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Versión: 1 FORMATO Código: PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS Fecha: 05/Ago/2013
Versión: 1
FORMATO
Código:
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE
MICROORGANISMOS
Fecha: 05/Ago/2013

IDENTIFICACIÓN

UNIDAD ACADÉMICA:

DEPARTAMENTO

DE

CIENCIAS

BÁSICAS

UNIDAD DE ESTUDIO:

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

PRACTICA 1:

Preparación de medios de cultivo y aislamiento de microorganismos

FUNDAMENTO TEORICO

Los microorganismos (bacteria, virus, hongos, protozoarios, y algunas algas) se pueden encontrar virtualmente en todo el medio ambiente. Se encuentran en el aire, agua, suelo, alimentos, petróleo, en la materia orgánica en descomposición y en las superficies del cuerpo. Estos organismos son extremadamente importantes para la salud humana y el medio ambiente además en los avances en inmunología, virología, genética y biología molecular.

En microbiología, la esterilización se define como la destrucción o remoción de cualquier forma de vida. Un objeto que esté libre de cualquier organismo viviente, se dice que está estéril. La esterilización es uno de los mecanismos utilizados para el control de los microorganismos, existen otros métodos de control que sólo matan o inhiben una parte de la población microbiana como son: desinfección, pasteurización, quimioterapia y asepsis. Estos métodos permiten prevenir la contaminación de los materiales de laboratorio y de cultivos puros, evitan las infecciones y facilitan el tratamiento de enfermedades.

La esterilización es muy importante en los laboratorios de microbiología porque la mayoría de los experimentos son realizados con cultivos puros o axénicos (cultivos que solamente tienen un tipo de microorganismo) o con cultivos mixtos o consorcios (cultivos constituidos por más de un tipo de microorganismo) por lo que es necesario primero esterilizar los materiales y medios de cultivo.

El crecimiento microbiano sólo es posible si las condiciones físicas (temperatura de incubación, y la cantidad de oxígeno presente) y químicas (constituyentes del medio de cultivo, pH, etc.) son apropiadas.

Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos, razón por la cual es difícil aislarlas. A menudo nuestro interés es caracterizar una especie bacteriana, para lo cual debemos estar preparados para aislar, cultivar e

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identificar a la misma. Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Es decir, es un soporte que proporciona sustancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos. La diversidad metabólica de los microorganismos es enorme, por ello, la variedad de medios de cultivo también lo es, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos. El conocimiento de las necesidades nutritivas y físicas de los microorganismos es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado. Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan.

OBJETIVOS

Conocer los principios generales de las técnicas de esterilización y preparación de medios de cultivo de uso común en Microbiología.

Adquirir conocimientos básicos teóricos y prácticos de la siembra y aislamiento de bacterias.

Determinar la presencia de microorganismos en diferentes ambientes.

Establecer la diversidad morfológica de los microorganismos recuperados en los distintos medios de cultivo.

MATERIALES

Cajas de Petri estériles

2 tubos de solución salina con 9 ml

Hisopos o escobillones estériles

Balanza

Autoclave

Erlenmeyer

Mechero Bunsen

Incubadora

Probeta

REACTIVOS

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Medio de cultivo Plate Count

Medio de cultivo PDA (Agar Papa Dextrosa)

Agua destilada

1. PROCEDIMIENTO

Preparación de medios de cultivo

1. Pesar los gramos necesarios de acuerdo a las instrucciones del fabricante

para preparar 200 ml de medio Agar Plate Count y Agar PDA. Adicionar el agua

destilada y calentar a ebullición para disolver con agitación si es necesario.

Medir y ajustar el pH

2. Esterilizar en autoclave a 121 °C por 15 min.

3. Distribuir 20 ml de medio a cada caja de Petri, dejar solidificar y someter a prueba de esterilización a 37 °C

Aislamiento de microorganismos

Ambiente

-Seleccione un lugar y realice le descripción del sitio

-Remover las tapas de las cajas petri que contienen el agar nutritivo y el agar PDA. Déjelas por espacio de 20 min, una vez concluido el tiempo tape las cajas, inviértalas y márquelas

Superficies

-Tomar el hisopo estéril, humedecerlo en el tubo de solución salina y luego hacer un frotis sobre el celular, la superficie de trabajo o una moneda, luego pasar el hisopo sobre los medios de cultivo

-Tomar otras cajas de Petri con agar Plate Count y Agar PDA dividirlas y colocar los dedos

Incubar las cajas de Agar nutritivo o Plate Count a 37°C por 24 a 48 horas Incubar las cajas de Agar PDA a 25°C por 5 a 7 días

Dejar 1 caja de Petri de cada medio de cultivo para control de esterilidad.

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Una vez transcurrido el tiempo efectúe el registro de sus observaciones de las colonias formadas en los medios de cultivo.

2. RESULTADOS Y DISCUSION

Realice el recuento del número de colonias que hay en cada caja

Describa su morfología, si tienen presencia de color y cuáles son las más predominantes.

Complete la siguiente tabla con los datos de los otros grupos de laboratorio

Grupo

Lugar/superficie

AN

PDA

Discuta los resultados teniendo en cuenta la respuesta a las siguientes preguntas:

¿Qué lugar presenta el mayor número de microorganismos?

¿Qué superficie presento el mayor número de microorganismos?

¿Cuál es la morfología más predominante?

¿Cuál es la razón para que se encuentre más bacterias que hongos?

CUESTIONARIO

¿Cuáles son los métodos de esterilización más utilizados en microbiología?

¿Explique cuáles son las diferencias entre los procesos de esterilización, desinfección y asepsia?

¿Cómo se clasifican los medios de cultivo según su estado físico?

¿Cómo se clasifican los medios de cultivo según su uso y finalidad?

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BIBLIOGRAFIA

AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, engineered organisms in the enviroment: scientific, Ed Harlyn o halvorson, p 239, 1985.

CAMBELL, R., Ecología Microbiana, Editorial Limusa, p 268, 1987.

GRANT W.D y LONG P.E., Microbiología Ambiental. Editorial Acribia, p 22.

MITCHELL R., Introduction to environmental Microbiology, Prentice Hall INC, . P 355, 1974.

SOCIETY FOR GENERAL MICROBIOLOGY, ASPECTS OF Microbial metabolism and ecology, Ed By G.A. Codd., P 282, 1984.

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