Versin: 1 FORMATO Cdigo: PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS Fecha: 05/Ago/2013

IDENTIFICACIN UNIDAD ACADMICA: UNIDAD DE ESTUDIO: PRACTICA 1:

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BSICAS LABORATORIO DE MICROBIOLOGA Preparacin de medios de cultivo y aislamiento de microorganismos

FUNDAMENTO TEORICO Los microorganismos (bacteria, virus, hongos, protozoarios, y algunas algas) se pueden encontrar virtualmente en todo el medio ambiente. Se encuentran en el aire, agua, suelo, alimentos, petrleo, en la materia orgnica en descomposicin y en las superficies del cuerpo. Estos organismos son extremadamente importantes para la salud humana y el medio ambiente adems en los avances en inmunologa, virologa, gentica y biologa molecular. En microbiologa, la esterilizacin se define como la destruccin o remocin de cualquier forma de vida. Un objeto que est libre de cualquier organismo viviente, se dice que est estril. La esterilizacin es uno de los mecanismos utilizados para el control de los microorganismos, existen otros mtodos de control que slo matan o inhiben una parte de la poblacin microbiana como son: desinfeccin, pasteurizacin, quimioterapia y asepsis. Estos mtodos permiten prevenir la contaminacin de los materiales de laboratorio y de cultivos puros, evitan las infecciones y facilitan el tratamiento de enfermedades. La esterilizacin es muy importante en los laboratorios de microbiologa porque la mayora de los experimentos son realizados con cultivos puros o axnicos (cultivos que solamente tienen un tipo de microorganismo) o con cultivos mixtos o consorcios (cultivos constituidos por ms de un tipo de microorganismo) por lo que es necesario primero esterilizar los materiales y medios de cultivo. El crecimiento microbiano slo es posible si las condiciones fsicas (temperatura de incubacin, y la cantidad de oxgeno presente) y qumicas (constituyentes del medio de cultivo, pH, etc.) son apropiadas. Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos, razn por la cual es difcil aislarlas. A menudo nuestro inters es caracterizar una especie bacteriana, para lo cual debemos estar preparados para aislar, cultivar e

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identificar a la misma. Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Es decir, es un soporte que proporciona sustancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproduccin de microorganismos. La diversidad metablica de los microorganismos es enorme, por ello, la variedad de medios de cultivo tambin lo es, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos. El conocimiento de las necesidades nutritivas y fsicas de los microorganismos es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado. Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan.

OBJETIVOS Conocer los principios generales de las tcnicas de esterilizacin y preparacin de medios de cultivo de uso comn en Microbiologa. Adquirir conocimientos bsicos tericos y prcticos de la siembra y aislamiento de bacterias. Determinar la presencia de microorganismos en diferentes ambientes. Establecer la diversidad morfolgica de los microorganismos recuperados en los distintos medios de cultivo.

MATERIALES Cajas de Petri estriles 2 tubos de solucin salina con 9 ml Hisopos o escobillones estriles Balanza Autoclave Erlenmeyer Mechero Bunsen Incubadora Probeta

REACTIVOS

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Medio de cultivo Plate Count Medio de cultivo PDA (Agar Papa Dextrosa) Agua destilada

1. PROCEDIMIENTO Preparacin de medios de cultivo 1. Pesar los gramos necesarios de acuerdo a las instrucciones del fabricante para preparar 200 ml de medio Agar Plate Count y Agar PDA. Adicionar el agua destilada y calentar a ebullicin para disolver con agitacin.. Medir y ajustar el pH si es necesario. 2. Esterilizar en autoclave a 121 C por 15 min. 3. Distribuir 20 ml de medio a cada caja de Petri, dejar solidificar y someter a prueba de esterilizacin a 37 C Aislamiento de microorganismos Ambiente -Seleccione un lugar y realice le descripcin del sitio -Remover las tapas de las cajas petri que contienen el agar nutritivo y el agar PDA. Djelas por espacio de 20 min, una vez concluido el tiempo tape las cajas, invirtalas y mrquelas Superficies -Tomar el hisopo estril, humedecerlo en el tubo de solucin salina y luego hacer un frotis sobre el celular, la superficie de trabajo o una moneda, luego pasar el hisopo sobre los medios de cultivo -Tomar otras cajas de Petri con agar Plate Count y Agar PDA dividirlas y colocar los dedos Incubar las cajas de Agar nutritivo o Plate Count a 37C por 24 a 48 horas Incubar las cajas de Agar PDA a 25C por 5 a 7 das Dejar 1 caja de Petri de cada medio de cultivo para control de esterilidad.

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Una vez transcurrido el tiempo efecte el registro de sus observaciones de las colonias formadas en los medios de cultivo. 2. RESULTADOS Y DISCUSION Realice el recuento del nmero de colonias que hay en cada caja Describa su morfologa, si tienen presencia de color y cules son las ms predominantes. Complete la siguiente tabla con los datos de los otros grupos de laboratorio Grupo Lugar/superficie AN PDA

Discuta los resultados teniendo en cuenta la respuesta a las siguientes preguntas: Qu lugar presenta el mayor nmero de microorganismos? Qu superficie presento el mayor nmero de microorganismos? Cul es la morfologa ms predominante? Cul es la razn para que se encuentre ms bacterias que hongos?

CUESTIONARIO Cules son los mtodos de esterilizacin ms utilizados en microbiologa? Explique cules son las diferencias entre los procesos de esterilizacin, desinfeccin y asepsia? Cmo se clasifican los medios de cultivo segn su estado fsico? Cmo se clasifican los medios de cultivo segn su uso y finalidad?

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BIBLIOGRAFIA AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, engineered organisms in the enviroment: scientific, Ed Harlyn o halvorson, p 239, 1985. CAMBELL, R., Ecologa Microbiana, Editorial Limusa, p 268, 1987. GRANT W.D y LONG P.E., Microbiologa Ambiental. Editorial Acribia, p 22. MITCHELL R., Introduction to environmental Microbiology, Prentice Hall INC, . P 355, 1974. SOCIETY FOR GENERAL MICROBIOLOGY, ASPECTS OF Microbial metabolism and ecology, Ed By G.A. Codd., P 282, 1984.

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