DISCUCIONES:

La transformacin es el resultado de la introduccin de un DNA extrao al interior de otro organismo y esta nueva informacin gentica suele proporcionar al organismo una nueva caracterstica que puede ser identificada despus de la transformacin, La mayora de las bacterias, como E. coli, son impermeables a la entrada de cidos nucleicos exgenos en condiciones normales de crecimiento, Las bacterias de esta tratadas en fro con una disolucin de CaCl2, y que continuacin sometidas a un choque trmico a 42C, se hacen competentes y permiten la entrada del DNA del fago lambda. Este mtodo de transformacin mediante el choque trmico de clulas competentes con cationes divalentes es muy rutinario dada la facilidad de realizacin del mismo y la no necesidad de utilizar aparatos sofisticados, a diferencia de la electroporacin o la biobalstica. No obstante la eficiencia del mismo puede resultar baja, segn el caso. (2-3)En experimentos de clonacin, las colonias bacterianas que han sido transformadas con un plsmido recombinante se pueden identificar usando un anlogo de galactosa, el 5-bromo-4-cloro-3-indolil--D-galactopiransido (abreviadamente X-gal). Este compuesto puede ser metabolizado por la -galactosidasa en galactosa, un monosacrido, y 5-bromo-4-cloro-3-hidroxindol, un compuesto de color azul. El IPTG es un azcar sinttico anlogo de la lactosa que se utiliza para la induccin de la produccin de protenas en la bacteria Escherichia coli.Las clulas transformantes que han captado plsmidos con el opern lac intacto, una vez inducidas por IPTG, estn expresando activamente -galactosidasa, que hidroliza X-gal y colorea de azul sus colonias. Las colonias de clulas transformantes que han captado un plsmido con el opern lac recombinante, en cuyo interior ha sido insertado el gen de la protena de inters, sufren con la insercin la inactivacin del gen lacZ (uno de los genes que codifica la -galactosidasa) y por tanto, no pueden expresar -galactosidasa ni degradar X-gal, permaneciendo sus colonias de color blanco. La ampicilina es una aminopenicilina con actividad antimicrobiana de amplio espectro que Inhibe la sntesis del pptidoglicano, constituyente de la pared bacteriana, en clulas en fase activa de crecimiento. Las bacterias que contienen este tipo de plsmidos se pueden seleccionar crecindolas en presencia de ampicilina. Obviamente, las bacterias que no han incorporado el plsmido no crecern en este medio de cultivo. En los plsmidos recombinantes, la incorporacin del inserto inactiva el fragmento de forma que las bacterias que contienen estos plsmidos carecen de actividad -galactosidasa, originando colonias blancas en un medio de cultivo que contiene el sustrato incoloro X-GAL. Las bacterias transformadas con plsmidos sin inserto aparecen como colonias azules en este medio pues son capaces de sintetizar -galactosidasa.

CONCLUSIONES:
La temperatura en el choque trmico es de gran importancia para que pueda dar la insercin del plsmido correctamente. Para que se produzca la transformacin de una bacteria sta debe encontrarse en un estado fisiolgico denominado de competencia. Estas clulas son susceptibles de ser transformadas y, por lo tanto, tomar ADN externo e introducirlo en su citoplasma. El ADN asimilado de esta forma puede expresar sus genes en la bacteria transformada.

Se obtuvieron colonias de color blanco y azul Los elementos regulatorios del opern lac son utilizados de esta manera como sistemas inducibles de expresin de protenas. IPTG es un inductor efectivo en un rango de concentraciones de 100 M a 1,5 mM.