Tese Wilerson Sturm

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAN
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM PROCESSOS BIOTECNOLGICOS

DESENVOLVIMENTO DE FERRAMENTAS DE SOFTWARE PARA AQUISIO DE
DADOS E AVALIAO DOS RESULTADOS EM PROCESSOS DE FERMENTAO EM
ESTADO SLIDO E SUBMERSA E CULTIVO CELULAR

WILERSON STURM

Tese apresentada como requisito parcial para a
obteno do grau de Doutor em Processos
Biotecnolgicos. Programa de Ps-Graduao em
Processos Biotecnolgicos, Universidade Federal do
Paran.

Orientador: Prof. Dr. Carlos Ricardo Soccol

Co-orientador: Prof. Dr. Dario Eduardo Amaral Dergint

CURITIBA
2009

WILERSON STURM

DESENVOLVIMENTO DE FERRAMENTAS DE SOFTWARE PARA AQUISIO DE
DADOS E AVALIAO DOS RESULTADOS EM PROCESSOS DE FERMENTAO EM
ESTADO SLIDO E SUBMERSA E CULTIVO CELULAR

Tese apresentada como requisito parcial para a
obteno do grau de Doutor em Processos
Biotecnolgicos. Programa de Ps-Graduao em
Processos Biotecnolgicos, Universidade Federal do
Paran.
Orientador: Prof. Dr. Carlos Ricardo Soccol

Co-orientador: Prof. Dr. Dario Eduardo Amaral Dergint

CURITIBA
2009

ii

minha filha, Bianca, fonte inesgotvel de
motivao. Aos meus pais, Walter e Walkiria,
pelo incentivo aos meus estudos. Aos meus
irmos, Wederle e Walirene, e a todos os
meus familiares e amigos pela demonstrao
sempre presente de certeza no meu sucesso.

iii
AGRADECIMENTOS

Ao Professor Dr. Carlos Ricardo Soccol pela orientao, confiana e apoio
durante a realizao deste trabalho.
Ao Professor Dr. Dario Eduardo Amaral Dergint pela co-orientao e
colaborao neste e outros projetos de vida.
Ao Professor Dr. J ose Angel Rodriguez-Leon cujas informaes foram
indispensveis desde o incio deste trabalho e pela participao na banca de
defesa.
Aos Professores Doutores J ulio Cesar de Carvalho e Luciana Porto de Souza
Vandenberghe pelas sugestes e crticas que promoveram melhorias nesta
pesquisa.
Ao Professor Doutor Willibaldo Schmidell Netto, por to gentilmente aceitar
participar da banca de defesa desta tese.
Aos, ento, estagirios Alysson Hikaru Shirai e Deiva Canali Navarro Vieira
Magalhes pelo empenho e interesse.
Michele Rigon Spier, Cristine Rodrigues, Andrea Policastro Canuto, Luiz
Gustavo Lacerda, Eduardo B. Sydney e Ivo A. Borghetti pela amizade e auxlio
prestado durante a realizao dos trabalhos.
Aos amigos, Syonara Fernandes, Ellen de Souza Marquez, Alexandre Meira
de Vasconcelos, Walmor Cardoso Godoi, J os Carlos Bucholdz, Marilda Munaro,
Lgia de Oliveira Franzosi e Scheyla Zeck, pela companhia e incentivo em todos os
momentos.
Ao grupo de amigos, cujo lder Luciano Borges Nogueira e tambm, em
especial, Luis Mauricio Trevisan e Laertes Adamovicz, mantiveram sempre o
otimismo perante meus desafios, fao em nome destes o meu agradecimento a
todos os membros.
CAPES pelo suporte financeiro concedido durante o perodo de doutorado.
UFPR e ao Programa de Ps-Graduao em Processos Biotecnolgicos
pela estrutura necessria realizao desta pesquisa.

iv

A luta pela verdade deve ter
precedncia sobre todas as outras.

Albert Einstein.

v
SUMRIO

LISTA DE FIGURAS..................................................................................................ix
LISTA DE TABELAS ..................................................................................................x
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS ....................................................................xi
LISTA DE SMBOLOS..............................................................................................xii
RESUMO..................................................................................................................xiii
ABSTRACT..............................................................................................................xiv
1 INTRODUO....................................................................................................15
1.1 Apresentao....................................................................................................15
1.2 DEFINIO DO OBJ ETIVO GERAL ................................................................18
1.2.1 Objetivo Geral .............................................................................................18
1.3 Definio dos Objetivos Especficos.................................................................18
1.4 ORGANIZAO DOS CAPTULOS .................................................................19
2 MATERIAL E MTODOS...................................................................................22
2.1 sensores...........................................................................................................22
2.1.1 Sensores de Oxignio.................................................................................22
2.1.2 Sensores de Gs Carbnico.......................................................................23
2.1.3 Sensor de Vazo.........................................................................................23
2.1.4 Sensor de umidade relativa do ar...............................................................24
2.1.5 Sensor de temperatura................................................................................24
2.1.6 Suporte para sensores................................................................................24
2.2 controladores....................................................................................................25
2.3 Biorreatores......................................................................................................27
2.3.1 Biorreator Tipo Coluna................................................................................28
2.3.2 Biorreator Tipo Tambor Horizontal..............................................................29
2.3.3 Biorreator Tipo Tanque Agitado..................................................................29
2.4 discusso sobre os recursos utilizados............................................................29
2.5 Concluso deste captulo.................................................................................30
3 DESENVOLVIMENTO de FERRAMENTAS de SOFTWARE APLICADAS aos
PROCESSOS .....................................................................................................32

vi
3.1 MATERIAL E MTODOS..................................................................................32
3.1.1 Recursos Utilizados ....................................................................................32
3.1.2 Estrutura do Programa FERSOL2...............................................................33
3.1.2.1 Dados de entrada....................................................................................33
3.1.2.2 Sequncia de Processamento.................................................................34
3.1.2.3 Dados de sada.......................................................................................35
3.1.3 Mtodos Matemticos .................................................................................35
3.1.4 Mtodos Numricos Utilizados em Cada Etapa..........................................36
3.1.4.1 Clculo das integrais relacionadas aos processos.................................37
3.1.4.2 Mtodo iterativo para ajuste da curva de crescimento da biomassa.......38
3.1.4.3 Filtragem dos dados de entrada..............................................................40
3.1.4.4 Filtragem por Transformada de Fourier ..................................................40
3.1.4.5 Filtragem por Mdia Mvel......................................................................41
3.1.4.6 Filtragem por Savitzky-Golay..................................................................41
3.1.5 Clculo dos Parmetros do Processo.........................................................42
3.2 IMPLEMENTAO do software FERSOL2......................................................43
3.2.1 Desenho da Interface Principal...................................................................43
3.2.2 Biblioteca Grfica........................................................................................45
3.3 Implementao do sistema de aquisio de dados..........................................46
3.3.1 Determinao das variveis de entrada......................................................46
3.3.2 Gravao de valores...................................................................................47
3.3.3 Interface de demonstrao dos valores atuais ...........................................48
4 APLICAO DA FERRAMENTA EM PROCESSO COM BACTRIA...............50
4.1 Processo de produo de goma xantana.........................................................50
4.2 Microrganismo utilizado neste processo ..........................................................51
4.3 Fermentao em colunas de Raimbault...........................................................51
4.4 Anlise de Biomassa por Mtodo Experimental ...............................................52
4.5 Resultados obtidos com as ferramentas de Software ......................................53
4.6 Discusso dos resultados deste processo.......................................................56
5 APLICAO EM PROCESSO COM FUNGO....................................................59
5.1 Processo de produo de Fitase......................................................................59
5.3 Fermentao em Biorreator tipo coluna ...........................................................60

vii
5.4 Anlise de Biomassa pelo Mtodo de extrao de ergosterol..........................60
5.5 Resultados estimados pelas ferramentas de Software.....................................61
5.5.1 Valores Obtidos pelo Sistema de Aquisio...............................................61
5.6 Discusso dos resultados deste processo.......................................................65
6 APLICAO EM PROCESSO COM MUDANA DE ESCALA..........................68
6.1 Processo de mudana de escala......................................................................68
6.3 Fermentao em Biorreator tipo tambor horizontal ..........................................69
6.4 Anlise de Biomassa pelo Mtodo de extrao de ergosterol..........................69
6.5 Resultados Apresentados pelas ferramentas de Software...............................69
6.5.1 Valores Determinados pelo Sistema de Aquisio.....................................69
6.5.2 Resultados de Biomassa Estimada pelo Programa....................................73
6.5.3 Outros Resultados Apresentados pelo Programa.......................................74
6.6 Discusso dos resultados deste captulo.........................................................76
7 APLICAES PARCIAIS DAS FERRAMENTAS ..............................................79
7.1 Processo de Crescimento de clulas vegetais.................................................79
7.1.1 Organismo Utilizado neste Processo..........................................................79
7.1.2 Biorreator Desenvolvido para Clulas Vegetais BIB...................................80
7.1.3 Resultados Obtidos com o Sistema de Aquisio.......................................81
7.1.4 Concluso 82
7.2 processo de cultivo de microalga em manipueira.............................................83
7.2.1 Microalga Utilizada neste Processo............................................................83
7.2.2 Biorreator Utilizado no Cultivo da Chlorella minutissima ............................84
7.2.3 Resultados Obtidos pelo Sistema Instalado...............................................84
7.2.4 Concluso 86
7.3 Processo de cultivo de microalga em MBM......................................................87
7.3.1 Microalga Utilizada neste Processo............................................................87
7.3.2 Biorreator utilizado para cultivo de Chlorella vulgaris.................................88
7.3.3 Resultados Obtidos com o Sistema de Aquisio.......................................88
7.3.4 Concluso desta Seo..............................................................................90

viii
8 CONSIDERAES FINAIS................................................................................93
8.1 QUANTO AOS OBJ ETIVOS.............................................................................93
8.2 SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS................................................96
8.3 CONCLUSO...................................................................................................97
REFERNCIAS.........................................................................................................99

ix
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 - SUPORTE PARA OS SENSORES........................................................25
FIGURA 2 - PAINEL FRONTAL DOS CONTROLADORES......................................26
FIGURA 3 - SISTEMA COMPLETO ADAPTADO AO BIORREATOR TIPO COLUNA
...........................................................................................................................27
FIGURA 4 - BIORREATOR TIPO COLUNA DE RAIMBAULT ..................................28
FIGURA 5 - INDICAO DE REA DE INTEGRAO............................................37
FIGURA 6 - DETERMINAO DOS LIMITES DOS TRAPZIOS ............................38
FIGURA 7 INTERFACE DE ENTRADA DE DADOS..............................................44
FIGURA 8 INTERFACE PARCIAL DE APRESENTAO DE PARMETROS .....45
FIGURA 9 - EXEMPLO DE GRFICO GERADO PELO PROGRAMA......................46
FIGURA 10 INTERFACE DE AQUISIO DE DADOS .........................................47
FIGURA 11 CONSUMO DE OXIGNIO DURANTE O PROCESSO DE
PRODUO DE GOMA XANTANA...................................................................53
FIGURA 12 PRODUO DE GS CARBNICO NO PROCESSO DE
PRODUO DE GOMA XANTANA...................................................................54
FIGURA 13 ESTIMATIVA DE CRESCIMENTO DE BIOMASSA PELO SOFTWARE
...........................................................................................................................55
FIGURA 14 VAZO MONITORADA DURANTE O PROCESSO ...........................61
FIGURA 15 OXIGNIO CONSUMIDO...................................................................62
FIGURA 16 GS CARBNICO PRODUZIDO.......................................................62
FIGURA 17 COEFICIENTE RESPIROMTRICO..................................................63
FIGURA 18 BIOMASSA ESTIMADA PELO PROGRAMA......................................63
FIGURA 19 COMPARAO ENTRE BIOMASSA ESTIMADA E MEDIDA............64
FIGURA 20 BIOMASSA ESTIMADA E MEDIDA EM DOIS EIXOS........................64
FIGURA 21 ATIVIDADE DE FITASE E CRESCIMENTO DA BIOMASSA .............66
FIGURA 22 - VAZO DE AR PARA O REATOR DE 1 KG.......................................70
FIGURA 23 - VAZO DE AR PARA O REATOR DE 2 KG.......................................70
FIGURA 24 - VAZO DE AR PARA O REATOR DE 10 KG.....................................71
FIGURA 25 COMPORTAMENTO RESPIROMTRICO REATOR DE 1 KG..........71
FIGURA 26 COMPORTAMENTO RESPIROMTRICO REATOR DE 2 KG..........72
FIGURA 27 COMPORTAMENTO RESPIROMTRICO REATOR DE 10 KG........72
FIGURA 28 BIOMASSAS ESTIMADA E EXPERIMENTAL REATOR DE 1KG......73
FIGURA 29 BIOMASSAS ESTIMADA E EXPERIMENTAL REATOR DE 2KG......73
FIGURA 30 BIOMASSAS ESTIMADA E EXPERIMENTAL REATOR DE 10KG....74
FIGURA 31 - RELAO ENTRE ATIVIDADE DA ENZIMA E BIOMASSA ...............76
FIGURA 32 - ESQUEMA DO REATOR.....................................................................80
FIGURA 33 - CICLO DE RESPIRAO E FOTOSSNTESE NO CONSUMO DE O2
...........................................................................................................................82
FIGURA 34 - CONSUMO DE OXIGNIO EM G/H....................................................84
FIGURA 35 - PRODUO DE GS CARBNICO EM G/H.....................................85
FIGURA 36 - COMPARAO ENTRE PRODUO E CONSUMO DE GASES ......85
FIGURA 37 - VAZO DE CO2 NA ENTRADA DO REATOR EM ML/MIN................89
FIGURA 38 - CONSUMO DE OXIGNIO EM G/H....................................................89
FIGURA 39 PRODUO DE CO2 EM G/H...........................................................90

x
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 - RESULTADO DA CONTAGEM DE UFC/ML.........................................52
TABELA 2 COMPARAO ENTRE OS MTODOS DE ESTIMATIVA..................54
TABELA 3 PARMETROS DO PROCESSO CALCULADOS PELO PROGRAMA55
TABELA 4 COMPARAO ENTRE OS MTODOS..............................................63
TABELA 5 RELAO ENTRE ATIVIDADE DA ENZIMA E BIOMASSA.................65
TABELA 6 PARMETROS CALCULADOS PARA REATOR DE 1 KG..................74
TABELA 7 PARMETROS CALCULADOS PARA REATOR DE 2 KG..................75
TABELA 8 PARMETROS CALCULADOS PARA REATOR DE 10 KG................75
TABELA 9 COMPARAO ENTRE RESULTADOS DOS SOFTWARES .............95

xi
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
CPU - Unidade Central de Processamento
DOS - Disk Operating System Sistema de Operao por Disco
FES - Fermentao em Estado Slido
PID - Proporcional Integral e Derivativo

xii
LISTA DE SMBOLOS
Smbolo - Significado correspondente simbologia
- Velocidade especfica de crescimento (h
-1
)
Yx/o - Coeficiente de rendimento de biomassa em relao ao oxignio (g/g)
m - Coeficiente de manuteno (g O
2
/ g biomassa h)
t - Intervalo de Tempo (h)
X - Valor de Biomassa (g)

xiii
RESUMO
Na produo de determinadas substncias de interesse comercial, atravs de
processos biotecnolgicos, um dos meios mais utilizados a fermentao. Este
processo se divide em fermentao submersa, como na produo de vinhos,
cachaas e lcool, por exemplo, e em fermentao em estado slido. Na
fermentao em estado slido algumas peculiaridades dificultam a medio de
certas variveis, pois se trata de ambiente heterogneo. Para o acompanhamento e
controle deste processo necessria a medio da biomassa, ou seja, qual a
massa dos microrganismos produzida, bem como sua evoluo durante o processo.
Uma forma de medio a estimativa da biomassa atravs da respirometria:
medindo-se quanto de oxignio est sendo consumido e quanto gs carbnico est
sendo produzido possvel estimar a massa de microrganismos. Hoje este
procedimento realizado atravs de cromatgrafo gasoso, acoplado a um sistema
de aquisio de dados, equipamento que torna o processo bastante caro. Este
trabalho apresenta uma alternativa mais acessvel, bem como a incorporao de
recursos atuais da informtica, o uso de sensores para as diversas variveis como
temperatura, vazo, percentuais de oxignio e gs carbnico, ligados a um sistema
de aquisio de dados desenvolvido para a monitorao e posterior controle deste
processo. Com os dados medidos torna-se possvel a utilizao de outra ferramenta
de software aperfeioada para a estimativa de crescimento da biomassa, bem como
o levantamento de parmetros peculiares ao processo como velocidade especfica
de crescimento, coeficientes de manuteno e produo, os quais caracterizam o
processo e permitem uma anlise mais aprofundada do seu desempenho. Para a
validao das ferramentas foram realizados experimentos envolvendo
microrganismos diferentes, com o intuito de abranger melhor os possveis
processos. O acompanhamento de processos com fungos, bactrias, clulas
vegetais e microalgas permitiu avaliar a validade do sistema frente aos diferentes
comportamentos de diversos microrganismos utilizados em fermentao, tanto
submersa quanto em estado slido e em cultivo celular.

Palavras-chave: Fermentao em Estado Slido; Sistema de Aquisio de Dados;
Ferramentas de Software.

xiv
ABSTRACT
In the production of certain substances of commercial interest, by biotechnological
processes, one of the most used is the fermentation. This process is divided in
submerged fermentation, as in the production of wine, cachaa and alcohol, for
instance, and in solid-state fermentation. In solid-state fermentation some
peculiarities raise difficulties to measure certain variables, because it is a
heterogeneous environment. To monitor and control this process it is necessary to
measure the biomass, i.e. what is the mass of microorganism, as well as its evolution
during the process. One way to measure is the estimated biomass by respirometry:
measuring how much oxygen is being consumed and the carbon dioxide is being
produced it is possible to estimate the mass of microorganisms. Today this
procedure is performed through a gas chromatograph coupled to a data acquisition
system which makes the process very expensive. This work presents a low cost
alternative, and the incorporation of current resources of informatics, the use of
sensors for different variables such as temperature, flow, percentages of oxygen,
and carbon dioxide, linked to a data acquisition system developed for monitoring,
and subsequent, control this process. With the measured data it is possible to use
another software tool improved for the estimation of biomass growth and the
determination of some parameters peculiar to the process as the specific growth
rate, maintenance and production coefficients, which characterize the process and
allow a more thorough analysis of its performance. For the validation of the tools
were carried out experiments involving different microorganisms, in order to better
embrace the possible processes. Monitoring processes with fungi, bacteria, algae
and plant cells, it allows evaluating the validity of the system, facing the different
behaviors of several microorganisms used in fermentation, both submerged and
solid state and in cell cultures.

Key words: Solid-state fermentation; Acquisition Data System; Software tools.

15
1 INTRODUO
Neste primeiro captulo apresenta-se, de forma sucinta, o tema deste
trabalho. Depois so apresentados os objetivos, tanto geral quanto especficos e,
finalmente, apresentada a estrutura geral do trabalho com a organizao dos
captulos.
1.1 APRESENTAO
A maioria dos autores concorda que a histria dos processos de fermentao
no estado slido (FES) teve sua origem h milnios. Existem relatos, na sia, sobre
a produo de queijos empregando cepas do fungo Penicillium rouquefortii mais de
cem anos antes de Cristo. Os egpcios, cerca de 2000 anos a.C., j empregavam a
FES para a elaborao do po. O processo para a produo de molho de soja j era
utilizado na China 1000 anos antes da era crist e a sua composio essencial
mantida sem grandes alteraes at hoje. J no incio do sculo XX foi
documentada a produo, at ento indita, de enzimas por este mtodo para
aplicao na indstria cervejeira. Na dcada de 40, do sculo passado, houve
grande estudo e desenvolvimento destes processos principalmente com o advento
da produo de penicilina, j com a criao de biorreatores para fermentao
submersa ou lquida. Quanto aos processos de FES alguns poucos trabalhos foram
descritos e, somente a partir dos anos 70, houve um crescimento vigoroso no
estudo destes, com sua caracterizao dentro de normas cientficas e no mais de
forma simplesmente descritiva, principalmente devido a vantagens observadas na
FES comparada fermentao submersa.
No Brasil, desde 1986, a Diviso de Engenharia de Bioprocessos e
Biotecnologia - DEBB, atravs dos Laboratrios de Engenharia de Bioprocessos e
Biotecnologia I e II da Universidade Federal de Paran (UFPR), vem desenvolvendo
diversos projetos visando a utilizao de produtos e subprodutos agrcolas e
agroindustriais empregando a tcnica da FES para a produo de diferentes
biomolculas de interesse comercial. Alguns resultados deste trabalho so:
Enriquecimento protico e transformao de subprodutos da agroindstria,
produo de enzimas, produo de cidos orgnicos, bioaromas, biopesticidas,

16
hormnios vegetais, goma xantana, polissacardeos de interesse comercial e vrios
outros.
De maneira geral pode-se definir os processos de FES como o crescimento
de microrganismos sobre materiais midos na ausncia, ou quase ausncia, de
gua em estado livre. Neste sentido existem diversas peculiaridades na FES,
consideradas ora como vantagem ora como desvantagem quando comparada aos
processos de fermentao lquida ou submersa, tais como: sistema heterogneo
comparado com a homogeneidade que se obtm nos processos lquidos agitados;
os microrganismos aderem superfcie fermentativa (matriz slida) sendo difcil sua
separao da mesma; os metablitos produzidos mediante estes processos ficam
mais concentrados; podem ser includos nas denominadas tecnologias limpas,
devido a sua baixa interferncia no meio ambiente em comparao aos processos
submersos.
Independentemente das vantagens e desvantagens que se relatam para o
processo de FES, existem algumas dificuldades de caracterizao e controle do
processo. Ainda nos dias de hoje os trabalhos publicados em relao aos processos
de FES apresentam respostas, embora vlidas, baseadas principalmente em
resultados empricos ou globais, devido s dificuldades de medio e modelagem
desses processos heterogneos. Neste sentido os processos de fermentao
submersa oferecem uma possibilidade de caracterizao muito mais desenvolvida,
at o momento, que os processos de fermentao slida. Conceitos completamente
aceitos na fermentao submersa como cintica de crescimento, rendimentos,
transferncia e demanda de oxignio, coeficiente de manuteno, transferncia de
calor etc., relacionados no somente com a fisiologia microbiana, mas com o
desenvolvimento de qualquer processo tecnolgico, tm sido menos estudados nos
sistemas de fermentao slida. Assim, a determinao das variveis
biotecnolgicas dos processos insuficiente quanto caracterizao global do
sistema. Neste sentido a maioria dos trabalhos limita-se a descrever a seleo de
meios e condies de cultivo, teor de umidade, temperatura e pH, devido s
dificuldades de homogeneizao e, portanto, de medio desses parmetros nos
sistemas slidos.

17
A respeito dos diferentes mtodos empregados para determinar a velocidade
especfica de crescimento (), que constitui um parmetro que pode ser
considerado como chave de qualquer processo fermentativo ou de crescimento
celular, os mesmos incluem desde medies diretas por contagem celular, com
prvia agitao da amostra no caso de bactrias e leveduras (Christen et al, 1994),
estimativas indiretas da biomassa atravs do teor de protena ou de outro
constituinte celular do microrganismo empregado (Raimbault, 1981; Okasaki et al.,
1980; Matchman et al., 1985), at medies do O
2
consumido e do CO
2
produzido
(Carrizalez et al., 1981; Koba et al., 1986).
Tudo parece indicar que o mtodo de estimativa da velocidade especfica de
crescimento (), a partir da velocidade de consumo de oxignio ou produo de
CO
2
, o mais indicado devido a duas questes fundamentais (Pandey et al., 2001):
- Nem o estado fisiolgico do microrganismo, nem o estado fsico-qumico do
sistema se alteram pelo manuseio das amostras;
- As medies do consumo de O
2
e produo de CO
2
representam o
comportamento global do sistema, evitando possveis imprecises de amostragem
de um sistema heterogneo como da FES.
Este ltimo mtodo, indicado acima, tende a se tornar o mais usual e tem
permitido o acmulo e processamento dos dados nos sistemas de FES (Saucedo-
Castaeda et al., 1990; Auria et al., 1990).
Quanto ao processamento dos dados da FES e a obteno dos respectivos
parmetros biotecnolgicos, foi criado um mtodo que permite, atravs das
medies de O
2
e CO
2
nestes processos, determinar parmetros importantes como
a velocidade especfica de crescimento () e estimar os coeficientes de rendimento
em relao ao oxignio (Yx/o) e de manuteno (m) da cepa empregada (Sato et
al.,1983; Rodrguez Len et al., 1988). Devido a dificuldades de clculo matemtico,
o coeficiente de manuteno no podia ser estimado at aquele momento. O
problema foi resolvido mediante o uso de um programa de computador (FERSOL)
desenvolvido por (Rodrguez Len et al., 1988). Tambm, deve-se esclarecer que
todos estes clculos e, conseqentemente, o programa de computador
desenvolvido servem igualmente para as estimativas e processamento de dados
dos processos de fermentao submersa (Rodrguez Len et al., 2003). De posse

18
destes parmetros torna-se possvel uma comparao entre os comportamentos de
diversos processos.
Este trabalho visa apresentar alternativas de soluo para as dificuldades de
medio, monitoramento e posterior anlise dos principais parmetros que
caracterizam cada processo de FES, permitindo uma comparao entre eles.
1.2 DEFINIO DO OBJ ETIVO GERAL
As dificuldades de medio indicadas anteriormente acarretam na falta de
dados para desenvolver as diferentes etapas do processo tecnolgico como, por
exemplo, um adequado balano de matria e de energia, critrios de controle no
sistema, critrios de otimizao de parmetros, como a velocidade especfica de
crescimento e a produtividade do sistema entre outros, e todos os que conduzam a
um balano econmico timo do processo assim como constituir os critrios de
reprodutibilidade e controle do mesmo.
1.2.1 Objetivo Geral
Mesmo em se tratando de objetivo geral, neste trabalho possvel separ-lo
em duas partes para melhor entendimento: o uso de sensores, controladores e
sistema de aquisio de dados como fonte de informao sobre o comportamento
do processo e o posterior processamento destes, gerando os parmetros que
permitam uma anlise comparativa. Assim, o objetivo geral :
- Propor uma metodologia de anlise e avaliao aplicvel a diversos
processos, e respectivos microrganismos, atravs do uso de sistema de aquisio
de dados, sensores e ferramenta computacional.
1.3 DEFINIO DOS OBJ ETIVOS ESPECFICOS
Esta seo busca especificar as diversas etapas necessrias para que se
cumpra o objetivo geral determinado acima. De acordo com (LIPTK, 2006; STURM
et al. 2008), um sistema de controle pode ser dividido em quatro grandes partes, a
saber: sensores, atuadores, estratgia de controle e rede industrial de interconexo.
Conforme Smith (2004), ainda h uma lacuna na disponibilidade de sensores para
determinadas variveis qumicas envolvidas nos processos de fermentao, assim

19
uma busca foi realizada no sentido de melhor adaptao dos sensores existentes s
necessidades encontradas. Algumas das variveis envolvidas podem ser de difcil
controle e at mesmo impossveis de se controlar atravs das estratgias
convencionais de controle, devido ao fato de pertencerem ao comportamento dos
prprios microrganismos, como por exemplo, a velocidade de consumo de oxignio.
Desta forma foram determinados os seguintes objetivos especficos:
- Pesquisar e especificar sensores adequados aos processos de fermentao
a serem avaliados;
- Desenvolver um sistema de aquisio direcionado para o processo de FES;
- Desenvolver um software para estimativa de crescimento de biomassa e
levantamento dos parmetros caractersticos do processo de FES, utilizando dados
gravados pelo sistema de aquisio;
- Realizar testes em processos de fermentao e de cultivo celular, com o
respectivo processamento de dados e anlise.
O programa de aquisio de dados foi desenvolvido sobre plataforma de uso
industrial, de modo que as condies ambientais e eltricas fossem contempladas
quando do uso no ambiente de laboratrio.
Para o programa de estimativa de biomassa e gerao de outros parmetros
do processo, foi utilizado como base um programa chamado FERSOL (Rodrguez
Len et al., 1988). O novo programa chamado no mbito deste trabalho como
FERSOL2, cujo desenvolvimento buscou incluir caractersticas e vantagens dos
sistemas mais atuais.
A aplicao do sistema com todos os seus recursos e tambm algumas
possibilidades parciais, tanto em processos de fermentao, como em alguns outros
de interesse para o programa de ps-graduao, foi realizada com o intuito de
variar as condies de uso deste sistema. A avaliao de reatores diferentes, com
microrganismos e substratos diversos e com a produo de vrios produtos, teve
como objetivo a demonstrao da versatilidade da soluo como um todo.
1.4 ORGANIZAO DOS CAPTULOS
Devido natureza deste trabalho, considerando que cada captulo trata de
um processo diferente, esta seo expe a ordem e breve contedo de cada

20
captulo, de modo que possa orientar a leitura de acordo com interesses
especficos.
O Captulo 2 descreve os diversos materiais e recursos necessrios para a
realizao da pesquisa. Sensores e suas principais especificaes, bem como
recursos mecnicos para sua adaptao aos diversos processos so descritos. Em
seguida feita uma rpida exposio dos tipos de reatores utilizados e elementos
acessrios para seu correto funcionamento.
O Captulo 3 explica os recursos usados para o desenvolvimento dos
programas de computador. As solues, em termos de mtodos matemticos e de
clculo numrico, so discutidas e tambm quanto s decises necessrias
relacionadas interface e plataforma de programao, sempre com o intuito de
tornar os programas mais amigveis e com uma maior vida til nos sistemas
atuais.
O Captulo 4 trata da primeira aplicao das ferramentas de uma forma
completa, ou seja, com a aquisio de dados feita pelo programa prprio e a
posterior anlise dos dados com a respectiva comparao com outros mtodos de
determinao, com o objetivo de encaminhar a validao dos programas
desenvolvidos.
O Captulo 5 mostra tambm uma aplicao completa, utilizando o sistema
como um todo no monitoramento e anlise de comportamento de processo para
produo da enzima fitase, em um cultivo de Fungo com o substrato polpa ctrica.
No Captulo 6 descrita mais uma aplicao completa, porm o uso da
ferramenta, com todos seus recursos, foi feito como auxlio na determinao do
comportamento e caracterizao do processo durante o procedimento de mudana
de escala de produo. O sistema foi adaptado a trs reatores com tamanhos
diferentes, com anlise de cada um e posterior avaliao em conjunto como
demonstrao da validade do procedimento de aumento de escala.
Para demonstrar o grau de versatilidade do sistema, bem como auxiliar
outras pesquisas na determinao de comportamento de processos diversos, o
Captulo 7 mostra aplicaes do sistema frente a outros processos que no
fermentao em estado slido. Embora com o uso parcial dos recursos disponveis
pelo sistema, as variveis monitoradas e analisadas puderam ser usadas com

21
sucesso na determinao de comportamentos destes processos ou mesmo
caracterizao de alguns de seus parmetros.

22
2 MATERIAL E MTODOS
Neste captulo so descritas as caractersticas dos sensores e controladores,
presentes no sistema de aquisio de dados, bem como os recursos fsicos
necessrios para a realizao dos experimentos como biorreatores, colunas e
suportes para os sensores, incluindo demais acessrios. As caractersticas e
mtodos referentes aos programas de aquisio de dados, FERSOL2 e demais
parmetros so abordados no captulo 3.
2.1 SENSORES
Sensores so dispositivos que transformam alguma variao de uma
grandeza em um sinal eltrico mensurvel, conforme (MITCHELL et al. 2006;
STURM, 2004). Neste trabalho os sensores foram adaptados para uso nos
processos aqui descritos.
2.1.1 Sensores de Oxignio
Para que se pudesse atingir os objetivos deste trabalho, uma pesquisa inicial
frente aos fornecedores de sensores e controladores foi realizada, mantendo como
base de deciso as especificaes mais adequadas, vida til e, finalmente, o
investimento financeiro.
Para a determinao da quantidade de oxignio consumido em cada um dos
processos, foram utilizados dois sensores de medio deste gs, um para medio
de percentual na entrada do processo, outro instalado na sada. A diferena entre
os valores percentuais destes sensores resultou no valor percentual consumido
pelos microrganismos presentes no processo. Os sensores utilizados foram do
modelo O2-A2 fornecidos pelo fabricante Alpha Sense(ALPHASENSE, 2009).
Usados em conjunto com circuito de amplificao, apresentam sinal variando de 4
mA a 20 mA, sinal padro industrial (LIPTK,2006; STURM et al. 2008). O sinal
varia conforme o percentual de oxignio se modifica desde 15% at 25%,
respectivamente. Com o uso de controladores para a aquisio deste sinal, a
resoluo foi estabelecida em centsimos de percentual.

23
Estes sensores funcionam atravs do processo chamado de bateria metal-ar
(ALPHASENSE, 2006), onde a reao de oxidao em um eletrodo metlico gera
um sinal eltrico proporcional ao percentual de oxignio presente no ar.
2.1.2 Sensores de Gs Carbnico
Para a determinao posterior da massa de gs carbnico consumido ou
gerado pelos processos, foram utilizados dois sensores, de modo semelhante ao
descrito na seo anterior, um instalado na entrada e outro na sada do processo,
sendo a diferena entre os resultados o valor de interesse. O modelo GMT 221
fornecido pelo fabricante Vaisala (VAISALA, 2006) funciona atravs da interferncia
entre dois feixes de infravermelho de comprimentos de onda ligeiramente diferentes
(STURM et al. 2008; MEIJ ER, 2008). O resultado gerado atravs de um sinal
padro de sada de 4 mA a 20 mA, numa faixa de atuao entre 0 e 20% de Gs
Carbnico. A resoluo deste sinal de 0,006%, porm o controlador ao qual este
conectado possui uma resoluo de 0,01%, desta forma limitando a este ltimo
valor.
2.1.3 Sensor de Vazo
Para o clculo das massas gasosas atravs dos sinais proporcionais ao
percentual presente de cada um dos gases de interesse, necessria a medio de
vazo. O sensor utilizado foi o modelo GFM da Aalborg (AALBORG, 2006). Para
esta grandeza foi necessrio utilizar dois sensores com faixas de atuao em
diferentes escalas, um respondendo na faixa entre 0 e 100 mL/min e outro entre 0 e
200 L/min. Quando do uso em reatores do tipo coluna de Raimbault com volume de
250 mL, o modelo adequado foi o primeiro, pois as vazes usadas seriam muito
pequenas frente ao fundo de escala do segundo modelo, o que acarretaria em
dificuldades de calibrao, bem como o acrscimo de erros nos resultados. Para o
uso em reatores do tipo tambor, tanto com capacidade de 2 kg quanto de 10 kg, o
modelo com maior escala demonstrou melhor adaptao, principalmente pelas
grandes diferenas na necessidade de aerao entre os tipos de reatores. Os
sensores funcionam atravs do princpio de disperso trmica (STURM et al. 2008;
LIPTK, 2006). Para minimizar os erros decorrentes de flutuaes de presso, este

24
sensor utiliza um mtodo de escoamento entre dois capilares, sempre com fluxo
laminar, calculando posteriormente o valor de vazo real, levando em conta a lei
dos gases ideais e sem a necessidade de medies auxiliares de temperatura antes
e depois do sensor, o que seria indispensvel considerando que a presso dos
gases sofre variaes, seja por condies de bombeamento, seja por mudanas na
perda de carga do prprio reator durante o processo. A exatido deste sensor de
1,5% no mnimo, frente ao valor de fundo de escala.
2.1.4 Sensor de umidade relativa do ar
Com o intuito de monitorar a variao de umidade relativa do ar, na sada dos
processos, foi utilizada uma sonda modelo RHT-DM, fornecida pelo fabricante
Novus (NOVUS, 2006), com a condio de medio desde 0 a 100%, com um sinal
de sada de 4-20mA, a dois fios, suportando uma temperatura de trabalho entre -
20C e 80C. A base de funcionamento deste sensor uma sonda capacitiva,
conforme Sturm (2004).
2.1.5 Sensor de temperatura
Para a medio de temperatura e, em alguns processos o seu controle, foi
utilizado um sensor do tipo Pt100. Esta escolha foi baseada na grande faixa de
utilizao deste tipo de sensor, bem como sua rpida resposta associada grande
linearidade (MEIJ ER, 2008; STURM et al., 2008). Para que se obtenha um sinal,
este sensor foi ligado a um controlador modelo N1100 (NOVUS, 2006b), o qual
permite a leitura com resoluo de um dcimo de grau Celsius, com erro mximo de
0,2% da faixa medida.
2.1.6 Suporte para sensores
Os sensores de gs e umidade foram adaptados em um tubo de PVC, de
modo que o ar fosse aplicado atravs do sensor de vazo, passando
obrigatoriamente por este tubo. No interior do tubo forma-se uma atmosfera com
os gases de sada, onde os respectivos sensores medem sua concentrao. Para a
medio ou controle de temperatura, o Pt100 foi adaptado o mais diretamente

25
possvel em contato com o processo, com o intuito de minimizar eventuais erros. A
Figura 1 mostra parte destes sensores instalados no suporte.

FIGURA 1 - SUPORTE PARA OS SENSORES
2.2 CONTROLADORES
Na concepo do sistema como soluo para o monitoramento e controle de
um bioprocesso, foi feita a opo pelo uso de controladores de processos, ao invs
de indicadores to somente. Com estes equipamentos torna-se possvel atuar nas
grandezas quando da necessidade de causar modificaes em seus valores a fim
de manter o resultado final prximo do pr-determinado. Algumas das variveis
monitoradas no so passveis de controle, como por exemplo, o consumo de
oxignio, dependente apenas do comportamento do processo. A opo pelos
controladores permite, ainda, a substituio e troca de qualquer dos instalados por
outro, em caso de sobra de recursos, bem como a menor necessidade de
equipamentos de reposio, em termos de modelos e fabricantes diferentes,

26
padronizando a instalao. O modelo utilizado foi o controlador N1100 da Novus
(NOVUS, 2006b). Este modelo permite controlar variveis pela estratgia PID
(Proporcional, Integral e Derivativo), avanada (STURM et al. 2008). Com mostrador
indicando, simultaneamente, o valor atual do processo e o pr-determinado, pode
facilitar o acompanhamento visual da grandeza pelo usurio. A deciso por este
modelo levou em considerao caractersticas como a entrada programvel, para
diversos sinais padro industriais, facilitando a conexo com os sensores, a sada
disponvel para atuao tanto como um simples liga-desliga, quanto com sinais
analgicos, alm da presena, neste caso indispensvel, de uma porta de
comunicao padro RS 485, para a conexo em rede dos controladores junto ao
programa de superviso.

FIGURA 2 - PAINEL FRONTAL DOS CONTROLADORES
De modo que se pudesse minimizar o cabeamento entre os controladores
conectados neste sistema foi utilizado uma rede industrial baseada no protocolo
MODBUS, com nvel fsico definido pela RS485 (LIPTK,2006; STURM et al.
2008b). Nestes controladores que foram conectados os respectivos sensores.

27
A Figura 2 mostra o painel frontal dos controladores instalados em suporte
porttil para adaptao aos processos.
2.3 BIORREATORES
Para a realizao dos experimentos tratados neste trabalho, foram utilizados
principalmente trs tipos de biorreatores: o tipo coluna de Raimbault para volumes
menores e o tipo tambor horizontal para volumes maiores de material slido e o tipo
tanque agitado para processos utilizando microalgas. A Figura 3 mostra o aspecto
final do sistema conectado a um reator do tipo coluna, incluindo a adaptao para
os sensores, controladores e computador para o sistema de aquisio de dados de
forma esquemtica.

FIGURA 3 - SISTEMA COMPLETO ADAPTADO AO BIORREATOR TIPO COLUNA
FONTE: Adaptado de Carvalho et al. (2006).

28
Na Figura 3 as indicaes numricas significam: 1) Bomba de ar; 2) Sistema
de distribuio de ar; 3) Umidificadores; 4) Colunas de fermentao, imersas em
banho de gua com temperatura controlada; 5) Filtro; 6) Sensor de vazo; 7)
Suporte para os controladores; 8) Computador com sistema de aquisio de dados
e controle; 9) Base cilndrica para adaptao dos sensores de CO
2
, O
2
, umidade e
temperatura dos gases de sada.
2.3.1 Biorreator Tipo Coluna
Para os processos de fermentao em estado slido, em volumes
relativamente pequenos, foi utilizado o reator tipo coluna, descrito por Raimbault e
Alazard (1980).

FIGURA 4 - BIORREATOR TIPO COLUNA DE RAIMBAULT
As colunas de vidro com 4 cm de dimetro e 20 cm de comprimento foram
acopladas a uma cuba de vidro com gua, na qual foram instalados os aquecedores
e sensor de temperatura, permitindo manter a temperatura homognea entre as
colunas. Nesta cuba podem ser instaladas at oito colunas, com a possibilidade de

29
retirada individual, sem que haja perturbaes nas colunas restantes no processo. A
Figura 4 mostra o aspecto final da montagem.

2.3.2 Biorreator Tipo Tambor Horizontal
Para os processos onde foi necessrio uma capacidade maior de material
slido, at a ordem de 10 kg, foram utilizados biorreatores do tipo Tambor
Horizontal, com a possibilidade de agitador interno para movimentao do material
durante o processo de fermentao, bem como a presena de entradas e sadas
para a circulao de gases (PANDEY et al. 2001). Devido ao maior volume gasoso
tambm foi utilizado um compressor de ar, de modo a manter a vazo na ordem de
grandeza necessria. O biorreator tinha sempre o mesmo volume, o que mudava
era a quantidade de suporte/substrato empregado, com diferentes alturas de leito.
Neste caso reatores com diferentes quantidades de substrato e respectivas
diferenas na altura do leito foram utilizados, dependendo do processo em estudo.
2.3.3 Biorreator Tipo Tanque Agitado
Nos processos envolvendo o estudo de crescimento e demais variveis em
microalgas, o reator utilizado foi do tipo Tanque Agitado (ROUSSOS et al. 2003).
Neste caso o crescimento do microrganismo se d em meio liquido, diferindo neste
quesito dos anteriores. Da mesma forma, porm, os gases de entrada e sada foram
medidos juntamente com o valor de vazo, de modo a permitir o clculo das massas
gasosas envolvidas no metabolismo das microalgas.
2.4 DISCUSSO SOBRE OS RECURSOS UTILIZADOS
Para o desenvolvimento dos experimentos, os recursos disponveis foram
suficientes e as especificaes dos sensores estiveram dentro das tolerncias
necessrias, haja vista que tanto a faixa de atuao, quanto a resoluo se
mostraram aceitveis e sempre superiores s necessidades das grandezas durante
os experimentos. A nica exceo foi em relao ao sensor de vazo, no caso do
seu uso em vazes muito prximas do valor mnimo da escala, apresentando

30
desvios especificados na mesma ordem de grandeza da vazo necessria. Neste
caso a aquisio de sensores com outras faixas de aplicao ser necessria.
Para o caso de se utilizar o sistema para outros processos foi feita a
especificao e instalao de sensores e controladores para outras grandezas, no
somente as utilizadas com mais frequncia nos processos fermentativos. Assim,
sensores de umidade relativa do ar e temperatura de sada, incluindo os respectivos
controladores, esto disponveis para uso. Com o intuito de abranger futuras
necessidades, ou se adequar a outros processos, estes recursos podem ser
alterados ou substitudos, de acordo com os requisitos do experimento.
A escolha dos sensores de oxignio mostrou-se adequada, principalmente
sob o ponto de vista de investimento inicial comparado com os recursos disponveis.
O sensor utilizado eletroqumico, cujo investimento foi de US$ 100,00 por pea,
comparando-se diretamente com sensores de funcionamento baseado em
infravermelho, cujo investimento seria na ordem de US$ 1200,00 por pea, foi feita a
escolha. Em trabalhos futuros a utilizao de outros sensores com outras bases de
funcionamento podem ser passveis de teste, devido ao tempo de vida til em
sensores do tipo eletroqumico, determinado em cerca de dois anos no modelo
adquirido.
2.5 CONCLUSO DESTE CAPTULO
Devido concepo inicial do sistema como um todo, este se mostrou porttil
e adaptvel a diversos reatores, assim os processos puderam ser monitorados
mesmo em escalas diferentes, bem como em reatores cuja base de funcionamento
bastante diferente. Desde pequenas colunas at reatores com vrios quilogramas
de material, o resultado foi obtido sem que fosse necessria grande alterao,
exceto no caso do sensor de vazo. Para colunas de Raimbault as vazes utilizadas
foram da ordem de 60mL/min, enquanto que para reatores do tipo tambor horizontal
esta grandeza passou para a ordem de at 10L/min, neste caso sendo necessria a
troca de sensores para adequao de faixa de utilizao. Desta forma, o sistema
mostrou-se bastante verstil, qualidade indispensvel diante da grande variedade
de processos e reatores utilizados nos estudos biotecnolgicos.

31
A sobra de recursos iniciais, como grandezas monitorveis e nmero
expansvel de controladores, foi administrada com o intuito de dar maior
longevidade utilizao do sistema. Considerando que haja uma evoluo
constante e aumento gradativo de necessidades, que poderiam no ser previsveis
logo no incio da especificao de recursos, a soluo tcnica mostra flexibilidade
suficiente para melhor atender a estas possveis necessidades. Esta deciso
mostrou-se importante quando da anlise de consumo de oxignio medido nos
processos de microalgas e tambm no cultivo de clulas vegetais, pois seu
resultado apresentou dependncia do valor de umidade relativa, o qual j estava
sendo previamente medido. A disponibilidade do sensor de umidade permitiu a
correo dos desvios nas medies de oxignio.
Ainda nesta mesma linha de raciocnio, todos os sensores e controladores
foram especificados para uso com sinais eltricos padro dentro das aplicaes
industriais, permitindo, desta forma, a sua adaptao com outros sistemas, bem
como a modificao de escala, passando por plantas piloto at industriais. A
escolha de sinais padro tambm traz a vantagem de substituio de sensores por
outros modelos e, at mesmo, de outros fabricantes, sem necessidade de troca de
controladores, por serem disponveis numa vasta gama de produtos comerciais e
fabricantes diferentes.

32
3 DESENVOLVIMENTO DE FERRAMENTAS DE SOFTWARE APLICADAS AOS
PROCESSOS
Este captulo descreve os procedimentos adotados para o desenvolvimento
do Programa de Computador para Clculo e Anlise dos Parmetros determinantes
nos processos fermentativos, FERSOL2. Os principais parmetros gerados por este
programa, fundamentais para o entendimento do processo fermentativo, so os
valores da velocidade especfica de crescimento, coeficiente de manuteno, e
rendimento do processo. Atravs dos grficos gerados possvel realizar outras
anlises como, por exemplo, a durao da fase lag.
Aps a breve descrio dos mtodos utilizados feita uma discusso sobre
os resultados obtidos, seja por observao direta ou por comparao com os
resultados de outro programa mais antigo, Fersol (Rodriguez Leon et al, 1988). Este
captulo pretende, ainda, demonstrar o uso e resultados obtidos paralelamente com
o sistema de aquisio de dados, o qual pode ser utilizado de forma independente
da necessidade de processamento para obteno de estimativa de biomassa. Os
resultados com base em processos de produo que utilizam diversos
microrganismos so expostos, seguidos de comentrios relacionados ao
desempenho do sistema frente aos resultados esperados com base terica, nos
captulos seguintes.
3.1 MATERIAL E MTODOS
Nesta seo so apresentados os recursos utilizados, os equipamentos e
ferramentas computacionais. Uma descrio dos mtodos matemticos escolhidos,
e sua motivao, exposta com o intuito de esclarecer sua escolha.
3.1.1 Recursos Utilizados
Como base para o desenvolvimento deste projeto, foi tomado o software
Fersol, desenvolvido em 1987, utilizando a metodologia apresentada por Rodriguez
Leon et al, 1988. Esta ferramenta foi criada para uso em sistema operacional DOS
da Microsoft. Atualmente os equipamentos de informtica proporcionam maior

33
disponibilidade de espao em memria e, principalmente, em capacidade de
processamento, os quais foram levados em considerao quando da tomada de
deciso sobre a escolha da plataforma de programao. O cdigo do antigo
programa no pde ser lido devido perda dos arquivos gravados em meios
magnticos j obsoletos. Devido a esta perda, os algoritmos foram todos elaborados
com base nas tcnicas mais atuais, mantendo apenas algumas das funes usadas
na verso anterior.
Aps anlise de disponibilidade, investimento e longevidade, que em
informtica e computao se traduz em tempo de obsolescncia, optou-se pelo uso
de programao na linguagem C Sharp, dentro da plataforma DotNet da
Microsoft. Esta escolha levou em considerao a atualizao dos recursos, a
possibilidade de uso deste programa em sistema operacional Windows e tambm
em Linux, com o intuito de atender melhor as instituies e usurios, tornando-o
menos dependente do sistema operacional em uso. Como outros recursos avaliados
na escolha podem ser citados: velocidade na implementao, grau de dependncia
do sistema operacional, facilidade de obter programadores habilitados, flexibilidade
de programao por ser orientada a objeto e intensidade de uso da CPU (STURM et
al. 2008b).
3.1.2 Estrutura do Programa FERSOL2
Aps anlise dos requisitos para o adequado funcionamento do programa, foi
determinada a estrutura deste, visando a facilidade de entrada de dados, incluindo
a compatibilidade com o programa de aquisio de dados, as etapas de
processamento e finalmente a forma de apresentao de resultados e arquivos de
sada de dados. Estes recursos foram implementados de modo que o FERSOL2
fosse mais compatvel com outros programas comerciais, bem como para torn-lo
mais amigvel por parte dos pesquisadores usurios.

3.1.2.1 Dados de entrada
Os dados necessrios de entrada, para o posterior processamento e gerao
de resultados so: biomassa medida inicial e final, valor do intervalo de tempo entre

34
as medies, t, e a sequncia de valores de consumo de oxignio, em gramas, ou
consumo de substrato, para o caso de fermentao submersa.
No incio do processo de entrada de dados, o usurio deve decidir entre
fermentao em estado slido ou submersa. Os valores de biomassa inicial e final
so indispensveis nesta verso, porm possvel que sejam informadas
biomassas intermedirias e, neste caso, o usurio deve decidir qual o percentual de
erro mximo permitido na aproximao das estimativas pelo programa.
Para facilitar o uso possvel digitar os valores diretamente na interface de
entrada ou abrir arquivo externo j gravado. Este recurso permite inserir diretamente
valores j armazenados em arquivos de formato txt, compatvel com MS Worde
csv compatvel com MS Excele outros programas comerciais e de cdigo aberto.

3.1.2.2 Sequncia de Processamento
Depois de feita a entrada de dados o programa cria automaticamente a curva
de crescimento de biomassa, de acordo com mtodo descrito frente na seo
3.1.4.2. Este mtodo permite estimar o prximo valor de biomassa com base no
valor anterior, no consumo de oxignio e no valor do coeficiente de manuteno
inicial que, para o incio do processo iterativo de ajuste considerado um valor
desprezvel. Aps finalizada a sequncia de estimativa de biomassa feita uma
comparao entre o valor final estimado e o valor final medido j informado como
dado de entrada. Atravs de processo iterativo feito o ajuste desta curva pela
variao do coeficiente de manuteno at que os valores inicial e final estejam
prximos o suficiente, condio determinada pelo erro percentual mximo informado
pelo usurio. Os critrios de parada para o mtodo iterativo so o erro percentual
mximo entre as biomassas e o nmero mximo de iteraes, ambos ajustveis pelo
usurio.
Quando a curva de estimativa de crescimento da biomassa j est ajustada,
gerada a curva logartmica de crescimento da biomassa. Sobre esta curva
logartmica so localizados automaticamente o primeiro e o ltimo ponto de
linearidade, os quais determinam a fase logartmica de crescimento da biomassa e a
regio onde a maioria dos parmetros calculada. O critrio de parada para a

35
determinao da regio linear ajustado inicialmente para um desvio padro,
porm este valor pode ser modificado pelo usurio de acordo com a necessidade e
tambm com relao ao grau de no-linearidade da curva gerada. Para auxiliar
nesta tarefa o programa gera grficos, tanto da biomassa quanto da curva
logartmica, permitindo uma localizao aproximada visualmente. Com base na
curva logartmica e na sua regio linear os parmetros do processo so calculados,
como a velocidade especfica de crescimento, , o valor de produo Yx/o e o
coeficiente final de manuteno, m.

3.1.2.3 Dados de sada
O programa FERSOL2 permite a gravao de todos os testes e
experimentos, para posterior uso. Como dados de sada, so gerados grficos,
valores em forma de tabela tanto de oxignio consumido quanto de biomassa
estimada, valores dos parmetros do processo, , Yx/o e m, primeiro e ltimo pontos
de linearidade e mtodo de filtragem de dados quando aplicvel.
Para permitir novas avaliaes posteriores, so gerados arquivos gravados
em formato txt e csv, conforme citados anteriormente.
3.1.3 Mtodos Matemticos
Existem diversas publicaes indicando mtodos para determinar a
velocidade especfica de crescimento (), parmetro chave para o entendimento de
qualquer processo fermentativo ou de crescimento celular, como por exemplo:
medies diretas por contagem celular, com agitao da amostra no caso de
bactrias e leveduras (CHRISTEN et al, 1994), estimativas indiretas da biomassa
atravs da anlise do teor de protena ou de outro constituinte celular do
microrganismo empregado (RAIMBAULT, 1981; OKASAKI et al., 1980) e medies
da quantidade de oxignio consumido e do gs carbnico produzido (NISHIO et al.,
1979; KOBA et al., 1986). Este ltimo mtodo demonstra ser o mais indicado para a
estimativa da velocidade especfica de crescimento () nos processos em estado
slido, a partir da velocidade de consumo de oxignio ou produo de gs
carbnico, pois o estado fisiolgico do microrganismo e o estado fsico-qumico do
sistema no se alteram pelo manuseio das amostras e, ainda, as medies do

36
consumo e produo destes gases representam o comportamento global do
sistema, minimizando eventuais imprecises de amostragem de um sistema
heterogneo como no caso da Fermentao em Estado Slido. Este mtodo vem
sendo utilizado nos ltimos anos e tem permitido o acmulo e processamento dos
dados nos sistemas de Fermentao em Estado Slido (RODRGUEZ-LEN et al.,
2008; SPIER et al., 2009; SAUCEDO-CASTAEDA et al., 1990; AURIA et al., 1990).
Atravs da entrada de uma lista dos valores de oxignio consumido,
diretamente pela interface do programa ou gravado em arquivo, o programa avalia
os resultados iniciais e finais do desenvolvimento da biomassa, ajustando a curva
de oxignio atravs de mtodos numricos, para a resoluo numrica das
equaes diferenciais e das integrais que descrevem os balanos de materiais
inerentes aos processos fermentativos. Caso haja algum valor indicativo de erro,
possvel aplicar uma filtragem por Transformada de Fourier, Mdia Mvel e
Savitzky-Golay (CERQUEIRA et al., 2000), retirando os valores que podem ser
provenientes de falhas de medio ou, ainda, rudos de natureza eltrica, antes da
realizao dos clculos e estimativas.
Existe a necessidade de se considerar diversos critrios sobre a escolha e
uso do mtodo de filtragem, pois, se algumas condies no estiverem bem
determinadas, o resultado poderia descaracterizar o grfico de entrada, gerando
erros pela eliminao de valores que deveriam ser considerados teis, impedindo a
reconstruo da curva verdadeira (CERQUEIRA et al., 2000).
Alm de determinar a velocidade especfica de crescimento () o programa
permite estimar parmetros biotecnolgicos importantes como os coeficientes de
rendimento em relao ao consumo de oxignio (Yxo) e de manuteno (m) da cepa
empregada (SATO et al.,1983; RODRGUEZ LEN et al., 1988). Os clculos e o
programa desenvolvido servem tambm para o processamento de dados dos
processos de fermentao submersa (RODRGUEZ LEN et al., 2003).
3.1.4 Mtodos Numricos Utilizados em Cada Etapa
O programa utiliza em cada fase de clculo o mtodo que demonstrou maior
adequao natureza dos problemas de acordo com as descries que seguem.

37
3.1.4.1 Clculo das integrais relacionadas aos processos
As funes que representam o comportamento dos processos de
fermentao so, em geral, utilizadas em notao de derivadas, seja em relao ao
tempo ou em relao a outras grandezas, como, por exemplo, a biomassa. Desta
forma a soluo pode passar pelo processo de integrao destas funes como
demonstrado em PANDEY et al., 2001.

FIGURA 5 - INDICAO DE REA DE INTEGRAO
Para o clculo da integral indicada na Equao (1), que representa o
consumo total de oxignio pelo processo, foi utilizado o mtodo da regra do trapzio
(ETTER e INGBER, 2007), pois se trata de uma soluo das mais usuais em
problemas de engenharia, haja vista que os valores de oxignio foram medidos em
intervalos iguais de tempo, ou seja, tornam-se uma sequncia de diferenas
numricas nestes intervalos, permitindo o uso do mtodo. A Figura 5 mostra um
exemplo indicando a rea a ser integrada pelo mtodo.
dt
dt
dO
n t
o t
}
=
=
2
(1)

A Figura 6 mostra um exemplo de como foram determinados os limites dos
trapzios utilizados neste mtodo de integrao.

38

FIGURA 6 - DETERMINAO DOS LIMITES DOS TRAPZIOS
Deve-se considerar que os intervalos de tempo tomados pelo sistema de
aquisio de dados, descrito na seo 3.3, sejam pequenos o suficiente para que
no haja qualquer variao significativa no comportamento do processo, de modo
que este mtodo seja suficientemente exato.

3.1.4.2 Mtodo iterativo para ajuste da curva de crescimento da biomassa
Conforme Pandey et al. (2008) o equilbrio fisiolgico de consumo de
oxignio composto da seguinte forma: o valor total consumido a soma da massa
de oxignio empregado na produo da biomassa com a massa empregada nos
processos endgenos. Assim, parte desta massa empregada na reproduo das
clulas e parte para a sua manuteno. Este balano de massas pode ser
representado pela Equao (2) abaixo:

t
manuteno O
t
reproduo O
t
O
A
A
+
A
A
=
A
A 2 2 2
(2)

Considerando termos mais diretamente relacionados cintica do processo a
equao pode ser escrita (RODRGUEZ-LEN et al., 2008):

mX
t
X
Y t
O
O X
+
A
A
=
A
A
/
2
1
(3)

39
Atravs da integrao de ambos os membros desta equao possvel
extrair o termo referente biomassa X, ou seja, X como (X
n
X
o
), onde X
n

representa a biomassa num determinado tempo e X
o
a biomassa medida no incio
do processo. Isolando e reagrupando os demais termos a funo pode ser
reapresentada como na Equao (4) abaixo.
A curva de crescimento da biomassa estimada atravs dos valores de
entrada de consumo de oxignio, de modo que o valor seguinte gerado com a
utilizao do resultado da iterao anterior conforme Sturm et al. (2008b). Desta
forma a funo gerada contnua, ou seja, no h um valor onde esta no esteja
definida em todo o tempo de durao do processo. Esta funo apresentada
segundo Pandey et al. (2001) como exposta na Equao (4), na qual, para facilitar
sua leitura, foi inserido o termo indicado como a =m.Y
x/o
.t e onde X
n
representa o
valor de biomassa estimado em cada valor de tempo, X
o
o valor inicial desta e Y
x/o
o
coeficiente de rendimento biomassa por oxignio.

|
.
|
\
|
+
|
.
|
\
|
+
|
.
|
\
|
+
(
|
.
|
\
|
+ |
.
|
\
|
A
=

=
=
=
= = = =
2
1
2
1
2
1
1
1
0
1
1
2 2
0
2
/
a
X a X
a
dt
dO
dt
dO
dt
dO
t Y
X
n i
i
i
n i
i i t n t t
O X
n
(4)

Em se tratando de uma funo contnua, e levando em conta o fato de que a
variao do coeficiente de manuteno (m) gera uma mudana nos valores
subsequentes, o mtodo usado para ajuste da curva aos valores medidos foi o da
Bisseco (BASSANEZI, 2002). Assim, aps um ciclo completo de repetio da
funo, o valor final de biomassa estimada comparado ao valor medido de
biomassa, caso esta diferena no esteja dentro de um intervalo pr-determinado
de tolerncia, o ciclo se repete com um novo valor arbitrado para o coeficiente de
manuteno (m). O nmero arbitrado para (m) estar no ponto mdio entre as
iteraes anteriores, assim o resultado tende a oscilar em torno do valor final de
biomassa, com um grau de convergncia bastante rpido para a funo aqui
tratada. Cabe lembrar que o valor de Y
x/o
no foi utilizado no mtodo iterativo por ter

40
sido determinado pelos valores experimentais totais de biomassa e oxignio
consumido.
Existe a possibilidade de entrada de dados com valores intermedirios de
biomassa medida, pois este procedimento depende do processo a ser analisado
com o programa. Os valores intermedirios so tratados pelo mesmo mtodo, porm
com intervalos menores contendo o valor estimado anterior e o novo valor medido.

3.1.4.3 Filtragem dos dados de entrada
Para que o usurio possa filtrar os dados de entrada de consumo de
oxignio, foram includos trs mtodos diferentes, Transformada de Fourier, Mdia
Mvel e Savitzky-Golay. Esta variedade tem o objetivo de permitir que o
pesquisador retire dados que no esto diretamente relacionados com o
comportamento do processo em estudo, ou seja, alguns pontos podem ser
considerados como outliers (pontos esprios que podem ser causados por rudo
ou interferncia), ou pontos fora da curva (CERQUEIRA et al. 2000). Estes dados
podem ser gerados por erros de medio, rudos provenientes da rede eltrica,
variaes no andamento do processo de ordem prtica ou manual, entre outros.
Cada um dos filtros ser explicado nas sees seguintes.

3.1.4.4 Filtragem por Transformada de Fourier
A filtragem pela Transformada de Fourier consiste na aplicao desta
transformada, indicada na Equao (5), ao grfico que representa os valores
experimentais. Este procedimento gera o equivalente do grfico no chamado
domnio das freqncias, ou seja, o espectro de freqncias F(w) (BRACEWELL,
2000).
(5)
Onde representa o comprimento de onda, relacionado frequncia, e w a
prpria frequncia do sinal que, anteriormente, poderia ser representado como F(x)
onde x seria o tempo. Depois de obtido o grfico em funo das freqncias,
aplicado um filtro passa-baixa, este filtro corta as regies da curva que resultaram

41
em altas freqncias, normalmente geradas por rudos provenientes dos
instrumentos (CERQUEIRA et al., 2000). Para retornar ao chamado domnio do
tempo aplicada a transformada inversa de Fourier, dada pela Equao (6),
resultando no grfico original, porm retirados os pontos considerados fora da
curva.
(6)

3.1.4.5 Filtragem por Mdia Mvel
Conforme Hellerstein et al. (2004), em sistemas computacionais, geralmente
os pontos fora da curva apresentam valores em torno da mdia geral dos dados
coletados experimentalmente. Desta forma, o filtro por mdia mvel utiliza o
resultado da mdia aritmtica dos valores da vizinhana do ponto fora da curva
como novo resultado, ou seja, o ponto substitudo pelo valor da mdia entre os
pontos laterais, normalmente avaliados dentro de um intervalo pr-determinado,
formado por um nmero mpar de pontos (CERQUEIRA et al., 2000). Embora seja
um mtodo relativamente simples de implementar, no gera um bom resultado
quando aplicado a grficos que apresentam picos muito estreitos, pela perda da
relao com o grfico original devida a distores.
3.1.4.6 Filtragem por Savitzky-Golay
De acordo com Rosenthal e Gilliam (2003), o filtro de Savitzky-Golay
bastante utilizado em sistemas de espectrometria e pouco conhecido em outras
reas. Este mtodo suaviza o grfico, retirando possveis pontos esprios, atravs
da substituio destes por outros estimados por um polinmio que interpola um
determinado intervalo em torno do outlier. A interpolao geralmente feita pelo
mtodo dos mnimos quadrados e o resultado bastante superior ao obtido pela
mdia mvel, pois cada regio do grfico analisada por uma funo que considera
todos os pontos e as respectivas tendncias de comportamento.

42
3.1.5 Clculo dos Parmetros do Processo
O programa FERSOL2 calcula os parmetros do processo depois de
determinados os valores relacionados aos totais de biomassa produzida e oxignio
consumido, bem como a curva logartmica da biomassa. Para o clculo do valor da
velocidade especfica de crescimento foi utilizada a relao (7) indicada a seguir:

dt
dX
.
X
1
= (7)

Reagrupando os elementos:
X
dX
dt = . (8)

Integrando ambos os membros:

} }
=
tf
ti
tf
ti
X
dX
dt . (9)

O resultado da equao final (10) ser:

) ln( ) ln( ) ( Xi Xf ti tf = (10)

Da equao (10) isolado o valor da velocidade especfica, onde:
tf =ltimo ponto de linearidade da curva logartmica de biomassa;
ti =Primeiro ponto de linearidade da curva logartmica de biomassa;
Xf =Respectivo valor de biomassa na curva logartmica ao valor de tf;
Xi =Respectivo valor de biomassa na curva logartmica ao valor de ti;
Para a determinao do valor do coeficiente de manuteno, foi utilizada a
equao (3) reapresentada abaixo para facilitar a leitura:
mX
t
X
Y t
O
O X
+
A
A
=
A
A
/
2
1
(3)

43
Isolando m tem-se a equao (11):

X
t
X
Y t
O
m
O X
A
A
A
A
=
/
2
1
(11)

Para o clculo da produo de biomassa por oxignio consumido a equao
(12) foi utilizada aps determinados seus valores totais:
cons O
Xi Xf
o Yx
2
/

= (12)

Onde:
Xf =Biomassa final em gramas;
Xi =Biomassa inicial em gramas;
O2cons =Quantidade total de oxignio consumido em gramas.

Estes so os principais parmetros apresentados como resultados de sada
do programa, de modo que se possa caracterizar e acompanhar o andamento de um
processo fermentativo.

3.2 IMPLEMENTAO DO SOFTWARE FERSOL2
Esta seo expe as atividades relacionadas ao projeto do programa, bem
como da interface deste, demonstrando a nova interface grfica e os recursos
apresentados.
3.2.1 Desenho da Interface Principal
Utilizando os recursos grficos da linguagem de programao escolhida, foi
desenhada a interface principal do novo programa, a Figura 7 mostra a parte desta
interface onde os dados iniciais so inseridos. Como requisito bsico, esta nova
interface permite a visualizao de todos os principais parmetros calculados, bem
como indicao de qualquer alterao, com os parmetros apresentados na mesma
tela. Isto foi feito de modo que no haja perdas de informao quando o nmero
total de leituras ultrapassa um determinado limite imposto de linhas em cada tela,

44
como acontecia no passado em programas para DOS. Nesta mesma tela
possvel abrir, salvar, alterar e exibir propriedades de cada arquivo de leituras, os
arquivos de entrada e de sada podem ser salvos como arquivo de texto ou como
arquivo CSV (comma separated values) de acordo com a necessidade do usurio,
permitindo sua abertura para anlise em outros programas como no Microsoft Excel,
por exemplo.

FIGURA 7 INTERFACE DE ENTRADA DE DADOS
A Figura 8 mostra um exemplo de valores dos parmetros calculados, j com
uma breve explicao do significado de cada um.
Alm destas interfaces parciais, o programa permite a visualizao de todos
os valores estimados de biomassa, incluindo a possibilidade de criao de grficos,

45
tanto dos valores de entrada quanto dos resultantes de seu processamento, como
crescimento da biomassa e seu equivalente logartmico.

FIGURA 8 INTERFACE PARCIAL DE APRESENTAO DE PARMETROS
3.2.2 Biblioteca Grfica
Durante o desenvolvimento do atual projeto, foi pesquisada uma nova
biblioteca grfica, alm da oferecida pela Linguagem C Sharp, pois esta
demonstrava tambm algumas limitaes quanto transferncia para outros
programas externos, os quais j foram resolvidos e esto completamente funcionais
na verso atual do programa. Estes grficos podem ser abertos em uma nova
janela, permitindo que sejam transferidos para outros programas como Excel, Word
e outros, facilitando a gerao de documentao, relatrios e publicao dos
resultados obtidos, conforme exemplo exposto na Figura 9, onde est mostrada a
curva de entrada de oxignio e, sobreposta a esta, a mesma sequncia j filtrada,
facilitando a anlise dos resultados. Alm do grfico dos valores de entrada, o

46
programa permite gerar grficos de diversos parmetros cruciais para a anlise do
processo como um todo, como a evoluo da biomassa diretamente ou em forma
logartmica.
0
0,002
0,004
0,006
0,008
0,01
0,012
0,014
0,016
0,018
08
1
6
2
4
3
2
4
0
4
8
5
6
6
4
7
2
8
0
8
8
9
6
1
0
4
1
1
2
1
2
0
1
2
8
1
3
6
1
4
4
1
5
2
1
6
0
Tempo (h)
O
x
i
g
n
i
o

c
o
n
s
u
m
i
d
o

(
g
/
h
)
Sem filtragem Com filtragem

FIGURA 9 - EXEMPLO DE GRFICO GERADO PELO PROGRAMA

Os recursos apresentados pelos novos grficos como variao nas escalas,
por exemplo, sero teis para anlise posterior dos resultados, bem como
estimativas de comportamento do processo.
3.3 IMPLEMENTAO DO SISTEMA DE AQUISIO DE DADOS
Esta seo mostra o desenvolvimento do programa para aquisio de dados,
atravs de rede industrial, Modbus (STURM et al. 2008) e uso de plataforma de
desenvolvimento Laquis (LCDS, 2009).
3.3.1 Determinao das variveis de entrada
De acordo com os sensores especificados para o sistema de aquisio, as
variveis foram escolhidas de forma que permitisse sua utilizao em uma
variedade mais ampla de processos (STURM et al. 2008). Cada sensor foi
conectado a um controlador de processos, que por sua vez foi ligado rede de
comunicao que leva os sinais ao microcomputador com o programa de aquisio.
Para verificao da respirometria foi utilizado um sensor de vazo, dois sensores de

47
percentual de oxignio, sendo um na entrada do biorreator e outro na sada, e um
de gs carbnico. Sensores de umidade relativa e temperatura tambm compem o
sistema de forma auxiliar.
3.3.2 Gravao de valores
As variaes dos percentuais de consumo de oxignio, ou produo, bem
como de gs carbnico no sofrem variaes expressivas em pequenos intervalos
de tempo (PANDEY et al. 2001), assim o programa foi ajustado, praticamente para
todos os processos testados, para uma nova aquisio e gravao de valores a
cada quinze minutos, o que demonstrou ser mais do que o suficiente para anlise
do comportamento do processo em estudo.

FIGURA 10 INTERFACE DE AQUISIO DE DADOS
Para um acompanhamento mais adequado, uma varivel virtual foi criada
para demonstrar o valor, em tempo real, do coeficiente respiromtrico, ou seja, a
taxa de consumo de oxignio dividida pela taxa de produo de gs carbnico,

48
quando do uso do sistema para um processo tpico de cultivo aerbio. O programa
Laquis permite a gravao de todos os valores e sua recuperao pode ser
exportada para outros programas como, por exemplo, Excel ou Word.
3.3.3 Interface de demonstrao dos valores atuais
A Figura 10 mostra a interface do software de aquisio de dados, j com a
identificao de cada varivel medida, sendo processada pelo microcomputador
ligado rede de comunicao.
Os valores gravados por este programa foram aplicados diretamente no
FERSOL2, cujos parmetros foram tratados em seo anterior.
A utilizao da plataforma de programao DOTNET da Microsoft
demonstrou versatilidade adequada para a soluo dos problemas que se
apresentaram durante o desenvolvimento do programa.
O novo programa demonstrou um grau de convergncia bastante superior ao
antigo, que serviu como base inicial de comparao, mas devido maior velocidade
de processamento, o programa atual capaz de realizar milhares de iteraes a
mais que o antigo, porm em menos tempo, neste sentido o programa antigo
permitia at 200 iteraes, enquanto que o FERSOL2 ajustado inicialmente para
100.000 iteraes. Para a realizao de 200 iteraes o programa antigo consome
cerca de trs segundos, a verso atual realiza seu total de iteraes em tempo
menor que um segundo, mensurvel apenas pela estimativa dada pelo
processamento. Os limites mais abrangentes do sistema atual permitem que os
critrios de parada dos mtodos repetitivos possam ser mais rigorosos, gerando
graus de aproximao entre valores esperados e obtidos bem mais precisos
(THISTED, 1988). Apenas como exemplo, foi executado um experimento com o
programa antigo e o mesmo grupo de dados foi aplicado ao FERSOL2, o resultado
de biomassa final teve um erro de ajuste de 0,13% para o programa antigo e
0,001% para o atual, corroborando com as afirmaes anteriores.
A verso do programa utilizado como base, Fersol, apresentava limitaes
quanto gerao de grficos, principalmente quanto resoluo e escalas,

49
dificultando a sua anlise e, ainda, era impossvel transferir estes grficos para
outros recursos externos ao programa. Conforme discutido em seo anterior, a
gerao de grficos com melhor resoluo permite tirar melhores concluses quanto
aos resultados que estes representam. O uso de nova biblioteca grfica criou a
possibilidade de cpia para a rea de transferncia, ou seja, permite que estes
grficos sejam copiados para dentro de outros programas, gerando maior
praticidade na divulgao de resultados obtidos com o auxlio deste software, bem
como gerao de tabelas diretamente dos grficos, para anlise por outros
mtodos.
Os resultados numricos e seus grficos associados sero demonstrados e
discutidos nas prximas sees, quando da exposio do desempenho do sistema,
como um todo, para a anlise de diversos processos.

50
4 APLICAO DA FERRAMENTA EM PROCESSO COM BACTRIA
Este captulo visa apresentar os resultados da aplicao do sistema de
aquisio de dados, juntamente com o programa FERSOL2, num processo que
utiliza como microrganismo a bactria Xanthomonas campestris para produo de
goma xantana, atravs de FES. Apresenta tambm os resultados em forma de
tabelas e grficos do desempenho do programa comparado tcnica experimental
de avaliao de biomassa.
4.1 PROCESSO DE PRODUO DE GOMA XANTANA
A goma xantana, um polissacardeo de valor comercial devido a suas
excelentes propriedades reolgicas conforme Lima et al. (2001), incluindo sua
estabilidade temperatura e compatibilidade com vrios ingredientes que compem
alimentos, possui grande utilizao na indstria, sendo usada principalmente como
estabilizante, emulsionante e espessante (MAUGERI FILHO, 2001). Este produto
considerado atxico e aprovado pelo FDA (Food and Drug Administration) dos EUA
desde 1969, como aditivo em alimentos. No Brasil, a adio da goma xantana em
alimentos permitida desde 1965, pelo Decreto Lei no. 55.871, da Legislao
Brasileira de Alimentos (MAUGERI FILHO, 2001). Alm da indstria alimentcia, a
goma xantana pode ser tambm utilizada como aditivo para tintas e leos
automotivos, produtos cosmticos e farmacolgicos, em materiais txteis e outros.
A produo tradicionalmente feita atravs de fermentao submersa, porm
neste trabalho foi utilizada FES como alternativa, visando solucionar problemas
ligados ao aumento da viscosidade do meio, o que prejudica a transferncia de
oxignio, acarretando em perdas no rendimento final do processo (LO et al., 1997).
A produo de goma xantana por FES foi utilizada por Stredanski e Conti (1999),
porm com gros de malte, bagao de ma, bagao de uva e cascas de frutas
ctricas como substrato no processo. Neste trabalho a fermentao foi realizada com
o uso de resduos, os bagaos de cana-de-acar e de mandioca com o intuito de
baixar os custos e produzir uma maior quantidade de goma, devido reduo das
limitaes de transferncia de massa ocasionadas pela viscosidade do

51
polissacardeo disperso no meio, as quais esto presentes de forma mais sensvel
em fermentao submersa.
4.2 MICRORGANISMO UTILIZADO NESTE PROCESSO
Para este processo foi utilizada a bactria Xanthomonas campestris, cepa
LPB01, disponvel no Laboratrio de Processos Biotecnlogicos da UFPR (LPB), e
cedida pelo Instituto de Desarrollo Tecnolgico para la Indstria Qumica (INTEC),
de Santa F, Argentina.
4.3 FERMENTAO EM COLUNAS DE RAIMBAULT
As colunas receberam aerao forada, com vazo de 20 mL/min,
monitorada por sensor de vazo. Foram mantidas mergulhadas em banho com
temperatura controlada a 28C por 7 dias. Em cada coluna foi adicionado em torno
de 50 g de bagao de cana e 16 g de bagao de mandioca. A umidade utilizada
neste experimento foi de 84%, correspondente capacidade de absoro da
mistura dos bagaos.
Para a realizao das anlises de produo deste processo, uma coluna foi
retirada do banho a cada dia e, ento, providenciada a anlise da quantidade de
goma produzida. Para esta anlise, foi adicionada gua deionizada ao contedo do
frasco e posteriormente esta mistura foi submetida ao agitador mecnico (Ultra-
Turrax) por 20 minutos e ento filtrada em tecido de nylon para eliminao das
partculas slidas maiores. A soluo foi filtrada novamente, a vcuo, com uso de
papel de filtro. O lquido produzido foi diludo e centrifugado a 8000 g por 20
minutos em centrfuga refrigerada (marca Hitachi, modelo Himac CR21E) a 15C,
para eliminao de biomassa e demais slidos em suspenso. Na soluo
resultante foram adicionados 3 volumes de etanol, para a precipitao da goma
xantana diluda no meio. A goma precipitada foi filtrada novamente, a vcuo, em
papel de filtro seco a 70C por 24h, resfriado em dessecador e pesado. O conjunto
formado pela goma mais o filtro tambm foi seco na mesma temperatura por 24h,
resfriado e pesado. A diferena entre as duas medidas forneceu a quantidade de
goma presente no volume.

52
A quantificao dos gases consumidos, O
2
, e produzidos, CO
2
, foi feita
atravs do sistema de aquisio eletrnico, para posterior anlise respiromtrica.
4.4 ANLISE DE BIOMASSA POR MTODO EXPERIMENTAL
Decidiu-se pela retirada de uma coluna por dia, ao longo dos sete dias de
durao do teste, para anlise de quantidade de biomassa, para comparao final
com o sistema automtico. Desta forma a curva de crescimento da biomassa por
este processo apresentou apenas sete pontos. O contedo de cada coluna foi
extrado com 200 mL de gua deionizada, auxiliado por agitador mecnico. Para
minimizar a presena de contaminantes este procedimento foi realizado numa
cmara de fluxo, caso contrrio uma contaminao poderia comprometer a
contagem de UFC (Unidade Formadora de Colnias). Aps esta extrao, foi
tomada uma amostra de 1 mL, a qual foi diluda em 9 tubos, cada um contendo 9 mL
de gua peptonada 0,1%, por diluies sucessivas, obtendo-se tubos com as
seguintes concentraes: 10
-1
, 10
-2
,10
-3
,10
-4
,10
-5
,10
-6
,10
-7
,10
-8
e 10
-9
. Os tubos
contendo as diluies 10
-8
e 10
-9
foram utilizados para plaqueamento: tomou-se 1
mL da amostra de cada tudo e transferindo-a em Placa de Petri contendo meio de
cultura slido. Em seguida, em cada uma destas placas, foi feita a homogeneizao,
com uma ala de Drigalski, de forma a espalhar as bactrias. Aps este
procedimento, as placas foram incubadas em estufa a 28C por 48 horas. Decorrido
esse tempo, foi feita a contagem das colnias presentes em cada placa, em cmara
de Neubauer. A Tabela 1 apresenta o resultado desta contagem.
TABELA 1 - RESULTADO DA CONTAGEM DE UFC/ML
Tempo (horas) Contagem em UFC/mL x 10
13
0 0,08
24 3
75 4
123 6
166 7

53
4.5 RESULTADOS OBTIDOS COM AS FERRAMENTAS DE SOFTWARE
Esta seo apresenta os resultados obtidos atravs do uso de software de
aquisio de dados, (STURM et al. 2008b), e a posterior aplicao ao programa de
FERSOL2 e demais parmetros do processo. Conforme descrito, os sensores, j
calibrados para as faixas de atuao de cada grandeza do sistema, foram
conectados a controladores, os quais enviaram os dados para o sistema de
aquisio. Somente para este processo os sensores utilizados para medio de gs
carbnico foram por processo eletroqumico, modelo CO2-A1 do fabricante
Alphasense Limited, os quais apresentam como resultado um sinal em tenso
eltrica cuja variao logartmica em relao ao resultado do percentual no gs.
Para no tornar os arquivos gravados muito grandes o programa foi ajustado para
uma aquisio a cada quinze minutos, devido ao fato de no haverem grandes
mudanas no comportamento do processo neste perodo de tempo, assim os
resultados apresentados quanto aos gases envolvidos na respirometria esto
expostos nas Figuras 11 e 12.
Consumo de Oxi gnio g/h
0
0,002
0,004
0,006
0,008
0,01
0,012
0,014
0,016
0,018
1 10 19 28 37 46 55 64 73 82 91 100 109 118 127 136 145 154 163
horas

FIGURA 11 CONSUMO DE OXIGNIO DURANTE O PROCESSO DE
PRODUO DE GOMA XANTANA

54
Produo de CO2 g/h
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
1 21 41 61 81 101 121
horas

FIGURA 12 PRODUO DE GS CARBNICO NO PROCESSO DE
PRODUO DE GOMA XANTANA

A partir dos valores gravados pelo sistema de aquisio, foi calculada a
massa de oxignio consumida durante o processo, levando em considerao os
resultados simultneos de produo de gs carbnico.
TABELA 2 COMPARAO ENTRE OS MTODOS DE ESTIMATIVA
Tempo (dias) Tempo (horas) Contagem em UFC/mL x 10
13
Estimativa pelo Software
em UFC/mL x 10
13

0 0 0,08 0,08
1 24 3 3,85
3 75 4 5,96
5 123 6 6,44
7 166 7 7,01

A Tabela 2 apresenta os valores de biomassa estimados pelo programa,
comparados aos medidos por mtodo experimental.
Para uma visualizao facilitada, a Figura 13 mostra o crescimento da
biomassa total durante todo o processo. Os resultados esto apresentados em
UFC/mL x 10
13
para facilitar a leitura. Os resultados de contagem manual so
inteiros, exceto o valor em tempo zero que foi modificado em sua escala somente,

55
enquanto os estimados apresentam casas decimais devido ao mtodo de clculo
utilizado.
Bi omassa em UFC/mL x 10
13
0
1
2
3
4
5
6
7
8
1 10 19 28 37 46 55 64 73 82 91 100 109 118 127 136 145 154 163
horas
U
F
C
/
m
L

x

1
0

^
1
3

E
s
t
i
m
a
d
a
0
1
2
3
4
5
6
7
8
U
F
C
/
m
L

x

1
0

^
1
3

M
e
d
i
d
a

FIGURA 13 ESTIMATIVA DE CRESCIMENTO DE BIOMASSA PELO SOFTWARE

A Tabela 3 apresenta os parmetros calculados pelo software a partir dos
dados de crescimento da biomassa.
TABELA 3 PARMETROS DO PROCESSO CALCULADOS PELO PROGRAMA

Parmetro Valor (unidade)
Y
x/o
13,7009 (UFC/mL x 10^13/g O
2
)
() 0,00469 (h
-1
)
(m) 0,00047(g O
2
/UFC/mLx10^13.h)
(R) 0,8097
Filtragem Nenhum

Neste caso especificamente, a biomassa no foi calculada em massa para
que se pudesse comparar ao mtodo manual de contagem, assim os valores foram
inseridos no programa em UFC/mL e o rendimento, ou produo, Y
x/o
, indicado
acima deve ser considerado como UFC/mL x 10
13
por grama de oxignio. Este

56
resultado no adequado para comparao com outros processos onde os valores
so expressos em gramas de biomassa por grama de oxignio, pois os valores
numricos sero provavelmente bastante diferentes. O valor indicado de velocidade
especfica de crescimento (), durante a fase exponencial, e coeficiente de
manuteno tambm foram afetados por esta mudana de valores.
4.6 DISCUSSO DOS RESULTADOS DESTE PROCESSO
A comparao entre os valores de crescimento de biomassa obtidos pelo
mtodo de contagem experimental de UFC/mL e o apresentado pelo programa
demonstram algumas diferenas que, se analisadas diretamente, parecem ser
relativamente grandes. Cabe analisar, porm, que o mtodo experimental considera
contagem em nmeros inteiros de UFC/mL e o programa, atravs de mtodo
iterativo, busca o ajuste da curva de crescimento, com resultados apresentados por
nmeros racionais com vrias casas decimais, devido ao algoritmo de clculo. A
diferena perceptvel na maioria dos resultados est na ordem de dcimos, ou seja,
a contagem experimental no poderia expressar da mesma forma, de modo que a
estimativa pelo programa mostrou-se bastante coerente, com um coeficiente de
determinao, R
2
, de 0,8097 bastante adequado quando consideradas as
diferenas numricas.
O grfico de crescimento da biomassa apresenta de forma clara as fases
deste processo, com destaque para a fase exponencial, onde a maioria dos clculos
relativos aos parmetros do processo calculada.
O fato de inserir os valores na forma de UFC/mL e no em massa resultou e
valor numericamente grande, como sendo 13,7 (UFC/mL x 10^13/g O
2
) para o
rendimento Y
x/o
, se comparado a outros processos com estimativa realizada sobre o
valor dado em gramas. Da mesma forma o valor da velocidade especfica de
crescimento, indicado como 0,00469 (h
-1
) pode parecer baixo, em se tratando de
bactria como microrganismo analisado, cabendo levar em considerao a
diferena de unidades.
O uso de sensor eletroqumico de CO
2
demonstrou algumas desvantagens
devido ao sinal gerado ser logartmico, ou seja, pequenas variaes neste sinal
acarretaram em diferenas grandes no resultado, proporcional a produo deste

57
gs pelo processo. O grfico demonstrou um comportamento constante na produo
de CO
2
, com valor praticamente desprezvel, exceto nas proximidades do tempo de
10 horas a partir do incio e tambm prximos de 60 horas, desta vez de forma mais
expressiva. Embora fosse espervel uma sequncia crescente nos primeiros dias,
conforme grfico do consumo de O
2
, os valores de pico de produo de CO
2
foram
prximos dos respectivos picos de consumo de oxignio, ocorridos em torno de 10
horas e 60 horas. Mesmo estando estes valores praticamente sincronizados, a
ordem de grandeza na produo de gs carbnico apresentou desvios incoerentes
com o comportamento esperado teoricamente. Estes desvios seriam relacionados
aos erros gerados pelo sinal logartmico, bem como sua ordem de grandeza, dada
em mV, ser bastante susceptvel a interferncia de rudos eltricos provenientes do
prprio ambiente onde o sistema estava instalado. Os valores utilizados pelo
FERSOL2 foram os de consumo de oxignio, que apresentaram um comportamento
adequado frente aos objetivos deste experimento. O grfico de CO
2
foi aqui
apresentado apenas para acompanhamento de sua evoluo durante o processo,
embora no seja possvel seu uso diretamente para o clculo de coeficiente
respiromtrico, haja vista que a ordem de grandeza no parece adequada, mesmo
depois de considerados todos os erros provenientes de temperatura e demais
aproximaes. Este resultado motivou a substituio destes sensores por outros de
diferente base de funcionamento. Com o uso posterior de sensor de CO
2
por
infravermelho, nos demais processos, os resultados tornaram-se mais prximos do
que se esperava com base na literatura.
Este captulo apresentou os resultados relacionados ao primeiro processo
analisado pelo novo sistema, desta forma foi includo como indicador de algumas
pequenas modificaes, implementadas no sistema, com o intuito de minimizar os
problemas.
Tanto o sistema de aquisio de dados, incluindo os sensores, controladores,
rede de comunicao e software supervisrio, como o programa FERSOL2,
demonstraram coerncia nos resultados e relativa praticidade na manipulao dos
dados representativos do comportamento do processo. A utilizao do sistema para

58
avaliao do processo mostrou-se confivel quando comparado ao mtodo manual
de medio e contagem relativa ao montante de biomassa gerada. Os valores
apresentados esto bastante prximos entre si, considerando a contagem
experimental e os estimados automaticamente, o que pode motivar sua utilizao
como ferramenta de anlise, principalmente pela reduo de tempo e recursos
materiais e humanos necessrios.

59
5 APLICAO EM PROCESSO COM FUNGO
Neste captulo esto expostos os resultados da aplicao da ferramenta
computacional num processo utilizando como microrganismo o fungo A. niger FS3
para produo da enzima fitase, por fermentao em estado slido. Apresenta como
complemento os resultados relacionados avaliao de crescimento da biomassa
estimada em comparao direta com a respectiva produo de fitase.
5.1 PROCESSO DE PRODUO DE FITASE
A produo de enzimas vem promovendo o crescimento dos estudos e
aplicaes dentro da rea biotecnolgica, sendo que este mercado movimenta
cerca de dois bilhes de dlares, em termos internacionais, por ano (BINOD et al,
2008). Dentro deste contexto, a comercializao de fitase estaria na ordem de
duzentos milhes de dlares (GREINER e KONIETZNY, 2006).
A fitase (mio-inositol hexafosfato fosfohidrolase) pode ser encontrada nos
tecidos animais e vegetais, em diversas espcies de fungos e bactrias. Esta
enzima hidrolisa o cido ftico em inositol e fosfato inorgnico (SILVA e TRUGO,
1996). Hidrolisando os resduos de fosfato do cido ftico, a enzima diminui a forte
afinidade do fitato por certos minerais (SANDBERG e ANDERSON, 1988). Nas
matrias-primas, de origem vegetal, utilizadas na alimentao animal como gros de
cereais, sementes oleaginosas e legumes, grande parte do fsforo mineral est
armazenada na forma de cido ftico, o qual no degradado pelos animais
monogstricos, como porcos, galinhas e peixes (PANDEY et al. 2001). Desta forma,
a fitase, alm de promover uma melhor digesto de alguns dos componentes nos
animais monogstricos, aproveitando fsforo mais adequadamente, tambm reduz a
quantidade deste elemento excretado pelo animal, reduzindo, assim, a poluio
provocada pelo excesso deste no meio ambiente.
A forma comercialmente mais adequada de produo de fitase a sntese
efetuada pela membrana celular de microrganismos como bactrias e leveduras,
entretanto os fungos so os mais utilizados (PANDEY et al. 2001). O processo de
produo utilizava inicialmente o mtodo de fermentao submersa, porm a

60
fermentao no estado slido (FES) tem despertado grande interesse, devido aos
bons rendimentos apresentados.
Para a produo da enzima foi utilizado o fungo A. niger FS3, isolado a partir
de amostras de solo conforme Spier et al. (2008), aps ter sido mantido para
crescimento em PDA durante oito dias a 30C.
5.3 FERMENTAO EM BIORREATOR TIPO COLUNA
A fermentao em estado slido foi desenvolvida em biorreator tipo coluna de
vidro. Cada coluna com as medidas de 20 cm de comprimento e 4 cm de dimetro.
Como substrato foi utilizado polpa ctrica com granulao entre 0,8 mm e 2,0 mm
fornecidas pela indstria Cargill (Brasil). Para o experimento foram lanadas dez
colunas com 85 g de meio cada, com temperatura mantida em 30C pelo sistema de
medio e controle, atravs da imerso das colunas em gua, na qual se
encontrava o sensor de temperatura. O meio fermentado foi avaliado aps 96 horas
para verificao de atividade de fitase.
5.4 ANLISE DE BIOMASSA PELO MTODO DE EXTRAO DE ERGOSTEROL
Este mtodo baseado na presena de Ergosterol, como um dos elementos
constituintes da membrana celular do microrganismo. Desta forma pode ser usado
como meio de medio indireta da biomassa, porm est sujeito a desvios neste
valor causados pela interferncia de outros elementos do substrato, geralmente
heterogneo (TEREBIZNIK e PILOSOF, 1999).
Para a determinao de biomassa real foram retiradas amostras de 1 g de
substrato fermentado de cada uma das colunas do reator. A anlise das amostras
foi feita com base no mtodo descrito por Carvalho et al. (2006). O preparo inicial foi
feito pela adio de 4 mL de etanol e 2 mL de hidrxido de sdio, NaOH 2M,
amostra de 1 g, a qual foi incubada em banho com gua durante uma hora a 70C.
Depois de decorrido este tempo foi adicionado 4 mL de cido clordrico, HCI 1M, e
a amostra foi agitada. Foi realizada nova adio de 2 mL de KHCO
3
1M e 4 mL de

61
n-hexano e nova agitao, aps a qual foi feita centrifugao a 4536 g por 5
minutos. O sobrenadante foi novamente centrifugado, aps evaporao do solvente
e adio de 4 mL de n-hexano por 3 minutos. Uma ltima centrifugao, por 2
minutos, foi feita depois de acrescentado 2 mL de n-hexano. Os extratos obtidos por
este processo foram analisados por um HPLC (High performance liquid
chromatography) Varian ProStar com coluna tipo C18 e ajuste em 282 nm.
5.5 RESULTADOS ESTIMADOS PELAS FERRAMENTAS DE SOFTWARE
Nesta seo esto apresentados os resultados obtidos atravs do uso do
software e a comparao com o mtodo descrito na seo anterior como indicao
de validade das estimativas feitas pelo programa e um dos mtodos mais usuais de
determinao de biomassa.
5.5.1 Valores Obtidos pelo Sistema de Aquisio
Para o clculo das massas de oxignio e gs carbnico, foi mantida uma
vazo mdia de 67,7 mL por minuto na aerao das colunas. A Figura 14 mostra o
comportamento desta varivel durante o perodo de fermentao.
Vazo mL/mi n
0
20
40
60
80
100
1 7 13 19 25 31 37 43 49 55 61 67 73 79 85 91
horas

FIGURA 14 VAZO MONITORADA DURANTE O PROCESSO
O processo, de acordo com o metabolismo do fungo, consome oxignio e
produz gs carbnico. Atravs dos sensores, os valores gerados pela emisso de
gases de entrada e sada do biorreator esto apresentados nas Figuras 15 e 16.
Para que a estimativa de biomassa possa ser feita, deve haver uma relao entre a

62
produo de CO
2
e o consumo de O
2
, o chamado coeficiente respiromtrico. O
comportamento deste parmetro est demonstrado na Figura 17, mostrando a
estabilidade das trocas gasosas promovidas pelo processo. O valor mdio do
coeficiente respiromtrico foi 1,16 quando calculado em moles, considerando que
este valor deveria ficar prximo de 1 para processos desta natureza.
Oxigni o Consumi do g/h
0
0,05
0,1
0,15
0,2
1 7 13 19 25 31 37 43 49 55 61 67 73 79 85 91
horas

FIGURA 15 OXIGNIO CONSUMIDO

Gs Carbni co Produzi do g/h
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
1 7 13 19 25 31 37 43 49 55 61 67 73 79 85 91
horas

FIGURA 16 GS CARBNICO PRODUZIDO

63
Coefi ci ente Respi romtri co (mol CO2/mol O2)
0
0,5
1
1,5
2
1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51 56 61 66 71 76 81 86
horas

FIGURA 17 COEFICIENTE RESPIROMTRICO

Bi omassa Esti mada (g)
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1 7 13 19 25 31 37 43 49 55 61 67 73 79 85 91
horas

FIGURA 18 BIOMASSA ESTIMADA PELO PROGRAMA
A Tabela 4 mostra os valores comparativos entre as biomassas estimadas e
medidas.
TABELA 4 COMPARAO ENTRE OS MTODOS

Tempo (h) Biomassa Estimada(g) Biomassa Medida(g) Erro (%)
0 0,103 0,103 0,03
24 0,162 0,250 34,98
48 0,623 0,589 5,71
72 0,839 0,815 2,97
96 0,921 0,922 0,08

64
Para o processo de determinao por ergosterol, foram tomadas amostras no
incio da fermentao, no final e a cada 24 horas.
Para facilitar a visualizao a Figura 19 reapresenta os valores comparativos
de biomassas entre os mtodos. A correlao entre os conjuntos de valores foi
calculada em 0,994. Este valor seria igual a 1 se ambos os grficos tivessem
comportamento idntico.
Comparao entre Mtodos
0,000
0,200
0,400
0,600
0,800
1,000
1 2 3 4 5
Amostras
Estimada
Medida

FIGURA 19 COMPARAO ENTRE BIOMASSA ESTIMADA E MEDIDA
Da mesma forma a Figura 20 mostra a comparao com os valores de
biomassa estimada e medida em eixos diferentes, mostrando um coeficiente de
determinao R
2
de 0,988.
Comparao Entre Mtodos XY
R
2
=0,988
0,000
0,200
0,400
0,600
0,800
1,000
0,000 0,200 0,400 0,600 0,800 1,000
Biomassa Medi da
B
i
o
m
a
s
s
a

E
s
t
i
m
a
d
a

FIGURA 20 BIOMASSA ESTIMADA E MEDIDA EM DOIS EIXOS

65
5.6 DISCUSSO DOS RESULTADOS DESTE PROCESSO
Durante o processo de fermentao foram colhidas amostras e determinadas
as biomassas. Os dados medidos foram comparados aos estimados, com uma
correlao bastante expressiva e com coeficiente de determinao R
2
= 0,988,
demonstrando a coerncia dos mtodos aplicados pelo programa para a gerao
destes valores. De posse dos valores medidos, a velocidade especfica de
crescimento () foi calculada conforme Spier (2008). O valor deste parmetro foi
idntico ao gerado pelo software, ou seja, ( =0,05h
-1
), corroborando com os
mtodos utilizados no programa para a determinao da regio linear, segmento do
grfico onde esta velocidade calculada, e demais mtodos envolvidos.
A Tabela 5 mostra os valores de biomassa estimada e os valores de
atividade de fitase e para melhor visualizao deste comportamento a Figura 21
mostra as curvas de cada um. De acordo com Spier (2008) a atividade de fitase
associada ao crescimento da biomassa. Esta caracterstica pde ser observada
pelos dados relacionados ao processo, indicados na Figura 21. Para validar este
item, a correlao entre conjuntos foi calculada em 0,993 e, ainda como
confirmao, as velocidades especficas foram determinadas em 0,05 h
-1
para a
biomassa e 0,08 h
-1
para a atividade de fitase. Estes resultados mostram a grande
relao entre a atividade da enzima e o crescimento da biomassa.
TABELA 5 RELAO ENTRE ATIVIDADE DA ENZIMA E BIOMASSA

Tempo
(h)
Atividade Fitase
(U/gds)
Biomassa estimada
(gds)
0 0 0,1027
6 0 0,1027
12 0,95 0,1027
24 10,18 0,1622
36 20,15 0,3909
48 48,1 0,623
60 67,96 0,7624
72 77,64 0,8394
84 84,19 0,8897
96 89,83 0,9209

66
Atravs do programa foi estimado o valor do coeficiente de manuteno, o
qual apresentou valor de 0,08 (gO
2
/ g de biomassa hora), compatvel com o
processo de fermentao com fungos.
Associao Produto Biomassa
0
20
40
60
80
100
0 6 12 24 36 48 60 72 84 96
horas
U
/
g
d
s
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
g
d
s
Fitase
Biomassa

FIGURA 21 ATIVIDADE DE FITASE E CRESCIMENTO DA BIOMASSA
Na exposio deste captulo possvel verificar os resultados obtidos pelo
novo sistema e a comparao com mtodo usual de determinao de biomassa. Os
valores relacionados estimativa de biomassa mostraram-se bastante prximos aos
medidos pelo mtodo de extrao de ergosterol, contribuindo, desta forma, para a
validao dos algoritmos utilizados no programa, haja vista que a localizao da
regio linear, na curva logartmica de biomassa, feita automaticamente pelo
software e nesta regio so calculados os parmetros do processo. Clculos foram
feitos por mtodos manuais, pela observao direta dos grficos iniciais e posterior
determinao das regies de interesse, bem como dos procedimentos para
levantamento dos parmetros conforme Spier (2008). Os resultados alcanados
foram prximos numericamente e no caso de alguns valores de biomassa estimada
seu comportamento foi correlacionado ao grfico de medies experimentais, ou
seja, as variaes em cada um deles foram avaliadas e este procedimento revelou
grande coerncia, conforme exposto, em aproximadamente 0,993 num mximo
estatstico de 1 que, considerando dados experimentais sujeitos a incertezas de
processo, provaram sua validade matemtica.

67
Durante este processo, o sistema de aquisio de dados, incluindo todos os
seus componentes, foi adequado para a confirmao da associao de produo da
enzima fitase com o respectivo crescimento da biomassa, bem como o
monitoramento do coeficiente respiromtrico para garantir a validade da
metodologia utilizada para determinao dos outros parmetros (PANDEY et al.,
2001).
O valor do coeficiente respiromtrico apresentou valor mdio de 1,1 sendo
seu valor terico para este processo igual a 1, quando todo o valor de massa de
oxignio consumido transformado em gs carbnico. Embora este valor esteja
ligeiramente acima do esperado no se caracterizou como processo anaerbio,
conforme pode ser analisado pelo grfico deste parmetro.

68
6 APLICAO EM PROCESSO COM MUDANA DE ESCALA
No presente captulo esto expostos os resultados de um processo que,
embora utilize como microrganismo o fungo A. niger FS3, tambm para produo da
enzima fitase, como descrito em captulo anterior, apresenta a aplicao na
metodologia de mudana de escala. Para atingir este objetivo so demonstrados os
comportamentos relativos a volumes de 1 kg, 2 kg e 10 kg de polpa ctrica em
fermentao em estado slido.
6.1 PROCESSO DE MUDANA DE ESCALA
Para que os processos testados e desenvolvidos possam ser utilizados em
maiores escalas, torna-se necessria a aplicao de metodologia adequada
(SERMANNI e TISO, 2008). A partir de uma escala menor, usada em laboratrio, o
processo passa por experimentos sem a necessidade de grande disponibilidade de
material. Durante esta fase podem ser feitos ajustes conforme o comportamento do
processo, bem como a possvel otimizao do mesmo. Para que se mantenha a
condio de investimento em material e energia, o processo pode ser modificado
para uma escala semi-piloto, ou piloto, onde outros aspectos devem ser
considerados, como por exemplo, caractersticas mecnicas, s quais tanto o
substrato quanto os microrganismos estaro sujeitos, incluindo a prpria demanda
energtica do processo. Quando as adaptaes j foram implementadas e demais
ajustes realizados, pode-se atingir a escala industrial, visando produo em
quantidade e reduo de custos por demanda.
Para a gerao do produto de interesse foi utilizado o fungo A. niger FS3,
como indicado em Spier et al. (2008). Nesta seo, a modificao foi apenas nas
quantidades de substrato e inculo, de acordo com cada escala em estudo.

69
6.3 FERMENTAO EM BIORREATOR TIPO TAMBOR HORIZONTAL
Em todas as trs escalas escolhidas para este estudo, foram utilizados os
biorreatores do tipo tambor horizontal (SERMANNI e TISO, 2008). Os volumes
internos foram tais que a massa de meio slido ocupasse apenas cerca de um tero
do volume, permitindo a circulao dos gases insuflados e gerados pelo prprio
processo.
Para que no houvesse regies preferenciais para a circulao de ar, o que
poderia promover um crescimento heterogneo da biomassa, foi pr-determinada a
ao de misturar periodicamente o meio slido.
As massas de meio slido usadas, de forma a aumentar gradativamente a
escala, foram de 1 kg, 2kg e 10 kg.
6.4 ANLISE DE BIOMASSA PELO MTODO DE EXTRAO DE ERGOSTEROL
A medio de biomassa experimental foi feita com base no mtodo descrito
por Carvalho et al. (2006), e de forma semelhante ao descrito no Captulo 5, os
respectivos extratos obtidos foram analisados por um HPLC (High performance
liquid chromatography) Varian ProStar com coluna tipo C18 e ajuste em 282 nm.
6.5 RESULTADOS APRESENTADOS PELAS FERRAMENTAS DE SOFTWARE
Esta seo expe os resultados obtidos pelo uso do software e uma
comparao com os obtidos pelo mtodo descrito na seo anterior, de modo que
haja possibilidade de anlise de validade das estimativas feitas pelo programa.
Alguns resultados auxiliares foram gerados, como a indicao de associao entre
a produo de fitase e o respectivo crescimento da biomassa.
6.5.1 Valores Determinados pelo Sistema de Aquisio
Em cada uma das escalas testadas foi determinada uma vazo mdia
necessria para o clculo das massas de oxignio e gs carbnico. As Figuras 22,
23 e 24 mostram os resultados relativos a esta varivel durante o processo de
fermentao para cada massa de meio slido.

70
Vazo L/h
0
20
40
60
80
100
1 9 17 25 33 41 49 57 65 73 81 89 97 105 113
horas

FIGURA 22 - VAZO DE AR PARA O REATOR DE 1 KG

Vazo L/h
0
50
100
150
200
1 9 17 25 33 41 49 57 65 73 81 89 97 105 113
horas


71
Vazo L/h
0
200
400
600
800
1 9 17 25 33 41 49 57 65 73 81 89 97 105 113
horas

Os valores de vazo foram determinados de acordo com o metabolismo do
fungo e do reator em questo. Para o reator com massa de 1 kg foi ajustada uma
vazo mdia de 60 L/h, para o de 2 kg uma vazo de 120 L/h e para o de 10 kg uma
vazo de 600 L/h.

Oxi gni o Consumi do x Gs Carbni co Produzi do g/h
0,000
1,000
2,000
3,000
1 10 19 28 37 46 55 64 73 82 91 100 109
horas
O2 Consumido CO2 produzido

FIGURA 25 COMPORTAMENTO RESPIROMTRICO REATOR DE 1 KG

Os valores de vazo foram definidos com base no critrio de escalonamento
de aerao constante, ou seja, em todos os casos este valor foi de 1L/min/kg de
meio. Neste processo o fungo consome oxignio e produz gs carbnico. A medio

72
destes gases pelos sensores apresentou os valores expostos nas Figuras 25, 26 e
27.

0,000
2,000
4,000
6,000
1 10 19 28 37 46 55 64 73 82 91 100 109
horas

0,00
2,00
4,00
6,00
1 10 19 28 37 46 55 64 73 82 91 100 109
horas


A produo de gs carbnico est diretamente relacionada ao consumo de
oxignio. Com o intuito de evidenciar esta dependncia, foram calculados os
coeficientes de determinao (R
2
) dos conjuntos de valores em cada escala, cujos
valores foram 0,85 para o reator de 1 kg, 0,89 para o de 2 kg e 0,88 para o de 10

73
kg. Estes valores demonstram a correlao esperada no que se refere ao
comportamento respiromtrico dos processos em estudo.
6.5.2 Resultados de Biomassa Estimada pelo Programa
Para facilitar a anlise, os Grficos 28, 29 e 30 abaixo mostram os valores de
biomassa estimados pelo programa e tambm os valores experimentais, medidos
conforme seo anterior. As estimativas feitas pelo programa esto baseadas no
perfil de consumo de oxignio, bem como nos valores iniciais e finais de biomassa
em cada um dos reatores e respectivas escalas.
Bi omassas Esti mada e Experi mental g
0,00
100,00
200,00
300,00
0 48 72 96 120
horas
Biomassa Estim. g Biomassa Exp. g

FIGURA 28 BIOMASSAS ESTIMADA E EXPERIMENTAL REATOR DE 1KG
0
200
400
600
800
0 48 72 96 120
horas


74
0,00
1000,00
2000,00
3000,00
4000,00
0 48 72 96 120
horas

Embora existam discrepncias entre os valores estimados pelo programa e
os valores medidos experimentalmente, o comportamento de ambos foi analisado
atravs do coeficiente de determinao (R
2
) cujos valores foram 0,97 para o
processo com 1 kg de meio, para o de 2 kg o resultado foi 0,99 e para o reator com
10 kg foi 0,95. Estes indicadores demonstram que os valores estimados
acompanham os medidos de forma bastante prxima.
6.5.3 Outros Resultados Apresentados pelo Programa
As tabelas abaixo mostram os parmetros do processo apresentados pelo
software.
TABELA 6 PARMETROS CALCULADOS PARA REATOR DE 1 KG

Parmetro Total
0 a 48 horas
0 a 72 horas 72 a 120 horas
Y x/o (g/g) 1,974 1,381 2,173 1,607
(h
-1
) 0,026
0,021
0,034 0,006
m (g O2/g biom. h) 0,005
0,017
0,007 0,016

Para uma anlise segmentada por fases do processo os valores foram
calculados nos intervalos indicados. Os valores de produo de biomassa em
relao ao oxignio consumido (Y x/o), para o reator de 1 kg, demonstram que no
intervalo at 72 horas a taxa desta transformao foi mais intensa, com valor de
2,173 g/g, o que tambm pode ser considerado pelo prprio grfico de crescimento

75
da biomassa. Sob este aspecto, a velocidade especfica de crescimento tambm
concorda com este intervalo, apresentando seu maior valor. O coeficiente de
manuteno, por sua vez, sugere que a maior parte do consumo energtico foi
devida ao crescimento da biomassa, com menor valor proporcional neste intervalo.

Parmetro Total 0 a 48 horas 0 a 72 horas 72 a 120 horas
Y x/o (g/g) 3,110
3,843
3,539 2,393
(h
-1
) 0,032
0,040
0,044 0,007
m (g O2/g biom. h) 0,003 0,006 0,004 0,011

Para o reator com 2 kg percebe-se que houve um maior crescimento dentro
do intervalo at 48 horas a partir do incio do processo. O valor de Yx/o apresenta
seu mximo neste intervalo, com uma taxa maior de transformao relativa. O
resultado relacionado ao coeficiente de manuteno apresenta a condio de que
no ltimo segmento do processo houve maior consumo energtico no sentido de se
manterem vivos os microrganismos em comparao com o desgaste ligado ao
crescimento em nmero e, consequentemente, em massa. A velocidade especfica
de crescimento manteve-se, praticamente, constante at o perodo de 72 horas,
diminuindo na ltima fase estimada do processo.

Parmetro Total
0 a 48 horas
0 a 72 horas 72 a 120 horas
Y x/o (g/g) 3,168
6,623
4,009 2,161
(h
-1
) 0,024
0,031
0,031 0,006
m (g O2/g biom. h) 0,003 0,003 0,003 0,012

Os resultados relacionados ao reator com 10 kg demonstraram uma
velocidade especfica de crescimento constante at o perodo de 72 horas, de forma
semelhante ao reator anterior. A taxa de transformao de oxignio consumido em
biomassa foi maior no perodo entre o incio e 48 horas, mostrando no ltimo
segmento um decrscimo mais significativo quando comparado aos outros
intervalos, ou seja, uma desacelerao pode ser percebida, a qual confirmada
pelo valor da velocidade especfica. Neste processo o valor do coeficiente de

76
manuteno foi constante, exceto no ltimo perodo, onde surge um aumento
expressivo, novamente indicando que durante o processo o consumo energtico foi
mais direcionado ao aumento da populao em forma de biomassa, enquanto que
no perodo final a biomassa j no sofre um aumento considervel em relao ao
tempo, indicando um proporcional aumento na quantidade de energia direcionada
sobrevida do microrganismo.
6.6 DISCUSSO DOS RESULTADOS DESTE CAPTULO
Neste captulo o trabalho foi desenvolvido como auxlio ao procedimento de
mudana de escala de produo de fitase, com uso de polpa ctrica como substrato.
Os resultados apresentados demonstraram coerncia quanto ao comportamento do
processo em cada uma das ordens de grandeza testadas. Durante a fermentao
foram colhidas amostras nas quais foi realizada anlise posterior, atravs de HPLC,
pelo mtodo de ergosterol. A comparao entre os valores de biomassa estimados e
medidos serve como indicao do grau de proximidade alcanado pelo software,
validando assim o seu uso como ferramenta dentro da metodologia utilizada para o
aumento de escala.
Associ ao Produto Bi omassa
0,00
200,00
400,00
600,00
800,00
0 48 72 96 120
horas
B
i
o
m
a
s
s
a

0
20
40
60
80
F
i
t
a
s
e
Biomassa g Fitase U/g

FIGURA 31 - RELAO ENTRE ATIVIDADE DA ENZIMA E BIOMASSA
A avaliao grfica do crescimento da biomassa permitiu outra verificao,
relacionada associao da produo da fitase ao crescimento, conforme pode ser
visto na Figura 31, onde os valores de biomassa usados foram os estimados pelo

77
FERSOL2. Esta anlise foi feita para o reator de 2 kg, embora os resultados para as
outras escalas tenham sido bastante semelhantes. O coeficiente de correlao entre
estes comportamentos foi de 0,98. Este valor concorda com o resultado previsto
conforme descrito por Spier (2008).
Na concepo inicial do sistema de aquisio de dados, foi verificada a
necessidade de utilizar-se sensor de vazo adequado para minimizar os erros
gerados pelas medies muito prximas dos extremos de suas faixas de atuao.
Durante os experimentos aqui descritos no foi necessria a mudana deste sensor,
embora a faixa de valores apresente diferenas na ordem de dez vezes.
Os valores de vazo demonstraram maior estabilidade, principalmente nas
escalas maiores, devida ao uso de um compressor de ar exclusivo para cada
processo, de modo que fossem minimizadas as interferncias relacionadas a
eventuais diferenas de presso. No caso da primeira escala houve uma variao
proporcionalmente maior devido a dificuldades no ajuste de menores vazes pelo
sistema disponvel utilizado.
Os grficos relacionados ao consumo de oxignio comparado produo de
gs carbnico foram conclusivos no que se refere proporo entre estas duas
mudanas gasosas no processo de fermentao, reforado pelos coeficientes de
correlao calculados para estas grandezas.
A perceptvel concordncia entre os grficos de crescimento da biomassa
gerados pelo software e seus respectivos valores medidos demonstra a capacidade
de estimativa dos algoritmos utilizados. Mesmo na condio de maiores amplitudes
nas diferenas, o processo apresentou um comportamento bastante semelhante,
quanto aos perodos de maior crescimento e estabilidade posterior, evidenciados
pelo resultado do seu coeficiente de correlao relativamente alto. A mdia do
coeficiente de determinao (R) foi de 0,97 considerando todos os experimentos
relacionados mudana de escala, assim o resultado de biomassa estimado pelo
FERSOL2 foi novamente validado pela comparao com mtodo experimental.
Os parmetros determinantes do acompanhamento do processo, gerados
pelo FERSOL2, mostraram coerncia em cada uma das fases testadas, mtodo

78
usado, neste caso, para buscar uma caracterizao fragmentada, com intuito de
expor de forma mais sensvel o comportamento em cada segmento dentro do tempo
total de fermentao.
Em se tratando de processo ligado produo da enzima fitase, um teste
final proporcionou a confirmao da associao de atividade desta enzima frente ao
crescimento da biomassa, com grau de proximidade bastante elevado indicado pelo
coeficiente de correlao de 0,98. Este indicador concorda com os resultados
apresentados por Spier (2008), onde o valor foi de 0,99 num volume bastante
inferior de biomassa.

79
7 APLICAES PARCIAIS DAS FERRAMENTAS
Embora com o uso apenas parcial das ferramentas desenvolvidas, este
captulo demonstra aplicaes nas quais o sistema auxiliou em processos que no
so classificados como fermentao em estado slido ou mesmo submersa. Devido
a condio de medio do sistema ser bastante verstil e na presena de
necessidades semelhantes por outros experimentos, decidiu-se por avaliar a
capacidade de adaptao, tanto dos sensores e controladores, quanto das
caractersticas fsicas e mecnicas do sistema.
Nestes casos o sistema de aquisio de dados, bem como a posterior anlise
dos resultados, foi suficiente para atingir os objetivos propostos durante o estudo de
comportamento dos processos. Auxiliou tambm no levantamento de informaes
para a caracterizao dos mesmos.
7.1 PROCESSO DE CRESCIMENTO DE CLULAS VEGETAIS
Para a anlise respiromtrica, utilizada posteriormente para o desenvolvimento
de um modelo matemtico para o biorreator de imerso por bolhas (B.I.B.)
patenteado por Soccol et al. (2008), o sistema de aquisio de dados foi utilizado,
porm com algumas limitaes. Devido pequena quantidade de biomassa, com a
conseqente reduo da capacidade de trocas gasosas, seja por respirao ou
fotossntese, os resultados referentes ao consumo ou produo de Gs Carbnico
foram inferiores aos passveis de medio com os sensores utilizados, devido a
sensibilidade especificada no ser suficiente para este tipo de aplicao (SCHEIDT,
2008).
7.1.1 Organismo Utilizado neste Processo
As clulas vegetais utilizadas durante este experimento foram de Orqudeas
Oncidium leucochilum. Esta espcie, conforme Scheidt (2008), natural do Mxico,
Guatemala e Honduras, pases onde pode ser encontrada em florestas midas e
altitudes variveis de 500 a 2.000 metros. A escolha desta espcie foi feita com
base em seu fcil cultivo in vitro, e por existir, tambm, interesse comercial em sua
produo.

80
7.1.2 Biorreator Desenvolvido para Clulas Vegetais BIB
O uso do sistema foi feito com o intuito de auxiliar nas tarefas de ajustes
necessrios ao processo, propondo a possibilidade de se atingir a escala industrial
de produo, visando a reduo de custos por demanda.
Em se tratando de trabalhos referentes micropropagao de plantas, dois
tipos de biorreatores so os mais usados, conforme Scheidt (2008), os biorreatores
de imerso temporria, expondo temporariamente a soluo nutritiva aos explantes,
e os de imerso permanente, mantendo o contato dos explantes durante toda fase
de cultivo. Neste trabalho, o sistema novo desenvolvido partiu do princpio de que
as plantas podem absorver mais nutrientes no sistema de imerso por bolhas,
comparado ao tradicional, melhorando sua produtividade e reduzindo, assim, o
custo de plantas por unidade produzida. A Figura 32 mostra o esquema do reator
desenvolvido.

FIGURA 32 - ESQUEMA DO REATOR: A) Sada de ar, B) Kit fixao, C)
Estgios, D) Placa porosa, E) Base, F) Entrada de ar.
Fonte: Soccol et al. (2008).

81
7.1.3 Resultados Obtidos com o Sistema de Aquisio
Para o trabalho de levantamento de informaes necessrias posterior
elaborao do modelo matemtico do reator, foram feitas medies com o sensor de
vazo, ligado ao software de aquisio de dados. A observao do comportamento
do reator permitiu que se determinasse um valor mximo de vazo de 9 L/min para o
modelo desenvolvido. A limitao se deve ao aumento de presso no sistema de
filtrao, ocorrendo vazamentos com vazes excessivas (SCHEIDT, 2008). O
procedimento de medio de vazes, comparando-se o resultado esperado de
altura de soluo nutritiva, demonstrou que vazes entre 5 L/min e 6 L/min foram
suficientes para manter esta altura em cerca de 15 cm, valor adequado para cobrir
todos os trs estgios do reator em estudo.
Devido ao valor reduzido de vazo, comparado ao volume do reator, e a
baixa taxa de transformao de oxignio em gs carbnico e o comportamento
inverso, durante a fotossntese, foi possvel verificar que os sensores de CO
2

apresentaram sensibilidade insuficiente para que o programa pudesse registrar
concentraes. Entretanto, os sensores de oxignio apresentaram sensibilidade
suficiente para que o sistema pudesse registrar os perodos de respirao e
fotossntese. Embora com percentuais bastante reduzidos, devido ao volume de ar
utilizado no reator e a capacidade de transformao dos gases pelos explantes, cuja
biomassa tambm seria bastante pequena para realizar tais trocas gasosas. A
sucesso destes perodos foi determinada assumindo-se que a percentagem de
oxignio na entrada permaneceu praticamente constante, a qual foi comparada com
a percentagem na sada do sistema de imerso. Esta condio fez com que os
valores de consumo de oxignio fossem na ordem de centsimos de percentual. A
inverso no valor de consumo indica, na verdade, a produo deste gs. A Figura
33, mostra a variao do percentual de oxignio, considerando-se a diferena entre
entrada e sada do sistema, onde possvel verificar o ciclo de respirao e
fotossntese. Este ciclo apresentou valores mdios de respirao de 10 horas e 42
minutos e fotossntese durante 13 horas e 4 minutos. O tempo de fornecimento de
luz artificial foi de 16 horas, o que demonstra um pequeno atraso em relao
exposio de luz e sua respectiva reao em termos de realizao de fotossntese.

82
Consumo de O2%
-0,15
0,05
0,25
1 26 51 76 101 126 151 176 201 226 251 276 301 326 351 376 401 426 451
horas

FIGURA 33 - CICLO DE RESPIRAO E FOTOSSNTESE NO CONSUMO DE O2
7.1.4 Concluso
O sistema de aquisio, incluindo sensores e demais componentes, foi
concebido, inicialmente, para o uso em processos de fermentao em estado slido.
Nestes os valores de consumo e produo de gases so mais expressivos, nos
quais foram baseadas as especificaes dos dispositivos de medio.
Nesta parte da pesquisa, o principal objetivo foi auxiliar no levantamento de
informaes pertinentes para a determinao de um modelo matemtico do reator
em estudo. Os resultados relacionados vazo foram de grande utilidade para a
concepo do modelo, mostrando inclusive algumas das limitaes do reator real.
As medies feitas com os sensores de gs foram suficientes para a
verificao do comportamento das clulas vegetais em termos de ciclos de
respirao, corroborando com o previsto, dados os ciclos determinados
artificialmente pela irradiao de luz sobre o reator. Para melhorar a condio de
medio, sem a modificao de especificaes dos sensores, seria necessria
quantidade maior de explantes, aumentando consideravelmente a condio de
transformao gasosa em valores mensurveis pelo sistema, no tempo avaliado.
Para uma melhor anlise dos resultados apresentados pela Figura 33
necessrio levar em considerao a ordem de grandeza utilizada, ou seja, os
valores esto em centsimos de percentual, com escala variando entre -0,15% e
0,25%, assim fica demonstrado que a quantidade de biomassa ativa seria bastante
reduzida quando comparada aos requisitos que levaram especificao dos
sensores. Os sensores de oxignio possuem uma sensibilidade relacionada ao valor
de umidade relativa, conforme AlphaSense, (2009a), assim foi calculado o desvio a

83
partir dos valores registrados pelo sistema da umidade relativa percentual presente
na sada do processo, cujo valor mdio foi de 83,3%.
7.2 PROCESSO DE CULTIVO DE MICROALGA EM MANIPUEIRA
Neste trabalho foi realizado um estudo para o desenvolvimento de bioprocesso
para o cultivo da microalga (Chlorella minutissima), utilizando como substrato a
manipueira (BORGHETTI, 2009). De acordo com Cereda (2001), a manipueira o
resduo liquido mais importante decorrente do processamento da mandioca, sendo
sua produo estimada na ordem de 30%, quando comparada ao peso de matria-
prima em fbricas de farinha, constituindo um montante bastante elevado frente
capacidade de absoro natural do meio ambiente, gerando grande impacto
ecolgico. O objetivo de produzir biomassa de microalga, neste meio, est baseado
no seu alto teor de amido, compostos cianognicos e de sais minerais, ainda com
altos nveis de nitrognio, caractersticas estas que possibilitam o desenvolvimento
de microrganismos (CEREDA, 2001).
7.2.1 Microalga Utilizada neste Processo
As microalgas so microrganismos fotossintticos microscpicos. Podem ser
coloniais ou filamentosos, geralmente coloridos. Filogeneticamente podem ser
classificados como procariticos ou eucariticos (OLAIZOLA, 2003). Ainda conforme
Olaizola (2003), estes microrganismos no so um grupo muito estudado, sob o
ponto de vista biotecnolgico, pois, dentre as mais de dez mil espcies de
microalgas supostamente existentes, pouco mais de mil linhagens so mantidas em
colees em todo o mundo, poucas centenas foram investigadas por seu contedo
qumico e apenas uma pequena quantidade foi cultivada em escala industrial. Estas
informaes indicam um potencial bastante rico no sentido de se conseguirem
novas descobertas. Este estudo foi baseado no cultivo da microalga Chlorella
minutissima, com o objetivo de analisar a produo de biomassa (BORGHETTI,
2009).

84
7.2.2 Biorreator Utilizado no Cultivo da Chlorella minutissima
Para a realizao dos estudos foi utilizado reator tipo tanque com aerao
forada e agitao. O ambiente onde foi instalado permaneceu sob ciclo de
iluminao artificial por lmpadas com uso de temporizadores, com fotoperodo de
12 horas claro e 12 horas escuro. O meio utilizado foi obtido com as propores de
20% de manipueira, 70% de gua e 10% de inculo (BORGHETTI, 2009).
7.2.3 Resultados Obtidos pelo Sistema Instalado
O sistema de aquisio de dados foi instalado de forma a gravar os valores
de temperatura do ambiente, percentuais de oxignio, tanto no ambiente quanto na
sada do reator, valor de vazo de ar insuflado no reator e valores percentuais de
gs carbnico na entrada e sada do processo.
A Figura 34 mostra os valores de consumo de oxignio e a Figura 35 indica a
produo de gs carbnico.
Consumo de Oxignio g/h
-20
-10
0
10
20
30
1 15 29 43 57 71 85 99 113 127 141 155 169 183 197 211 225 239
horas

FIGURA 34 - CONSUMO DE OXIGNIO EM G/H

85
Produo de Gs Carbnico g/h
0
1
2
3
4
5
1 15 29 43 57 71 85 99 113 127 141 155 169 183 197 211 225 239
horas

FIGURA 35 - PRODUO DE GS CARBNICO EM G/H
Para facilitar a comparao entre os comportamentos de produo e
consumo destes gases, a Figura 36, mostra estas duas curvas sobrepostas.

Comparao O2 X CO2
-19
-9
1
11
21
1 15 29 43 57 71 85 99 113 127 141 155 169 183 197 211 225 239
horas
g
/
h

O
2
-7
-2
3
8
g
/
h

C
O
2
Consumo O2 Produo CO2

FIGURA 36 - COMPARAO ENTRE PRODUO E CONSUMO DE GASES
A comparao entre os valores apresentados demonstra que houve um ciclo
determinado de consumo de oxignio e, consequentemente, de produo de gs
carbnico. Considerando que a microalga realiza fotossntese, a indicao de um
valor negativo no consumo de O
2
pode ser interpretada como a produo deste gs,
numa vazo constante. Esta inverso no sinal de consumo de O
2
acontece em
alguns perodos, dadas as vazes e massa de microalgas presentes no processo.
Desta mesma forma, o comportamento da produo de gs carbnico demonstra um

86
comportamento cclico em comparao com o oxignio, determinado pela correlao
entre estes elementos no metabolismo da microalga.
7.2.4 Concluso
Durante os experimentos foi feita uma tentativa de injeo de gs carbnico
para verificao do comportamento de crescimento da biomassa quando da
presena deste gs em maior proporo. Nas condies apresentadas no
laboratrio ocorreram dificuldades no controle de vazes relativas ao ar, este
diretamente do ambiente, e do gs carbnico, proveniente de cilindro prprio. A
presso do cilindro associada a falta de vlvulas adequadas, impediram a mistura
em propores constantes destes gases. Devido a isto o procedimento no pde ser
mantido, porm o sensor de medio de CO
2
permaneceu em uso para a avaliao
na sada do reator.
Como este microrganismo realiza fotossntese, o programa FERSOL2 no foi
utilizado, pois o modelo matemtico no prev formao de biomassa por outra
fonte de energia externa, como neste caso o fornecimento de luz artificialmente para
o reator.
Os resultados obtidos pelo sistema de aquisio de dados, e a posterior
anlise destes, permitiu uma melhor compreenso do comportamento da microalga
quando nas condies impostas pelo reator em uso, bem como nas demais
variveis envolvidas, como concentrao de manipueira e inculo iniciais. O fato de
permitir a visualizao em tempo real das variveis medidas mostrou-se bastante
til na tarefa de monitoramento do andamento do processo durante todo o seu
perodo de estudo, pois qualquer distrbio frente ao esperado nas variveis seria
indicador de eventuais problemas, tanto locais, como vazamentos e falhas no
reator, quanto ambientais como diminuio da presso de aerao, por exemplo.
Em alguns destes casos foi possvel atuar sobre o problema antes que pudesse
afetar o resultado do experimento.
O fotoperodo programado atravs do uso de temporizadores atuando sobre
lmpadas foi estabelecido como 12 horas, ou seja, perodo simtrico de presena e
ausncia de luz. O ciclo de fotossntese determinado pelo metabolismo da
microalga foi de 13 horas e meia, o qual foi calculado pela mdia dos perodos

87
registrados durante todo o andamento do processo e, em se tratando de
experimento prtico, apresentou desvio percentual aproximado de 11,11%.
possvel verificar que, durante algumas fases do processo, no houve um
sincronismo entre o consumo de oxignio e produo de gs carbnico, mesmo
considerando a condio inversa durante a fotossntese. Este comportamento pode
ser relacionado dificuldade em manter a vazo constante de CO
2
na entrada e
tambm a possibilidade de consumo de outra fonte de carbono presente no prprio
meio de cultivo, por ser heterogneo.
7.3 PROCESSO DE CULTIVO DE MICROALGA EM MBM
Nesta seo ser descrita a aplicao do sistema em reator para o cultivo da
microalga Chlorella vulgaris em meio do tipo MBM (Modified Bristol Media) descrito
por Watanabe (1960 apud COSTA et al. 2006).
Novamente o microrganismo em estudo realiza fotossntese, assim somente
uma utilizao parcial dos recursos desenvolvidos no sistema de aquisio e
estimativa de parmetros foi utilizada, porm os resultados foram suficientes para
orientar demais clculos para uma caracterizao mais completa do processo de
crescimento da microalga, bem como levantamento de rendimento do reator em
termos de produo de biomassa por tempo e rea de cultivo.
7.3.1 Microalga Utilizada neste Processo
As microalgas podem produzir vrios produtos de interesse como
carboidratos, protenas, aminocidos essenciais, vitaminas e pigmentos, alm de
fornecerem molculas bioativas (DUFOSS et al., 2005).
Especificamente neste processo foi utilizada a microalga Chlorella vulgaris
LEB 104, obtida da Universidade de Santa Maria (UFSM RS). Esta descrita
como uma microalga verde unicelular de tamanho entre 2 a 4 m, possuindo
mancha ocelar e vacolos contrteis. Conforme citado por Raven et al. (2001), esta
espcie pode ser considerada uma Chlorophyceae unicelular no-mvel. Na
natureza pode ser encontrada em gua doce, salgada e no solo. Formada por
clulas que contm um nico cloroplasto em forma de taa, com ou sem pirenide e
um nico ncleo muito pequeno, para reproduo possui apenas a forma

88
assexuada, ou seja, cada clula haplide se divide mitoticamente duas ou trs
vezes, formando, assim, quatro ou oito clulas no-mveis.
7.3.2 Biorreator utilizado para cultivo de Chlorella vulgaris
O reator utilizado foi do tipo Tanque Agitado (SERMANNI e TISO, 2008). O
suporte para sensores foi adaptado para se conectar s mangueiras originais do
reator, de modo que o sistema de aquisio pudesse interagir com o processo. A
medio foi feita sobre as variveis de vazo, tanto de ar insuflado no reator quanto
de gs carbnico separadamente, oxignio percentual na entrada e sada e gs
carbnico percentual presente na sada do processo.
7.3.3 Resultados Obtidos com o Sistema de Aquisio
Conforme exposto na seo anterior, o sistema foi adaptado ao reator de
forma a permitir a medio das variveis de processo. As Figuras 37, 38 e 39
mostram os resultados apresentados pelo processo. Os grficos de massa de gs
carbnico, bem como de oxignio, foram calculados a partir da medio de vazo
em L/min e dos percentuais destes gases. Esta vazo foi monitorada atravs do uso
de rotmetro, devido ao valor estar muito prximo da escala inferior do sensor,
inviabilizando seu uso devido aos erros associados. O sensor de vazo usado na
entrada de CO
2
gera sinal proporcional a esta grandeza, independente do valor de
presso, ou seja, no foi necessria a medio de temperaturas e aplicao da lei
dos gases perfeitos para a obteno dos valores reais. A partir destas grandezas
foram calculados os valores em gramas por hora. No caso especfico do oxignio,
foi feita a medio na entrada e sada do sistema, sendo a diferena tomada como
consumo deste gs. Para o caso do gs carbnico, o valor de entrada foi medido
pela vazo deste, o qual foi fornecido por cilindro prprio, contendo somente este
gs. A medio de CO
2
na sada, comparando com o resultado de entrada, tambm
permitiu a determinao de consumo ou produo durante o processo.

89
Vazo de Gs Carbnico na Entrada mL/min
0
10
20
30
40
50
60
1 15 29 43 57 71 85 99 113 127 141 155 169 183 197 211 225 239 253 267 281
horas

FIGURA 37 - VAZO DE CO2 NA ENTRADA DO REATOR EM ML/MIN
A Figura 37 mostra o valor da vazo medida antes da aplicao do CO
2
ao
processo, atravs de sensor. Estes valores foram verificados tambm atravs de
indicador, do tipo rotmetro, j calibrado para este gs. Devido calibrao de
fbrica do sensor de vazo ter sido feita para ar, um fator de correo foi aplicado
aos valores originais para que fosse reajustado para o gs carbnico, fator indicado
pelo prprio fabricante em tabela de calibrao. A vazo mdia ficou em 37,4
mL/min.
Consumo de Oxignio g/h
-0,4
-0,3
-0,2
-0,1
0
0,1
0,2
0,3
1 15 29 43 57 71 85 99 113 127 141 155 169 183 197 211 225 239 253 267 281
horas

FIGURA 38 - CONSUMO DE OXIGNIO EM G/H
O resultado de oxignio consumido, apresentado em gramas por hora na
Figura 38, demonstrou comportamento cclico, sendo que o tempo de ciclo mdio

90
durante toda a extenso do processo foi de 23 horas e 20 minutos, o que corrobora
com o valor esperado do ciclo dirio em 24 horas, determinado pelo temporizador
de acionamento da iluminao artificial.
Produo de Gs Carbnico g/h
-1,5
-1,0
-0,5
0,0
0,5
1,0
1,5
1 15 29 43 57 71 85 99 113 127 141 155 169 183 197 211 225 239 253 267 281
horas

FIGURA 39 PRODUO DE CO2 EM G/H
A Figura 39 mostra o comportamento da produo de CO
2
pelo processo,
onde os valores negativos se referem ao consumo deste gs. As medies foram
elaboradas com o objetivo de, alm de acompanhar o comportamento do processo,
determinar qual a quantidade de gs carbnico foi retirado da mistura de entrada.
Durante os perodos de fotossntese os valores de consumo foram quantificados
atravs da integrao da curva gerada no grfico, utilizando integrao numrica
pela regra do trapzio conforme descrito por Etter e Ingber, (2007). A partir deste
valor e considerando o volume do reator de 8 litros, foi possvel extrapolar o
consumo para as unidades geralmente utilizadas para mensurar a magnitude de
retirada de CO
2
da atmosfera, pela transferncia em forma de biomassa de
microalgas. O valor para este processo foi de 76,07 ton/acre/ano de gs carbnico.

7.3.4 Concluso desta Seo
Para complementar a verificao de exatido do sistema de medio, foi
elaborado um teste no reator com um meio branco, ou seja, o processo foi
acompanhado com todos os recursos, porm sem a adio de microrganismo, de
modo que os valores de trocas gasosas fossem nulos. O resultado ficou dentro das

91
tolerncias dos sensores. Um desvio de 0,61 g/h em mdia no consumo de CO
2
foi
o mais expressivo no que se refere ao funcionamento do processo, apresentado
pelo branco. A sua presena explicada pelo acrscimo de um erro, quando da
utilizao do fator de correo, na ordem de 5% a 10% quando utilizado com outro
gs que no o ar, para o qual foi calibrado em fbrica. Na concepo inicial do
sistema no havia sido previsto o uso com gs carbnico puro, haja vista que nos
processos de fermentao este gs estaria misturado ao ar. Esta limitao do
sensor no prejudicou sua condio de medio, apenas necessitando de um ajuste
posterior nos valores gerados e, ainda, deve ser considerado que esta correo
linear, com um valor multiplicador constante de 0,7382 (AALBORG, 2006).
Os valores de medio de oxignio na sada do processo levaram em
considerao os desvios causados pela presena de umidade neste ponto, cujo
resultado mdio foi de 79,38% de umidade relativa.
A vazo de entrada de CO
2
medida apresentou uma mdia de 37,4mL/min,
considerando que o valor determinado pelo procedimento era na ordem de 40
mL/min, esta grandeza mostrou um desvio percentual de apenas 6,5% durante todo
o andamento do processo. O comportamento da injeo de gs carbnico extra no
processo mostrou estabilidade devido a sua origem proveniente de cilindro prprio.
Desta forma a presso relativa no se modificou muito durante o processo, o que
acarretou em pequena incidncia de perturbao nesta grandeza.
Os resultados gerados por este experimento foram usados para avaliar a
quantidade de CO
2
que o processo retira da atmosfera, estimado com base nas
medidas mais usuais de tanques para cultivo de microalgas (SYDNEY, 2009).
Diferente dos processos anteriores, este necessitou de medio de dois
valores diferentes de vazo. Um sensor foi utilizado para a medio de injeo de
gs carbnico e para o ar um rotmetro. O sensor previsto para a medio de
entrada de ar possui uma faixa de atuao at 200L/min, porm a repetibilidade
deste apresenta um valor mximo de 0,5% do fundo de escala (AALBORG, 2006).
Este valor aplicado escala completa do dispositivo resulta em cerca de 1 L/min.
Para o experimento realizado neste estudo, a vazo de ar deveria ser mantida em
torno de 1,2 L/min, assim a proximidade do desvio e do valor pr-determinado
tornou invivel seu uso. Devido a esta caracterstica, a vazo total de ar foi medida

92
atravs de rotmetro e os resultados foram incorporados posteriormente nos
clculos junto aos valores registrados pelo sistema de aquisio de dados.
A ferramenta desenvolvida para aquisio de dados mostrou flexibilidade
quanto a modificaes necessrias para o atendimento de peculiaridades de cada
processo, sendo apenas renomeado o endereo do controlador para o qual o
sensor passou a enviar seu sinal, bem como a adequao de escalas.

93
8 CONSIDERAES FINAIS
Este captulo apresenta as concluses deste trabalho, incluindo comentrios
relativos aos objetivos iniciais deste. Tambm so comentados resultados
complementares e sugeridas algumas possibilidades para trabalhos futuros.
8.1 QUANTO AOS OBJ ETIVOS
Conforme exposio em cada um dos captulos, referentes aplicao dos
sensores e controladores, ficou demonstrada a adequao destes frente aos
processos propostos como teste. Considerando que, inicialmente, o objetivo tenha
sido a instrumentao de processo de fermentao em estado slido, apenas
alguns testes iniciais com sensores de Gs Carbnico eletroqumicos mostraram a
sua inadequao. Os demais sensores foram especificados j com este teste em
mente, ou seja, as condies de escala e tratamento de sinal foram escolhidas
sempre com base em sinais industriais padro, permitindo a conexo direta com os
controladores instalados.
Para que o sistema pudesse ser usado tanto em reatores de pequeno porte,
como colunas, por exemplo, quanto em reatores de maior tamanho como os tanques
e cilindros, no houve outra condio para escolha do sensor de vazo seno o uso
de dois sensores com faixas de atuao diferentes, um para uso at 100mL/min e
outro at 200L/min, assim este foi o nico elemento do sistema que teve a
necessidade de ser substitudo de acordo com o porte do processo, sendo os outros
todos mantidos conforme descrito anteriormente. Os resultados obtidos no processo
de cultivo de microalgas em MBM, com relao vazo total de ar, demonstraram a
necessidade de aquisio de novo sensor, com faixa de atuao na ordem de
10L/min, pois a medio de valores muito prximos de 1L/min se mostrou proibitiva
devido aos desvios percentuais totais, dados geralmente em comparao ao fundo
de escala. Para este processo os erros associados foram muito prximos dos
valores a serem medidos, impedindo assim seu uso dentro de um padro mnimo de
exatido. Cabe comentar que a repetibilidade dos sensores de vazo de 0,5% do
fundo de escala e para o sensor de maior faixa de atuao esta grandeza resulta
em 1L/min, novamente reprovando seu uso na faixa indicada para o processo.

94
O uso de controladores universais de processos mostrou a capacidade de
adaptao no uso do sistema, bem como sua funo primordial de controle em
processos onde estava disponvel algum elemento final de atuao, como no caso
dos tanques com aquecimento por resistncias, nos quais pde ser feito o controle
propriamente da temperatura. A conexo atravs de rede de padro industrial
proporcionou a necessria imunidade a rudos eltricos, presentes mesmo
considerando um ambiente laboratorial.
A plataforma de produo do Software de Aquisio de dados foi utilizada
para a gerao de uma interface prpria para o uso em bioprocessos, com a
condio de leitura direta das grandezas medidas j com as devidas converses de
escala para facilitar seu entendimento durante a evoluo dos processos.
Nos processos onde o programa FERSOL2 pde ser utilizado com todos os
seus recursos, este produziu resultados coerentes com o comportamento do
processo, incluindo a proximidade dos valores comparados a processos
experimentais, ou mais usuais, para sua determinao. Os testes propostos nos
experimentos foram suficientes para a validao dos mtodos usados quando do
projeto do software, haja vista que em todos os casos os valores foram sempre
bastante prximos, independentemente do processo em estudo. Os resultados de
comparao entre a estimativa gerada pelo FERSOL2 e os valores medidos
diretamente apresentaram coeficientes de determinao mdio de 0,92. Este
resultado pode ser considerado na validao do programa nesta tarefa, com as
provas experimentais comparadas aos resultados apresentados pelo
processamento a partir do software. Para demais anlises futuras os resultados do
FERSOL2 poderiam ser tomados sem a necessidade de medies experimentais,
reduzindo o tempo e recursos materiais necessrios para avaliao de desempenho
dos processos. Apenas como exemplo de comparao entre o FERSOL2 e o
programa anterior, os valores de seus principais parmetros resultantes do
processamento de alguns experimentos antigos esto apresentados na Tabela 9,
onde a indicao antigo refere-se primeira verso e atual ao FERSOL2, o
nome do arquivo serve apenas como referncia para os processos. Cabe lembrar
que a nova verso faz um nmero maior de iteraes, com um grau de aproximao

95
superior ao da verso antiga, assim alguns dos parmetros apresentam pequenos
desvios, porm com coerncia quando avaliados pelos mtodos aqui tratados.
TABELA 9 COMPARAO ENTRE RESULTADOS DOS SOFTWARES
Nome do Arquivo m
(g O
2
/g biom. h)
Yx/o
(g/g)

(h
-1
)
Recap7a Antigo: 0,020 2,00 0,28
Atual: 0,013 1,67 0,25
Recap3a Antigo: 0,020 2,02 0,55
Atual: 0,040 1,86 0,40
Recap2a Antigo: 0,003 3,598 0,40
Atual: 0,006 3,519 0,38

A metodologia foi utilizada com xito em alguns dos microrganismos mais
usuais, incluindo processos em reatores diferentes e cujos produtos tambm foram
diversos, cabendo comentar que alm dos microrganismos tambm os meios de
cultivo foram diferentes. Um dos indicadores usados na validao da metodologia
empregada, formada pelo sistema de aquisio junto ferramenta computacional,
foi a correlao entre valores de biomassa, porm outro indicador pde ser
levantado e analisado quando do uso para produo de Fitase. Este indicador foi a
correlao entre o crescimento da biomassa e a atividade da enzima, com resultado
mdio de 0,98 em todos os experimentos analisados pelo sistema, concordando
com as demais publicaes afirmando sobre a associao entre crescimento e
produo da enzima em questo.
Para finalizar os testes, alguns processos que no se enquadram em
fermentao em estado slido foram avaliados pela mesma metodologia, porm com
uso parcial das mesmas ferramentas e cujos resultados tambm foram bastante
promissores, mesmo em se tratando de auxiliar no levantamento de parmetros. No
caso de anlise de crescimento de clulas vegetais, o sistema foi suficiente para
demonstrar os ciclos de respirao e fotossntese no reator, com total do perodo de
23 horas e 46 minutos, aproximando-se do valor real de 24 horas, bem como do
valor mximo aplicvel de vazo em 9L/min no reator em estudo. Para o caso dos

96
estudos em microalgas o sistema foi testado em condies tambm diferentes das
presentes nos processos fermentativos. Embora com algumas limitaes, como as
relacionadas aos desvios de alguns sensores, o sistema pde ser utilizado para
levantamento de outros parmetros de desempenho destes processos, como por
exemplo, o valor final de gs carbnico retirado do ar pela biomassa, cujo valor foi
de aproximadamente 76 ton/acre/ano. Algumas limitaes de sensores puderam ser
contornadas pelo uso de outros recursos, como no caso de ajuste dos valores de
oxignio consumido com relao influncia da umidade relativa presente, a qual
foi medida em praticamente todos os processos, mesmo quando no tenha sido
necessrio qualquer ajuste.
Com base na sequncia dos resultados expostos nos captulos anteriores,
possvel considerar como atingido o objetivo geral da pesquisa reapresentado como
segue: Propor uma metodologia de anlise e avaliao aplicvel a diversos
processos, e respectivos microrganismos, atravs do uso de sistema de aquisio
de dados, sensores e ferramenta computacional.
8.2 SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS
Com a inteno de complementar esta pesquisa, bem como produzir
solues ainda necessrias para o contnuo uso das ferramentas desenvolvidas,
seguem algumas sugestes para trabalhos futuros:
- Realizao de testes complementares em processos de Fermentao
Submersa, de modo a validar com mais informaes os recursos j disponveis no
programa principal;
- Verificao da possibilidade de uso de sensores de percentual de oxignio
com outras bases de funcionamento, que no eletroqumicos, com o intuito de
aumentar a vida til destes dispositivos;
- Desenvolver dispositivos finais de atuao, como vlvulas proporcionais
para pequenas vazes, adaptados para as aplicaes nos laboratrios e adequadas
a sua ordem de grandeza;
- Pesquisar os recursos computacionais necessrios para integrar as funes
dos programas de modo que permita a indicao, em tempo real, dos parmetros

97
principais dos processos, sem a necessidade de processamento posterior dos
dados para ger-los (POWELL e WEEKS, 2001);
- Pesquisar quais as modificaes necessrias e incorporar no algoritmo do
FERSOL2 a possibilidade de realizar estimativas de crescimento de biomassa
quando utilizado em processo que realize fotossntese.
8.3 CONCLUSO
A contribuio desta pesquisa est relacionada com a possibilidade de tornar
mais prticas, rpidas e confiveis, as anlises dos comportamentos dos processos
aqui contemplados.
Quando do acompanhamento de um processo, a verificao em tempo real
das grandezas determinantes do funcionamento correto deste crucial para seu
melhor entendimento, em caso de processo ainda em estudo, ou de seu
monitoramento, em processos bem conhecidos, possibilitando alguma mudana em
suas caractersticas quando na presena de alguma perturbao ou condio
desfavorvel.
A aplicao do sistema em processos com Bactrias, Fungos e Microalgas
demonstrou a abrangncia das ferramentas como soluo ligada ao monitoramento,
ainda que algumas funes de controle no tenham sido implementadas. Mesmo
diante disto, apresentando indicaes que foram indispensveis na deciso do
pesquisador, ligado diretamente ao seu estudo especfico, sobre necessidade de
interrupo da fermentao, por exemplo, quando sob influncia de alguma
contaminao ou mau funcionamento de algum dos dispositivos auxiliares. Este
procedimento pode ser de grande importncia em reatores de grande porte, sendo
este recurso, presente nas ferramentas, um indicador relacionado economia de
matria-prima e conseqente melhora da rentabilidade financeira de determinado
processo. Cabe salientar que o investimento total em materiais, sensores, licenas
de softwares e demais etapas para o desenvolvimento das ferramentas, foi na
ordem de vinte mil reais, o qual comparado ao custo total de um biorreator de
grande porte, que pode chegar a ordem de algumas centenas de milhares de reais,
mostra sua viabilidade em aplicaes industriais

98
Mesmo tendo sido uma aplicao parcial dos recursos desenvolvidos, a
aquisio e anlise dos resultados referentes a produo de Microalgas, mostrou
grande potencial para a gerao de indicadores, matematicamente demonstrados
sobre resultados experimentais, a respeito da capacidade de retirada de gs
carbnico da atmosfera pelos reatores fechados de produo de biomassa destas
algas. Os resultados atingidos mostram a coerncia entre os valores calculados
pelos grficos, e ajustes definidos por flutuaes em outras variveis, quando em
comparao com resultados medidos e calculados por outros mtodos de medio.
Os resultados, obtidos em cada um dos processos, dos parmetros que
definem os processos de fermentao como coeficiente de manuteno, velocidade
especfica de crescimento e rendimento ou produo de biomassa comparada ao
consumo de oxignio, foram confirmados por procedimentos analticos ou por outros
mtodos, validando, desta forma, os mtodos e algoritmos empregados no projeto
do programa de computador.
Outras aplicaes podero ser desenvolvidas para adaptao a outras reas
de interesse dentro do programa de ps-graduao, haja vista o potencial
demonstrado pelos experimentos no que se refere versatilidade do sistema em
conjunto.

99
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