UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS Curso de Ps-Graduao em Engenharia Metalrgica e de Minas

Dissertao de Mestrado

SNTESE, CARACTERIZAO E AVALIAO DO PERFIL DE LIBERAO in vitro DE HIDROGIS DO LCOOL POLIVINLICO pH SENSITIVOS PROCESSADOS POR MTODOS FSICO-QUMICOS

Autora: Carolina Mieko Sadahira Orientador: Professor Herman Sander Mansur Fevereiro/2007

UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

Curso de Ps-Graduao em Engenharia Metalrgica e de Minas

Carolina Mieko Sadahira

SNTESE, CARACTERIZAO E AVALIAO DO PERFIL DE LIBERAO in vitro DE HIDROGIS DO LCOOL POLIVINLICO pH SENSITIVOS PROCESSADOS POR MTODOS FSICO-QUMICOS

Dissertao de Mestrado apresentada ao Curso de Ps-Graduao em Engenharia Metalrgica e de Minas da Universidade Federal de Minas Gerais

rea de concentrao: Cincia e Engenharia de Materiais Orientador: Professor Herman Sander Mansur

Belo Horizonte Escola de Engenharia da UFMG 2007

AGRADECIMENTOS

Deus.

minha me pelo incansvel apoio, incentivo, coragem e carinho.

Ao meu marido Reinaldo Xisto pela amizade, compreenso, pacincia e constante presena nos momentos difceis.

Aos meus irmos Gelson Hakuo, Mnica Akiko e Joo Nozomu.

Ao Prof. Herman Sander Mansur pela orientao, confiana e ensinamentos.

A Valle S.A.que me disponibilizou e apoiou financeiramente.

Ao Dr. Amrico Craveiro pela colaborao para a realizao do projeto.

Ao Instituto Newton Paiva e, em especial, Adriana do Nascimento.

Dermet Agekem pela doao das amostras de lcool Polivinlico.

Embrarad pela irradiao das amostras dos hidrogis.

Aos amigos do LTF , LEB e SIT (Valle) que me auxiliaram no trabalho: Edson, Ado Roberto, Ceclia, Patrcia, Larissa, Tanira, Bergson, Elbi, Igor, Alex, Samir, Gleicilane e Ivy.

Aos colegas do LASMAT e, em especial, Magda, Fagner, Juliano, Alexandra, Agda, Lvio e Denise.

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SUMRIO

LISTA DE FIGURAS......................................................................................................... V LISTA DE TABELAS ......................................................................................................VIII 1. INTRODUO...............................................................................................................1 2. OBJETIVOS: .................................................................................................................2 2.1. OBJETIVOS GERAIS:.................................................................................................2 2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS: ......................................................................................2 3. REVISO BIBLIOGRFICA ..........................................................................................3 3.1. SNTESE E PROPRIEDADES DO PVA ......................................................................3 3.2. PREPARAO DOS HIDROGIS ..............................................................................4 3.2.1. MODELO DE RETICULAO QUMICA COM GLUTARALDEDO (GA) .............4 3.2.2. MODELO DE RETICULAO COM CIDO CTRICO E RADIAO GAMA.......5 3.3. APLICAES DE HIDROGIS NA LIBERAO DE FRMACOS.............................9 3.4. CLASSIFICAO DOS HIDROGIS ........................................................................12 3.5. ESTRUTURA DOS HIDROGIS...............................................................................13 3.6. PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS DOS HIDROGIS .........................................13 3.7. MECANISMOS DE INCHAMENTO ...........................................................................14 3.8. INCORPORAO DO FRMACO NOS HIDROGIS...............................................15 3.9. MECANISMOS PARA A LIBERAO CONTROLADA DE FRMACOS ..................15 3.10. HIDROGIS pH SENSITIVOS ................................................................................18 3.11. PROPRIEDADES DOS HIDROGIS pH SENSITIVOS...........................................19 3.12. DOENAS INFLAMATRIAS INTESTINAIS ..........................................................20 3.12.1. DOENA DE CROHN ......................................................................................20 3.12.2. RETOCOLITE ULCERATIVA ...........................................................................21 3.13. MESALAZINA..........................................................................................................22 3.13.1. PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS..............................................................22 3.13.2. FARMACOCINTICA .......................................................................................22 3.13.3. MECANISMO DE AO...................................................................................23 3.14. CARACTERIZAO DOS FILMES E HIDROGIS DE PVA ...................................23 3.14.1. ESPECTROMETRIA NO ULTRAVIOLETA.......................................................23 3.14.2. ESPECTROMETRIA NO INFRAVERMELHO POR TRANSFORMADA DE FOURIER - FTIR ..........................................................................................................24 4. METODOLOGIA ..........................................................................................................27 4.1. FLUXOGRAMA .........................................................................................................27

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4.2. PREPARO DA SOLUO AQUOSA DE PVA...........................................................28 4.3. SNTESE DO FILME DE PVA ...................................................................................29 4.3.1. RETICULAO COM GLUTARALDEDO (GA)..................................................29 4.3.2. RETICULAO COM CIDO CTRICO E RADIAO GAMA ...........................29 4.4. CARACTERIZAO DO PVA E DOS HIDROGIS DERIVADOS DO PVA ..............30 4.4.1. DETERMINAO DA VISCOSIDADE DA SOLUO AQUOSA DE PVA..........30 4.4.2. ESPECTROMETRIA NO ULTRAVIOLETA:........................................................30 4.4.3. ESPECTROSCOPIA NO INFRAVERMELHO COM TRANSFORMADA DE FOURIER (FTIR)..........................................................................................................31 4.5. TESTE DE INCHAMENTO ........................................................................................31 4.6. CARACTERIZAO E INCORPORAO DO FRMACO .......................................32 4.6.1. ESPECTROSCOPIA NO INFRAVERMELHO COM TRANSFORMADA DE FOURIER (FTIR)..........................................................................................................32 4.6.2. PREPARO DA SOLUO DO FRMACO.........................................................33 4.6.3. INCORPORAO DO FRMACO NO HIDROGEL DE PVA RETICULADO COM GA.......................................................................................................................33 4.7. TESTE DE LIBERAO in vitro ................................................................................33 4.7.1. PADRONIZAO DO MTODO DE ANLISE DA MESALAZINA POR ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA.........................................................................33 4.7.2. HIDROGEL DE PVA RETICULADO COM GA E MESALAZINA .........................34 4.7.3. PVA SEM O AGENTE RETICULANTE COM A MESALAZINA...........................34 5. RESULTADOS E DISCUSSES .................................................................................35 5.1. ASPECTOS VISUAIS DOS FILMES DE PVA E HIDROGIS DERIVADOS DE PVA RETICULADOS........................................................................................................35 5.2. CARACTERIZAO DO PVA E DOS HIDROGIS DERIVADOS DO PVA ..............37 5.2.1. VISCOSIDADE DA SOLUO AQUOSA DE PVA.............................................37 5.2.2. ESPECTROMETRIA NO ULTRAVIOLETA.........................................................39 5.3. ESPECTROSCOPIA NO INFRAVERMELHO COM TRANSFORMADA DE FOURIER (FTIR)..............................................................................................................41 5.3.1. FILMES DE PVA ................................................................................................41 5.3.2. HIDROGEL DE PVA RETICULADO COM GLUTARALDEDO (GA)...................45 5.3.3. PVA SUBMETIDO A RADIAO GAMA ............................................................52 5.3.4. PVA RETICULADO COM CIDO CTRICO SUBMETIDO A RADIAO GAMA ..........................................................................................................................54 5.4. INCHAMENTO ..........................................................................................................58

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5.4.1. PVA E PVA RETICULADO COM GA..................................................................58 5.4.2. PVA IRRADIADO E PVA RETICULADO COM CIDO CTRICO E RADIAO GAMA ..........................................................................................................................60 5.5. CARACTERIZAO DA MESALAZINA ....................................................................65 5.6. LIBERAO IN VITRO .............................................................................................66 5.6.1. PADRONIZAO DO MTODO DE ANLISE DA MESALAZINA POR ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA.........................................................................66 5.6.2. PERFIL DE LIBERAO IN VITRO ...................................................................69 6. CONCLUSES............................................................................................................71 7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ............................................................................72

LISTA DE FIGURAS

Figura 3.1 Reao do PVA e GA catalisada por cido. .................................................5 Figura 3.2 Reao do PVA com cido ctrico e radiao gama.....................................9 Figura 3.3 Perfis tpicos da concentrao do frmaco na corrente sangunea em funo do tempo. (a) administrao convencional com mltiplas doses e (b) liberao controlada. ..................................................................................................................10 Figura 3.4 Estmulo ao inchamento .............................................................................12 Figura 3.5 - Representao esquemtica dos passos envolvidos na reticulao e incorporao da droga no hidrogel. .............................................................................15 Figura 3.6 Liberao do frmaco de um sistema reservatrio (a) e matricial (b)..........16 Figura 3.7 Liberao do frmaco do sistema osmoticamente controlado. ...................17 Figura 3.8 Degradao do polmero (a) eroso superficial, (b) eroso volumtrica. ....17 Figura 3.9 Inchamento do hidrogel pH sensitivo (a) aninico e (b) catinico ...............19 Figura 3.10 Anatomia do trato gastrointestinal humano...............................................21 Figura 3.11 Estrutura qumica da mesalazina..............................................................22 Figura 3.12 Transies eletrnicas do PVA totalmente e parcialmente hidrolisado. ....24 Figura 5.2 Relao do Grau de Hidrlise e Viscosidade para os PVAs ......................38 Figura 5.3 Relao da Massa Molar e Viscosidade para os PVAs..............................39 Figura 5.4 Espectros no ultravioleta do PVA 87-31 e do PVA 98-31 ...........................40 Figura 5.5 Espectros no ultravioleta do PVA 87-85, PVA 96-85 e do PVA 98-85 ........40 Figura 5.6 Espectro na regio do infravermelho para o PVA (PVA 87-85)...................42 Figura 5.7 Espectro na regio do infravermelho para o PVA (PVA 96-85)...................42 Figura 5.8 Espectro na regio do infravermelho para o PVA (PVA 98-85)...................43 Figura 5.9 Espectro na regio do infravermelho para PVA com diferentes graus de hidrlise: (a) PVA-88-85, (b) PVA-96-85, (c) PVA-98-85 .............................................43 Figura 5.10 Relao do Grau de Hidrlise e o contedo de Grupos Acetatos do PVA 44 Figura 5.11 - Relao do Grau de Hidrlise e a Cristalinidade do PVA .......................45 Figura 5.12 - Espectro na regio do infravermelho para o PVA reticulado com GA (PVA/GA/ 87/85) .........................................................................................................47 Figura 5.13 Espectro na regio do infravermelho para o PVA reticulado com GA (PVA/GA/ 96/85) .........................................................................................................47 Figura 5.14 Espectro na regio do infravermelho para o PVA reticulado com GA (PVA/GA/ 98/85) .........................................................................................................48

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Figura 5.15 Modo vibracional esquemtico e freqncias das bandas do PVA e do PVA reticulado com GA: (a) PVA 98-85, (b) PVA/GA/98/85 ........................................49 Figura 5.16 Espectro no infravermelho para PVA reticulado com GA (PVA/GA/98/85): (a) 100 PVA (p/p), (b) 100 PVA:12,5 GA (p/p), (c) 100 PVA:25 GA (p/p), (d) 100 PVA:37,5 GA (p/p) ......................................................................................................50 Figura 5.17 Razo [PVA]/[GA] (p/p) associado com os grupos hidroxilas (A3300 cm-1 / A1450 cm-1).................................................................................................................51 Figura 5.18 Razo [PVA]/[GA] (p/p) associado com pontes acetais (A1710 cm-1 / A1450 cm-1).................................................................................................................51 Figura 5.19 Espectros na regio do infravermelho (4000 cm-1a 650 cm-1): (a) PVA, (b) PVA/RAD 5 kGy, (c) PVA/RAD 10kGy, (d) PVA/RAD 15kGy, (e) PVA/RAD 20kGy, (f) PVA/RAD 25kGy. ........................................................................................................52 Figura 5.20 Espectros na regio do infravermelho (1900 cm-1 a 1500 cm-1): (a) PVA; (b) PVA/RAD 5kGy; (c) PVA PVA/RAD 10kGy; (d) PVA/RAD 15kGy; (e) PVA/RAD 20kGy e (f) PVA/RAD 25kGy..................................................................................................53 Figura 5.21 Espectros na regio do infravermelho (1250 cm-1 a 650 cm-1): (a) PVA; (b) PVA/RAD 5kGy; (c) PVA/RAD 10kGy; (d) PVA/RAD 15kGy; (e) PVA/RAD 20kGy e (f) PVA/RAD 25kGy. ........................................................................................................53 Figura 5.23: Espectros na regio do infravermelho (1900 cm-1 a 1500 cm-1): (a) PVA, (b) PVA/Ac/RAD 5kGy; (c) PVA/Ac/RAD 10kGy; (d) PVA/Ac/RAD 15kGy; (e) PVA/Ac/RAD 20 kGy; (f) PVA/Ac/RAD 20 kGy ............................................................55 Figura 5.24 Comparao da cristalinidade para o filme PVA e para os hidrogis de PVA.............................................................................................................................56 Figura 5.25 Comparao dos grupos carbonilas para o filme PVA e para os hidrogis de PVA........................................................................................................................57 Figura 5.26 Comparao dos grupos hidroxila para o filme PVA e para os hidrogis de PVA.............................................................................................................................57 Figura 5.27 Perfil de inchamento do PVA 98-85..........................................................58 Figura 5.28 Perfil de inchamento do PVA/GA/98/85 razo 100:25 (p/p). .....................59 Figura 5.29 Inchamento do PVA 98-85 e PVA/GA/98/85 100:25 (p/p) em 60 minutos.59 Figura 5.30 Perfil de inchamento para o PVA irradiado ...............................................60 Figura 5.31 Perfil de inchamento, aps 120 minutos, para hidrogis de PVA submetidos a diferentes doses de radiao. ...............................................................61 Figura 5.32 Perfil de inchamento para o PVA irradiado com cido ctrico (4% p/V).....62

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Figura 5.33 Perfil de inchamento para PVA irradiado com cido ctrico (4% p/V) aps 120 minutos de inchamento. .......................................................................................62 Figura 5.34 Perfil de inchamento para PVA irradiado com cido ctrico (4% p/V)........63 Figura 5.35 Comparativo de inchamento do PVA no irradiado PVA irradiado com cido ctrico (4% p/V), aps 120 minutos de inchamento. ...........................................64 Figura 5.36 Comparativo de inchamento do PVA irradiado e PVA irradiado com cido ctrico (4% p/V), aps 120 minutos de inchamento......................................................65 Figura 5.38 Espectro da soluo de mesalazina diluda (0,0125 mg/mL) em soluo tampo fosfato em diferentes pHs. .............................................................................67 Figura 5.39 Representao grfica da curva de mesalazina por espectroscopia no UV em tampo fosfato pH 3,0 ...........................................................................................68 Figura 5.40 Representao grfica da curva de mesalazina por espectroscopia no UV em tampo fosfato pH 6,0 ...........................................................................................68 Figura 5.41 Representao grfica da curva de mesalazina por espectroscopia no UV em tampo fosfato pH 9,0 ...........................................................................................69 Figura 5.42 Teste de liberao in vitro para PVA reticulado com GA e incorporado com mesalazina em diferentes pHs....................................................................................70

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LISTA DE TABELAS

Tabela 3.1 Vantagens e desvantagens da utilizao de sistema de liberao controlada de frmacos...............................................................................................11 Tabela 3.2 Monmeros utilizados na sntese de hidrogis pH sensitivos ....................18 Tabela 3.3 pH do tratogastrointestinal ........................................................................20 Tabela 3.4 Dados de absoro no UV do PVA............................................................24 Tabela 3.5 Modos vibracionais com nmero de onda correspondente para o PVA .....25 Tabela 3.7 Modos vibracionais com nmero de onda correspondente para os subprodutos de degradao do PVA...........................................................................25 Tabela 3.8 Modos vibracionais com nmero de onda correspondente para a mesalazina..................................................................................................................26 Tabela 4.1 Propriedades dos PVAs utilizados neste estudo.....................................28 Tabela 5.1 Resultados de viscosidade dos diferentes tipos de PVAs. ......................38 Tabela 5.2 Modos vibracionais com o nmero de onda correspondente do PVA ........41 Tabela 5.3 Modos vibracionais com nmero de onda correspondente para o hidrogel de PVA com glutaraldedo...........................................................................................46 Tabela 5.4 Modos vibracionais com nmero de onda correspondente para o PVA e para o hidrogel de PVA com glutaraldedo ..................................................................48 Tabela 5.5 Percentual de liberao da mesalazina incorporado no PVA no reticulado, aps 2 horas de ensaio in vitro....................................................................................69

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ABREVIATURAS Tamanho do poro da rede Desdobramento Estiramento Frao volumtrica no inchamento cido 5-aminosaliclico cido ctrico

2,s. 5-ASA AC

Ac-5-ASA cido 5-aminosaliclico acetilatado ci. DC DII Dip FTIR GA GH HETE HLA. IL-1 ji LTB4 Mc Mw NAT NF-B PVA PVAc RU TGI TNF UA UV Concentrao da espcie i Doena de Crohn Doenas inflamatrias intestinais Coeficiente de difuso das espcies, i, na matriz polimrica Espectroscopia no Infravermelho com Transformada de Fourier Glutaraldedo Grau de hidrlise cido hidroxieicosatetranico Antgeno leucocitrio humano Interleucina-1 Fluxo de massa da espcies i Leucotrienos B4 Massa molar mdia entre ligaes cruzadas Molecular weight N-acetil-transferase Fator nuclear B lcool polivinlico Acetato polivinlico Retocolite ulcerativa inespecfica Trato gastrointestinal Fator de necrose tumoral Unidade arbitrria Espectroscopia no Ultravioleta

RESUMO Neste trabalho obteve-se hidrogis do lcool polivinlico (PVA) processados por mtodo qumico e radiao gama, com o objetivo de avaliar o comportamento pH sensitivo do sistema assim como a aplicao em liberao vetorizada de frmacos no trato gastrointestinal do Homem. A propriedade reolgica das solues de PVA com diferentes graus de hidrlise e massas molares foi avaliada assim como sua estrutura qumica, atravs da espectroscopia no infravermelho e ultravioleta. A reticulao foi feita com glutaraldedo e cido ctrico/radiao gama. Os hidrogis foram avaliados quanto efetividade das ligaes cruzadas pela presena de grupos qumicos caractersticos no espectro do infravermelho, aps reticulao. Adicionalmente, a partir dos espectros do infravermelho obtidos, o perfil de cristalinidade do PVA e hidrogis derivados foi estudado. O comportamento pH sensitivo e a utilizao potencial na aplicao vetorizada de frmacos foram avaliados pelos testes de inchamento e liberao in vitro, em diferentes pHs. O frmaco, mesalazina, foi incorporado durante o processo de reticulao do PVA com o glutaraldedo. Os resultados demonstraram que o aumento da viscosidade est relacionado com o grau de hidrlise e massa molar do polmero. Os testes de inchamento demonstraram que os hidrogis de PVA apresentaram comportamentos diferentes quando submetidos a diferentes pHs, sendo maior para o pH 6 e menor para pH 3. Para o perfil de liberao in vitro da mesalazina, nos diferentes pHs, verificou-se o efeito burst nas primeiras duas horas e uma liberao mais lenta at o final do ensaio. A maior percentagem de liberao do frmaco no hidrogel de PVA com glutaraldedo foi alcanada para a formulao submetida ao pH 6 e a menor em pH 3. Como esperado, a liberao da mesalazina incorporado ao PVA no reticulado foi superior quando comparado ao resultado obtido no hidrogel de PVA com glutaraldedo, sugerindo que o sistema estudado apresenta potencial para utilizao em sistema de liberao vetorizada de frmacos.

Palavras-chaves: PVA; hidrogel; pH sensitivo; reticulao qumica; radiao gama.

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ABSTRACT In this study hydrogels of poly(vinyl alcohol) (PVA) processed by chemical method and gamma radiation were obtained in order to evaluate the pH responsive behaviour of those systems as well the utilization for the targeted drug delivery in the gastrointestinal tract of Human. The rheological properties of PVA solutions with different hydrolysis degree and weight mass were evaluated as well your chemical structure through infrared and ultraviolet spectroscopy. The crosslinking was made with glutaraldehyde and citric acid/gamma radiation. The hydrogels were analyzed on the effectiveness of the crosslink bounds by the presence of characteristics chemicals groups in the infrared spectra, after crosslinking. In addition based on the infrared spectrum obtained the degree of cristallinity was studied. The pH-responsive behavior and the potential utilization on the targeted drug delivery were measured by the swelling and in vitro test, in different pHs. The active ingredient, mesalazine, was loaded during the crosslinking process of PVA and glutaraldehyde. The results showed that the increase of viscosity is related with the hydrolysis degree and the weight mass of the polymer. Furthermore the swelling tests demonstrated that the PVA hydrogels processed showed different behaviors when submitted in different pHs, meaning that pH 6 was higher than pH 3. The in vitro release profile showed, in tested pHs, a burst effect in the first two hours and a slower release afterwards. In the PVA hydrogel crosslinked with GA, the higher release of mesalazine was obtained in pH 6 and the lowest in pH 3. As expected the release of mesalazine loaded into the PVA not crosslinked was superior when compared with the results obtained in the PVA hydrogels crosslinked with GA. This suggests that the proposal hydrogel could be used as a potential drug target delivery system.

Key-words: PVA; hydrogel; pH responsive; chemical cross-linking; gamma radiation.

1. INTRODUO

Em paralelo ao desenvolvimento de novos e mais potentes frmacos pela indstria farmacutica, significantes avanos em liberao controlada de frmacos tm sido realizados nos ltimos 30 anos, possibilitando uma srie de vantagens sobre os mtodos clssicos de liberao: (1) manuteno contnua dos nveis dos frmacos em uma faixa teraputica desejvel, (2) reduo dos efeitos colaterais devido liberao vetorizada para um tipo particular de tecido ou clula, (3) potencial reduo da dosagem do frmaco e do nmero de administraes do medicamento e (4) maior comprometimento do paciente ao tratamento (LANGER, 1998; BRAZEL, 1999).

Dentre as reas da pesquisa, grandes esforos esto sendo realizados em sistemas de liberao vetorizada no clon (KOPECEK, 1992; VANDAMME, 2002; YANG, 2002; BAJPAI, 2006). A necessidade justificada no somente para as doenas inflamatrias intestinais (DI) que compreendem, principalmente, a doena de Crohn (DC) e retocolite ulcerativa inespecfica (RU), onde so necessrias altas concentraes do frmaco no local de ao, mas tambm para a liberao sistmica de frmacos tais como protenas e peptdeos, que normalmente so degradados e/ou pouco absorvidos no estmago (AURORA, 2006; YANG, 2002).

Os hidrogis tm atrado bastante ateno para aplicao em sistemas de liberao de frmacos e, em especial, os hidrogis estmulo-sensitivos, uma vez que eles podem perceber alteraes do meio e induzir alteraes em sua estrutura (com alterao no inchamento), resultando na liberao do frmaco incorporado matriz do hidrogel (RUIZ, 2001; MIYATA, 2001; GUPTA, 2002; PEPPAS, 2002a ).

Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um hidrogel pH sensitivo pelo mtodo qumico e radiao gama, a partir do lcool Polivinlico, com o intuito de avaliar a potencialidade deste sistema como liberao alvo especfico no clon, quando submetido a diferentes pHs, simulando o pH do estmago e do intestino.

2. OBJETIVOS:

2.1. OBJETIVOS GERAIS:

O objetivo geral do presente trabalho estudar a viabilidade da utilizao do hidrogel de PVA, processado por mtodos fsico-qumicos, como sistema adequado para incorporao e liberao controlada de frmaco no sistema gastrointestinal do homem, quando submetido a diferentes pHs.

2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS:

Sntese e caracterizao do hidrogel utilizando o lcool polivinlico (PVA) com diferentes graus de hidrlise atravs de reticulao qumica com glutaraldedo (GA) e reticulao fsica (radiao gama) com o cido ctrico (AC).

Incorporao, avaliao do comportamento de inchamento assim como da liberao in vitro do frmaco mesalazina, em diferentes pHs, utilizando a potenciometria, espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR) e espectroscopia no ultravioleta (UV).

3. REVISO BIBLIOGRFICA 3.1. SNTESE E PROPRIEDADES DO PVA

O lcool polivinlico (PVA) apresenta uma estrutura qumica relativamente simples com grupos hidroxilas laterais. O monmero, lcool vinlico, no existe em uma forma estvel rearranjando para o seu tautmero, acetaldedo. Portanto, o PVA produzido pela polimerizao do acetato vinlico para acetato polivinlico (PVAc), seguido pela hidrlise do PVAc para PVA conforme equao 3.1. A reao de hidrlise no completa resultando em polmeros com certos graus de hidrlise dependendo da extenso da reao. Na essncia, PVA sempre um copolmero de PVA e PVAc (PEPPAS, 2000).

CH2

CH O C CH3 O

CH2CH O C CH3

n Hidrlise O

CH2CH x HO

CH2CH O C CH3 lcool

Polimerizao

Acetato de vinila (VAM)

Acetato de Polivinila (PVAc)

(3.1)

Polivinlico

O PVA um dos polmeros mais utilizados devido a sua excelente propriedade mecnica. Tambm biodegradvel sob determinadas condies. PVA comercial uma mistura de estruturas estereoqumicas diferentes (isottico, sindiottico e attico). Sua estereoqumica e propriedades fsico-qumicas so altamente dependentes dos mtodos de preparao. A solubilidade do PVA em gua depende do grau de hidrlise e polimerizao. Usualmente, PVA com grau de hidrlise de 98,5% ou maior pode ser dissolvido em gua a 70C, que a prtica mais com um no preparo desta soluo (WANG, et al., 2004).

3.2. PREPARAO DOS HIDROGIS

A preparao dos hidrogis envolve a formao de ligaes cruzadas de polmeros lineares ou polimerizao simultnea de monmeros monofuncionais e formao de ligaes cruzadas com monmeros polifuncionais. Polmeros naturais, semi-sintticos ou sintticos podem ser usados para a sntese dos hidrogis. Usualmente, utilizam-se polmeros com grupos laterais tais como hidroxila, amina, amida, ter, carboxila e sulfonato (GUPTA, et al., (2002).

Existem diferentes mtodos qumicos e fsicos que podem ser utilizados para a formao das ligaes cruzadas nos hidrogis. No mtodo qumico, as ligaes covalentes esto presentes nas cadeias dos polmeros. Entretanto, os agentes utilizados so geralmente txicos e precisam ser removidos do gel antes da aplicao. Tais efeitos adversos so eliminados quando so utilizados agentes fsicos de ligao cruzada (HENNINK, et al., 2001).

3.2.1. MODELO DE RETICULAO QUMICA COM GLUTARALDEDO (GA) PVA pode ser reticulado atravs de agentes de reticulao. Alguns destes agentes incluem: glutaraldedo, acetaldedo, formaldedo e outros monoaldedos. Quando estes agentes so utilizados, em presena de cido sulfrico, cido actico ou metanol, pontes acetais so formadas entre o grupo hidroxila do PVA e o glutaraldedo, conforme equao 3.2 (Mansur, 2006).
H3 C

)
OH

H3C

(
OH O

H CH 3

H H O

+O
Glutaraldedo

O CH 3

Pontes acetais

(3.2)

PVA

O H3 C

O CH 3

A figura 3.1 ilustra a formao das pontes acetais aps a reticulao com glutaraldedo.
OH HO

O=C CH3

OH

C=O CH3

[H+] Reticulao com GA

HO

PVA O CH-(CH2)3-CH O O O

Figura 3.1 Reao do PVA e GA catalisada por cido. FONTE: Adaptao de MANSUR , et al., 2005.

3.2.2. MODELO DE RETICULAO COM CIDO CTRICO E RADIAO GAMA

A formao de hidrogis por meio da radiao ionizante pode ser explicada como um resultado da recombinao de macroradicais. As vantagens deste mtodo incluem: Ausncia de agentes qumicos para a iniciao e propagao das reaes. Todo o processo, isto , a formao do hidrogel e a esterilizao ocorrem simultaneamente. As reaes qumicas de iniciao e terminao so alcanadas pela introduo ou remoo do material do irradiador. Propriedades fsico-qumicas requeridas para o produto podem ser alcanadas pelo ajuste da intensidade, tipo de radiao e tempo de radiao (dose).

O mecanismo sugerido envolve as etapas de iniciao, propagao e terminao, conforme descrito nas equaes de 3.3 a 3.9 (JABBARI, 2000; PEPPAS, 1986):

Na equao (3.3), o polmero PVA e o solvente HOH absorvem a radiao gama resultando em estados ativados de PVA* e HOH*, respectivamente. Na equao (3.4), as ligaes covalentes das molculas PVA* e HOH* dissociam causando a formao de radicais livres. Se uma ligao C-H do polmero quebra ento um radical PVA e um radical, H, so formados. A dissociao do estado ativado da molcula da gua causa a formao do radical hidroxila, OH e um radical hidrognio, H.

Na equao (3.5) dois radicais hidrognio podem recombinar causando a formao de gs hidrognio. A equao (3.6) envolve a transferncia dos radicais do polmero para as molculas da gua reduzindo a eficincia e a extenso da reticulao. A equao (3.7) envolve a transferncia do radical da gua para o polmero resultando em aumento na concentrao dos radicais de PVA e aumento na taxa de reticulao.

As equaes (3.8) e (3.9) descrevem as reaes de reticulao envolvendo o radical do polmero com outra molcula de PVA e a ligao subseqente de radicais de PVA com cido ctrico.

Ativao

CH2

CH OH H2O

CH2

CH

(a)

OH HOH
*

(b)

(3.3)

Formao de Radical Livre

CH2

CH

(a)

CH2

(c) + H (c)

OH HOH
*

OH
(b)

HO (e) + H (d)

(3.4)

Formao de Gs

H (c) + H (d)

H2 (f)

(3.5)

Recombinao:

CH2

C OH

(a) + HOH

CH2

CH OH

+ HO (g)
(3.6)

Transferncia de Radical:

CH2

CH OH

HO (e ou i) +

CH2

C OH

(h) + H2O (3.7)

Reao de reticulao:

CH2

C
(h)

+ +

CH2

CH OH

CH2

C OH

CH2

CH OH
(3.8) (i)

OH

Reao de reticulao com cido ctrico:

HO
CH2 C

H C C H HO
CH OH

OH H C C C H O C

OH

CH2

CH OH

(i)

OH

O
OH

CH2 H HOOC C H OH C

CH2

COOH

(3.9)

COOH H

Em soluo aquosa do polmero, devido alta absoro da radiao gama pelas molculas de gua, as reaes de transferncia dos radicais entre o polmero e os radicais hidroxila so predominantes, levando a formao de radicais do polmero e consequentemente ao aumento das reaes de reticulao (JABBARI, 2000).

No entanto, a utilizao da radiao gama para a reticulao de polmeros pode induzir a degradao da estrutura inicial pela ruptura e emisso de molculas e fragmentos moleculares. A extenso desta mudana depende da composio do polmero e da dose da radiao ionizante. A possvel interao da radiao gama com o PVA apresentada na equao 3.10 (BHAT, 2005):

Modelo proposto da reao de degradao do PVA:

H C H3C H H C O H

H C H H H C O

H C H H C O H

H C H H H C O

H C H H C O H

H C H H H CH Raios gama O
-H2O

(a)

H C H3C H H C O
(b)

H C H3C

H C

H C H H C O
(c) (3.10)

A alta energia da radiao afeta as ligaes H e OH das molculas de PVA resultando na quebra das ligaes. Isto leva a formao de duplas ligaes e grupos aldedos assim como a ciso da cadeia principal.

A figura 3.2 mostra o modelo de reticulao do cido ctrico e radiao gama:

OH HO
HO C O H C H HO OH H C C C H O C O OH

O=C O CH3 HO

OH

O C =O CH3

Reticulao com cido ctrico gama + radiao

PVA

HO C H

C C C

O C H OH

HO

C HO O

Figura 3.2 Reao do PVA com cido ctrico e radiao gama. FONTE: Adaptao de JABBARI, 2000; PEPPAS, 1986

3.3. APLICAES DE HIDROGIS NA LIBERAO DE FRMACOS

Por definio, o termo sistema de liberao de frmacos refere-se tecnologia utilizada para otimizar a liberao de um frmaco, onde o princpio ativo deve ser liberado e/ou absorvido, melhorando a resposta teraputica (ANSEL, et al., 1999).

10

Nos sistemas convencionais, a concentrao do frmaco no sangue segue o perfil mostrado na figura 3.3a, em que a concentrao do frmaco na corrente sangunea apresenta um aumento, atinge um pico mximo e ento declina. Os nveis plasmticos so dependentes das doses administradas e cada frmaco possui uma faixa de ao teraputica acima da qual ela txica e abaixo da qual ela ineficaz. Na liberao controlada busca-se o desenvolvimento de um sistema que mantenha a concentrao do medicamento na corrente sangunea dentro da faixa teraputica, por um tempo prolongado, utilizando uma nica dosagem, como descrito na figura 3.3b.

(a)

(b)

Figura 3.3 Perfis tpicos da concentrao do frmaco na corrente sangunea em funo do tempo. (a) administrao convencional com mltiplas doses e (b) liberao controlada. FONTE: PEPPAS, et al (1997).

A tabela 3.1 mostra as vantagens e desvantagens da utilizao de sistemas de liberao controlada de frmacos.

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Tabela 3.1 Vantagens e desvantagens da utilizao de sistema de liberao controlada de frmacos. VANTAGENS O nvel da droga no plasma continuamente mantido em uma faixa teraputica adequada. Efeitos colaterais prejudiciais podem Produo ser reduzidos e/ou eliminados. de subprodutos prejudiciais DESVANTAGENS Toxicidade ou falta de biocompatibilidade do material polimrico utilizado.

provenientes do polmero biodegradvel.

Proteo dos frmacos com tempo de Operaes cirrgicas para implantao em um meia vida curta quanto degradao. local apropriado. Maior comodidade para o paciente Dor causada pela presena do implante. quanto administrao da droga. Maior aderncia do paciente ao Custo elevado de desenvolvimento do produto.

tratamento. Maior seletividade do frmaco no local Dificuldade na interrupo do tratamento em de ao. FONTE: LANGER, 1981 caso de intoxicao grave ou intolerncia.

Hidrogis tm sido propostos como sistema de liberao controlada para uma srie de agentes bioativos, tais como contraceptivos, oftlmicos, antibiticos, frmacos antagonistas, antiarrtmicos, frmacos anticncer, anticoagulantes, enzimas e anticorpos (RANADE, et al., 2003).

Em adio s suas propriedades, as pesquisas atualmente esto sendo direcionadas para o desenvolvimento de hidrogis que alteram suas estruturas e propriedades em resposta aos meios biolgicos e fisiolgicos, isto , hidrogis que podem exibir mudanas nas propriedades de inchamento devido ao pH externo, temperatura, fora inica ou radiao eletromagntica, conforme descrito na figura 3.4. Estes materiais so conhecidos como materiais inteligentes (GUPTA et al., 2002).

12

pH

Ultra-som Campo magntico Campo eltrico Uria Metal Anticorpo Inchamento do hidrogel

Fora inica
Temperatura

Hidrogel

Inflamao Glicose Morfina

Figura 3.4 Estmulo ao inchamento FONTE: GUPTA et al (2002).

Dentre os hidrogis, os pH sensitivos, tm sido freqentemente utilizados no desenvolvimento de sistemas de liberao de frmacos clon-especficos. Alm de proteger os frmacos da degradao enzimtica no trato gastrointestinal, estes reduzem os efeitos colaterais da irritao gstrica (YANG, et al., 2001).

Em relao via oral, a liberao de frmacos no trato gastrointestinal inquestionavelmente a mais popular via de liberao por causa da facilidade de administrao de frmacos e sua grande rea superficial para absoro sistmica (PEPPAS, 2000).

3.4. CLASSIFICAO DOS HIDROGIS

Hidrogis podem ser classificados como neutros ou inicos baseados na natureza dos grupos laterais. Adicionalmente, eles podem ser redes homopolmeros ou

copolmeros, baseados no mtodo de preparao. Finalmente, eles podem ser classificados baseados na estrutura fsica como rede amorfa, semicristalina, estrutura ligao de hidrognio, estrutura supermolecular e agregados hidrocoloidais (PEPPAS, et al., 2000).

13

3.5. ESTRUTURA DOS HIDROGIS Para avaliar a utilizao dos hidrogis como um sistema de liberao de frmacos importante conhecer a estrutura e propriedades da rede polimrica. Os mais

importantes parmetros utilizados para caracterizar a estrutura da rede dos hidrogis cruzadas (Mc) e o tamanho do poro da rede () (PEPPAS, 2000). so a frao volumtrica no inchamento (2,s), massa molar mdia entre ligaes

A frao volumtrica do polmero no estado de inchamento uma medida da quantidade de lquido absorvido e retido pelo hidrogel. A massa molar entre duas ligaes cruzadas consecutivas, que podem ser de natureza qumica ou fsica, uma medida do grau de ligaes cruzadas do polmero. A correlao da distncia entre duas ligaes cruzadas, , fornece uma medida do espao disponvel entre cadeias macromoleculares disponveis para a difuso da droga (PEPPAS, 2000).

Quanto ao tamanho dos poros os hidrogis podem ser: (1) macroporoso (entre 50 nm a 1000 nm); (2) microporoso (entre 5 nm a 50 nm)e (3) no poroso (s existem a nvel molecular) (PEPPAS, 2000). A distino entre estes tipos de gis no clara porque os poros raramente apresentam-se bem definidos, especialmente para gis no porosos.

3.6. PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS DOS HIDROGIS

A razo de ligaes cruzadas um dos fatores mais importantes que afetam o inchamento dos hidrogis. definido como a razo de mol do agente de reticulao para o nmero de mol das unidades de repetio do polmero. Quanto maior a razo de ligaes cruzadas, maior quantidade de agente de reticulao incorporada na estrutura do hidrogel, levando a uma estrutura mais rgida. Conseqentemente, o inchamento ser menor quando comparado com o mesmo hidrogel que apresenta menor razo de ligaes cruzadas (PEPPAS, 2000).

A estrutura qumica dos polmeros pode tambm afetar a razo de inchamento dos hidrogis. Aqueles contendo grupos hidroflicos incham em maior grau quando comparado com aqueles contendo grupos hidrofbicos, devido ao colapso destes na presena da gua, minimizando a exposio destes na gua (PEPPAS, 2000).

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A cintica de inchamento pode ser classificada como controlada por difuso (Fickian), sendo matematicamente descrita pelas equaes 3.11 e 3.12 e inchamento controlado por relaxamento (no Fickian). Quando a difuso da gua para o interior do hidrogel ocorre mais rpido que o relaxamento das cadeias polimricas, a cintica de inchamento controlada por difuso (PEPPAS, 2000).

ji = - Dip dci dx

(3.11)

ci = Dip 2ci t x2

(3.12)

onde a concentrao e fluxo de massa das espcies, i, so designados como ci e ji, respectivamente; Dip o coeficiente de difuso das espcies, i, na matriz polimrica, e x e t representam variveis independentes de posio e tempo, respectivamente (PEPPAS, 2000). As propriedades mecnicas dos hidrogis so muito importantes para a aplicao farmacutica. Um sistema de liberao de frmacos deve manter sua integridade para proteger o agente teraputico dos meios hostis at ser liberado do sistema (PEPPAS, 2000). Mudanas no grau de ligaes cruzadas tm sido utilizadas para alcanar propriedades mecnicas desejveis. Aumentando o grau de ligaes cruzadas o hidrogel torna-se mais resistente. Entretanto, maior grau de ligaes

cruzadas resulta em uma estrutura frgil. Portanto, h um nmero timo de ligaes cruzadas para a obteno de hidrogel resistente e elstico. Copolimerizao pode ser utilizada para alcanar as propriedades mecnicas desejveis para os hidrogis. (PEPPAS, 2000).

3.7. MECANISMOS DE INCHAMENTO

O processo de inchamento que envolve a penetrao da gua na matriz polimrica segue os seguintes passos: (1) Difuso das molculas de gua para o interior da rede polimrica; (2) Relaxamento das cadeias polimricas com hidratao; (3) Expanso da rede polimrica para o meio aquoso.

15

3.8. INCORPORAO DO FRMACO NOS HIDROGIS

Existem basicamente dois mtodos para incorporao de frmacos nos hidrogis, sendo que no primeiro mtodo o polmero misturado com a droga e o agente reticulante, permitindo assim a polimerizao e a captura da droga na matriz, conforme demonstrado na figura 3.5. No segundo mtodo o hidrogel pr-formado submetido ao inchamento com uma soluo contendo o frmaco e em seguida submetido a secagem para obteno do dispositivo. (KIM, 1992).

Reticulao qumica Incorporao droga Mesalazina GA . PVA Secagem Liberao droga

Figura 3.5 - Representao esquemtica dos passos envolvidos na reticulao e incorporao da droga no hidrogel. FONTE: GUPTA, et al., (2002).

3.9. MECANISMOS PARA A LIBERAO CONTROLADA DE FRMACOS

Os mecanismos para a liberao controlada de frmacos envolvem: (1) difuso, (2) ativao do solvente e (3) reao qumica (GUTOWSKA, et al .,1997).

(1) Os sistemas controlados por difuso podem ser divididos em reservatrio no qual o frmaco est presente no ncleo circundado por uma membrana polimrica e monoltico onde o frmaco dissolvido ou disperso uniformemente atravs de uma matriz polimrica conforme ilustrado na figura 3.6 (GUTOWSKA, et al .,1997).

16

a)
a

membrana Membrana

Tempo Tempo

b)

Tempo Figura 3.6 Liberao do frmaco de um sistema reservatrio (a) e matricial (b) FONTE: Adaptao de SIM, et al., 2003; SWAMI, et al., 2004

(2) O sistema de ativao do solvente pode ser feito osmoticamente ou por inchamento. A figura 3.7 mostra o mecanismo osmtico (para agentes solveis em gua) de uma membrana semipermevel com um orifcio, circundando o centro osmtico do frmaco. Quando o sistema introduzido em um meio aquoso, a gua absorvida com uma taxa controlada e um volume saturado de soluo do frmaco liberado (igual quantidade de gua absorvida). A taxa do frmaco liberado constante dependendo do excesso do frmaco presente no centro osmtico (GUTOWSKA, et al., 1997).

17

Orifcio de liberao osmtica

liberao

liberao frmaco da droga

membrana Membrana semipermeve semipermevel

Figura 3.7 Liberao do frmaco do sistema osmoticamente controlado. FONTE: Adaptao de SIM, 2003.

entrada Entrada de HO 2 de gua

(3) Finalmente, sistemas controlados quimicamente podem liberar frmacos via degradao do polmero (eroso da superfcie ou do volume da matriz) ou clivagem do frmaco de uma cadeia polimrica (GUTOWSKA, 1997). O mecanismo de degradao pode ser observado pela figura 3.8.

a)

b)

Figura 3.8 Degradao do polmero (a) eroso superficial, (b) eroso volumtrica. FONTE: SWAMI, et al., 2004.

18

3.10. HIDROGIS PH SENSITIVOS

Os hidrogis pH sensitivos contm grupos laterais cidos (cido carboxlico ou sulfnico) ou bsicos (sais de amnio) que mudam a ionizao em resposta s mudanas no pH sendo, portanto, um dos sistemas de maior interesse para uso como dispositivos na liberao de frmacos. A tabela 3.2 exemplifica os principais monmeros aninicos e catinicos utilizados na sntese dos hidrogis pH-sensitivos.

Hidrogis de PVA puro so praticamente insensveis s mudanas de pH, segundo alguns estudos realizados. Portanto, so considerados hidrogis neutros (PEPPAS, et al., 1997).

Tabela 3.2 Monmeros utilizados na sntese de hidrogis pH sensitivos Monmeros utilizados na sntese de hidrogis pH sensitivos Nome Monmeros aninicos cidos acrlicos cido p-estireno sulfnico cido itacnico cido Crotnico Monmeros catinicos Vinil piridina Aminoetil metacrilatos 4-vinil piridina FONTE: QIU, et al., 2001. CH2CHNC5H5 CH2C(R)COO(CH2)2NR1(R2) CH2CHC5H4N CH2CRCOOH CH2CHC6H4SO3H CH2C(COOH)CH2COOH CH3CHCHCOOH Frmula Qumica

19

3.11. PROPRIEDADES DOS HIDROGIS PH SENSITIVOS

Em meio aquoso, em apropriado pH e fora inica, os grupos laterais ionizam e desenvolvem cargas fixas na rede polimrica, gerando foras repulsivas eletrostticas, responsveis pelo inchamento do hidrogel, controlando desta maneira, a liberao do frmaco. Pequenas mudanas no pH podem resultar em significantes mudanas no tamanho do poro da rede polimrica. Grupos laterais de hidrogis aninicos so

ionizados acima do pKa da rede polimrica, resultando em inchamento do hidrogel em um pH acima do pKa do polmero devido a grande fora osmtica de inchamento devido presena dos ons. O reverso o caso dos hidrogis catinicos, que incham em pH baixo. Diferenciados inchamentos de hidrogis inicos em tampes alcalinos ou cidos esto apresentados na figura 3.9 (GUPTA, et al., 2002).

Soluo cida

H+ H+ H+

H+ H+ H+

H+ H+ H+

H+ H+ H+

Baixo inchamento

Alto inchamento

(a) Hidrogel aninico Soluo Bsica

(b) Hidrogel catinico Soluo Bsica

OHOHOHOH-

OHOH OH-

OHOHOH- OH-

OHOHOHOH-

OH-

Alto inchamento

Baixo inchamento

Figura 3.9 Inchamento do hidrogel pH sensitivo (a) aninico e (b) catinico FONTE: GUPTA, et al, (2002)

Soluo cida

H+

H+ H+

H+

H+ H+

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Os hidrogis pH sensitivos so adequados para liberao controlada de peptdeos (protenas) assim como para a liberao de frmacos de baixa massa molar para o tratamento de doenas no clon. No pH do estmago, o gel apresenta baixo grau de inchamento e o frmaco protegido contra a digesto das enzimas. Este aumenta quando o hidrogel passa pelo trato gastrointestinal devido a elevao do pH. Na tabela 3.3 os valores de pH da regio do tratogastrointestinal esto descritos.

Tabela 3.3 pH do tratogastrointestinal Regio do TGI Estmago Duodeno Intestino delgado Ceco Clon FONTE: VANDAMME, et. al, 2002 pH 1,5-3,5 6,0 5,5-6,8 6,8-7,3 6,4-7,0

3.12. DOENAS INFLAMATRIAS INTESTINAIS

3.12.1. DOENA DE CROHN

Caracteriza-se por um envolvimento transmural e descontnuo dos intestinos, podendo atingir todo o tubo digestivo. A figura 3.10 evidencia a anatomia do trato gastrointestinal. Sua incidncia nas ltimas dcadas est aumentando. mais comum na raa branca, iniciando-se mais freqentemente entre os 20 e 30 anos. Tem um componente gentico hereditrio importante e prevalncia maior em indivduos HLA-2 positivo, bem como nos HLA-B27 positivo quando associada a espondilite anquilosante. A etiologia desconhecida. Observa-se, com freqncia, piora ou incio da DC associada a crises emocionais. A apresentao clnica da doena varia de acordo com a extenso, a intensidade e as complicaes presentes. Acomete, com maior freqncia, o leo terminal e o clon, iniciando-se tipicamente com crises de diarria, febre, dor abdominal e emagrecimento. Na evoluo, podem surgir complicaes locais, nutricionais e sistmicas. A doena se agrava e as crises tornamse mais freqentes, gerando comprometimento do estado geral (SIMES, et al, 2003).

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Cavidade oral

Esfago Fgado Vescula biliar Duodeno Clon ascendente Vlvula leo cecal leo Vlvula cardaca Estmago Vlvula pilrica Bao Clon Intestino delgado Clon descendente Clon sigmide nus

Ceco Apndice Reto

Figura 3.10 Anatomia do trato gastrointestinal humano FONTE: FRIEND & TOZER, 1992

3.12.2. RETOCOLITE ULCERATIVA

Consiste em uma inflamao idioptica que envolve a mucosa do clon e do reto, resultando em friabilidade difusa e eroses com sangramento. Pode, em 40 a 50% dos pacientes, ser limitada ao reto ou ao retossigmide. Em 30 a 40% dos doentes vai alm do sigmide, no atingindo o clon em toda a sua extenso e numa minoria, no mais do que 20% atinge todo o clon. Os principais sintomas so: diarria, enterorragia, tenesmo, eliminao de muco e dor abdominal tipo clica. A doena caracterizada por perodos de recidiva sintomtica e remisses e os sintomas, em geral, permanecem por semanas e at meses. Alm disso, h intensa correlao da gravidade com a extenso da doena. Existem manifestaes extra-intestinais em aproximadamente 25% dos doentes, incluindo o eritema nodoso, a epiesclerite e a artrite no-deformance oligoarticular, entre outras, (SIMES, et al., 2003).

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3.13. MESALAZINA

3.13.1. PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS

A figura 3.11 descreve a estrutura qumica do 5-aminosaliclico, tambm conhecido como 5-ASA ou mesalazina, um salicilato usado no tratamento de colite ulcerativa e doena de Crohns. Este medicamento no eficaz por via oral porque ele inativado antes de chegar ao intestino delgado (QURESHI, et al., 2005). A figura 3.9 ilustra a estrutura qumica da mesalazina.

Figura 3.11 Estrutura qumica da mesalazina. FONTE: QURESHI, et al., 2005.

3.13.2. FARMACOCINTICA

Mesalazina rapidamente e completamente absorvida no intestino superior quando administrada oralmente, mas pobremente absorvida no clon. 5-ASA livre sofre rpida e quase completa absoro sistmica no intestino proximal dependendo da concentrao e do pH local, seguido pelo metabolismo extensivo do N-acetil-5ASA, pelas N-acetil-transferase 1 (NAT1) enzima presente nas clulas epiteliais intestinais dose-dependente enquanto o tempo de meia vida dos metablitos (Ac-5-ASA) de 6 horas (SIMES, et al., 2003).

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3.13.3. MECANISMO DE AO

O mecanismo exato da ao da mesalazina no conhecido. Estudos tm mostrado que a mesalazina bloqueia a produo de interleucina-1 (IL-1) e do fator de necrose tumoral (TNF-). Mesalazina um potente inibidor da ciclooxigenase, inibindo a produo das prostanglandinas E2. O bloqueio das lipooxigenases tambm relatado com a inibio da 5-lipooxigenase e da protena ativante 5-lipooxigenase, que por sua vez bloqueia a produo e atividade quimiottica dos leucotrienos B4 (LTB4) e cido hidroxieicosatetraenico (%-HETE). possvel que sua eficcia como agente antiinflamatrio seja devido tambm aos efeitos no metabolismo dos leucotrienos. Mesalazina um potente seqestrador de radicais livres e antioxidante. Muitos dos efeitos do 5-ASA podem tambm ser explicados pela inibio da ativao do fator nuclear B (NF-B), um fator regulatrio de transcrio central envolvido na mediao da resposta inflamatria (QURESHI, et al., 2005).

3.14. CARACTERIZAO DOS FILMES E HIDROGIS DE PVA

3.14.1. ESPECTROMETRIA NO ULTRAVIOLETA

Esta tcnica se baseia na absoro molecular na regio do ultravioleta prximo (200 a 380 nm) dos compostos, dependendo da estrutura eletrnica da molcula. Esta absoro produz modificaes da energia eletrnica da molcula em conseqncia de transies dos eltrons de valncia, implicando na excitao de um eltron de um orbital molecular ocupado ao primeiro orbital de energia superior. Um espectro de ultravioleta obtido diretamente de um instrumento nada mais do que um grfico de nmeros de onda versus a intensidade da absoro. Isto permite a identificao de bandas especficas para determinadas estruturas eletrnicas presentes na molcula (SILVERTEIN, 1994).

A figura 3.12 apresenta as transies eletrnicas do PVA totalmente e parcialmente hidrolisado e a tabela 3.4 descreve os dados de absoro do PVA.

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- * H C H

H C - * C H n - * - * C H H C - * O C C H - * O - * C O n - * H

n - * n - *

H C n - *
Figura 3.12 Transies eletrnicas do PVA totalmente e parcialmente hidrolisado. Tabela 3.4 Dados de absoro no UV do PVA Grupamento Qumico C-H C-C O-H Tipo de Transio mximo (nm) 125 135 184 204 150 190

- * - * n - * n - *

C=O

- * n - *

FONTE: SILVERSTEIN, 1994

3.14.2. ESPECTROMETRIA NO INFRAVERMELHO POR TRANSFORMADA DE FOURIER - FTIR

Esta tcnica tem a funo de identificar os principais grupamentos funcionais dos compostos atravs do tipo de dinmica de vibrao desses grupos. utilizada para caracterizar as mudanas qumicas e estruturais. A intensidade das bandas pode ser expressa em transmitncia (T) ou absorbncia (A). A transmitncia a razo entre a energia radiante transmitida por uma amostra e a energia radiante que nela incide. A absorbncia o logaritmo, na base 10, do recproco da transmitncia, isto , A = log10(1/T) (SILVERTEIN, 1994).

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As tabelas 3.5 a 3.8 mostram os picos caractersticos do PVA, do PVA reticulado com GA, dos subprodutos de degradao do PVA e da mesalazina para o FTIR, respectivamente.

Tabela 3.5 Modos vibracionais com nmero de onda correspondente para o PVA
Grupo caracterstico O-H da ligao hidrognio intermolecular/intramolecular C-H dos alcanos C=O C-H do CH3 C-O (cristalinidade) C-O-C Nmero de Onda cm-1 3550-3200 2840-3000 1750-1735 prximo a 1450 1141 1150-1085 Peppas,N. A,1986 Silvestein,R.M.1991 Silvestein,R.M.1991 Referncias

Tabela 3.6 Modos vibracionais com nmero de onda correspondente para o PVA reticulado com GA Grupo caracterstico O-H da ligao de hidrognio intermolecular intramolecular C-H do aldedo C=O C-O-C Dois picos 2830-2695 Silvestein,R.M.1991 e Nmero de Onda cm-1 Referncias

3550-3200

1750-1735 1150-1085

Tabela 3.7 Modos vibracionais com nmero de onda correspondente para os subprodutos de degradao do PVA Grupo caracterstico C=O (aldedo) C=C (aldedo) Nmero de Onda cm-1 Referncias BHAT, et al, 2005; ZHANG, 2004

1736 1652

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Tabela 3.8 Modos vibracionais com nmero de onda correspondente para a mesalazina Grupo caracterstico O-H de anel aromtico N-H C-H do anel aromtico N-H de amina aromtica primria C=O C=C-C do anel aromtico Nmero de Onda cm-1 Referncias

axial 3100-2600 3130-3070 3510-3460 1750-1735 1615-1580

3650-3400

Silvestein,R.M. 1991

Coates, 2000

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4. METODOLOGIA

4.1. FLUXOGRAMA

O fluxograma proposto abaixo descreve as fases de investigao a partir dos objetivos descritos para este trabalho: Viscosidade Espectroscopia UV Espectroscopia IR Teste de inchamento

PVA

Sntese do Hidrogel

Glutaraldedo

cido ctrico Radiao gama

Mesalazina

Incorporao da droga

Espectrometria IR

Espectrometria IR

Teste de Liberao in vitro da droga

Teste inchamento

de

28

4.2. PREPARO DA SOLUO AQUOSA DE PVA

Para a realizao dos experimentos foram utilizados diferentes tipos de PVAs (Celanese Chemicals), com diferentes graus de hidrlise e polimerizao, conforme indicado na tabela 4.1. Todos os dados relacionados com o GH e Mw (Molecular weight0 foram obtidos atravs dos certificados tcnicos do fabricante (Celanese Chemicals USA).

As solues de PVA foram preparadas nas concentraes de 5% e 10% (p/p), utilizando gua miliQ. Inicialmente, sob agitao magntica, o PVA foi adicionado lentamente em um erlenmeyer contendo gua, temperatura ambiente. Em seguida, o erlenmeyer foi aquecido em banho-maria (temperatura entre 855C) at solubilizao completa. Aps resfriamento, foi adicionada gua para compensao do solvente evaporado e o pH foi corrigido para 2,00 0,05 com HCl 1,0 M (P.A., Synth, Brasil).

A soluo de PVA obtida apresentou-se incolor e viscosa.

Tabela 4.1 Propriedades dos PVAs utilizados neste estudo. Grau de hidrlise (%) 78-82 87-89 98-98,8 87-89 PVA PVA + GA Identificao das Amostras PVA + Radiao Gama Celvol 603 Celvol 205 Celvol 107 Celvol 530 Celvol 425 Celvol 325 Celvol 165 SF 13000-23000 31000-50000 31000-50000 85000-124000 PVA 78-13 PVA + cido Ctrico/ Radiao Gama PVA/Ac/RAD -

Nome comercial

Massa molar(Mw) (g/mol)

PVA 87-31 PVA/GA/87/31 PVA 98-31 PVA/GA/98/31 PVA 87-85 PVA/GA/87/85

85000-124000 95,5-96,5 PVA 96-85 PVA/GA/96/85

85000-124000 98-98, 8 PVA 98-85 PVA/GA/98/85 PVA/RAD > 186000 99,4 PVA 99-186 -

FONTE: Celanese Chemicals, USA

29

4.3. SNTESE DO FILME DE PVA Foram transferidos 4,0 mL da soluo de PVA a 10% p/p (98,4% hidrolisado e Mw entre 85000-124000 g/mol) para moldes de plstico de 3,0 cm de dimetro. Em seguida, os mesmos foram colocados em estufa a 40C, por 48 horas, at total secagem.

Para os testes de inchamento, os filmes de PVA foram cortados nas dimenses aproximadas de 2 cm de dimetro com espessuras mdias de aproximadamente 5 mm.

4.3.1. RETICULAO COM GLUTARALDEDO (GA)

Hidrogis de PVA reticulados com GA foram preparados misturando 20,0 mL da soluo aquosa de PVA 10% (p/p) (98,4% hidrolisado e Mw entre 85000-124000 g/mol) com 1,0 mL, 2,0 mL, 3,0 mL e 5,0 mL de GA a 25% V/V (Sigma, USA, 25% (V/V)). Aps 5 minutos de reao, em temperatura ambiente, 4,0 mL das solues PVA/GA foram transferidas para moldes de plstico de 3,0 cm de dimetro e deixadas em estufa a 40C, por 72 horas, at total secagem, produzindo filmes opticamente transparentes.

Para o teste de inchamento e FTIR, as amostras, aps secagem, foram lavadas com gua milliQ para eliminao de possveis resduos e excesso do agente reticulante, com posterior secagem a 40C, por 48 horas.

4.3.2. RETICULAO COM CIDO CTRICO E RADIAO GAMA

Em balo de fundo redondo contendo 100,0 mL da soluo de PVA a 10% p/p (98,4% hidrolisado e Mw entre 85000-124000 g/mol), adicionou-se diferentes quantidades de cido ctrico (0,4 4,0 % p/V). Em seguida, as amostras foram levadas ao banhomaria a 80C, sob refluxo, e agitadas constantemente, por aproximadamente 81 minuto. Aps resfriamento, 30,0 mL das solues foram transferidas para moldes de plstico de 9 cm de dimetro.

30

Em temperatura ambiente, aps inertizao com nitrognio, as amostras foram irradiadas com 5, 10, 15, 20 e 25 kGy e mantidas em estufa a 40C, por 48 horas, at total secagem.

Para os testes de inchamento e FTIR, as amostras foram cortadas nas dimenses aproximadas de 2 cm de dimetro e espessuras mdias de 5 mm e lavadas com gua miliQ por 4 dias para eliminao de possveis resduos, com posterior secagem a 40C, por 48 horas.

4.4. CARACTERIZAO DO PVA E DOS HIDROGIS DERIVADOS DO PVA

4.4.1. DETERMINAO DA VISCOSIDADE DA SOLUO AQUOSA DE PVA

As avaliaes das viscosidades foram feitas com as solues aquosas de PVA a 5,0% p/p, com diferentes graus de hidrlise e massas molares, em triplicata, em dias diferentes, utilizando um viscosmetro marca Brookfield DV-II+, sistema SSA (Small Sample Adapter), spindle SC4. As amostras foram mantidas em repouso, por 30 minutos antes da anlise, a 26C 1C, com a utilizao de um banho termosttico. Para cada dia de anlise foram selecionados valores de viscosidade com maiores porcentagens de torque e consequentemente menores erros instrumentais. As medidas foram realizadas com 30 e 60 rpm.

4.4.2. ESPECTROMETRIA NO ULTRAVIOLETA:

Os filmes foram preparados atravs da secagem de 8 mL das solues de PVA a 5% p/p, com diferentes graus de hidrlise e massas molares, em estufa a 40C, por um perodo de 24 a 48 horas. Aps secagem, os mesmos foram cortados e colocados nas cubetas de quartzo de 1,0 cm para posterior leitura no espectrofotmetro Ultrospec 4300 pro UV/Visible.

31

4.4.3. ESPECTROSCOPIA NO INFRAVERMELHO COM TRANSFORMADA DE FOURIER (FTIR)

Os filmes de PVA na concentrao de 10% p/p e hidrogis derivados de PVA reticulados com GA (PVA/GA) e cido ctrico/radiao gama (PVA/Ac) foram obtidos na espessura de 1 a 2 mm e analisados usando a tcnica de transmitncia.

Os espectros foram obtidos utilizando o equipamento FTIR Spectrometer Universal ATR Sampling Acessory Spectrum One, Perkin Elmer, na faixa de nmero de onda compreendida entre 650-4000 cm-1 e resoluo de 4 cm-1. Os espectros FTIR foram normalizados e as principais bandas de vibrao foram associadas com grupos qumicos.

4.5. TESTE DE INCHAMENTO

Para determinao do grau de inchamento, os filmes de PVA e hidrogis de PVA reticulados com GA e cido ctrico/radiao gama foram exatamente pesados e colocados em erlenmeyers de 150 mL. Em seguida, um volume fixo de 50 mL da soluo tampo-fosfato nos pHs 3, 6 e 9 foram adicionados aos erlenmeyers. As amostras foram colocadas em shaker (Innova TM 4330 Refrigerated Incubator Shaker, New Brunswick Scientific) por 120 minutos, sob agitao a 150 rpm e 37C. Em intervalos regulares (30, 60, 90 e 120 minutos), as amostras foram removidas, o excesso de gua superficial removido com papel de filtro e pesadas em balana analtica. O grau de inchamento foi calculado conforme indicado na equao 4.1:

Grau de inchamento = Mt M0 X 100% M0

(4.1)

Onde Mt representa a massa da amostra inchada no tempo t, e M0 massa inicial da amostra antes do inchamento (RISBUD, 2000).

32

O preparo da soluo tampo fosfato para o teste de inchamento e liberao in vitro est descrito a seguir:

pH3: 34,0 g de ortofosfato dihidrognio de potssio (KH2PO4), Vetec, Brasil) foram pesados e solubilizados em 200 mL de gua miliQ a temperatura ambiente. O pH da soluo foi ajustado para 3,0 com cido ortofosfrico, utilizando-se peagmetro Mettler Toledo MP 220. Em seguida, transferiu-se para um balo volumtrico de 250 mL, completou-se o volume com gua e homogeneizou-se.

pH6: 1,7 g de ortofosfato dihidrognio de sdio (NaH2PO4), Vetec, Brasil) foram pesados e solubilizados em 200 mL de gua miliQ a temperatura ambiente. O pH da soluo foi ajustado para 6,0 com NaOH 10 M, utilizando-se peagmetro Mettler Toledo MP 220. Em seguida, transferiu-se para um balo volumtrico de 250 mL, completou-se o volume com gua e homogeneizou-se.

pH9: 4,35 g de ortofosfato dihidrognio de potssio (KH2PO4), Vetec, Brasil) foram pesados e solubilizados em 200 mL de gua miliQ a temperatura ambiente. O pH da soluo foi ajustado para 9,0 com KOH 1M, utilizando-se peagmetro Mettler Toledo MP 220. Em seguida, transferiu-se para um balo volumtrico de 250 mL, completou-se o volume com gua e homogeneizou-se.

4.6. CARACTERIZAO E INCORPORAO DO FRMACO

4.6.1. ESPECTROSCOPIA NO INFRAVERMELHO COM TRANSFORMADA DE FOURIER (FTIR)

A espectroscopia na regio do infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) foi utilizada para caracterizar a mesalazina. O espectro foI obtido utilizando o equipamento FTIR Spectrometer Universal ATR Sampling Acessory Spectrum One, Perkin Elmer, na faixa de nmero de onda compreendida entre 400-4000 cm-1 e resoluo de 4 cm-1.

33

4.6.2. PREPARO DA SOLUO DO FRMACO

Foram pesados exatamente 650 mg de mesalazina (Galena, Brasil) e transferidos para um balo volumtrico de 50 mL. O volume foi completado com soluo tampo-fosfato pH 9, resultando em uma soluo de 13 mg/mL.

4.6.3. INCORPORAO DO FRMACO NO HIDROGEL DE PVA RETICULADO COM GA

O frmaco foi incorporado ao hidrogel aps a reticulao pela mistura de 25,0 mL da soluo de mesalazina a 13 mg/mL com 125,0 mL da soluo de PVA a 10% p/p e 12,5 mL do agente reticulante GA a 25 % V/V. Em seguida, 6,5 mL da mistura resultante foi transferida para moldes de plstico de 3 cm de dimetro, espessura aproximada de 2 mm e mantida em estufa a 40C por 72 horas, at total secagem.

4.7. TESTE DE LIBERAO in vitro

O teste de liberao in vitro foi realizado para se verificar o comportamento de hidrogis de PVA reticulados com glutaraldedo como um sistema pH sensitivo para a liberao da mesalazina.

4.7.1. PADRONIZAO DO MTODO DE ANLISE DA MESALAZINA POR ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA

A quantificao da mesalazina foi realizada atravs da leitura de absorbncia no espectrofotmetro Ultrospec 4300 pro UV/Visvel, em comprimento de onda de 300 nm, aps diluio das alquotas do teste in vitro em HCl 0,1N e soluo tampo fosfato pHs 3, 6 ou 9.

Para avaliao da seletividade do mtodo, os perfis dos espectros UV da soluo de mesalazina a 0,0125 mg/mL, diluda em tampo fosfato pH 3, 6 e 9 e HCl 0,1 N assim como dos tampes fosfato pH 3, 6 e 9 foram comparados.

34

Para a avaliao da linearidade do mtodo, uma curva de calibrao foi construda pela diluio de uma soluo estoque de mesalazina (0,25mg/mL) para a obteno de concentraes de mesalazina de 0,005 mg/mL; 0,0075 mg/mL; 0,010 mg/mL; 0,0125 mg/mL; 0,015 mg/mL; 0,020 mg/mL e 0,025 mg/mL.

4.7.2. HIDROGEL DE PVA RETICULADO COM GA E MESALAZINA

O hidrogel reticulado, seco e carregado com mesalazina, foi colocado em erlenmeyers contendo 25 mL de soluo tampo-fosfato pH 3, 6 e 9. Todas as amostras foram colocadas em shaker (Innova TM 4330 Refrigerated Incubator Shaker, New Brunswick Scientific), sob agitao constante de 150 rpm, a 37C e protegidas da luz. Em intervalos de tempo, foram retiradas alquotas de 3 mL para quantificao do frmaco liberado. A cada coleta foi adicionado um volume idntico de soluo tampo-fosfato nos respectivo pH. Os ensaios de liberao foram repetidos seis vezes e o controle negativo consistiu do hidrogel de PVA reticulado com GA sem o carregamento com mesalazina.

4.7.3. PVA SEM O AGENTE RETICULANTE COM A MESALAZINA

Em paralelo, a mesalazina foi incorporada aoo PVA no reticulado e aps 2 horas de ensaio in vitro o frmaco foi quantificado. Todas as demais condies experimentais para este estudo foram idnticas s realizadas para o teste do hidrogel de PVA reticulado com GA e mesalazina.

35

5. RESULTADOS E DISCUSSES

5.1. ASPECTOS VISUAIS DOS FILMES DE PVA E HIDROGIS DERIVADOS DE PVA RETICULADOS

A figura 5.1 ilustra o aspecto macroscpico do filme de PVA assim como dos hidrogis formados entre o PVA, glutaraldedo e cido ctrico com radiao gama, aps secagem na estufa. Pode-se notar que o filme de PVA apresentou-se transparente, homogneo e flexvel enquanto que o hidrogel de PVA com glutaraldedo apresentouse incolor, transparente e rgido, em menores concentraes do agente reticulante, e amarelado quando em maior concentrao. Foi verificada a presena de bolhas nas amostras da radiao gama decorrentes da formao de gases durante a irradiao do polmero. Adicionalmente, verificou-se maior nmero de bolhas com o aumento da dose de irradiao.

36

(b) RETICULAO QUMICA COM GLUTARALDEDO

(a) FILME DE PVA (c) RETICULAO COM RADIAO GAMA

5 kGy

10 kGy

15 kGy

25 kGy

Figura 5.1 Aspecto macroscpico do (a) filme de PVA, (b) hidrogel de PVA com glutaraldedo e (c) hidrogel de PVA com cido ctrico e radiao gama

37

5.2. CARACTERIZAO DO PVA E DOS HIDROGIS DERIVADOS DO PVA

5.2.1. VISCOSIDADE DA SOLUO AQUOSA DE PVA

Os valores de viscosidade obtidos esto descritos na tabela 5.1 e nas figuras 5.2 e 5.3 relacionam os PVAs com diferentes graus de hidrlise e massas molares com as viscosidades correspondentes. Podemos verificar que a viscosidade mais alta encontrada no PVA mais hidrolisado, quando se compara polmero de mesma massa molar. Em contrapartida, quando se compara a viscosidade do PVA com mesmo grau de hidrlise e diferentes massas molares, verifica-se maior viscosidade para maiores massas molares. Estes resultados esto em conformidade com os dados de literatura (Briscoe et al, 2000) que descreveram que a viscosidade das solues aquosas de PVA est relacionada com as ligaes de hidrognio entre as cadeias do polmero e as molculas de gua e das ligaes de hidrognio inter e intra cadeias, formadas entre os grupos hidroxilas das molculas de PVA, sendo a extenso destas ligaes principalmente determinada pelo grau de hidrlise. Portanto, estes dois tipos de ligaes de hidrognio apresentam papis fundamentais na determinao do comportamento reolgico do PVA. O elevado nmero de ligaes de hidrognio formado entre o polmero e a gua associado com as ligaes inter e intra cadeias do polmero justifica a viscosidade do PVA altamente hidrolisado. J para o PVA parcialmente hidrolisado, o aumento no nmero de grupos acetatos hidrofbicos, enfraquece as ligaes inter e intra moleculares dos grupos hidroxilas das cadeias e reduz o nmero de ligaes de hidrognio com a gua, levando a reduo da viscosidade. Para o PVA com baixa massa molar, a viscosidade se deve reduo no nmero de ligaes de hidrognio inter e intra moleculares e ao menor nmero de ligaes de hidrognio com a gua.

38

Tabela 5.1 Resultados de viscosidade dos diferentes tipos de PVAs. Parmetros PVA 78-13 3,1 3,1 3,1 60,0 60,0 60,0 31,1 % Torque 31,2 30,9 Fora cisalhamento (D/cm2) Taxa cisalhamento (1/seg) 2,3 2,3 2,3 73,4 73,4 73,4 87-31 5,4 5,5 5,5 60,0 60,0 60,0 54,5 54,8 55,2 4,0 4,0 4,0 73,4 73,4 73,4 98-31 6,1 6,2 6,2 60,0 60,0 60,0 61,3 62,5 62,1 4,5 4,6 4,6 73,4 73,4 73,4 87-85 29,3 28,6 29,0 60,0 60,0 60,0 58,6 57,2 58,0 23,2 22,6 23,0 79,2 79,2 79,2 96-85 31,4 31,1 31,7 60,0 60,0 60,0 62,8 62,2 63,5 24,9 24,6 25,1 79,2 79,2 79,2 98-85 34,6 34,3 34,6 60,0 60,0 60,0 69,2 68,7 69,3 27,4 27,2 27,4 79,2 79,2 79,2 99-186 76,0 75,2 77,8 30,0 30,0 30,0 76,0 75,2 77,8 30,1 29,8 30,8 39,6 39,6 39,6

Viscosidade (mPa.s)

Velocidade (RPM)

100 90

Viscosidade (cPs)

80 70 60 50 40
96-85

99-186

Super Hidrolisado Totalmente Hidrolisado Intermedirio Hidrolisado Parcialmente Hidrolisado Baixo Hidrolisado

98-85

30
87-85

20 10
78-13 87-31 98-31

80

85

90

95

100

Grau de Hidrlise (% )
Figura 5.2 Relao do Grau de Hidrlise e Viscosidade para os PVAs

39

100 90 99-186 80

Super Hidrolisado Totalmente Hidrolisado Intermedirio Hidrolisado Parcialmente Hidrolisado 98-85 96-85 87-85 Baixo Hidrolisado

Viscosidade (cPs)

70 60 50 40 30 20 10 0
78-13 98-31 87-31

10000

40000

90000

140000

19000

240000

Peso molecular (g/mol)

Figura 5.3 Relao da Massa Molar e Viscosidade para os PVAs

5.2.2. ESPECTROMETRIA NO ULTRAVIOLETA

Os espectros dos PVAs com diferentes GH e Mw esto ilustrados atravs da figura 5.4 e 5.5. Pode-se observar que a transio eletrnica (n - *) do grupamento C=O do PVA altamente hidrolisado foi detectado no comprimento de onda de 204 nm. Entretanto, os demais picos de absoro referentes s ligaes - * e n - * do PVA hidrolisado no foram satisfatrios uma vez que as transies eletrnicas ocorrem em comprimentos de onda abaixo de 200 nm, no sendo detectadas no espectrofotmetro ultravioleta (SILVERSTEIN, 1994; SKOOG,2002). totalmente hidrolisado e das ligaes - *, n - *, - * do PVA parcialmente

40

(n - *) C=O
1,000

CH2CH x HO

CH2CH y O C CH3 O

Absorbncia (UA)

87-31

0,500

98-31
0,000 200,0 220,0 240,0 260,0 280,0 300,0

Comprimento de onda (nm) Figura 5.4 Espectros no ultravioleta do PVA 87-31 e do PVA 98-31

1,000

Absorbncia (UA)

(n - *) C=O 87-85
0,500

96-85 98-85
0,000 200,0 220,0 240,0 260,0 280,0 300,0

Comprimento de onda (nm)

Figura 5.5 Espectros no ultravioleta do PVA 87-85, PVA 96-85 e do PVA 98-85

41

5.3. ESPECTROSCOPIA NO INFRAVERMELHO COM TRANSFORMADA DE FOURIER (FTIR)

5.3.1. FILMES DE PVA

Na tabela 5.2 est sumarizado os modos vibracionais com os respectivos comprimentos de onda do PVA.

Tabela 5.2 Modos vibracionais com o nmero de onda correspondente do PVA Identificao Grupo caracterstico O-H da ligao hidrognio intermolecular/intramolecular C-H dos alcanos C=O C-H do CH3 C-O (cristalinidade) C-O-C Nmero de Onda cm-1 Referncias

I II III IV V VI

3550-3200 2840-3000 1750-1735 prximo a 1450 1150-1085 1141

Peppas,N. A,1986 Silvestein,R.M.1991 Silvestein,R.M.1991

As figuras 5.6 a 5.8 mostram os espectros tpicos para os filmes de PVA com diferentes graus de hidrlise. A banda larga observada entre 3550-3200 cm-1 est relacionada com o estiramento O-H das ligaes de hidrognio intermoleculares e intramoleculares; a banda observada entre 2840-3000 cm-1 refere-se ao estiramento C-H dos grupos alquila e os picos entre 1750-1735 cm-1 e 1150-1085 cm-1 so atribudos aos estiramentos de C=O e C-O dos grupos acetatos remanescentes do PVA (Silverstein, R.M., et.al (1994).

42

100,0
1907,23

80

2104,02 945,81

60
1374,24

%T 40

1141,28

II
3302,81

1246,02

20

III
2939,87 1731,74

IV
1427,81 1328,08

845,92

I
0,0 4000,0

VI 1087,85
1000 650,0

3000

2000

1500 cm-1
-1

Nmero de onda (cm )

Figura 5.6 Espectro na regio do infravermelho para o PVA (PVA 87-85)

100,0
1917,73

80

2104,63

60 %T 40
3283,92

III
1714,09

1265,83 1376,33 1141,28 917,08

II
2940,36

IV
1327,72 1417,62

20

846,69

VI

1087,07

0,0 4000,0 3000 2000 cm-1 Nmero de onda (cm )

-1

1500

1000

650,0

Figura 5.7 Espectro na regio do infravermelho para o PVA (PVA 96-85)

43

100,0

80
2112,98

1908,36

III

1376,74

1141,28

60
1714,31

%T 40
3281,21

1655,24 1133,02 916,74

20

II I IV
2939,93 1417,38 1327,59

V VI
847,40 1087,03

0,0 4000,0

3000

2000 cm-1 Nmero de onda (cm )

-1

1500

1000

650,0

Figura 5.8 Espectro na regio do infravermelho para o PVA (PVA 98-85) A figura 5.9 mostra os espectros na regio do infravermelho das amostras de PVA (PVA-88-85, PVA-96-85, PVA-98-85). A intensidade da banda C=O (1750-1735 cm-1) fraca para o PVA com alto grau de hidrlise, indicando que somente poucos grupos acetatos esto presentes na cadeia polimrica e intensa para o PVA com baixo grau de hidrlise.

C=O

(c) (b) (a)

4000

3000

2000

1500

1000

650

Nmero de onda (cm-1) Figura 5.9 Espectro na regio do infravermelho para PVA com diferentes graus de hidrlise: (a) PVA-88-85, (b) PVA-96-85, (c) PVA-98-85

44

ESTIMATIVA DO GH E CRISTALINIDADE DO PVA

O GH correlacionado com o nmero de grupos acetatos, significando que maior GH representa menor nmero de grupos acetatos na molcula como demonstrado na figura 5.10. Esta correlao calculada atravs da razo da banda C=O (1750 cm-1) e C-H (1450 cm-1, que permanece quase constante). Este resultado demonstra que a tcnica FTIR adequada para estimar o GH e este por sua vez, muito importante na definio do perfil de inchamento e consequentemente o perfil de liberao do frmaco.

105

100 Grau de hidrlise (%)

95

90

85
2

80

R = 0,9967

75 0,00

0,20

0,40

0,60

0,80
-1/ -1

1,00

1,20

Razo Absorbncia (A1750 cm A1450 cm )

Figura 5.10 Relao do Grau de Hidrlise e o contedo de Grupos Acetatos do PVA

O grau de cristalinidade foi obtido da espectroscopia no infravermelho atravs da intensidade da banda 1141 cm-1 (identificadas como V, nas figuras 5.6, 5.8, 5.9). A intensidade desta banda influenciada pela poro cristalina das cadeias polimricas. De acordo com a literatura (Peppas N.A, 1986; Mallapragada, S.K, 1996), esta banda est relacionada com o estiramento simtrico da ligao C-C ou ao estiramento da C-

45

O de uma parte da cadeia onde ligaes de hidrognio intramoleculares so formadas entre dois grupos OH vizinhos que esto do mesmo lado do plano da cadeia de carbono. Utilizando a razo entre as intensidades dos picos C-O (1141 cm-1) e C-O-C (1096 cm-1, que permaneceu constante e identificada como VI nas figuras 5.6, 5.8, 5.9), uma correlao entre o GH e o grau de cristalinidade foi estabelecida, como demonstrado pela figura 5.11. Como esperado, a poro cristalina dependente do nmero de grupos OH do PVA e, portanto, do grau de hidrlise, para a formao das ligaes de hidrognio.

103
Grau de hidrlise(%)

100 97 94 91 88 85 0,410

R2 = 0,9973

0,415

0,420

0,425

0,430
-1

0,435
-1

0,440

0,445

Razo absorbncia(A1145 cm /A1096 cm )

Figura 5.11 - Relao do Grau de Hidrlise e a Cristalinidade do PVA

5.3.2. HIDROGEL DE PVA RETICULADO COM GLUTARALDEDO (GA)

Na tabela 5.3 mostrada as bandas mais caractersticas do PVA reticulado com GA e seus comprimentos de onda.

46

Tabela 5.3 Modos vibracionais com nmero de onda correspondente para o hidrogel de PVA com glutaraldedo Identificao I O-H Grupo caracterstico da ligao de hidrognio Nmero de Onda cm-1 Referncias

intermolecular e intramolecular C-H do aldedo C=O C-O-C

3550-3200
Dois picos 28302695 Silvestein,R. M.1991

II III IV

1750-1735 1150-1085

Os espectros no infravermelho do PVA reticulado com GA esto apresentados nas figuras 5.12, 5.13 e 5.14. H um indicativo de que a reao do PVA com o GA

promova uma reduo da intensidade da banda do O-H (regio I) indicando a possvel formao das pontes acetais. De acordo com os espectros obtidos, sugere-se excesso de GA, mesmo aps enxges com gua, uma vez que foram evidenciados picos caractersticos de aldedo: uma banda de absoro entre 2720 a 2730 cm-1 (regio II), assim como duas bandas moderadamente intensas (dubletes) na regio de 2830-2695 cm-1, mostrando a deformao do C-H (Silverstein, R.M., et.al; 1994). Outra hiptese que explicaria a presena dos picos de aldedo no hidrogel seria pela reao incompleta do GA com os grupos OH do PVA, durante a formao das ligaes cruzadas. Como o GA um agente reticulante bifuncional, um grupo aldedo pode reagir com a cadeia polimrica do PVA formando uma estrutura hemi-acetal enquanto que o outro ficaria sem reagir em funo de uma limitao conformacional ou cintica (MANSUR, 2006).

47

100,0
754,92

80
3453,13

I II
2729,63

2095,40

1978,33 695,60 1198,90

60 %T 40

2867,39 1435,96 2944,53 1141,28 1128,21 948,90 1374,75 1242,39 1721,51

20

III

0,0 4000,0 3000 2000 cm-1 1500

-1

IV
1000 650,0

Comprimento de onda (cm )

Figura 5.12 - Espectro na regio do infravermelho para o PVA reticulado com GA (PVA/GA/ 87/85)
100,0
755,61

80

I
2726,00 3450,49

1411,95 2077,34 1640,02

687,96

60 %T 40

II
2865,51 2943,32 1435,67 1243,26 1141,28 976,26 1349,06 1128,07

1378,11

20

1719,92

III
0,0 4000,0 3000 2000 1500 cm-1
-1

IV
1000 650,0

Nmero de onda (cm )

Figura 5.13 Espectro na regio do infravermelho para o PVA reticulado com GA (PVA/GA/ 96/85)

48

100,0

2187,73

1532,13

1242,91

80

I
3497,12

II
2297,48 2946,21

1196,93 2079,35

60 %T 40

1434,81 2830,21 2867,39

III
1377,93 1717,21 1349,39

1128,45 988,94

20

IV
1000 650,0

0,0 4000,0

3000

2000

1500
-1

Nmero de ondacm-1 (cm )

Figura 5.14 Espectro na regio do infravermelho para o PVA reticulado com GA (PVA/GA/ 98/85) A tabela 5.4 sumariza as principais bandas caractersticas encontradas no FTIR.

Tabela 5.4 Modos vibracionais com nmero de onda correspondente para o PVA e para o hidrogel de PVA com glutaraldedo Identificao Grupo caracterstico O-H da ligao de hidrognio intermolecular e intramolecular O-H da ligao de hidrognio intermolecular e intramolecular C-H do grupo alquila C-H do aldedo C=O C=O C-O (cristalinidade) C-O-C C-O-C Nmero de Onda (cm-1) Referncias

PVA I PVA + GA PVA II PVA + GA PVA III PVA + GA IV V PVA + GA PVA PVA

3550-3200 3550-3200 2840-3000

Dois picos em Silvestein,R. M.1991; Coates, John. 2000; Mallapragad a, S.K. 1996

2830-2695 1750-1735 1750-1735 1141 1150-1085 1150-1085

49

Na figura 5.15 ilustra-se o espectro do PVA (PVA 98-85) e do PVA reticulado com GA (PVA/GA/98/85) que foram utilizados nos testes de inchamento e liberao in vitro.

100

II (b)

III

IV V

80

(a)
60 %T 40

20

0 4000 3000 2000 1500

-1

1000

650

Nmero de Onda (cm ) Figura 5.15 Modo vibracional esquemtico e freqncias das bandas do PVA e do PVA reticulado com GA: (a) PVA 98-85, (b) PVA/GA/98/85 Na figura 5.16 pode ser observado os espectros dos hidrogis de PVA reticulados com diferentes concentraes de glutaraldedo. Pode-se observar uma tendncia na reduo da intensidade da banda de OH em maiores concentraes de glutaraldedo, indicando uma evidncia que a reao do PVA com GA ocorre pela formao de pontes acetais entre os grupamentos hidroxilas das cadeias de PVA quando este agente reticulante usado e catalisado por cido clordrico.

50
Reticulao com GA

(d ) (c )

(b ) (a )

4000

3500

3000

2500

2000
-1

1500

1000

N m e ro d e o n d a (cm

Figura 5.16 Espectro no infravermelho para PVA reticulado com GA (PVA/GA/98/85): (a) 100 PVA (p/p), (b) 100 PVA:12,5 GA (p/p), (c) 100 PVA:25 GA (p/p), (d) 100 PVA:37,5 GA (p/p) . CORRELAO DO GRUPO HIDROXILA E PONTES ACETAIS

A figura 5.17 mostra a relao entre a razo [PVA]/[GA] e o grau de grupos hidroxilas. Esta correlao calculada atravs da razo das bandas O-H ( 3300 cm-1) e CH2 do PVA ( 1450 cm-1, que permanece praticamente inalterado). Pode ser observado que uma diminuio da razo do [PVA]/[GA] resultou em maior grau de reticulao e consequentemente reduo dos grupos hidroxilas disponveis, conforme detalhado pelo mecanismo de reao entre as cadeias de PVA com GA catalisado por cido clordrico.

51

Grupos Hidroxila (A3300 cm -1 /A1450 cm -1)

25,0

15,0 R = 0,9446 5,0 0,0 5,0 10,0 Razo [PVA]/[GA] (p/p) 15,0
2

Figura 5.17 Razo [PVA]/[GA] (p/p) associado com os grupos hidroxilas (A3300 cm-1 / A1450 cm-1)

Em adio, na figura 5.18 foi observado uma diminuio na razo [PVA]/[GA] resultando em maior formao em pontes acetais, e maior reticulao, conforme detalhado pelo mecanismo de reao. Esta concentrao foi calculada atravs da razo das intensidades associadas com as bandas vibracionais do C=O ( 1710 cm-1) e CH2 do PVA ( 1450 cm-1, que permanece praticamente inalterado).

6,0

(A1710 cm-1/A1450 cm-1)

Pontes Acetais

4,0

2,0

R2 = 0,985

0,0 0,0 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0

Razo PVA/GA (p/p)

Figura 5.18 Razo [PVA]/[GA] (p/p) associado com pontes acetais (A1710 cm-1 / A1450 cm-1)

52

5.3.3. PVA SUBMETIDO A RADIAO GAMA

As figuras 5.19, 5.20 e 5.21 apresentam os espectros FTIR obtidos para o PVA e PVA submetido radiao gama. Observam-se diferenas entre os espectros nas regies C=O (1735-1750 cm-1), C=C (1667 a 1640 cm-1), 1141 cm-1 e C-H dos alcanos (2840-3000 cm-1), este ltimo quando submetido a 25 kGy. No entanto, no podemos concluir que houve uma degradao do PVA com as doses utilizadas neste estudo uma vez que a literatura (BHAT, et al, 2005; ZHANG, 2004) relata degradao quando se observa acentuado decaimento nas bandas OH ( 3330-3340 cm-1), C-H ( 2942 cm-1) e C-O ( 1096 cm1

) assim como o aparecimento de bandas C=O do aldedo (1736 cm-1) e C=C ( 1652

cm-1) com doses iguais ou superiores a 50kGy.

f e d c
b a

4000

3500

3000

2500

2000

1500

1000

Nmero de onda (cm-1 )

Figura 5.19 Espectros na regio do infravermelho (4000 cm-1a 650 cm-1): (a) PVA, (b) PVA/RAD 5 kGy, (c) PVA/RAD 10kGy, (d) PVA/RAD 15kGy, (e) PVA/RAD 20kGy, (f) PVA/RAD 25kGy.

53

f e
d c b a

C=O

C=C

1 9 00

1 8 00

17 0 0 N m e ro d e O n d a (c m
-1

1 60 0 )

1 5 00

Figura 5.20 Espectros na regio do infravermelho (1900 cm-1 a 1500 cm-1): (a) PVA; (b) PVA/RAD 5kGy; (c) PVA PVA/RAD 10kGy; (d) PVA/RAD 15kGy; (e) PVA/RAD 20kGy e (f) PVA/RAD 25kGy.

f e d c
b a

1250

1200

1150

1100

1050

1000

950

900
-1

850

800

750

700

650

N m e ro d e o n d a (c m

Figura 5.21 Espectros na regio do infravermelho (1250 cm-1 a 650 cm-1): (a) PVA; (b) PVA/RAD 5kGy; (c) PVA/RAD 10kGy; (d) PVA/RAD 15kGy; (e) PVA/RAD 20kGy e (f) PVA/RAD 25kGy.

54

5.3.4. PVA RETICULADO COM CIDO CTRICO SUBMETIDO A RADIAO GAMA

Foram testadas as concentraes de cido ctrico (0,4% p/V; 0,8 % p/V, 1,2 % p/V, 2,0 % p/V e 4,0 % p/V) concomitantemente com as doses de 5kGy, 10kGy, 15kGy, 20kGy e 25 kGY. No entanto, a reticulao com cido ctrico foi mais intensa na concentrao de 4,0% p/V sendo esta a concentrao de escolha para todos os testes subseqentes.

As figuras 5.22 e 5.23 apresentam os espectros FTIR obtidos para o PVA e o PVA com cido ctrico submetido a diferentes doses de radiao gama. Pode-se observar um aumento da intensidade das bandas correspondentes s ligaes C=O (1750 a 1735 cm-1), indicando que os grupos carboxila do cido ctrico foram incorporados cadeia principal do polmero, conforme detalhado pelo mecanismo de reao. A possvel interferncia de resduo de cido ctrico nos espectros foi eliminada atravs do enxge com gua MiliQ por 4 dias. Adicionalmente, no foi evidenciada uma correlao entre intensidade do pico de carbonila e a dose de irradiao. De acordo com os perfis demonstrados no FTIR, provavelmente a dose de 5 kGy j seja suficiente para promover a reticulao.

C=O
f e

d c b a

4 0 0 0

3 5 0 0

3 0 0 0

2 5 0 0

2 0 0 0

1 5 0 0
-1

1 0 0 0

N m e ro

d e

o n d a

(c m

Figura 5.22: Espectros na regio do infravermelho (4000 cm-1a 650 cm-1): (a) PVA; (b) PVA/Ac/RAD 5kGy; (c) PVA/Ac/RAD 10kGy; (d) PVA/Ac/RAD 15kGy; (e) PVA/Ac/RAD 20 kGy

55
C=O

f e

c b

1 9 0 0

1 8 0 0 N m e ro

1 7 0 0 d e

1 6 0 0
-1

1 5 0 0

o n d a (c m

Figura 5.23: Espectros na regio do infravermelho (1900 cm-1 a 1500 cm-1): (a) PVA, (b) PVA/Ac/RAD 5kGy; (c) PVA/Ac/RAD 10kGy; (d) PVA/Ac/RAD 15kGy; (e) PVA/Ac/RAD 20 kGy; (f) PVA/Ac/RAD 20 kGy

CORRELAO DA CRISTALINIDADE, GRUPO CARBONILA E GRUPO HIDROXILA

A figura 5.24 apresenta os graus de cristalinidade do PVA, PVA irradiado e PVA irradiado com cido ctrico. Verificou-se uma reduo na cristalinidade aps radiao gama. Esta reduo pode ser indicativo da presena de produtos de degradao do PVA (aldedos) uma vez que a cristalinidade est relacionada com o contedo de grupos hidroxilas na molcula. A maior cristalinidade para o PVA reticulado com cido ctrico pode estar relacionado com os grupos hidroxilas do cido ctrico.

56

1,00
Cristalinidade (A1141 cm -1 /A1450 cm -1 )

0,90

0,80 0,70

0,60 0,50
PVA

1 PVA/Ac/RAD com 15kGy

PVA/RAD com 15kGy

Figura 5.24 Comparao da cristalinidade para o filme PVA e para os hidrogis de PVA A figura 5.25 compara os grupos carbonilas para o PVA, PVA irradiado e para o PVA irradiado com cido ctrico. Como esperado, pode-se verificar que a relao maior para o hidrogel irradiado com cido ctrico provavelmente em funo da incorporao dos grupos carboxilas na cadeia principal do polmero. Os grupos carbonilas do PVA se devem aos grupamentos carbonilas provenientes do grupo acetato, uma vez que o polmero utilizado 98% hidrolisado, ou seja, possui 2% de grupamentos acetatos.

57

0,30
[C=O] (A1710 cm -1/A1450 cm -1)

0,25 0,20 0,15 0,10 0,05 0,00 PVA PVA/RAD 15 kGy PVA/Ac/RAD 15 kGy

Figura 5.25 Comparao dos grupos carbonilas para o filme PVA e para os hidrogis de PVA

A figura 5.26 compara os grupos hidroxilas para o PVA, PVA irradiado e para o PVA irradiado com cido ctrico. Observa-se que a relao maior para o hidrogel irradiado com cido ctrico, em funo da presena dos grupos hidroxilas provenientes do cido ctrico. No foram verificadas alteraes relevantes com o aumento das doses de radiao gama utilizada.

1,60 (A3300 cm /A1450 cm )

-1

1,50 1,40 1,30 1,20 1,10 1,00

Grupo Hidroxila

-1

PVA

PVA/RAD 15kGy

PVA/Ac/RAD 15kGy

Figura 5.26 Comparao dos grupos hidroxila para o filme PVA e para os hidrogis de PVA

58

5.4. INCHAMENTO 5.4.1. PVA E PVA RETICULADO COM GA As figuras 5.27 e 5.28 mostram os perfis de inchamento para o PVA (PVA 98-85) e para o PVA reticulado com GA (PVA/GA/98/85 na razo de 100:25 (p/p)) sob diferentes pHs (3, 6 e 9).

Comparando as figuras 5.27 e 5.28 foi observado que uma diminuio nos grupos hidroxilas verificados no FTIR aps a reao de reticulao reduziu significativamente a afinidade dos polmeros pela gua resultando na reduo da taxa de inchamento.

200

pH 6
Inchamento (%) 150

pH 9
100

pH 3
50

0 0 30 60 Tem po (m inutos) 90 120

Figura 5.27 Perfil de inchamento do PVA 98-85.

59

Inchamento (%)

20,0 18,0 16,0 14,0 12,0 10,0 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0 30 60 90 Tempo (minutos)

pH 6 pH 9 pH 3

120

Figura 5.28 Perfil de inchamento do PVA/GA/98/85 razo 100:25 (p/p).

A figura 5.29 compara os perfis de inchamento do filme de PVA e do hidrogel de PVA reticulado com GA quando submetido a diferentes pHs. Embora BODUGOZ (1999) reporte que o PVA tenha um comportamento quase neutro frente ao estmulo de diferentes pHs, foi observado que o PVA e hidrogis derivados de PVA apresentaram comportamento pH sensitivo. A figura tambm indica que o aumento do pH de 6 para 9 resultou em uma diminuio na taxa de difuso da gua.

150,0

Inchamento (%)

100,0

50,0

0,0

pH 3
PVA 98-85

pH 6 pH

pH 9

PVA/GA/98/85 100:25 (p/p)

Figura 5.29 Inchamento do PVA 98-85 e PVA/GA/98/85 100:25 (p/p) em 60 minutos.

60

5.4.2. PVA IRRADIADO E PVA RETICULADO COM CIDO CTRICO E RADIAO GAMA 5.4.2.1. PVA IRRADIADO

A figura 5.30 apresenta o perfil de inchamento para o PVA (PVA-98-85) submetido s doses de 5, 15 e 25 kGy nos pHs 3, 6 e 9. Para todos os experimentos, observa-se maior inchamento para o pH 6 e menor para o pH 3. Para cada faixa de pH no foram observadas grandes variaes nos perfis de inchamento, quando submetidos s diferentes doses de radiao gama, conforme demonstrado na figura 5.31. Isto refora a hiptese de que as doses testadas de radiao no influenciam no perfil de inchamento.
300 250 Incham ento (% ) 200 150 100 50 0 0 30
pH 3 - 5 kGy pH 6 - 5 kGy pH 9 - 5 kGy

60 Tempo (min)
pH 3 - 15 kGy pH 6 - 15 kGy pH 9 - 15 kGy

90
pH 3 - 25 kGy pH 6 - 25 kGy pH 9 - 25 kGy

120

Figura 5.30 Perfil de inchamento para o PVA irradiado

61

300,0 250,0 Inchamento (%) 200,0 150,0 100,0 50,0 0,0 5 10 15 Dose de radiao (kGy) 20 25

pH 6 pH 9

pH 3

Figura 5.31 Perfil de inchamento, aps 120 minutos, para hidrogis de PVA submetidos a diferentes doses de radiao.

5.4.2.2. PVA RETICULADO COM CIDO CTRICO E RADIAO GAMA

A figura 5.32 apresenta o perfil de inchamento para o PVA (PVA-98-85) reticulado com cido ctrico e irradiado nas doses de 5, 15 e 25 kGy, nos pHs 3, 6 e 9. Assim como na figura 5.30, observa-se o maior inchamento para o pH 6 e menor para o pH 3. Dentro de cada faixa de pH tambm no foram observadas grandes diferenas nos inchamentos em diferentes doses de radiao gama conforme mostrado na figura 5.33.

62

450,0 400,0 350,0 Inchamento (%) 300,0 250,0 200,0 150,0 100,0 50,0 0,0 0 30 60 Tempo (minutos)
pH 3 - 5 kGy pH 6 - 5 kGy pH 9 - 5 kGy pH 3 - 15 kGy pH 6 - 15 kGy pH 9 - 15 kGy pH 3 - 25 kGy pH 6 - 25 kGy pH 9 - 25 kGy

90

120

Figura 5.32 Perfil de inchamento para o PVA irradiado com cido ctrico (4% p/V).

500,0 450,0 400,0 Inchamento (%) 350,0 300,0 250,0 200,0 150,0 100,0 50,0 0,0 5 15 20

pH 6 pH 9

pH 3

25

Dose de radiao gama (kGy)

Figura 5.33 Perfil de inchamento para PVA irradiado com cido ctrico (4% p/V) aps 120 minutos de inchamento.

A figura 5.34 apresenta os resultados de inchamento para PVA reticulado com cido ctrico e irradiado com 15 kGy, nos pH 3, 6 e 9. Considerando os pKas do cido ctrico (3,15 (pKa1); 4,77 (pKa2) e 5,19 (pKa3)), sugere-se que ocorra a desprotonao dos

63

grupos carbonila com o aumento do pH, e em conseqncia, a repulso entre as cargas negativas, resultando em maior inchamento no pH 6. Os resultados para o pH 9 so menores que pH 6 devido a neutralizao das cargas negativas dos grupos carbonila pelo aumento da fora inica.

450,0 400,0 350,0 Inchamento (%) 300,0 250,0 200,0 150,0 100,0 50,0 0,0 0 30 60 Tempo (minutos) 90

pH 6

pH 9

pH 3

120

Figura 5.34 Perfil de inchamento para PVA irradiado com cido ctrico (4% p/V).

A figura 5.35 compara os resultados de inchamento do PVA no irradiado com o PVA irradiado com cido ctrico. O aumento expressivo do inchamento deste ltimo pode ser atribudo ao aumento da hidrofilicidade do hidrogel devido ligao dos grupos funcionais como hidroxila e/ou carboxlicos cadeia principal do polmero. A caracterizao pelo FTIR dos hidrogis de PVA contendo cido ctrico revelou a presena destes dois grupamentos qumicos.

64

500,0

400,0

Inchamento (%)

300,0

200,0

100,0

0,0

pH 3

pH 6

pH 9
PVA/Ac/RAD

PVA

Figura 5.35 Comparativo de inchamento do PVA no irradiado PVA irradiado com cido ctrico (4% p/V), aps 120 minutos de inchamento.

A figura 5.36 compara os resultados de inchamento do PVA no irradiado, PVA irradiado com 15 kGy e PVA reticulado com cido ctrico e irradiado com 15 kGy. notvel o aumento do inchamento para o PVA contendo cido ctrico e radiao gama quando comparado com outros sistemas. Nos hidrogis contendo cido ctrico, diferentemente dos demais, existem grupamentos hidroflicos (hidroxila e carbonila) responsveis pela entrada de solvente (gua) na matriz polimrica, alm da repulso eletrosttica da desprotonao da carbonila.

65

500,0

400,0 Inchamento (%)

300,0

200,0

100,0

0,0

PVA/RAD

pH 3

pH 6

pH 9
PVA/Ac/RAD

Figura 5.36 Comparativo de inchamento do PVA irradiado e PVA irradiado com cido ctrico (4% p/V), aps 120 minutos de inchamento.

5.5. CARACTERIZAO DA MESALAZINA

A figura 5.37 apresenta o espectro tpico para a mesalazina. Foi observado a superposio de uma srie de bandas na regio entre 2000 cm-1 a 3500 cm-1 . Em 3650-3400 cm-1, a banda est relacionada ao estiramento O-H do anel aromtico; em 3100-2600 cm-1 a banda est relacionada com a deformao axial de N-H; em 31303070 cm-1 ao estiramento C-H do anel aromtico; em 3510-3460 cm-1 ao estiramento N-H da amina aromtica; entre 1750-1725 cm-1 ao estiramento de C=O e em 16151580 cm-1 ao estiramento C=C-C do anel aromtico (Silverstein, et.al (1991); Coates, J. (2000).

66

T (%)

O-H (3500 cm ) N-H (3100 cm-1) -1 C-H (3510 cm ) N-H (3510 cm-1)
-1

C=C-C (1615 cm ) C=O (1750 cm-1)

-1

4000.0

3000

2000 1500 -1 Nmero de onda (cm )

1000

400.0

Figura 5.37: Espectros na regio do infravermelho (4000 cm-1- 400 cm-1) para a mesalazina

5.6. LIBERAO IN VITRO

5.6.1. PADRONIZAO DO MTODO DE ANLISE DA MESALAZINA POR ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA

A figura 5.38, apresenta os perfis espectrofotomtricos no comprimento de onda de 300 nm, nos diferentes pHs. Esta foi preparada na concentrao de 0,0125 mg/mL, diluda em soluo tampo fosfato pH 3, 6 e 9. Pode-se verificar a seletividade da tcnica para a droga estudada pois no foram verificados outros picos no espectro no comprimento em questo.

67

Absorbncia (UA)

2,000

( - *) benzeno substitudo
1,000

Mesalazina

0,000 200,0 400,0 600,0 Comprimento de onda (nm) 800,0

pH 3 (

), pH 6 (

), pH 9 (

Figura 5.38 Espectro da soluo de mesalazina diluda (0,0125 mg/mL) em soluo tampo fosfato em diferentes pHs.

A linearidade entre as absorbncias e concentraes conhecidas de mesalazina foi determinada a partir das curvas de calibrao podendo ser visualizadas nas figuras 5.39, 5.40 e 5.41. Os resultados da regresso linear demonstram que existe uma alta correlao linear entre as variveis estudadas no intervalo de 0,0050 mg/mL a 0,0250 mg/mL.

68

1,500

Absorbncia (UA)

1,000

0,500

0,000 0,0000 0,0100 0,0200 0,0300

Concentrao (mg/mL)

Figura 5.39 Representao grfica da curva de mesalazina por espectroscopia no UV em tampo fosfato pH 3,0

1,500

Absorbncia (UA)

1,000

0,500

0,000 0,0000 0,0100 0,0200 0,0300

Concentrao (mg/mL)

Figura 5.40 Representao grfica da curva de mesalazina por espectroscopia no UV em tampo fosfato pH 6,0

69

1,500

1,000

Absorbncia (UA)

0,500

0,0000

0,0100

0,0200

0,0300

Concentrao (mg/mL)

Figura 5.41 Representao grfica da curva de mesalazina por espectroscopia no UV em tampo fosfato pH 9,0

5.6.2. PERFIL DE LIBERAO IN VITRO

A tabela 5.5 mostra os resultados de doseamento da mesalazina quando incorporado ao PVA no reticulado. Os dados mostram que, aps 2 horas de ensaio, grande parte do frmaco j se encontra no meio, ou seja, aproximadamente 84% em pH 6 e 57% em pH 3.

Tabela 5.5 Percentual de liberao da mesalazina incorporado no PVA no reticulado, aps 2 horas de ensaio in vitro

pH
3 6 9

Percentual de Liberao (%)

57,2 6,0 83,8 4,0 76,1 6,0

70

Na figura 5.42 est apresentado o resultado de liberao in vitro da mesalazina para o hidrogel de PVA com GA. Como resultado do processo de reticulao observa-se um comportamento pH sensitivo ao longo do estudo de 70 horas. Evidencia-se que a liberao em pH 3 nitidamente menor quando comparado com os demais pHs. Alm disto, observa-se uma modulao desta liberao se comparado com o PVA no reticulado.

50,00

Liberao Acumulada (%)

40,00

30,00

20,00

10,00

0,00 0 10 20 30 40 50 60 70 80

Tempo (horas) pH 3 pH 6 pH 9

Figura 5.42 Teste de liberao in vitro para PVA reticulado com GA e incorporado com mesalazina em diferentes pHs.

Os possveis mecanismos envolvidos no processo de inchamento do PVA reticulado com GA no esto totalmente claros, entretanto, conforme ressaltaram MOOTER, et al. (2003), alguns processos esto envolvidos: penetrao do meio de liberao no interior da rede polimrica, dissoluo do frmaco disperso, efeito de inchamento na permeabilidade da matriz polimrica tanto pelo frmaco quanto pelo meio e liberao do frmaco do hidrogel sob condies de inchamento. Alm do mais, a incorporao do frmaco durante a reticulao do hidrogel retarda consideravelmente a liberao do frmaco quando comparado ao mtodo de carregamento da droga por difuso.

71

6. CONCLUSES

- As propriedades reolgicas de uma soluo aquosa de PVA foram principalmente determinadas pelo equilbrio das ligaes de hidrognio entre as cadeias polimricas e entre as cadeias polimricas e as molculas da gua. Este equilbrio pode ser alterado pelo grau de hidrlise ou a massa molar do polmero.

- Os espectros do infravermelho para o PVA, PVA reticulado com glutaraldedo e PVA reticulado com cido ctrico/radiao gama, demonstraram que o procedimento experimental desenvolvido neste trabalho foi adequado para a obteno dos hidrogis.

- A incorporao do cido ctrico na cadeia de PVA utilizando radiao gama foi eficiente. Os resultados de inchamento foram muito maiores para este sistema quando comparado com o hidrogel de PVA reticulado com glutaraldedo.

- Considerando os resultados da incorporao e liberao in vitro do frmaco no PVA reticulado com GA, os hidrogis podem ser considerados sistemas promissores na vetorizao de drogas clon-especficas, evitando a liberao prematura do frmaco no meio cido.

72

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