enzimticas pueden ser entrampadas entre finas membranas semipermeables: Nylon, polisulfonas, celulosa, poliacrilato. Microencapsulacin: Los enzimas se inmovilizan dentro de microcpsulas son membranas semipermeables. Mtodos qumicos Enlace covalente a soportes: residuos de AA , que no son funcionales (participan en el sitio activo), se unen al soporte. Los grupos funcionales son: -COOH -SH -OH -NH2 -fenil -imidazol Soportes comunes son: 1. Soportes sintticos (polipptidos, polmeros con grupos: acrilamida, anhidrido maleico, metacrilatos y estireno). 2. Soportes naturales (agarosa, celulosa, dextrano, vidrio y almidn). Operaciones y procesos biotecnolgicos I Dr. J. M. Peralta 19

3. Enzimas inmovilizados 4. Efecto de la transferencia de materia

Bio-reactores Enzimticos

Mtodos de inmovilizacin (cont.)

Mtodos qumicos (cont.) Enlace covalente entre enzimas: La inmovilizacin se puede producir uniendo enzimas por medio de crosslinking produciendo derivados insolubles. Mtodos fsicos o qumicos Adsorcin: Es el mtodo mas simple de inmovilizacin. Usualmente se produce por fuerzas fsicas dbiles: van der Waals, dispersin, etc. La inmovilizacin es dbil, posee una bajo poder de inmovilizacin y es dependiente del pH, fuerza inica y la temperatura.

Efecto de la transferencia de materia

La inmovilizacin de enzimas puede introducir un nuevo problema, el cual esta ausente en enzimas libres. Este problema se debe al gran tamao del enzima inmovilizado o debido a la inclusin del enzima en la matriz polimrica. El trayecto hipottico del sustrato desde el fluido hasta el enzima: 1. Transferencia desde el seno del liquido hasta la capa relativamente no mezclada que rodea el enzima inmovilizado. 2. Difusin a travs de la capa relativamente no mezclada. 3. Difusin desde la superficie de la partcula hacia el sitio activo del enzima en el interior del soporte. Operaciones y procesos biotecnolgicos I
1 Csb Cs 2 3
E

Dr. J. M. Peralta

20

4. Efecto de la transferencia de materia

Bio-reactores Enzimticos

Resistencia externa
Si un enzima es inmovilizado en la superficie de la partcula de soporte, la trayectoria del sustrato solo se compone de las dos primeras etapas. La velocidad de transferencia de materia ser proporcional a la diferencia de concentracin (fuerza impulsora): CSb y CS: concentraciones de sustrato en el seno del liquido y la superficie de la partcula, respectivamente. ks: coeficiente de transferencia de materia. A: superficie de una partcula de soporte. Durante la reaccin, la velocidad de transferencia de sustrato es igual a la velocidad de consumo del mismo. Por lo tanto, si la velocidad de reaccin puede ser descripta por Michaelis-Menten:

Ns = ks A (CSb CS )

rp = ks a (CSb

rmaxCS CS ) = K M + CS

Expresando esta ecuacin en forma adimensional:

1 xS xS = 1 + xS NDa

xS =

CS CSb

CSb KM

NDa =

rmax kS aCSb

Nmero de Damkhler Operaciones y procesos biotecnolgicos I Dr. J. M. Peralta 21

4. Efecto de la transferencia de materia

Bio-reactores Enzimticos

Resistencia externa (cont.)

Nmero de Damkhler: es la relacin entre la mxima velocidad de reaccin y la mxima velocidad de transferencia de materia:

NDa =

Mxima vel. de reaccin Mxima vel. de transferencia de materia

rmax = kS a (CSb 0 )

NDa << 1: la transferencia de materia es mucho mayor que la velocidad de reaccin. Por lo tanto, la velocidad global de reaccin es controlada por la reaccin enzimtica:

rmaxCS rp K M + CS
NDa >> 1: la velocidad de reaccin es mucho mayor que la transferencia de materia. Por lo tanto, la velocidad global de reaccin es controlada por la transferencia de materia, la cual se puede describir como una reaccin de primer orden:

rp ks aCSb
Para medir la extensin en la cual la velocidad de reaccin es alterada debido a la transferencia de materia, se define el factor de efectividad de un enzima inmovilizado como:

Velocidad de reaccin con transf. de materia Velocidad de reaccin sin transf. de materia

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Dr. J. M. Peralta

22

4. Efecto de la transferencia de materia

Bio-reactores Enzimticos

Resistencia externa (cont.)

Teniendo en cuenta el modelo planteado:

rmaxCS xS K + CS 1 + xS = M = = f ( xS , ) rmaxCSb 1+ K M + CSb

Si: Si: Si: xS = 0 xS = 1 CS = 0 CS = CSb

= 0 (Vel. de reaccin igual a difusin) = 1 (no hay limitacin)

Resistencia interna
Si el enzima es inmovilizado por copolimerizacion o encapsulacin, la resistencia intraparticula a la transferencia de materia puede afectar la velocidad de reaccin enzimtica. Para poder encarar el problema matemtico es necesario plantear una serie de suposiciones: 1. La reaccin ocurre en todas las posiciones dentro del enzima inmovilizado y la cintica de la reaccin es de la misma forma que la observada para el enzima libre. 2. La transferencia de materia a travs del enzima inmovilizado ocurre por difusin molecular. 3. No hay limitacin por transferencia de materia en la regin externa del enzima inmovilizado. 4. El enzima inmovilizado es esfrico. Operaciones y procesos biotecnolgicos I Dr. J. M. Peralta 23

4. Efecto de la transferencia de materia

Bio-reactores Enzimticos

Resistencia interna (cont.)

El conjunto de suposiciones generan un modelo denominado modelo distribuido. Aplicando un balance de materia para el sustrato para una cascara esfrica de espesor dr :

Velocidad de Velocidad de acumulacin = ingreso 2 1

2 1 = 4 r dr

Velocidad de egreso 3

Velocidad de + generacin 4

dCS dt
dr

dC d dCS 2 2 = 4 ( r + dr ) DS S + dr dr dr
2 3 = 4 r DS

CS dr CSb

r R

dCS dr

2 4 = 4 r dr rS

( r + dr )

dC d dC DS S + S dr dr dr

dCS 2 dCS 2 2 dr r D r dr r r dr + = ( ) S S dr dt

Para la condicin de estado estacionario, el cambio en la concentracin de sustrato dCS / dt = 0. Simplificando el balance:

d 2CS 2 dCS DS + 2 r dr dr

+ rS = 0
Dr. J. M. Peralta 24

Esta ecuacin puede ser resuelta utilizando una expresin para rS. Operaciones y procesos biotecnolgicos I

4. Efecto de la transferencia de materia

Bio-reactores Enzimticos

Resistencia interna (cont.)

Algunos valores del coeficiente efectivo de difusin (DS) se presentan en la siguiente tabla.

Soluto
Glucosa Etanol Sacarosa Sacarosa Sacarosa Sacarosa Lactosa L-triptofano

Gel
Alginato (Ca) Alginato (Ca) Gelatina Gelatina Gelatina Gelatina Gelatina Alginato (Ca)

Conc. (%)
2 2 0 3.8 5.7 7.6 25 2

Temp. (C)
25 25 5 5 5 5 5 30

DS (m2 s-1)
6.10 10-10 1.00 10-9 2.85 10-10 2.09 10-10 1.86 10-10 1.35 10-10 0.37 10-10 6.67 10-10

En la ecuacin de balance, slo es necesario reemplazar el trmino rS por una expresin cintica adecuada. En el caso de una reaccin enzimtica, son tiles las siguientes expresiones: Cintica de orden cero: Cintica de primer orden: Cintica de Michaelis-Menten:

rS = k0 rS = k1CS rS = rmaxCS K M + CS

A continuacin se tratarn los casos por separado para obtener las expresiones de los parmetros mas importantes. Operaciones y procesos biotecnolgicos I Dr. J. M. Peralta 25

4. Efecto de la transferencia de materia

Bio-reactores Enzimticos

Resistencia interna (cont.)

Cintica de orden cero Asumiendo que el consumo de sustrato sigue una cintica de orden cero: rS = k0 si CS > 0

rS = 0

si

CS = 0

Esta es una buena aproximacin cuando KM << CS en la cintica de Michaelis-Menten. Es ese caso k0 = rmax. Sustituyendo esta cintica en el balance:

d 2CS 2 dCS k0 + = 0 para CS > 0 r dr DS dr 2

reordenando:

d 2 ( rCS ) k0 = r DS dr 2

CS =

C 1 k0 2 r + C1 + 2 6 DS r

Usando las condiciones de contorno:

dCS 0 cuando dr
Se obtiene:

r RC

CS = CSb cuando

r =R

CS k0 2 1 2 3 1 r R R 2 = ( ) c + 1 CSb 6DSCSb R r
Finalmente, el factor de efectividad para esta cintica es:

( 4 3 ) ( R 3 Rc3 ) k0 = ( 4 3 ) R 3 k0

R = 1 c R

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Dr. J. M. Peralta

26

4. Efecto de la transferencia de materia

Bio-reactores Enzimticos

Resistencia interna (cont.)

Cintica de primer orden Sustituyendo la expresin de la cintica de primer orden en la ecuacin de balance de materia y adimensionalizando este ltimo:

2 dr

 S) ( rx = 9 2 x

xS = CS CSb
S

=r R r

= ( R 3 ) k1 DS

(Mdulo de Thiele)

El mdulo de Thiele es un parmetro que mide la relacin entre las velocidades de reaccin y difusin. Resolviendo la expresin del balance:

xS =

1  ) + C2 senh ( 3 r  ) C1 cosh ( 3 r  r
1 0.8

Usando las condiciones de contorno:

0 xs es acotada cuando r

 =1 xs =1 cuando r
Por lo tanto:

xs

0.6 0.4 0.2 0 0

= 0 .5 =2
0.2 0.4

) senh ( 3 r xS =  senh ( 3 ) r
El factor de efectividad ser:

=5
0.6 0.8 1

 r

(A =
=

) Vp ) DS (CSb R )( dxS dr  =1 r k1CSb

0.1

3 coth ( 3 ) 1 3 2

0.01 0.1 1

10

100

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Dr. J. M. Peralta

27

4. Efecto de la transferencia de materia

Bio-reactores Enzimticos

Resistencia interna (cont.)

Cintica de Michaelis-Menten Sustituyendo la expresin de la cintica de Michaelis-Menten en la ecuacin de balance de materia y adimensionalizando este ltimo:

 S) d 2 ( rx xS 2 = 9 2 1 + xS dr

xS = CS CSb =r R r

= CSb K M

= ( R 3 ) rmax ( DS K M ) (Mdulo de Thiele)

Esta ecuacin no posee solucin analtica conocida. Por lo tanto, se resuelve por mtodos numricos. Las condiciones de contorno son:

dxs R = c = 0 cuando r  dr R
= xs = 1 cuando r
1 0.8

Rc R
1

= 0 .5
=5

xs

0.6 0.4 0.2 0 0 0.2

Primer orden
0.1

=2
0.4

=5
0.01
0.6 0.8 1

Michaelis-Menten ( = 5)
0.1 1

 r

10

100

Operaciones y procesos biotecnolgicos I

Dr. J. M. Peralta

28