Cuantificacin de la clorofila

La vida en la tierra depende fundamentalmente de la energa solar, la cual es atrapada mediante el proceso fotosinttico, que es responsable de la produccin de toda la materia orgnica que conocemos. La materia orgnica comprende los alimentos que consumimos diariamente tanto nosotros como los animales, los combustibles fsiles (petrleo, gas, gasolina, carbn); as como la lea, madera, pulpa para papel, inclusive la materia prima para la fabricacin de fibras sintticas, plsticos, polister, etc.Utilizando tcnicas cromatogrficas se han identificado un grupo de sustancias en las plantas verdes llamadas clorofilas, siendo las representantes la a y b. La clorofila a esta integrada por un ncleo de Mg, 4N, C y H. Para que se pueda formar la clorofila es indispensable la presencia del Fe. Las formulas de la clorofila son: a.C55H72O5N4Mg b.C55H70O6N4Mg

La clorofila tiene la capacidad de transformar la energa luminosa absorbida en energa qumica, canalizndola hacia reacciones celulares de biosntesis.El pigmento no entra en si en las reacciones qumicas que se llevan a cabo, si no que ejerce solamente una accin cataltica que activa las reacciones sin intervenir en ellas. Esta accin cataltica es extraordinariamente rpida y trabaja en fracciones de segundo. La clorofila, el pigmento verde comn a todas las clulas fotosintticas, absorbe todas las longitudes de onda del espectro visible, excepto las de la percepcin global del verde, detectado por nuestros ojos.la clorofila es una molcula compleja que posee un tomo de magnesio en el centro, mantenido por un anillo de porfirinas. Numerosas modificaciones de la clorofila se encuentran entre las plantas y otros organismos fotosintticos (plantas, algunos protistas, proclorobacteria y cianobacterias). Clorofila a C55H72O5N4 Mg -CH3 -CH=CH2 -CH3 -CH2CH3 CH2CH2COO -Phytyl Simple Clorofila b C55H70O6N4 Mg -CH3 -CH=CH2 -CHO -CH2CH3 CH2CH2COO -Phytyl Simple Clorofila c1 C35H30O5N4M g -CH3 -CH=CH2 -CH3 -CH2CH3 CH=CHCOO H Doble Clorofila c2 C35H28O5N4M g -CH3 -CH=CH2 -CH3 -CH=CH2 CH=CHCOO H Doble algas cromofitas Clorofila d C54H70O6N4 Mg -CH3 -CHO -CH3 -CH2CH3 CH2CH2COO -Phytyl Simple clorofila f C55H70O6N4 Mg -CHO -CH=CH2 -CH3 -CH2CH3 CH2CH2COO -Phytyl Simple

Frmula emprica Grupo C2 Grupo C3 Grupo C7 Grupo C8 Grupo C17 Enlace C17-C18

Universal Distribuci (plantas y n algas)

plantas y algas algas verdes cromofitas

algn alga algunas roja y cianobacteria cianobacteria s

Los pigmentos accesorios que incluyen a la clorofila b (tambin c, d, y e en algas y protistas) y los carotenoides, como el beta caroteno y las xantofilas (carotenoide de color amarillo), absorben la energa no absorbida por la clorofila.

La clorofila a (R = --CHO) absorbe sus energas de longitudes de onda correspondientes a los colores que van del violeta azulado al anaranjado-rojizo y rojo. El organismo vegetal ha desarrollado un sistema para capturar un fotn de luz y utilizar la energa para elevar el nivel energtico de un electrn determinado que posteriormente regresa su nivel basal; cuando esto sucede, el exceso de energa es liberad en diferentes formas. La evolucin de la vida vegetal ha logrado, a travs de mecanismos bioqumicos, desviar el retorno del electrn a su nivel primitivo y utilizar el exceso de energa para sintetizar carbohidratos. Adems de las clorofilas a y b, en el cloroplasto de plantas superiores, hay otro grupo de pigmentos que son los carotenoides y las xantofilas. Existen otros pigmentos, como son las antocianinas, que se encuentran en clulas de vegetales superiores y que determinan, en especial, el color de las flores y algunos matices en hojas y otras estructuras de la planta. DETERMINACIN CUANTITATIVA DE CLOROFILA Se calculara la cantidad de clorofila presente en el extracto, expresndola como mg de clorofila por gramo de tejido extrado, de acuerdo con las siguientes ecuaciones: Densidad ptica (nm) 645 652 663 Absorbancia 0.336 0.516 0.850

OBJETIVO Calcular la cantidad de clorofila que se encuentra en una determinada porcin de extracto por una determinacin cuantitativa. MATERIAL 1 Mortero 1 Embudo de Buchner 1 Matrz de filtracin

1 Matrz aforado de 50 mil 1. Probeta de 100 ml 1. Vaso de precipitados de 200ml. 1. Tubos de ensayo 1 Pipeta de 5ml. 1 Embudo 1. 2. Pipeta pasteur, mechero, tripie y rejilla espectrofotmetro y celdas 2 Discos de papel filtro Gradilla MATERIAL 1 gr de hojas frescas de espinacas. 3gr de ptalos de flores azules Arena REACTIVOS Acetona al 80% (v/v) H2S04 0.1N NAOH 0.1N Papel pH 0-14 METODOLOGIA 1.- Coloque en el mortero 1 g de hojas de espinacas, sin las venas grandes, cortadas en pequeos tamaos. 2.-Agregue arena y 4 ml de acetona al mortero, para moler el tejido y obtener una pasta fina. Adicione 20ml ms de acetona. 3.-Transfiera cuidadosamente el extracto resultante al embudo de Buchner provisto de papel filtro, y filtre al vaco.

4.- Agregue otros 50ml de acetona a la pulpa de las hojas y reanude la molienda y el filtrado. Este segundo extracto agrguelo al primero. El tejido debe de quedar sin clorofila, de lo contrario repita el proceso con otros 20ml de acetona y rena todos los filtrados. 5.- Lave el mortero y el embudo con 50ml de acetona que se incorporara al filtrado. En todo el proceso no debe de usar mas de 100ml de acetona se aconseja aforar a 50ml en un matraz. 6.- Lea la densidad ptica (D) a 645. 652.663 nm del extracto. usando como blanco el acetona. Anota las densidades medidas. 1. Otros pigmentos no fotosintticos: las antocianinas 1 Macere 3g de ptalos de flores azules y colquelos en un vaso de 200ml, con 100ml. de agua y ponga a hervir durante unos minutos. 2 Enfre un poco el extracto y filtre 3 En 3 tubos de ensayo. coloque 5 ml del extracto 4 En tubo uno mida el pH de la solucin, utilizando un papel indicador. 5 Al tubo 2, agregue. gota a gota la solucin de H2S04 0.1 N y observe cualquier cambio de color con respecto al original. Determine el pH y contine la adicin del cido para ver si ocurren otros cambios. 6 Al tubo 3 aada NAOH 0.1 N gota a gota y mide el pH de la solucin al transcurrir un cambio de color. RESULTADOS Densidad de 645 nm con absorbancia de 0.400 Densidad de 652 nm con absorbancia de 0.550 Densidad de 663 nm con absorbancia de 0.832 CLOROFILA A 0.47452 CLOROFILA B 0.263312 CLOROFILA TOTAL 1 0.737632 CLOROFILA TOTAL 2 0.7971 TRATAMIENTO COLOR pH Extracto original amarillo 7 Extracto mas H2S04 rosa 3

Extracto ms NAOH verde 9 CUESTIONARIO 1.- QUE SON LAS CLOROFILAS? Pigmentos verdes con estructuras policiclicas planas que funcionan como receptores de energa luminosa en la fotosntesis; al igual absorben energa de los organismos fotosintticos. Tambin la clorofila es una profirina al igual que el grupo hemo de los citocromos pero contiene un tomo de magnesio en lugar de una de hierro en el centro del anillo perifrico. La clorofila se asocia con lpidos y protenas hidrofobicas de las membranas fotosintticas. Hay dos tipos de clorofila como son: la clorofila A y la clorofila b. 2.- DESCRIBA LA FUNCION BIOLOGICA DE LOS PIGMENTOS VEGETALES Y DIGA ,CUAL ES SU IMPORTANCIA? Son sustancias que su funcin es absorber la luz visible. Los diferentes pigmentos absorben luz de longitudes de onda diferentes, adems de llevar a cabo principalmente la fotosntesis. La variacin en las proporciones de estos pigmentos es la responsable de la gama de colores de los organismos fotosintticos que van desde el azul obscuro de las hojas de abeto hasta el verde ms intenso de las hojas de arce, el rojo marrn o incluso prpura de algunas plantas. Las clulas vegetales tambin tienen otros pigmentos fotosintticos accesorios, como los carotenoides de color amarillo o anaranjado. Vistos absorben longitudes de onda de la luz diferente a las que corresponden a la clorofila y de tal suerte amplan el espectro luminoso que aporta energa para la fotosntesis. 3.- DESCRIBA LAS CARACTERISTICAS ESTRUCTURALES DL LA CLOROFILA Y EL CAROTENO. A)CLOROFILA: La estructura bsica de todas las clorofila es la de una unidad tetralirrolica plana que contienen metal similar al grupo proteico heme de la mioglobina y los citocromos. No obstante, la molcula de la clorofila es diferente al del grupo heme en tres aspectos: 1 .- En la clorofila, el ion, metlico que esta coordinado al grupo tetrapirrolico es magnesio como vez del hierro. 2.- Las clorofilas no son dependientes de uniones a grupos proteicos para su actividad. 3.- Las clorotilas contienen un grupo caracterstico de cadenas laterales unidos a los pirroliticos, los ms notables de los cuales son un grupo alcohlico, grande y no polar en enlace esfrico o un residuo Iateral del cido propionoico. y un anillo funcionado del ciclo pentano. El grupo fitol no polar es particularmente notable ya que proporciona la base estructural para una integracin de las molculas de clorofila en la matriz lipoproteica de la membrana de tilacoide.

B) CAROTENO.- carotenos y las xantotilas son pigmentos insolubles en agua y ampliamente distribuidas en la naturaleza, siendo ms abundantes en plantas y algas. 4.-QU SON LAS ANTICIANINAS? Son pigmentos vegetales hidrosolubles que se encuentran en flores y frutos, son hermosos colores azules, prpura, violeta, malva y la mayora de los rojos, contienen los grupos henzaopirilium y benzopirono. Estos pigmentos suelen presentarse en forma de gluxodisos lo que explica su solubilidad en agua y la fcil extractailidad por solventes acuosos. Se encuentran en la savia de las plantas y a menudo en forma de slidos amorfos o cristalinos en las hojas en el tejido leoso y frutos. Su color esta algunas veces enmascarado por otros pigmentos, como la clorofila en algunas clulas vegetales la vacuola contiene elevadas concentraciones de pigmentos que dan su intenso color o prpura en las llores de los geranios. Las rosas las ciruelas y las uvas. 5.- DE ACUERDO A SU EXTRCCION. QUE DIFERENCIA HAY ENTRE LAS CLOROFILAS Y LAS ANTOCIANINAS. La clorofila se encuentra en los cloroplastos formando compuestos insolubles se hace necesaria para llevar acabo el estudio de su poder. absorbente, extraerlas y aquellos por medio de ter, acetona u otros disolventes adecuados. Adems que la parte fundamental de la molcula de la clorofila es cl anillo llamado porfirina estructura formada por 4 ncleos pirrolicos unidos por eslabones metlicos. Los antocianinas son del grupo de los glucosidos son compuestos de glucosa, alcohol, o cido. Que en solucin en las vacuola dan color a la flor, rojo si en el pH es cido, azul o violeta si el ph es bsico. DISCUSIN La fotosntesis es un proceso que transforma en carbono orgnico el gas carbnico tomado del aire o disuelto en el agua. En el proceso interviene un pigmento, la clorofila, que es una sustancia capaz de absorber las radiaciones luminosas. Esta captacin de energa luminosa se realiza en una primera etapa en la fotosntesis, en la cual se produce energa qumica en forma de molculas de adenosintrifosfato (ATP) y se desprende oxigeno, que produce de la escisin de una molcula de agua. En una segunda etapa, que se denomina fase obscura porque puede tener lugar en ausencia de luz, el dixido de carbono se combina con una pentosa para formar glucosa a travs de una serie de reacciones qumicas. La clorofila absorbe sobre todo la luz roja, violeta y azul, y refleja la verde. La luz roja es la de mayor eficacia para la fotosntesis, ya que el espectro de absorcin de la clorofila es ms amplio en la zona del rojo. En cambio la luz verde carece de accin sobre este proceso. Lo anterior nos explica por que cuando llevbamos la solucin de clorofila a la luz del sol esta cambiaba a un color rojo. Cabe mencionar que no todas las soluciones obtenidas en la prctica por los dems equipos tenan la misma tonalidad de verde, esto es por que no todas las hojas de espinacas tenan la misma frescura, esto es que entre ms frescas se encuentren las hojas mayor contenido de clorofila.

En cuanto a las antocianinas estas son glucosidos es decir que se pueden hidrolizar por la accin de enzimas o de los cidos en una o ms de azucares y en otra porcin de diferente naturaleza llamada aglicon o antocianidina. Este se divide en tres antocianidinas: roja en solucin cida, violeta en medio neutro y azul en solucin alcalina. Por lo que cabe resaltar que las antocianinas pueden alterar qumicamente de acuerdo a su medio, el color se cambia de acuerdo a su medio cido cuando va de 1 a 7 y la basticidad cuando va de 7 - 11 por lo que se tiene que proceder a ver un cambio de color de la substancia por el indicador que contiene la antocianina. La antocianina pertenece al grupo de los glusidos los cuales contiene glucosa, cido y alcohol en su estructura. CONCLUSIN Sabemos que la clorofila es un factor importante en la fotosntesis y que es capaz de absorber la energa luminosa y gracias a ello puede promover la serie de reacciones que conducen al almacenamiento de dicha energa en un compuesto de alto poder calrico. La luz roja es la de mayor eficacia para la fotosntesis, ya que el espectro de absorcin de la clorofila es ms amplio en la zona del rojo. En cambio la luz verde carece de activacin sobre este proceso.

Viviana Medina Rodrguez