ALCALOIDES DE TIPO PURINA

Herminio C. Gonzlez Rivera

Objetivos Extraer alcaloides del caf, del t, del cacao o del mate. Purificar los productos naturales crudos. Analizar las estructuras moleculares de los productos obtenidos por mtodos espectroscpicos. Comparar el contenido relativo de los alcaloides por cromatografa de capa delgada.

Introduccin Obtener productos naturales derivados de la purina por el mtodo de extraccin de las hojas del t, del mate y de los granos del caf y del cacao. Purificar la cafena por recristalizacin. Identificar la cafena por determinacin de su punto de fusin y por anlisis espectroscpico. Comparar el contenido relativo de cafena, teobromina y teofilina en muestras comerciales de caf, t, cacao y mate por anlisis cromatogrfico de capa delgada. Base Terica y Destrezas

Tabla I: Alcaloides de tipo purina y su contenido aproximado:

A. Extraccin de la cafena de las hojas del te negro Para extraer 2.5 gramos de te, dentro del mismo sobre comercial en que viene, es necesario hacer lo siguiente. Abra cuidadosamente un sobre comercial de te sin romperlo y transfiera todo el contenido a un vidrio de reloj Iimpio y seco. Pese 2.5 g de las hojas de te y deposite esta cantidad nuevamente en el sobre original. Cierre el sobre y engrpelo para evitar que salga el te durante la extraccin. Pese y aada 2.7 g de carbonato de sodio (Na2CO3) anhidro a un matraz de Erlenmeyer de 50 mL. Luego, aada 20 mL de agua destilada al matraz y caliente la mezcla sobre un bao de arena agitando ocasionalmente con la varilla de vidrio, hasta que se disuelva el carbonato de sodio. Introduzca el sobre con los 2.5 g de te al matraz que contiene el carbonato de sodio de modo que el mismo se deposite horizontalmente en el fondo del matraz. Coloque un cristal de reloj sobre la boca del matraz, caliente cuidadosamente la suspensin acuosa y djela hervir por 30 minutos en un bao de arena. Despus, deje enfriar el matraz a temperatura de ambiente agitando en un bao de agua. Transfiera la solucin acuosa a un embudo de separacin. Lave el matraz con 5 mL de diclorometano (CH2Cl2) y transfiera el lavado al embudo de separacin. Agite el embudo y separe la fase orgnica, siendo paciente porque el diclorometano tiende a emulsionarse en medio alcalino. En caso de formarse una emulsin que dificulte reconocer ambas fases, aada 5 mL de una solucin saturada de cloruro de sodio (NaCI) y agite con la varilla de vidrio, hasta que se formen las fases. Si no se observan las dos fases consulte al profesor para sugerencias. Extraiga la cafena de la fase acuosa agitando la misma con 5 mL de diclorometano. Separe las fases y extraiga nuevamente ms cafena de la fase acuosa con otros 5 mL de diclorometano. Combine los extractos orgnicos transfirindolos a un matraz de Erlenmeyer aada un poco de sulfato de magnesio anhidro para remover los ltimos residuos de agua de la fase orgnica y espere unos minutos. Filtre el sulfato de magnesio por gravedad en otro matraz de Erlenmeyer seco y de peso conocido. Luego evapore el diclorometano en el extractor, calentando suavemente sobre el bao de arena. Pese el producto crudo y determine el punto de fusin (p.f. = 230-235 C). Si el mismo qued ms de 5 grados por debajo, recristalice el slido con el mnimo volumen posible de etanol al 95%. Pese el producto recristalizado y completamente seco, luego, tome el espectro de infrarrojo de su producto y comprelo con el espectro suministrado. Ensee el producto final recristalizado a su instructor con comentarios respecto a la comparacin de los espectros.

Datos experimentales: Cafena en la hoja de te negro Masa del sobre de te completo 2.7 g Disolvente para la extraccin - 2.7g mL (Na2CO3) Masa del extracto o cafena crudo 2.5 g (aprox. Balanza a 2 lugares decimales.) Tcnica de purificacin de la cafena Disolvente usado en la purificacin - Sulfato de Magnesio masa de la cafena pura 0.01 g % de cafena en el sobre (0.01g/2.5g)x100 = 0.4% Rango de punto de fusin de la cafena cruda ____230______ a _____235______ C Rango de punto de fusin de la cafena pura _____232______ a _____235______ C

B. ANALISIS CROMATOGRAFICO DEL CONTENIDO DE ALCALOIDES a. Extraccin Pulverice con el piln y el mortero, 2.5 gramos del material seco a extraerse, asignado por su instructor y que puede ser uno de los siguientes: te negro, mate, caf o cacao. Luego, siga el siguiente procedimiento para extraer las cantidades mnimas de alcaloides de tipo purina para su anlisis por cromatografa de capa delgada. Mezcle bien los 2.5 g del material pulverizado con 2.5 mL de una solucin acuosa de carbonato de sodio (Na2CO3) al 10% en un matraz de Erlenmeyer de 50 mL. Aada 15 mL de metanol, tape la boca del matraz con un vaso invertido y caliente suavemente al reflujo por 15 minutos. Luego, enfre el matraz agitando en un bao de agua que contenga poco hielo y filtre por gravedad en otro matraz de Erlenmeyer Iimpio y del mismo volumen. Concentre el filtrado calentando el matraz de Erlenmeyer sobre un bao de arena (a 60-75oC) en el extractor. EI volumen final del concentrado deber ser de aproximadamente 1-2 mL. b. Anlisis de los extractos crudos por cromatografa de capa delgada (TLC). EI cacao, el caf, el mate y el te pueden ser identificados por sus contenidos caractersticos de los derivados de la purina que son la cafena, la teobromina y la teofilina. Para analizar su extracto crudo concentrado por TLC, lIeve a cabo el siguiente procedimiento. Primero, obtenga una placa de slica gel 60 F254 de 10 x 6 cm, un vaso de 400 600 mL, limpio y seco que sirva de cmara para una placa de TLC de esas dimensiones, coloque en el vaso un papel de filtro en posicin vertical y un vidrio de reloj o papel de aluminio para cubrir el vaso durante la cromatografa. Luego, prepare en una probeta la fase mvil para la cromatografa, mezclando 10 mL de acetato de etilo, 1.5 mL de metanol y 1.0 mL de agua. Agite la mezcla con una varilla de vidrio Iimpia y seca, tape la probeta y deje reposar unos 10 minutos. Mientras tanto, trace suavemente con un lpiz dos Ineas horizontales a un centmetro de los bordes superior e inferior de la placa. Ahora, prepare una solucin de la cafena pura obtenida en la parte A, disolviendo una pizca de la misma en 1.0 mL de metanol. Utilizando capilares diferentes para cada solucin, deposite ambas soluciones ( la que acaba de preparar y la solucin concentrada de su extracto obtenido en la parte B. a) sobre la lnea de partida de forma tal que el dimetro de la micro-gota sobre la slica gel no sobrepase los 5 mm. Deje que se seque la placa completamente, agregue la mezcla de disolventes sobre el papel de filtro, introduzca la placa en el vaso de cromatografa, vuelva a tapar el mismo y espere a que el disolvente llegue a la lnea superior. Cuando el frente del disolvente lIegue a la lnea superior de la placa de slica gel, saque la placa del vaso, djela secar y detecte el resultado de su cromatografa irradiando con la lmpara de luz ultravioleta. Marque con un lpiz los contornos de sus manchas sobre la placa de TLC. Calcule los valores Rf de sus compuestos, revise sus resultados, comprelos con la informacin contenida en la Tabla I y est listo para discutir sus resultados en grupo.

Datos experimentales: Anlisis del contenido de alcaloides Material analizado - Extracto 1 Cafena - Extracto 2 Caf Concentrado Disolvente usado en la extraccin - Na2CO3 Disolvente usado en la TLC - 1mL Etanol Adsorbente usado en la TLC - Placa de slica gel 60 F254 Nmero de compuestos o manchas al revelar el cromatograma Valor de Rf para cada mancha en el cromatograma

A - Ext1 - Cafeina - Estraida de Te - Rf = 0.632 B - Ext2 - Caf Puro Concentrado - Rf = 0.632 C - Teoferina - Rf = 0.664 D - Cafeina - Rf = 0.649 E - Teoborina - Rf = 0.506

Caffeine

Teobromina

Teofilina

A. Datos Peso de la cafena cruda: 0.01 g Aprox. Rendimiento del producto obtenido: 0.4 % Rango del punto de fusin de la cafena aislada: ____232____ a ___235____ C. (Pf. de referencia: ____230 - 235______ C) Punto de Fusion de la cafeina extraida no pudo ser determinado debido a que la extraccion solo produjo 0.01g de solido lo cual no fue suficiente para llevar a cabo este paso del experimento.

C. Asignacin Pos-laboratorio: 1. Incluya en esta en sta y en la siguiente pgina) el espectro que obtuvo y los busc en el portal (IR y RMN de H1, C-13 ). Establezca la correlacin estructura-seal en cada uno.

N-H 3110

Dobl. CH3 Dobl. CH2 C=C 1659

C=O 1699

C=C 1746 Sys 1,2 Di

2. Dibuje la estructura de cafena, seale el tomo de nitrgeno ms bsico en la estructura y justifique porqu.

Este Nitrgeno posee 2 electrones libres y tiene menos impedimento estrico que los otros tres nitrgenos que estn unidos a un grupo metilo. 3. Por qu es necesario aadir una solucin de carbonato de sodio para poder extraer la cafena? Esto es necesario para evitar que la cafeina se protone y la transforma en una salt de sodio o solido el cual se puede extraer evaporando el solvente utilizado (CH2Cl2).

Conclucion:

Referencias: Nic, M.; Jirat, J.; Kosata, B., eds. (2006). "concentration". IUPAC Compendium of Chemical Terminology (Online ed.) | ISBN 0-9678550-9-8 Chemistry: A Molecular Approach (2010) | ISBN-10: 0321730127 | ISBN-13: 978-0321730121 | Edition: 2 Chemistry (6th Edition) by John E. McMurry and Robert C. Fay (2011) | ISBN-10: 0321704959 | ISBN-13: 978-0321704955 | Edition: 6 Organic Chemistry (8th Edition) by John E. McMurry (2011) ISBN-10: 0840054440 | ISBN-13: 9780840054449 | Edition: 8 http://www.chemindex.com/ http://www.sigmaaldrich.com/ http://www.chemspider.com/ Manual de Qumica Orgnica Chem 2222 UIPR Recinto Metropolitano http://www.sdbs.com/