MATURAO E FERTILIZAO IN VITRO DE OCITOS CAPRINOS UTILIZANDO ESPERMATOZIDES SEXADOS.

Thales Ferreira Teixeira1,Natlia Matos Souza2, Alexandre Tadeu Mota Macedo2 , Maria Dolores Sampaio Morais
Campos2 ,Marlom de Vasconcelos Azevedo2, Brunna Cavalcante Freitas2, Joana Darc da Rocha Alves3, Paulo Fernandes de Lima4, Marcos Antnio Lemos de Oliveira4 .

Introduo
A espcie caprina est difundida em todo o mundo, menos nas regies polares. Em algumas reas geogrficas, a cabra o animal domstico de maior importncia econmica, graas sua rusticidade e qualidade dos produtos que fornece ao homem para sua alimentao e vesturio. Em certos casos, a explorao caprina constitui fator primordial para a vida da populao humana, em zonas castigadas por secas e desprovidas de agricultura estvel [1]. Os pequenos ruminantes domsticos podem contribuir para o desenvolvimento socioeconmico do Pas, desde que racionalmente explorados. A populao brasileira caprina de 10.046.888 cabeas, sendo que 9.331.460 (92,88%) deste efetivo localizado na regio Nordeste com 1.533.132 (15,26%) no estado de Pernambuco [2]. O Brasil, especialmente a Regio Nordeste, tem realizado em moderada escala importaes de significativo nmero de embries congelados de caprinos e ovinos, de raas especializadas para corte, provenientes da frica do Sul [3]. A fecundao in vitro (FIV) tem ocupado lugar de destaque em funo do potencial que oferece para acelerar a melhoria gentica dos rebanhos [4] . A aplicao de tecnologias de reproduo assistida possibilita o incremento do desempenho do melhoramento gentico. Algumas dessas tcnicas aumentam a seleo diferencial, como a inseminao artificial e a transferncia de embries, enquanto outras aceleram o progresso encurtando, o intervalo entre

geraes, como a produo in vitro de embries a partir de animais pr-pberes[5] . Ovrios oriundos de abatedouro constituem uma abundante fonte de ocitos para a colheita do contedo folicular por aspirao, permitindo a obteno mdia de um a dois complexos cumulus-ocito (CCO) utilizveis por ovrio. Um incremento de quatro a cinco ocitos pode ser obtido aps fatiamento do ovrio com auxlio de uma lmina de navalha, mas esses ocitos so oriundos de pequenos folculos que so menos aptos a se desenvolver aps a fertilizao in vitro. Essa fonte de ocitos bastante apropriada para pesquisas cientficas, porm inadequada para a utilizao em animais de elevado valor gentico, bem como devido ao desconhecimento das condies sanitrias dos animais utilizados que pode ter como conseqncia o aumento da incidncia de diversas doenas no rebanho receptor dos embries produzidos a partir dessa fonte de ocitos. [6] A produo in vitro de embries (PIV) um procedimento que consiste das etapas de maturao e fecundao de ocitos e da cultura ou da co-cultura desde a fase de zigoto at a de blastocisto. Em bovinos, a adio de gonadotropinas, estradiol, vitaminas e fatores de crescimento aos meios de cultura celular tm determinado um aumento das porcentagens de blastocisto [7] . A seleo do sexo tem um valor econmico significativo nos animais de interesse zootcnico com aptido para produo de leite ou carne e em sistemas onde a produtividade favorecida pela prognie de um dos sexos . Sendo os machos com maior capacidade de ganho corporal e os que so destinados ao abate para obteno de carcaa, o ideal, para a compra dos embries, seria saber com antecedncia qual o sexo do produto. A sexagem de espermatozides, associada a programas de IA, MOTE ou PIV de embries possui um mercado

________________ 1. Primeiro Autor o Discente do Curso de Graduao em Medicina Veterinria bolsista do CNPQ, E-mail: thales_teixeira@hotmail.com. 2. Segundo Autor o Discente do Curso de Graduao em Medicina Veterinria e monitor da disciplina de Ginecologia Veterinria, Universidade Federal Rural de Pernambuco, E-mail: natinha_matos@hotmail.com, mutley_pb@hotmail.com, alexandretmota@hotmail.com, dolores_sampaio@hotmail.com, nunnafreitas@hotmail.com . 3. Terceiro autor a Medica veterinria do Departamento de Medicina Veterinria, Universidade Federal Rural de Pernambuco, E-mail: Joanarocha@hotmail.com . 4. Quarto Autor Professor Doutor do Departamento de Medicina Veterinria, Universidade Federal Rural de Pernambuco, E-mail: paulolima4045@hotmail.com ; maloufrpe@uol.com.br .

potencial atrativo para bovinos j que o Brasil possui o maior rebanho comercial bovino do mundo (196 milhes de cabeas). Nesta espcie, a inseminao artificial cresceu 350% nos ltimos 10 anos. Atualmente, considera-se que o desenvolvimento de uma tcnica para a sexagem de espermatozides tambm beneficiar a reproduo assistida de espcies de animais ameaados de extino e animais de companhia [8] . Cenrio este que justifica a utilizao desta biotecnologia em pequenos ruminantes. Objetivou-se desenvolver uma tcnica vivel para maturao in vitro de ocitos caprinos, possibilitando sua utilizao em programas de fertilizao in vitro utilizando espermatozides sexados, acompanhando os zigotos at o estgio de blastocisto para avaliao do mtodo empregado.

Resultados e Discusso
Com base nos achados finais, os protocolos de maturao e fertilizao adotados no experimento foram satisfatrios pois obteveram resultados acima dos encontrados na literatura. Porm, o processo de sexagem reduziu a motilidade e vigor espermtico a nveis que impossibilitaram a fertilizao dos ocitos com o smen sexado, obrigando assim a utilizao do smen no sexado. Vale ressaltar a necessidade de maiores estudos para obteno de melhores resultados na sexagem dos espermatozides caprinos.

Agradecimentos
Agradeo primeiramente a Deus segundo a minha famlia ao professor Marcos Antnio Lemos de Oliveira e aos funcionrios Alcir Loureiro de Carvalho e Joana DArc da Rocha Alves, do Departamento de Medicina Veterinria, da Universidade Federal Rural de Pernambuco, pela pacincia, compromisso e dedicao para realizao das atividades.

Material e mtodos

Foram utilizados 354 ovrios de cabras, destes foram recuperados 2007 CCOs, dentre os quais, classificados de acordo com a sua morfologia: 2666 foram considerados, como qualidade I, 328 como qualidade II, 612 como qualidade III e 801 como qualidade IV. Dentre os classificados, ao fim do processo de maturao, 24 horas em estufa a 38,5C, 100% de umidade e atmosfera de 5% de CO2 em ar, 1070 (53,31%) foram considerados ocitos maturados, e aps o processo de fecundao, 18 horas em estufa a 38,5C, 100% de umidade e atmosfera de 5% de CO2 em ar, 554 (27,60%) foram considerados fecundados, obtendo assim uma relao de 5,67 ocitos recuperados/ovrio aspirado, de 3,02 ocitos maturados/ovrio aspirado e de 1,56 ocito fertilizado/ovrio aspirado. Dados estes que superam os achados Cogni e Baril, (2002) que encontraram 35 a 50% a porcentagem de maturao in vitro e a taxa de ocitos recuperados/ovrio aspirado ficou entre 5 e 7. Ovrios oriundos de abatedouro constituem uma abundante fonte de ocitos para a colheita do contedo folicular por aspirao, permitindo a obteno mdia de um a dois complexos cumulus-ocito (CCO) utilizveis por ovrio. Um incremento de quatro a cinco ocitos pode ser obtido aps fatiamento do ovrio com auxlio de uma lmina de navalha, mas esses ocitos so oriundos de pequenos folculos que so menos aptos a se desenvolver aps a fertilizao in vitro [6].

Referncias
[1] JARDIM, W.R. Criao de caprinos. Ed. Nobel, So Paulo, 1987. 239p.

[2]IBGE (Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica)Sistema IBGE de Recuperao Automtica. Disponvel em: http://www.sidra.ibge.gov.br/bda/tabela/ Acessado em: 19/JUN/2006. [3] GUSMO, A. L. et al. Colheita, avaliao e criopreservao de embries caprinos. Revista Brasileira de Reproduo Animal. Belo Horizonte, v. 27, n.2, p. 115-119, 2003.
[4] HASLER, J.F. Current status and potential of embryo transfer and reproductive technology in dairy cattle. Journal of Dairy Science , Champaign, v. 75, n.10, p. 2857-79, 1992. [5] BALDASSARRE H, KARATZAS CN. Advanced assisted reproduction technologies (ART) in goats. Anim Reprod Sci, v.82/83, p.255-266, 2004. [6] COGNI Y, BARIL G. Le point sur la production et le transfert
dembryons obtenus in vivo e in vitro chez la bebris e la chvre. Prod Anim, v.15, p.199-207, 2002. [7] LIMA, P.F. Use of retinoids and growth factor to in vitro production of bovine embryos. Recife: Tese (Doutorado em Cincia Veterinria) Programa de Ps-graduao em Cincia Veterinria, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Recife, 2004. [8] SEIDEL Jr., G.E., JOHNSON, L.A. Sexing mammalian sperm overview. Theriogenology, Stoneham, v. 52, n. 8, p. 1267-1272, 1999.