Enzimas

Viso Geral: praticamente todas as reaes do corpo so mediadas por enzimas, que so protenas catalisadoras que aumentam a velocidacde da reao sem sofrerem alteraes no processo global. Elas canalizam, de forma seletiva, reagentes (chamados de substratos) para rotas teis. Nomenclatura: os nomes mais comuns frequentemente utilizados tm o sufixo -ase (Nome recomendado) adicionado ao nome do substrato da reao ou descrio da ao realizada. A. B. C. D. E. F. OXIDORREDUTASES: catalisam reaes de oxidorreduo. TRANSFERASES: catalisam a transferncia de grupos contendo C-, N- ou P-. HIDROLASES: catalisam a quebra de ligaes pela adio de gua. LIASES: catalisam a quebra de ligaes C-C, C-S e algumas C-N. ISOMERASES: catalisam racemizao de ismeros pticos ou geomtricos. LIGASES: catalisam a formao de ligaes entre carbono e O,S, N acoplada a hidrlise de fosfatos de alta energia (ATP,ADP...)

Nomenclatura potencialmente causadora de confuso: - Sintetase (requer ATP) e sintase (no requer ATP); - Fosfatase (utiliza gua para remover o grupo fosforila) e fosforilase (utiliza Pi para quebrar uma ligao, gerando um produto fosforilado); - Desidrogenase (NAD+/FAD o aceptor de eltrons de uma reao redox), oxidase (o O2 o aceptor, mas tomos de oxignio no so incorporados ao substrato) e oxigenasse (um ou ambos os tomos de oxignio so incorporados).

PROPRIEDADES DAS ENZIMAS: so, na maioria dos casos, protenas catalisadoras que aumentam a velocidade de uma reao e no so consumidas durante a reao que catalisam. Alguns tipos de RNA podem atuar como enzimas, esses so chamados de ribozimas e so encontrados em menor frequncia. A. Stios Ativos: as molculas enzimticas contm uma regio especfica, composta por cadeias laterais de aminocidos que participam da ligao com o substrato e da catlise. O Substrato se liga Enzima, formando um complexo enzima-substrato (ES), acredita-se que isso gera uma mudana conformacional na enzima (encaixe induzido) que permite a catlise. O complexo ES convertido no EP (enzima-produto), que posteriormente se dissocia em enzima e produto.

B. Eficincia cataltica: acelera a reao em 103 at 108 vezes. O nmero de molculas de substrato convertidas em molculas de produto por uma molcula de enzima em um segundo chamado nmero de renovao (turnover) ou Kcat, e se encontra tipicamente na faixa 102 a 104s-1. C. Especificidade: as enzimas so altamente especficas, interagindo com um ou alguns poucos substratos e catalisando apenas um tipo de reao qumica. O conjunto de enzimas produzidas em uma clula define quais vias metablicas acontecero nela.

Holoenzima se refere enzima ativa com seu componente no proteico (necessrio para a realizao de sua atividade enzimtica), ao passo que a enzima sem esse componente inativa e chama-se apoenzima. Caso esse componente no proteico for um on metlico, ele ser chamado de cofator, se for uma molcula orgnica pequena chamada de coenzima essas so, frequentemente, derivadas de vitaminas. Grupo prottico o nome dado coenzima que estiver permanentemente associada uma enzima e que retorna ao seu estado original (ex.: FAD).

D. Regulao: as enzimas podem ser inibidas ou ativadas afim de que a velocidade de formao do produto responda as necessidades da clula. E. Localizao dentro da clula: grande parte delas esto localizadas dentro de organelas especificas, isso serve para isolar o substrato ou produto de outras reaes competitivas garantindo, assim, um meio favorvel para a atuao das milhares de enzimas existentes dentro de uma clula.

COMO FUNCIONAM AS ENZIMAS: o mecanismo de funcionamento enzimtico pode ser visto de duas formas diferentes. A primeira aborda a catlise em termos de alteraes de energia que ocorrem durante a reao, ou seja, a enzima cria uma rota de ao energeticamente favorvel e alternativa. A segunda perspectiva descreve como o stio ativo facilita quimicamente a catlise.

A. Alteraes de energia que ocorrem durante a reao: a maioria das reaes qumicas possui uma barreira energtica (energia de ativao) separando os reatantes dos produtos. A T*B Reagente estado de transio Produto

1. Energia livre de ativao: devido grande energia livre de ativao, as velocidades das reaes qumicas no catalisadas so frequentemente lentas. 2. Velocidade da reao: para as molculas reagirem, devem conter energia suficiente para superar a barreira de energia do estado de transio. Quando no h atividade enzimtica, uma pequena parte da populao de enzimas possuir energia suficiente para ultrapassar o estado de transio, a velocidade de reao determinada pela quantidade dessas molculas energizadas. Quanto menor for a energia de ativao, mais molculas tero energia suficiente para superar o estado de transio e, assim, mais rpida a velocidade da reao. 3. Rota alternativa de reao: a enzima no altera a energia livre dos reatantes ou dos produtos, e, assim sendo, no altera o equilbrio da reao. Entretanto, ela acelera a velocidade na qual o equilbrio atingido. Ela fornece uma rota de reao alternativa, com uma menor energia livre de ativao. B. Qumica do Sitio Ativo: 1. Estabilizao do estado de transio: o sitio ativo no um receptculo passivo, ele frequentemente atua como um molde molecular flexvel, que se liga ao substrato e inicia a sua converso para o estado de transio. Ao estabilizar o estado de transio, a enzima aumenta muito a concentrao do intermedirio reativo que poder ser convertido em produto para acelerar a reao. 2. Outros mecanismos: o stio ativo pode fornecer grupos catalticos que aumentam a probabilidade de o estado de transio se formar. Em algumas enzimas, esses grupos podem participar de uma catlise acidobsica geral, na qual os resduos de aminocidos doam ou aceitam prtons. 3. Visualizao do estado de transio: a converso do substrato em produto, catalisada por enzimas, pode ser imaginada como a remoo de um suter de um beb no cooperativo. O processo possui elevada energia de ativao, pois a nica estratgia razovel para tirar a roupa do bebe (sem rasga-la) requer que a agitao aleatria do beb resulte em uma posio em que os dois braos fiquem completamente estendidos sobre a cabea uma postura improvvel. Entretanto podemos visualizar a me agindo como enzima, primeiro entrando em contato com o beb (formando o complexo ES) e, a seguir, orientando os braos do beb para uma posio vertical estendida, anloga ao estado de transio ES. Essa postura (mudana conformacional) facilita a remoo do suter, resultando no beb sem agasalho representando o produto.

FATORES QUE AFETAM A VELOCIDADE DA REAO

Concentrao do Substrato a) Velocidade mxima: a velocidade de uma reao catalisada por enzimas aumenta com a concentrao de substrato at uma Vmx. Quando a velocidade mxima atingida significa que todos os stios de ligao disponveis na molcula j esto saturados. b) Formato hiperblico da curva de cintica enzimtica: a maioria das enzimas mostram uma cintica de Michaelis-Menten, na qual a curva de velocidade de reao inicial em funo da concentrao de substrato possui forma hiperblica. Em contraste, enzimas alostricas mostram uma curva sigmoide. Temperatura a) Aumento da velocidade com a temperatura: quanto maior a temperatura, maior ser o nmero de molculas com energia suficiente para atravessar a barreira da energia de ativao e formar os produtos da reao. b) Diminuio da velocidade com temperaturas mais altas: um aumento maior da temperatura pode resultar na desnaturao das protenas enzimticas, resultando em uma reduo da velocidade de reao.
Em humanos a temperatura tima para funcionamento enzimtico de 35 e 40 C, comeando a desnaturar em valores mais altos do que esse.

pH a) Efeito do pH sobre a ionizao do stio ativo: a concentrao de H+ afeta a velocidade da reao em vrias maneiras. Afinal, o processo cataltico pode requerer que a enzima e o substrato tenham determinados grupos qumicos em estado ionizado ou no ionizado, de modo a interagirem. Efeito do pH sobre a desnaturao da enzima: pode ocorrer quando o pH atinge valores a) Efeito do pH sobre a ionizao do stio ativo:extremos, pois a estrutura da molcula proteica depende do carter inico das cadeias laterais. b) pH timo varia de acordo com a enzima.

EQUAO DE MICHAELIS-MENTEN: A. Modelo: usado para explicar e demonstrar a enzima combinando-se de modo reversvel com o substrato, formando o complexo ES que, subsequentemente, gera o produto e regenera a enzima.

B. Equao de Michaelis-Menten: descreve como a velocidade da reao com a concentrao de substrato.

Vo=Vmx [S]/Km + [S]

Vo= velocidade inicial/ Vmx= velocidade mxima Km = constante de Michaelis-Menten (k-1 + k2)/k1 [S] = concentrao de substrato 1. Concentraes relativas de E e S: a concentrao de substrato muito maior do que da enzima. 2. Hiptese do estado estacionrio: indaga que a velocidade de formao e degradao de ES igual. 3. Velocidade inicial: indica que a velocidade de reao mediada assim que enzima e substrato so misturados. C. Concluses importantes: 1. Km: A constante de Michaelis-Menten numericamente igual concentrao de substrato em que a velocidade da reao Vmx. Ele reflete a afinidade da enzima pelo substrato, sendo constante independente da concentrao dele. a. Km baixo = alta afinidade pelo substrato. b. Km alto = baixa afinidade pelo substrato. 2. Relao entre a velocidade e a concentrao da enzima: so diretamente proporcionais em qualquer concentrao de substrato.Gr 3. Ordem de reao: quando [S] muito menor que Km, a velocidade da reao aproximadamente proporcional a concentrao de substrato a velocidade dita, ento, de primeira ordem. Quando [S] muito maior do que a constante de Michaelis-Menten, a velocidade ser constante e igual Vmx nesse caso, em que a velocidade independente da concentrao de substrato, a reao dita de ordem zero. D. Grfico de Lineweaver-Burk: tambm chamado de grfico dos duplosrecprocos, representado por uma reta que usada para calcular Vmx e Km. Podendo tambm ser usada para determinar o mecanismo de ao de inibidores enzimticos.

1/vo = Km/Vmx[S] + 1/Vmx

- Eixo X = -1/KM - Eixo Y = 1/ VMX

INIBIO DA ATIVIDADE ENZIMTICA: Qualquer substncia capaz de diminuir a velocidade das reaes catalisadas por enzimas chamada de inibidor. Em geral, Inibidores irreversveis so aqueles que ligam-se s enzimas por meio de ligaes covalentes e Inibidores reversveis ligamse elas por meio de ligaes no covalentes. Os dois tipos mais comuns de inibio reversvel, so: II. Inibio Competitiva: nesse caso, o inibidor liga-se de forma reversvel ao mesmo stio em que o substrato se ligaria, competindo com ele por esse local. A. Efeito sobre a Vmx: o efeito desse inibidor pode ser revertido por um aumento da concentrao de [S]. B. Efeito sobre o Km: essa constante aumentada para um valor aparente na presena de um inibidor. Isso significa que necessrio uma maior concentrao de substrato para atingir Vmx. C. Efeito sobre o grfico de Lineweaver-Burk: apesar da Vmx no ser alterada, o ponto de interseco em X passar a estar mais prximo de ZERO indicando um aumento do Km aparente. D. Estatinas so exemplos de inibidores competitivos. III. Inibio no competitiva (irreversvel): reconhecido pelo seu efeito caracterstico sobre Vmx. Ocorrer quando o inibidor e o substrato se ligam stios diferentes da enzima e, ainda assim, a reao no ocorre. A. Efeito sobre Vmx: essa inibio no pode ser superada pelo aumento de [S]. Desse modo, esses tipos de inibidores diminuem a velocidade mxima aparente da reao. B. Efeito sobre Km: No interfere nessa constante. C. Efeito sobre o grfico de Lineweaver-Burk: facilmente percebida pela observao da curva 1/vo contra 1/[S], onde a Vmx aparente diminui na presena desse inibidor, ao passo que o Km continua inalterado. D. O chumbo, a ferroquelatase, certos inseticidas so alguns exemplos desse tipo de inibidor... IV. Inibidores enzimticos so comumente presentes em pelo menos metade dos 10 frmacos mais prescritos nos EUA.

REGULAO DA ATIVIDADE ENZIMTICA: a velocidade da reao costuma ser alterada pela variao da concentrao de substrato, uma vez que esses se encontram na faixa de Km. Dessa

forma o aumento de [S] provoca um aumento na velocidade da reao, o que induz ao retorno do substrato ao valor normal. Alm disso, algumas enzimas com funes reguladoras especializadas respondem a efetores alostricos ou a modificaes covalentes, ou ainda, mudam sua velocidade de sntese de acordo com o pH fisiolgico. A. Regulao das enzimas alostricas: essa enzimas so reguladas por molculas chamadas efetores (ou moduladores), que se ligam a um stio diferente do sitio ativo de maneira no covalente. A presena de um efetor alostricos pode alterar a afinidade da enzima pelo seu substrato ou modificar a atividade cataltica mxima da enzima, ou ambos. Normalmente, catalisam o incio das vias metablicas. 1. Efetores Positivo = aumentam a atividade enzimtica. 2. Efetores Negativos = inibem a atividade enzimtica. 3. Efetores homotrpicos = o prprio substrato atua como efetor, ao possuir uma molcula de substrato que aumenta as propriedades catalticas de outros stios, ou seja, atua em cooperatividade. 4. Efetores heterotrpicos = nesse caso, o efetor pode ser diferente da enzima. Pode ser facilmente encontrado na via glicoltica. B. Regulao de Enzimas por Modificaes Covalentes: 1. Fosforilao e desfosforilao: os grupos fosfatos, nessas reaes, so clivados a partir de enzimas fosforiladas pela ao das fosfoprotenasfosfatases. 2. Resposta da enzima fosforilao: dependendo da enzima especifica, a forma fosforilada pode ser mais ou menos ativa do que a forma no fosforilada. C. Induo e represso da sntese de enzimas: possvel para a clula regular a quantidade de enzima presente pela alterao da velocidade de degradao das molculas das clulas enzimticas ou, mais frequentemente, por meio da alterao da velocidade de sntese de enzimas. O aumento (induo) ou a diminuio (represso)de sntese de enzimas leva a uma alterao na populao geral de stios ativos. Alteraes dos nveis enzimticos, resultantes da induo ou da represso da sntese proteica, so lenta (de horas a dias) se comparadas com as regulaes alostricas e covalentes. IX. ENZIMAS NO DIAGNSTICO CLNICO.

1. Alteraes dos nveis plasmticos de enzimas em estados patolgicos: doenas que causam leses teciduais resultam no aumento da liberao de enzimas intracelulares no plasma. Ex.: doenas do corao, fgado, musculoesqueltico.... 2. Enzimas plasmticas como ferramentas diagnsticas: algumas enzimas apresentam atividade acentuada em um ou em poucos tecidos. A presena do aumento de suas atividades no plasma reflete uma leso no tecido correspondente. Ex.: alanina-aminotransferase
(ALT) no fgado...

3. Isoenzimas e doenas cardacas: podem conter diferentes nmeros de aminocidos

com cargas e, portanto, podem ser separadas umas das outras por eletroforese. Diferentes rgos contm diferentes nveis de isozimas, logo possvel identificar o stio da leso tecidual atravs do padro de isozimas encontrado no plasma. Ex.: creatina-cinase
(CK) comumente encontrada no miocrdio...

RESUMO: Enzimas so protenas catalisadoras que aumentam a velocidade de uma reao qumica por diminuir a energia do estado de transio. Elas no so consumidas durante a reao que catalisam. Possuem um stio ativo, no qual estaro presentes cadeias laterais de aminocidos que participam da ligao com o substrato e da catlise. Stio ativo + substrato = complexo enzima-substrato (ES) Acredita-se que a formao do ES cause uma mudana conformacional na enzima (encaixe induzido), que permitir a catlise. ES -> EP (enzima-produto) O EP ser, posteriormente, dissociado em enzima e produto. A enzima permite a acelerao de uma reao por criar via alternativa de reao com menor energia livre de ativao. Por no alterar a energia livre dos reatantes e dos produtos, ela no altera o equilbrio da reao. A maioria das enzimas apresenta a cintica de Michaelis-Menten. Inibidores so substancias capazes de diminuir a velocidade de uma reao catalisada por uma enzima. Dois tipos de inibidores so mais comuns: Inibidor competitivo: aumenta o Km aparente Inibidor no-competitivo: a Vmx aparente diminuda Em contraste, as enzimas alostricas, com mltiplas subunidades, frequentemente mostram uma curva sigmoidal. So, geralmente, achadas catalisando passos comprometidos (normalmente os mais lentos ou limitantes da velocidade) de uma via.

Elas so reguladas por molculas chamadas efetores (ou moduladores), que se ligam de forma no covalente a um stio diferente do ativo. Os efetores podem ser positivos ou negativos, esses, respectivamente, aceleram e diminuem a velocidade da reao. Um efetor alostrico pode alterar a afinidade da enzima por seu substrato ou modificar a atividade cataltica mxima da enzima, ou ambos. As enzimas podem, tambm, ser reguladas por modificao covalente e por mudana na velocidade de sua sntese ou degradao. Na medicina, enzimas possuem valor diagnstico e teraputico.

Enzima Michaeliana: protenas globulares constitudas de uma nica cadeia polipeptdica. So representadas, no grfico de Vmx pela [S] por uma hiprbole. Enzima Alostrica: protenas globulares, constitudas de pelo menos duas cadeias polipeptdicas, associadas atravs de ligaes no covalentes (Estrutura quaternria). No grfico de Vmx pela [S], so representadas por uma curva sigmoidal.

MECANISMOS DE REGULAO DA ATIVIDADE ENZIMTICA

EVENTO REGULADOR

EFETOR TPICO Substrato Produo da reao Produto final da via Outra enzima Hormnio ou metablito

RESULTADOS
Altera velocidade (vo) Altera Vmx e/ou Km Altera Vmx e/ou K0,5 Altera Vmx e/ou Km Altera a quantidade da enzima

TEMPO NECESSRIO PARA A ALTERAO

Inibio pelo Substrato Inibio pelo produto Controle alostrico Modificao covalente Sntese ou degradao da enzima

Imediato Imediato Imediato Imediato a minutos Horas a dias

p.s.: inibio pelo produto final tambm chamada de retroalimentao.