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CROMATOGRAFIA DE GASES La cromatografa de gases (CG) es la tcnica analtica de separacin que ha experimentado un desarrollo ms espectacular desde sus inicios en los aos cincuenta. Se ha usado para resolver numerosos problemas en distintos campos. Actualmente se emplea como tcnica de rutina y control de una gran variedad de reas. Adems sus posibilidades se han ampliado a medida que se han mejorado la instrumentacin disponible (columnas capilares, integradores computerizados, sistemas de gradiente de temperatura, nuevos detectores, etc.). La principal limitacin de esta tcnica es debida a la labilidad trmica de los solutos. los cuales deben ser estables a la temperatura requerida para su volatilizacin. En CG la fase mvil es un gas, y la fase estacionaria puede ser: slido , y estaramos ante una cromatografa gas-slido. Pero esta se usa mucho menos que la cromatografa gas-lqido, (fase estacionaria lquida) La CGS se usa mucho menos que la CGL debido a los problemas tales como picos asimtricos, tiempos de retencin excesivamente largos, falta de reproducibilidad., etc. Por todo esto la CGL es la tcnica ms empleada y a ella se denomina CG. INSTRUMENTACIN. COMPONENTES BSICOS DEL CROMATOGRFO En CG la mezcla de solutos a separar se volatiliza para a continuacin con la ayuda de un gas portador inerte se hace pasar a travs de un tubo largo y estrecho (columna)que contiene la fase estacionaria y donde tiene lugar la separacin de los solutos antes de llegar al sistema de deteccin. Las seales del detector se registran obtenindose una serie de picos que constituyen el cromatograma. La posicin de los picos (tiempo de retencin) se utiliza con fines cualitativos, mientras que el tamao de los mismos se relaciona con la concentracin de los solutos.
Bloque de Inyeccin termostatizado

Segn esto los componentes de un cromatgrafo de gases son: 1.- Sistema de sumistro de gas portador: generalmente es una bala o botella de gas a alta presin. Para regular su Presin o flujo se utiliza un: manoreductor sistema de regulacin de caudal Frecuentemente el gas se divide en dos flujos, uno se dirige al detector para actuar de referencia y el otros pasa a travs de la columna y es el que transporta la muestra. .2.- bloque de inyeccin termostatizado 3.- Sistema de termostatizacin: llamado horno. Controla la temperatura del sistema de introduccin de la muestra y de la columna, ya que sta es una variable decisiva para conseguir la separacin y reproducibilidad adecuadas. 4.- Columna: Componente esencial de cromatgrafo, ya que es donde se produce la separacin de los solutos. En ella se encuentra la fase estacionaria (lquida o slida). 5.- Sistema de deteccin: Est situado a la salida de la columna y tb esta termostatizado. A travs de l pasa el gas portador con los solutos ya separados. Cuando pasa un soluto se origina una seal elctrica que se amplifica adecuadamente. 6.- Registrador: Da lugar al cromatograma a partir de la seal elctrica amplificada que le llega. 7.- Integrador-computador: sistema informtico incorporado al cromatgrafo para la toma y tratamiento de datos. Realiza de forma automtica las siguientes operaciones: registra el cromatograma integra el rea del pico, mide el tiempo de retencin, realiza clculos con estndares e imprime el informe final del anlisis.

1.- GAS PORTADOR FASE MOVIL El gas portador o fase mvil debe ser qumicamente inerte y no interaccionar ni con la fase estacionaria ni con los componentes de la mezcla, su nica misin es la de transportar los analitos desde que se introducen en el sistema cromatogrfico hasta la salida del detector. Los ms empleados son N2, He, Ar, CO2 y H2.. La eleccin del gas est frecuentemente determinada por el tipo de detector que se usa. Los ms universales los ms universales son el N2 y el He. Aunque para conductores de conductividad trmica tambin se ha utilizado bastante el H 2, porque debido a su conductividad elevada es idneo junto con el He, para estos detectores. Por su carcter reductor es inadecuado para muchas separaciones, aparte del peligro de explosin. El gas portador debe ser de gran pureza, para evitar el ruido de fondo del detector y la inestabilidad de la lnea base

2.- PRESIN Y CAUDAL Para obtener resultados reproducibles es necesario conseguir un flujo constante de gas. En general, se regula la presin de entrada para mantener el caudal requerido. La medida del caudal de gas portador se lleva a cabo con un rotmetro, colocado a la entrada de la columna, o con caudalmetros de burbuja, a la salida del detector, . El caudalmetro de burbuja es el medidor de caudal ms usado en cromatografa gaseosa. Apretando la pera de goma que contiene una disolucin jabonosa se eleva el nivele de la disolucin jabonosa y se forma una burbuja. Midiendo el tiempo que tarda en pasar entre dos marcas sobre un tubo graduado, que corresponden a un volumen conocido, se determina el caudal del gas portador.

SISTEMAS DE INTRODUCCIN DE MUESTRA La CG puede utilizarse para cualquier tipo de muestra ya sea slida, lquida o gaseosa. La tcnica utilizada para introducir la muestra en el cromatgrafo va a depender: 1..- Estado fsico de la misma 2.- Rango de concentraciones de los solutos que la componen 3.- Tipo de columna utilizada, ya que la capacidad de muestra y el flujo en la columnas capilares es menor que en las columnas empaquetadas. Las muestras lquidas (las ms empleadas en CG) se inyectan con jeringas especiales de gran precisin y precio elevado, de 1 a 10 microlitros, generalmente. Con cierta prctica se consigue un buen grado de reproducibilidad. Las muestras slidas suelen inyectarse disueltas en un disolvente apropiado, y entonces estamos en el caso anterior. En casos muy especiales se puede emplear algn artificio para inyectar directamente el slido, pero no se suelen presentar estos casos.

INYECCIN DE MUESTRAS LQUIDAS O SLIDAS EN DISOLUCIN Bloque de inyeccion para columnas empaquetadas. El bloque de inyeccin consta de un septum de goma de silicona a travs del cual se introduce la aguja de la jeringa conteniendo la muestra. El contenido de la inyeccin (se puedrn inyectar hasta 20l) se vierte en una cmara de vidrio rodeada de un bloque metlico termostatizado cuya temperatura pude regularse. Las cmaras de inyeccin se mantienen normalmente, a temperatura superior en unos 50 C a la del punto de ebullicin del componente menos voltil de la muestra. A travs de la cmara de vaporizacin pasa el gas portador que arrastra a la muestra vaporizada hasta la columna. En las columnas empaquetadas a diferencia de las capilares la totalidad de muestra que puede ser introducida por la jeringa en el vaporizador puede entrar dentro de la columna.

a la columna

Bloque de inyeccin para columnas capilares: La inyeccin en este tipo de columnas, donde la velocidad de la fase mvil y el volumen de la fase estacionaria son menores que en columnas empaquetadas y por ello no se puede introducir tanta cantidad de muestra como en la empaquetadas. Se distinguen bsicamente dos modos de operar

Inyeccin con divisin "split":

Es generalmente la tcnica ms adecuada para introducir la muestra en una columna capilar. Con una jeringa se inyecta un volumen de muestra (0.1 2 1 L) en un bloque de inyeccin caliente que contiene que contiene un liner de vidrio o de cuarzo donde la muestra se vaporiza rpidamente. El flujo del gas portador est dividido en dos partes muy desiguales, la ms grande va al desecho mientras que la menor pasa a la columna, de esta forma solamente una pequea fraccin (1-2%) del vapor entra en la columna. Pueden utilizarse relaciones de divisin de flujo de1:10 a 1:100, aunque las ms usadas se encuentran en el rango de 1:20 a 1:200. Este sistema no es adecuado para el anlisis de trazas ya que se reduce notablemente la cantidad de soluto que llega a la columna, disminuyendo la sensibilidad del detector. Inyeccin sin divisin "splitless": Es una tcnica de preconcentracin til para el anlisis de muestras muy diluidas, tales como anlisis de trazas. Se utiliza el mismo bloque de inyeccin pero se inyecta con la vlvula de split cerrada. En el bloque de inyeccin se introduce un volumen relativamente grande de la disolucin diluida (1-5 l), donde se evapora y se dirige a la columna. En este punto se realiza el llamado "efecto disolvente" que consiste en mantener la columna a una temperatura inicial unos 10-30 C por debajo del punto de ebullicin del disolvente, de forma que ste se condensa a la entrada de la columna, formando una fina pelcula de fase estacionaria donde quedan atrapados los componentes de la muestra. Despus de 45 s o 1 m la vlvula de split se abre ( con un flujo de aproximadamente 50

mL/nin, y restos de vapor principalmente de disolvente son rpidamente expulsados fuera de la cmara de inyeccin a travs de la vlvula de split. De este modo Se produce un proceso de preconcentracin de los analitos antes entrar en la columna y es adecuado para el anlisis de trazs 3.- LA COLUMNA SE LA LLAMA EL CORAZN DEL CROMATOGRAFO En cromatografa de gases se distinguen dos tipos fundamentales de columnas - Columnas de relleno o empaquetadas - Columnas sin relleno, abiertas o capilares Columnas Empaquetadas : Se preparan con tubos de dimetro interno de 2 a 2,5 mm y una longitud de 2 a 4 m. La forma es variable, dependiendo del tamao del horno del cromatgrafo (forma en U, en espiral, etc). El material de construccin de las columnas suele ser de cobre, aluminio, acero inoxidable, tefln o vidrio, Las ms utilizadas, por ser ms inertes, son las de vidrio, aunque presentan el inconveniente de su fragilidad Para su uso en CGL, se rellena con un soporte slido impregnado de la fase estacionaria lquida. CGL. Se pueden rellenar en el laboratorio o comprar, pero comprarlas valen 100 veces ms Como se rellena? El relleno est constituido por la fase estacionaria lquida y un soporte slido (3% de fase estacionaria y el resto (97%) soporte En un vaso de precipitados se pesa la cantidad de fase estacioaria y se aade la cantidad correspondiente de soporte; se proce luego a una agitacin suave (no agresiva). Hacer girar el vaso de precipitado sin meter ningn tipo de agitador. El relleno fase estacionaria ms soporte se mete en el tubo con ayuda de un embudo, vibrando suavemente porque no interesa que la fase estacionaria quede demasiado apelmazada mi demasiado suelta. 1.- Soporte slido Aunque de manera indirecta juega un papel muy importante en las separaciones . Su misin es la de proporcionar una superficie para depositar la fase lquida en forma de pelcula muy fina. 2.- Fase estacionaria lquida Un lquido para que pueda servir como fase estacionaria en cromatografa de gases ha de reunir varias cualidades: 1.-La Viscosidad, no deber ser muy alta a la temperatura de operacin para favorecer la difusin de los solutos y por lo tanto la velocidad de equilibrio de reparto entre las fases.

2.- Tensin superficial suficientemente alta, para que la adherencia soporteliquido sea suficiente para evitar que sea arrastrada por la fase mvil. 3.-Tensin de vapor. Tener poca volatilidad a la temperatura de separacin para evitar el paso de la misma a la fase mvil. 4.-Selectividad, debe ser capaz de disolver, en distinto grado a los componentes para dar lugar a una separacin de bandas lo suficientemente marcada.. 5.-Reversibilidad del reparto: El reparto de cada componente entre las fases debe ser reversible. Estabilidad trmica. Debe ser estable a la temperatura de trabajo. El nmero de fases lquidas empleadas en cromatografa en fase de vapor es muy elevado, superior a 300. Para su eleccin se ha de tener encuentra su polaridad y la temperatura mxima a que se puede someter, la fase estacionaria sin que se volatilice. COLUMNAS SIN RELLENO, ABIERTAS O CAPILARES Estas columnas son mucho ms eficaces en la separacin que las tradicionales o con relleno. Si una columna con relleno puede llegar a tener 7.000 a 8.000 platos tericos, en una capilar se pueden alcanzar hasta los 50.000 o ms. Tipos de columnas capilares Son las ms utilizadas actualmente en CG . Se trata de tubos largos y de dimetro muy pequeo de vidrio o ms frecuentemente de en la actualidad de slice fundida , en las que la fase estacionaria est retenida sobre la pared interna de la columna.

Como estos capilares de slice fundida tienen las paredes mucho ms delgadas se refuerzan con un recubrimiento externo de poliimida, estas columnas as fabricadas resultan mucho ms flexibles, mayor resistencia fsica, reactividad menor frente a los componentes de la muestra. CONTROL DE LA TEMPERATURA. En cromatografa de gases, el control de la temperatura a la que se somete la columna es esencial para lograr una buena separacin de los solutos. Para controlar la temperatura la columna est situada en el "horno o estufa" del cromatgrafo. La temperatura ptima depende de los puntos de ebullicin de los componentes de la mezcla y no debe ser inferior a la de stos, sino la retencin sera muy elevada. Hay dos modos de trabajar: A.- Con Temperatura constante o isoterma. La temperatura se mantiene constante durante todo el tiempo de anlisis. La separacin isotrmica puede ser adecuada para la separacin de mezclas de solutos cuyos puntos de ebullicin varan en un rango estrecho. Cuando los puntos de ebullicin de los solutos a separar varan en un rango amplio, una temperatura adecuada para los solutos de punto de ebullicin ms bajo puede hacer que los tiempos de retencin de los solutos con punto de ebullicin ms alto sean excesivamente largos; y una temperatura adecuada a los solutos con punto de ebullicin ms alto los solutos con punto de ebullicin ms bajo no se separaran satisfactoriamente. B.- Con Temperatura programada: Cuando los puntos de ebullicin de los solutos varan en un rango amplio. En la programacin de la temperatura, la temperatura inicial se establece por debajo del punto de ebullicin ms bajo de los solutos a separar y a medida que la separacin progresa se va incrementando a un ritmo constante o mediante una serie de ascensos regulares. La programacin de temperatura presenta las ventajas siguientes: 1.- permite la resolucin de mezclas de solutos con amplio rango de variacin de puntos de ebullicin 2.-Es adecuada para la deteccin de trazas ya que los picos somas ms altos y ms estrechos agudos 3.- la duracin del anlisis se acorta.

.- DETECTORES

El detector cromatogrfico es un dispositivo que pone de manifiesto la presencia de los distintos componentes de la muestra eludos en la columna, y genera una seal elctrica proporcional a su concentracin. Los detectores ms usados en cromatografa de gases son los siguientes: Detector de Conductividad trmica (DCT): Es uno de los primeros detectores usados en cromatografa de gases, que an se utiliza ampliamente. Es un detector universal (dan respuesta todos los solutos) y la seal se debe a cambios de conductividad trmica de los solutos con respecto a la de la fase mvil. La conductividad trmica de un gas es mayor cuanto menor sea su masa molecular. Los gases portadores con mayor conductividad trmica son el He y el H2, por lo que estos gases son los elegidos como fase mvil en este tipo de deteccin, ya que una pequea cantidad de compuesto orgnico da lugar a una lugar a una disminucin relativamente grande de conductividad trmica y en consecuencia una mayor seal. Ventajas -Amplio rango lineal -No destructivo -Universal. Inconvenientes En general baja sensibilidad

Detector de ionizacin de llama de hidrgeno (FID): Es uno de los ms extensamente utilizados en cromatografa de gases. Su funcionamiento se basa en que la mayora de los compuestos orgnicos cuando se pirolizan a la temperatura de una llama de hidrogeno/aire, producen iones y electrones que pueden conducir electricidad a travs de la llama. Si se aplica una diferencia de potencial de unos 300 V a travs de esta llama se origina una pequea corriente que cuando se amplifica proporciona una seal analtica til. Este detector responde a los compuestos orgnicos ya que la mayora de los tomos de carbono salvo los que estn en grupo funcionales como carbonilo, carboxilo, generan seal. Entre las sustancias que no dan respuesta figuran: aire, agua, gases inertes, CO, CO2, S2C, NO, SO2 y SH2 Ventajas Buena sensibilidad Buen intervalo lineal de respuesta

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Bajo ruido Resistente y fcil de usar Inconvenientes Es destructivo

Detector de Captura de Electrones (ECD): Este detector mide las disminuciones de una seal en vez del aumento de la corriente elctrica. Cuando se usa este detector se tiene que usar N2, bien como fase mvil o sino como gas auxiliar. A medida que el nitrgeno fluye o a travs del detector, una lmina de tritio o de Ni-63 radiactivo ioniza las molculas de nitrgeno y forma electrones lentos. Estos electrones se desplazan hacia el nodo, cuyo potencial es de 90 voltios positivos. Al colectarse estos electrones lentos se produce una corriente constante, "corriente de fondo" es de unos 10-8 amperios, si en este momento se introduce en el detector solutos que contenga molculas que capturen electrones, se reducir esa corriente de fondo. La disminucin de corriente es una medida de la cantidad y afinidad electrnica del soluto. Con la calibracin apropiada puede relacionarse la prdida de la corriente con la concentracin de soluto en la muestra. El detector de captura de electrones es muy sensible a ciertas molculas que contienen grupos funcionales electronegativos (capaces de capturar electrones) tales como halgenos, perxidos, quinonas, y grupos nitro y compuestos organo-metlicos, e insensible a hidrocarburos, alcoholes y cetonas. Es un detector especficamente valioso para analizar pesticidas (pueden detectarse a niveles de picogramos). La lmina de tritio slo es utilizable hasta 220 C mientras que la de Ni-63, se puede calentar hasta 350 C, pudiendo trabajar con ella durante meses sin tener que limpiarla. VENTAJAS Alta sensibilidad No alteran la muestra de forma significativa INCONVENIENTES. Intervalo lineal de respuesta limitado. Otros detectores: Solo citaremos algunos de ellos: - Detector de ionizacin de llama de argn - Detector fotomtrico de llama (para S y P) -.Detector microcoulombimtrico (cloruros en hidrocarburos clorados)

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IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN DE LOS COMPUESTOS SEPARADOS Los compuestos se identifican en principio por el tiempo de retencin, para la determinacin de la cantidad se puede utilizar la altura de pico o rea de pico, la ms utilizada es el rea de pico y se basa en el hecho de que la concentracin de un componente de la muestra es directamente proporcional al rea del pico que produce.