Farmacologia Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Alvo para a ao das drogas: 1- Receptores 3- Enzimas 2- Canais inicos 4- Molculas transportadoras

1- Receptores - formam os elementos sensores no sistema de comunicao qumica. Os mensageiros qumicos so representados pelos hormnios, substncias transmissoras ou mediadores como citocinas, fatores de crescimento. Muitas drogas atuam como agonistas ou antagonistas nos receptores de mediadores endgenos

Farmacologia Aspectos Moleculares da Ao das Drogas 2- Canais inicos- podem estar diretamente ligados a um receptor e s se abrirem quando o receptor estiver ocupado por um agonista. A interao pode ser indireta envolvendo algum tipo de protena G e outros intermedirios. Ou ainda o tipo mais simples de interao pelo bloqueio fsico do canal pela droga (ex: anestsicos locais x canal de Na dependente de voltagem). Podemos ter tambm a modulao do canal pela droga, podendo a ligao da droga influenciar o mecanismo de comporta do canal.

Farmacologia Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Alvo para a ao das drogas: 3- Enzimas - a molcula da droga um substrato anlogo que atua como inibidor competitivo da enzima de maneira reversvel (ex: neostigmina x acetilcolinesterase) ou irreversvel (ex: aspirina x cicloxigenase) Outro tipo de interao um substrato falso qual sofre transformao qumica para formar um produto anormal
Inibidor Inibio da reao normal

Substrato falso

Produo de metablito anormal

Pr-droga

Produo de droga ativa

Farmacologia Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Alvo para a ao das drogas: 4- Molcula transportadora - englobam um stio de reconhecimento que as tornam especficas para determinada espcie esses stios de reconhecimento podem ser alvos de drogas cujo efeito consiste em bloquear o sistema de transporte

Protenas receptoras Na dcada de 70 a farmacologia saiu da fase em que os receptores eram tratados como entidades tericas e comeou a surgir a realidade bioqumica.

Biologia molecular Isolamento

Purificao das protenas receptoras

Extrao do RNAm

Seqncia do cDNA

Seqncia de aminocidos

Expresso

Farmacologia Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : estrutura e mecanismos de transduo de sinais Os efeitos celulares desencadeados pelos receptores podem variar desde muito rpido cerca de alguns milissegundos ou muito lentos cerca de horas ou dias. Em termos de estrutura molecular e de natureza do mecanismo de transmisso podemos distinguir 4 tipos de receptores ou 4 superfamlias: Tipo 1: Receptores ligados a canais - ou receptores ionotrpicos.Esto envolvidos principalmente na transmisso sinptica rpida. So receptores de membrana acoplados diretamente a um canal inico, podendo afetar a sua funo. A interao pode ser indireta (acoplado a protena G) ou direta (ex: anestsico local). Podem alterar o mecanismo de comporta do canal. Ex: receptor da nicotnico de acetilcolina (AChR), receptor de GABAA ...

Farmacologia Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : estrutura e mecanismos de transduo de sinais Tipo 2:
Receptores acoplados a protena G So tambm chamados de metabotrpicos ou receptores de 7 domnios transmembrana. So acoplados a efetores intracelulares atravs de uma protena G; ex: m AChR Tipo 3: Receptores ligados a quinase So muito diferentes dos ligados a protena G. Medeiam as aes de uma grande variedade de fatores de crescimento e citocinas, bem como de hormnios, como insulina e a leptina. Medeiam tambm as aes de alguns peptdeos como peptdio natriurtico atrial (ANP).

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : estrutura e mecanismos de transduo de sinais Tipo 1: Receptores ligados a canais Consiste em 4 tipos diferentes de subunidades denominadas , , , cada uma com cerca de 40-58 KDa. O receptor nicotnico da acetilcolina tpico dessa famlia, possui subunidades com elevada homologia na seqncias e no perfil de hidrofobicidade. A estrutura oligomrica (2, , , ) possui 2 stios de ligao para a ACh (subunidades ). Os quais devem se ligar a molculas de ACh para que o receptor seja ativado.

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : estrutura e mecanismos de transduo de sinais Tipo 1: Receptores ligados a canais Mecanismo de comporta - estes tipos de receptores controlam os eventos sinpticos mais rpidos no sistema nervoso onde um neurotransmissor atua sobre a membrana ps-sinptica de uma clula nervosa ou muscular aumentando a permeabilidade a ons. Os neurotransmissores excitatrios como ACh na juno neuromuscular e o glutamato no SNC, aumentando a permeabilidade aos ons Na e K.

neurotransm.exe

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : estrutura e mecanismos de transduo de sinais Tipo 1: Receptores ligados a canais Mecanismo de comporta - a condutncia do canal produzida por diferentes agonistas semelhantes a ACh a mesma, enquanto o tempo de vida mdia do canal varia. O esquema abaixo explica essas observaes e tambm fornece uma explicao fsica da eficcia para esse tipo de resposta:
K+1

+R
K-1

AR

AR*
canal aberto

canal fechado

R* = estado aberto (igual para todos os agonistas) = constante da taxa de fechamento = constante da taxa de abertura

Do ponto de vista cintico a vida mdia do canal determinado pela taxa de que varia de uma droga para a outra.
> = agonista de alta eficcia uma grande proporo de receptores ocupados > = droga de baixa eficcia = 0 = antagonista puro

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : estrutura molecular Tipo 2: Receptores acoplados a protena G So tambm chamados de metabotrpicos ou receptores de 7 domnios transmembrana. So acoplados a efetores intracelulares atravs de uma protena G; ex: m AChR

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : Tipo 2: Receptores acoplados a protena G ex: m AChR, adrenoreceptores, receptores de dopamina, de 5-HT, receptores opiceos e receptores para muitos peptdeos , receptores de purina, quimiorreceptores envolvidos no sentido de olfato.

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : Tipo 1: Receptores acoplados a protena G A maioria dos neurotransmissores interage com receptores metabotrpicos ou ionotrpicos(com exceo dos peptdeos), permitindo assim que a mesma molculas produza ampla variedade de efeitos

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : estrutura molecular Tipo 2: Receptores acoplados a protena G Consistem de uma cadeia polipeptdica de 400-500 radicais. Todos possuem 7 -hlices transmembrana, semelhante a dos receptores ligados a canais. Tanto a extremidade amino-terminal extra celular quanto a extremidade carboxi-terminal variam acentuadamente em seu comprimento e seqncia. Outra regio tambm muito varivel a terceira ala citoplasmtica longa.

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : Tipo 2: Receptores acoplados a protena G - Mecanismos alternativos de ativao dos receptores

A ativao dos receptores acoplados a protena G normalmente conseqncia da ligao do agonista. Pode entretanto ocorrer por outros mecanismos como so os seguintes casos: - trombina (protease envolvida na cascata de coagulao)- inicia suas respostas celulares atravs da sua ligao a um receptor acoplado a uma protena G. Sendo sua atividade protease essencial para essa atividade, atuando removendo um segmento de 41 aa da cauda N-terminal extra celular do receptor (atuam como agonistas amarrados). Uma conseqncia desse tipo de ativao que o receptor s pode ser ativado uma vez, j que a clivagem no pode ser revertida. Tendo a necessidade de sntese contnua do receptor

Clivagem pela trombina

Inativo

NH2 Fragmento liberado

NH2

Ativo

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : Tipo 2: Receptores acoplados a protena G Alguns receptores dessa classe so constitutivamente ativos na ausncia de qualquer agonista (receptor -adrenrgico). - Dessensibilizao Esses receptores possuem principalmente na poro citoplasmtica C-terminal certos radicais que atuam como stios de fosforilao, onde enzimas quinases especficas catalisam o acoplamento de grupos fosfatos. O que reduz a interao do receptor com a protena G, sendo importante como mecanismo de dessensibilizao induzida por agonista.

- Dessensibilizao Aps a fosforilao, os receptores podem ser reativados por fosfatases ou internalizados por endocitose e, a seguir, degradados sendo substitudos por receptores recm-sintetizados.

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Receptores acoplados a protena G

Famlia de receptores : Tipo 2: Receptores acoplados a protena G Protenas G e sua funo As protenas G representam o nvel de controle intermedirio na hierarquia organizacional. So protenas intermedirias denominadas de G por sua virtude de interao com os nucleotdeos GTP e GDP. Consistem de 3 subunidades , , e como pode ser visto no esquema abaixo:
GDP

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Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Receptores acoplados a protena G Protenas G e sua funo
GDP

Os nucleotdeos de guanina se ligam a subunidade , que possui atividade enzimtica catalisando a converso de GDP em GTP. Enquanto as subunidade e permanecem associadas no complexo . Todas as subunidades esto ancoradas a membrana atravs de uma cadeia de cidos graxos. As protenas G parecem ser livremente difusveis no plano da membrana. Um nico grupo de protena G possivelmente interage com diversos receptores e efetores diferentes (promiscuidade). Um nico complexo agonista-receptor pode ativar vrias molculas de protena G, podendo cada uma delas permanecer associada a enzima efetora o tempo suficiente para produzir muitas molculas do produto (geralmente segundo mensageiro)

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Funo da protena G

Fofoslipdeos de membrana

(A) Alvo 1
Receptor
Protena G

Alvo 2

GDP

, ,

(B)

Receptor ocupado

Alvo 1

Receptor

Alvo 2
,

GDP GTP

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Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Funo Protenas G

(C) Alvo 1
GDP

Receptor

Alvo 2
,

(D) Alvo 1
GDP

Receptor

Alvo 2
,

(A)
Receptor

Alvo 1

Alvo 2

GDP

, ,

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Funo da protena G Variao Molecular na Famlia das Protenas G Principais classes de protena G Gs - produzem estimulao da enzima adenilato ciclase Gi - produzem inibio da enzima adenilato ciclase Gq - aumento de IP3 e Ca intracelular

As subunidades dessas protenas G diferem na sua estrutura e com respeito a ao de 2 toxinas (T) bacterianas a colrica e da coqueluche. Essas toxinas que so enzimas catalisam a reao de conjugao (ADP-ribosilao) na subunidade das protenas G. T-clera atua apenas em Gs produzindo ativao persistente e estimulao da enzima adenilato ciclase. T-coqueluche atua em Gi- produzindo inibio da enzima adenilato ciclase

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Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Funo - Alvos da protena G Sistemas efetores acoplados a protena G: 1- sistema adenilato ciclase formao de - AMPc 2- sistema fosfolipase C - trifosfato de inositol IP3 e DAG 3- regulao de canais inicos - principalmente Ca e K 1- Sistema adenilato ciclase - AMPc O AMPc sintetizado intracelularmente sob ao da adenilato ciclase e inativado por hidrlise a 5-AMP atravs de enzimas (fosfodiesterases). Muitas drogas hormnios e neurotransmissores atuam aumentando ou reduzindo os nveis de AMPc. Funo do AMPc - regula enzimas envolvidas no metabolismo energtico, diviso e diferenciao celular, transporte de ons canais inicos, e protenas contrteis do msculo liso. Receptores ligados a Gs- Produzem estimulao da enzima adenilato ciclase aumentando assim os nveis de AMPc (ex: forscolina e ons fluoreto) e aqueles ligados a Gi - produzem inibio da enzima adenilato ciclase e reduo dos nveis de AMPc (ex: metilxantinas como teofilina e cafena e pelo Sidenafil Viagra).

Protena G

Fosfato de inositol

(+)

(-)

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Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Funo - Alvos da protena G

Sistemas efetores acoplados a protena G: 1- sistema adenilato ciclase/AMPc

2- sistema fosfolipase C- fosfato de inositol 3- regulao de canais inicos 2- Sistema fosfolipase C - fosfato de inositol Muitos agonistas produzem um aumento na concentrao de Ca livre, tambm induzem aumento paralelo na velocidade de degradao de fosfatidilinositis (PI) que so fosfolpides menores de membrana. O difosfato (PIP2) - o substrato da fosfolipase C (PLC) que efetua a clivagem em diacilglicerol (DAG) e inositol trifosfato (IP3), que atuam como segundo mensageiro. A ativao de PLC por vrios agonistas mediada atravs de uma protena G de forma idntica a adenilato ciclase, embora sejam subtipos diferentes de protena G. Uma isozima PLC tambm pode ser ativada diretamente por receptores ligados a quinase. Atravs de um mecanismo que no envolve protena G

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Funo - Alvos da protena G

Sistemas efetores acoplados a protena G: 1- sistema adenilato ciclase/AMPc

2- sistema fosfolipase C/ fosfato de inositol

3- regulao de canais inicos

Sistema fosfolipase C (PKC) - fosfato de inositol (PI) Aps a clivagem do PIP2 e liberao do IP3 restabelece-se o status. cuo. O DAG fosforilado para cido fosfatdico (PA), enquanto o IP3 desfosforilado e re-acoplados em PA para novamente formar PI.

Fosfatos de inositol (PI) e clcio intracelular (Ca)i O IP3 atua ao liberar o Ca das reservas intracelulares. O( Ca)i armazenado em vesculas no retculo sarcoplasmtico que ativamente seqestram o Ca , mantendo sua concentrao no citosol de cerca de 10-7 mol/l. O IP3 liga-se a um receptor especfico na membrana do retculo sarcoplasmtico que est acoplado a um canal inico clcio-seletivo. A abertura desses canais , libera um fluxo de Ca na clula e eleva em cerca de 100 vezes sua concentrao.

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Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Funo - Alvos da protena G

Sistemas efetores acoplados a protena G: 1- sistema adenilato ciclase/AMPc

2- sistema fosfolipase C/ fosfato de inositol 3- regulao de canais inicos Fosfatos de inositol e clcio intracelular (Ca)i A amplitude das respostas mediadas pelo aumento na concentrao de (Ca)i demasiadamente ampla, alguns exemplos: -contrao do msculo liso -aumento da fora de contrao do msculo cardaco -secreo de glndulas excrinas e liberao de neurotransmissores dos neurnios -citotoxicidade etc.... As aes do Ca dependem de sua capacidade de regular diversas protenas funcionais incluindo enzimas protenas contrteis e canais inicos. Diacilglicerol (DAG) e protena quinase C O principal efeito do diacilglicerol ativar uma protena quinase ligada a membrana a protena quinase C (PKC).

Ciclo do fosfatidilinositol (PI)

Receptor
Quinases

PI

PIP2
(+)

Fosfolipase

Ac. fosfatdico

Quinases

DAG

Ativao de proteinaquinase C

Inositol 1-fosfatase

Inositol

IP

IP3

Liberao de Ca+2 intracelular

inibida por Li

IP3

IP4

Entrada de Ca +2 atravs me mbrana

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Protena G

Fosfato de inositol

(+)

(-)

Aspectos Moleculares da Ao das Drogas

Funo - Alvos da protena G Sistemas efetores acoplados a protena G: 1- sistema adenilato ciclase/AMPc 2- sistema fosfolipase C/ fosfato de inositol

3- regulao de canais inicos Diacilglicerol (DAG) e protena quinase C (PKC) O DAG altamente lipoflico e permanece no interior da membrana, a PKC acredita-se que migre do citosol para a membrana na presena do DAG, e ento, liga-se a um stio especfico e torna-se ativada.. Existem pelo menos 13 tipos diferentes de PKC, que possuem em comum a capacidade de ser ativada por steres de forbol (compostos altamente irritantes produzidos por certas plantas). 3- Regulao de canais inicos Receptores acoplados a protena G podem controlar a funo de canais atravs de mecanismos independentes de 2 mensageiro. Neste caso a protena G interage diretamente com o canal. Especificidade de agonista

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Farmacologia Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : estrutura e mecanismos de transduo de sinais Famlia de receptores Tipo 3: Receptores ligados a tirosina quinase e guanilato ciclase So muito diferentes dos ligados a protena G. Medeiam as aes de uma grande variedade de fatores de crescimento e citocinas, bem como de hormnios, como insulina e a leptina. Medeiam tambm as aes de alguns peptdeos como peptdio natriurtico atrial (ANP). Possuem domnios extra e intracelulares muito grandes, e em todos os receptores desencadeada uma cascata de quinases. A ligao do ligante resulta na dimerizao de pares de receptores, o que permite uma auto fosforilao. A seguir os radicais autofosforilados de tirosina funcionam como stios de ligao para outras protenas intracelulares que possuem um domnio SH2, e o padro de eventos deflagrados altamente especfico.

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Receptores

Protena G

Enzimas Alvo

Gaunilato ciclase

Adenilato ciclase

Fosfolipase C

Fosfolipase A

2 Mensageiro

GMPc

AMPc

IP3

DAG

AA

[Ca +2]i Proetnas quinases

eicosanides

PKG

PKA

PKC

Efetores

Enzimas, protenas transportadoras

Protenas contrteis

Canais inicos

Farmacologia Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : estrutura e mecanismos de transduo de sinais Tipo 3: Receptores ligados a tirosina quinase e guanilato ciclase
Mecanismo de fosforilao de protenas e cascata das quinases O que vai ocorrer aps as protenas contendo SH2 se ligarem ao receptor fosforilado vai depender do receptor envolvido: - alguns vo ativar PLC levando a formao de IP3 e liberando Ca - outras faro o controle da diviso e diferenciao celular ( protenas com SH2 adaptadores)

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Farmacologia Aspectos Moleculares da Ao das Drogas Famlia de receptores : estrutura e mecanismos de transduo de sinais Tipo 4: Receptores que regulam a transcrio genica

Controle da expresso de canais

Receptores e doena.

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