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PERSPECTIVA HISTRICA DE LA BIOQUMICA

NGEL MARTIN MUNICIO

Real Academia de Ciencias

Una de las parcelas de la sabidura se ha atribuido tradicionalmente a la historia y, en la presentacin del estado general del saber, se refera Bacon al valor de la historia de esta manera: Una historia correcta del saber, donde se contengan las antigedades y orgenes de los conocimientos; sus invenciones, sus tradiciones, susflorecimientos,decadencias y olvidos, con las causas y ocasiones de los mismos, y todos los dems sucesos relacionados con el saber, a lo largo de las edades del mundo, puedo afirmar con certeza que no existe. Con la idea, pues, de atesorar los bienes del pasado, desde hace muchas dcadas el inters de los historiadores se ha centrado en dos tipos de estudio: o bien se fija la atencin en los largos periodos, los procesos irreversibles, las continuidades seculares y los movimientos de acumulacin; o bien se estudia el desplazamiento de los pensamientos permanentes hacia fenmenos de ruptura, de las manifestaciones homogneas y persistentes de las ideas y las disciplinas hacia las interrupciones y quiebros que conducen a nuevos tipos de racionalidad. Y, dentro de esta segunda opcin, la historia de los conocimientos de la ciencia, en la poca actual, saca a relucir segn la expresin de Foucault todos los erizamientos de la discontinuidad. Si, en efecto, ambos tipos de estudio han sido objeto de la atencin de los historiadores de las ideas y de las ciencias, las grandes continuidades del pensamiento cientfico estn en el nimo general de las gentes de la ciencia. Los orgenes griegos y su refugio cristiano medieval, la alquimia y la ciencia rabe, el nacimiento del mtodo cientfico y la desvinculacin de la ciencia de sus races filosficas, con sus motivaciones iniciales y sus grandes puntos modernos de inflexin bajo la forma de las grandes revoluciones de la ciencia y la tcnica la revolucin de la qumica, la revolucin industrial, la revolucin de la biotecnologa y la revolucin de la informtica y las comunicaciones, son algunas de las cronologas de continuidades y discontinuidades bajo las que se esconden tambin lentas maduraciones de los campos del conocimiento. La nocin de revolucin es un elemento fundamental de los estudios histricos, que ocurre bien de forma impensada o como fruto de la incorporacin lenta de nuevas ideas y que, en ambos casos y como punto de inflexin, surge del fondo montono de la continuidad de los acontecimientos y sobresale de los lmites entre los que oscila el umbral de la acumulacin estable de los datos de un determinado campo del conocimiento. Y es en ese desplazamiento de la continuidad, en la aparicin de la discontinuidad, cuando se presentan los rasgos ms esenciales de la historia nueva, las especificidades que nacen y las formas de relacin que permanecen. Bajo estos planteamientos podemos ya referirnos tanto a la continuidad de la Qumica y de la Qumica Orgnica y a los lmites del umbral de sus oscilaciones, como a las discontinuidades que sirvieron al origen de la Bioqumica; sin que ello quiera significar la existencia de lmites definidos, tan innecesarios como imposibles de establecer cuando la grandes inercias creadoras de la Qumica y de la Qumica Orgnica fueron capaces no tanto de penetrar en un nuevo campo del conocimiento, an inexistente, sino ms bien de irlo creando al contacto de las cualidades y los fenmenos de los individuos y las poblaciones de seres vivos. Qu fue esta creacin sino el intento de comprender las bases qumicas de la funcin celular de la digestin, la fermentacin, la fotosntesis, la contraccin muscular, la visin y la herencia? Y estas bases qumicas no descansaron en las teoras, las prcticas, los conceptos y el lenguaje XI

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que desarrollaron, con Lavoisier y sus mitos, y entre otros, Guyton de Morveau, Dalton, Davy, GayLussac, Dumas y Justus von Liebig? Y, para su construccin, no sirvieron las estructuras qumicas, conocidas desde el ltimo tercio del siglo XVIII, como las de los cidos tartrico, oxlico, lctico, rico, ctrico, mlico y glico, la casena, la glicerina y el cido benzoico? As, puede afirmarse que la Qumica Orgnica naci en la revolucin cientfica que llev a cabo Lavoisier al establecer las estrechas relaciones entre la combustin, la respiracin animal y la produccin de calor. Relacin entre los distintos fenmenos que se vena negando desde Aristteles, quien en De Respimtione (cap. III) aseguraba: ... es absurdo pensar que la respiracin sea una fuente de calor; no se puede creer que el ruego interior sea suministrado por el aire inspirado y que el hombre al respirar proporcione un elemento apto para la combustin interior. Si decisivos fueron, pues, los hechos mismos de la Qumica, no menos trascendente fue la instauracin de una nueva forma de pensamiento. Quiere ello decir que si til tuvo que ser el descubrimiento del oxgeno y su significado en el desarrollo de la teora de la acidez, no menor proyeccin habra de alcanzar la extensin de los hechos a la idea de la oxidacin biolgica en los seres vivos. Y los entresijos de estos oscuros debates, durante siglo y medio, contribuyeron esplndidamente a la historia del conocimiento y de la ciencia y, de ellos, entre luces y sombras, se fue haciendo la claridad de un maravilloso nuevo campo de saberes, que, en el ltimo medio siglo ha fructificado en multitud de ramas, a la vez independientes y conexionadas, a la vez parte de la ciencia fundamental y de sus mejores aplicaciones a la biologa humana. Sobre la naturaleza de la materia viva Si el incipiente campo de conocimiento que supuso la Bioqumica haba de tener su gnesis en la independiente maduracin de la Qumica Orgnica y su progresiva adecuacin a los modos de pensamiento biolgico, tendremos ya que estar sobre aviso de que en esta interaccin participaron debates, intensos a lo largo del siglo XIX, acerca de la naturaleza qumica de los compuestos de la materia viva, sobre las teoras de los principios vitales, la estructura molecular de las protenas, la naturaleza de la catlisis y la especificidad molecular de las enzimas. Seguramente que ya es bueno este momento para dejar constancia por primera vez de que, en mltiples ocasiones, los hechos de la Qumica Orgnica tuvieron necesidad de adaptarse a las especiales formas de pensamiento biolgico para seguir siendo de utilidad en la creacin del nuevo campo de conocimiento que la Bioqumica habra de suponer. Dentro de estas ideas, fue as como en la maduracin de la Qumica Orgnica de mediados del siglo XIX se avanza sobre bases fundamentalmente qumicas. As, Gerhardt, en 1840, dice que las frmulas qumicas tienen por finalidad poner en evidencia, de la forma ms sencilla y exacta, las relaciones existentes entre los diversos cuerpos, desde el punto de vista de sus posibles transformaciones. Y, en 1854, Thenard, en su Traite de Chimie, afirma que la investigacin en qumica orgnica no tiene otra finalidad que la de hacer desaparecer las frmulas brutas y sustituirlas por frmulas racionales. Sin embargo, la experiencia fue mostrando la existencia de compuestos con la misma composicin y distintas propiedades. Uno de los ms discutidos fue, sin duda, el cido tartrico; y Berzelius, Mitscherlich, Biot, Pasteur y otros qumicos, sin apenas ms tcnicas que la observacin y la medida de algunas propiedades, la solubilidad y la actividad ptica por ejemplo, llegaron a explicar la existencia de la isomera. Era, sin duda, la primera correlacin entre una supuesta ordenacin de los tomos constituyentes, responsables de una forma geomtrica externa, y las propiedades fsicas y qumicas de los compuestos. A medida que avanza el siglo XIX, la Qumica Orgnica y la Fisiologa, independientes, conocen la qumica de los alimentos y de diversos componentes del cuerpo humano; se lleva a cabo la sntesis de numerosos compuestos orgnicos, Pasteur descubre la asimetra molecular; comienza a hablarse de la digestin haciendo uso de los trminos metabolismo, catlisis y enzima. La Qumica y la Fisiologa, de cada lado, continan sujetas a los fenmenos, a las leyes y a los avances de la Qumica y de la Biologa. De una parte, por ejemplo, al principio de Avogadro, a la teora de la valencia y a la estereoqumica; y, de otra, a la iniciacin de la teora cromosmica de la herencia, al nacimiento de la endocrinologa experimental, a la extensin de las ideas de la fermentacin, al conocimiento de las bacterias, la asepsia y el origen microbiolgico de muchas enfermedades humanas. XII

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La Qumica Orgnica fundada sobre la sntesis fue el ttulo de una obra clsica en la que Berthelot, en 1860, recogi y sistematiz los mtodos de sntesis hasta entonces en vigor. Haca entonces un cuarto de siglo que Whler haba llevado a cabo la sntesis de la urea, y, con ello, la primera obtencin artificial de un producto natural. A partir de 1850, merecen recordarse la sntesis de la alanina por Strecker, las de la glicocola y leucina por Perkin, la de la taurina por Kolbe, la de la creatina por Volhard, la de la colina por Wrtz y la del ndigo por Baeyer, como ejemplos suficientes para justificar el permanente soporte de los mtodos de la qumica orgnica en la obtencin de numerosos compuestos con profunda significacin biolgica. Esta nueva actitud y las nuevas habilidades de los qumicos orgnicos motivaron la cita de Berthelot:
Interpretar la vida a partir de tas explicaciones de la qumica orgnica es el objeto de nuestros estudios. Tan slo desde esta perspectiva tendremos xito en edificar una ciencia completa y autnoma. La qumica crea su propio objeto y es esta facultad creativa, semejante a la del mismo arte, lo que la distingue de las ciencias naturales o histricas.

A su vez, las frmulas desarrolladas explicaban muchos casos de isomera, pero el problema de la isomera ptica no se resolvi hasta 1874 hace poco ms de un siglo, fecha en que van't Hoff y Le Bel propusieron la estructura tetradrica del carbono, con lo que naci la estereoqumica. Fue el primer concepto fundado en la ordenacin espacial de los tomos en la molcula e interpretaba cmo los antpodas tienen poder rotatorio ptico opuesto, aunque, obviamente, no fue posible determinar la configuracin especfica y la direccin de poder rotatorio. Hubo que contentarse con la convencin de Emil Fischer, que afortunadamente acert, y setenta aos despus, en 1951, el holands Bijvoet consigui su demostracin experimental.

Qumica Orgnica y Fisiologa Entretanto, comenzaron a sobrepasarse las ideas vitalistas que, a falta de otras ventajas, pusieron las ciencias naturales sobre el tapete de las disquisiciones filosficas, haciendo de ellas terreno privilegiado para el nacimiento de hiptesis, teoras y doctrinas sobre la vida y el hombre dentro de su marco, como resultado de la introduccin de la dimensin tiempo combinada con la idea concomitante de dinamismo. A la vez, la teora de la descendencia se iba interpretando por medio de hiptesis justificadoras de la magnitud de las transformaciones que surgieron, entrado ya el siglo XIX, con Darwin y la seleccin natural, y con De Vries y las mutaciones. Y, de esta manera, los nacientes campos del conocimiento de la Qumica Orgnica y la Fisiologa comenzaron a tratar reas comunes como ocurri con la nutricin que, por otro lado, eran estimulados por las necesidades sociales y sus implicaciones econmicas. A este propsito hay que sealar que, en 1811, se inicia la investigacin de los hidratos de carbono; el mismo ao que Gay-Lussac y Thnard determinaron con exactitud la composicin elemental del azcar de caa, que Chevreul iniciara sus famosas investigaciones sobre las grasas, y que Berthollet midiera la cantidad de amoniaco producido en la destilacin seca de la carne. En la misma poca, Magendie correlacion las propiedades qumicas y fisiolgicas de los alimentos, concluyendo que el nitrgeno, cuyo papel se seal como fundamental en la vida de los animales, era de origen nutritivo. La divisin de los alimentos en azcares, grasas y protenas, que dura hasta nuestros das, fue establecida por primera vez en 1 827 por el mdico ingls William Prout, quien, en las Philosophical Transactions de la Royal Society, comunicaba:
... he llegado a la conclusin de que los materiales alimenticios principales empleados por el hombre y los animales ms perfectos pueden reducirse a tres grandes clases, trie saccharine, the oily and the albuminous.

Y, a la vez, comenzaba el estudio de la digestin gstrica con el reconocimento de la presencia en el estmago de cido clorhdrico, lo que dio pie a los anlisis sistemticos de los alemanes Gmelin yTiedemann acerca de la digestin. Schwann, en 1836, descubri que el fluido gstrico contiene, adems del cido clorhdrico, otro componente digestivo al que denomin pepsina. Un ao antes, Berzelius haba introducido el trmino catlisis para significar este tipo singular de fenmenos qumicos. XIII

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Desde un punto de vista histrico, hay que sealar la atraccin que presentaba el estudio de la digestin; quiz porque en aquella poca eran escasos los fenmenos biolgicos que podan contribuir a dilucidar las bases fundamentales de la vida. As, Schwann y Purkinje fueron histlogos y fisilogos experimentales; ambos, y sobre todo Schwann, desarrollaron los detalles de la teora celular de forma sistemtica, a la vez que observaron la estructura granular de los tejidos animales y utilizaron la qumica como criterio indispensable para una explicacin racional de los procesos vivientes. La sustancia presente en dichos granulos fue denominada enchyme enzima por Purkinje en 1837, y, dos aos ms tarde, Schwann introdujo el trmino fuerza metablica para designar la causa desconocida responsable del conjunto de fenmenos que tienen lugar en las clulas. Fue esta la primera vez que se utiliz el trmino metabolismo en el sentido moderno. No cabe duda de que en el conjunto de estas relaciones se encontraba el estudio de la fermentacin. Las posiciones encontradas se mantenan, de un lado, por Berzelius y Liebig, defensores de la fermentacin como simple proceso qumico sin nada que ver con los procesos vitales. De otro lado, casi en solitario, Schwann describa el crecimiento de la levadura como causa de la fermentacin alcohlica, extendiendo los cambios metablicos de la levadura a todo tipo de clula viva. Y es, mediado el siglo XIX, cuando vuelven a solaparse las ramas, durante un siglo aisladas, de la Qumica Orgnica y la Fisiologa. Esta fisiologa se va a apoyar cada vez ms en la teora celular y en la qumica; y, simultneamente, las ideas de la qumica orgnica andarn a la zaga de los procesos qumicos en los tejidos y rganos de animales y plantas. Sucedi, pues, que en la misma poca en que la plenitud de la Qumica Orgnica llevaba a cabo la sntesis artificial de numerosos compuestos naturales, Hoppe-Seyler, en 1877, desechaba la diferencia entre los fermentos organizados para los que se describa una funcin privativa en el interior de las clulas de levadura y los fermentos no organizados, tales como la pepsina y la diastasa, a los que ya se vena conociendo como enzimas. La prueba experimental de tal falta de difetencia no vendra hasta finales de siglo, en 1897, ao en que Eduard Buchner demostr el mantenimiento de la fermentacin por extractos de levadura libres de clulas. La fermentacin se plante, pues, en los sencillos trminos de la accin enzimtica y de los cambios qumicos que tuvieran lugar en la clula. Y, a pesar de los zigzagueos, desde Lavoisier y Schwann hasta Pasteur y Buchner, el crculo se haba cerrado con muchas partes de verdad que aportaron cada uno de los grandes protagonistas de este prolongado enfrentamiento sobre el problema de la fermentacin alcohlica. Las ideas de Liebig, que consideraban la fermentacin como un fenmeno de naturaleza esencialmente qumica, eran, sin duda, correctas, aunque, de otro lado, no lo fueran las explicaciones sobre la esencia misma del proceso. Pasteur no estaba en lo cierto al juzgar la fermentacin indisolublemente unida a la vida del organismo; no se le puede negar, sin embargo, su aportacin al papel inicial de los organismos que, fruto de su vitalidad, elaboraban los fermentos activos. Fue Traube quien intuy como nadie la verdad: a saber, que todas las fermentaciones producidas por los seres vivos eran debidas a las sustancias fermentos o enzimas segregadas por las clulas; aunque no fuera capaz de probarlo. Y fue necesario el mtodo experimental de Buchner, el descubrimiento de lo que se conoci como zimasa, para que pudieran demostrarse las partes de verdad de cada una de las hiptesis anteriores, y, a la vez, iniciarse otra andadura, la de los complejos mecanismos qumicos y de la necesidad de otra sustancia dializable, estable al calor, a la que denomin coenzima. Denominacin que, si entonces fue debida a la naturaleza desconocida de sus misteriosas funciones coadyuvantes de la fermentacin, hoy, interpretada esta en todos sus detalles, se mantiene y conserva y se ha extendido a todas las sustancias que, como ella, participan en los mecanismos de la accin enzimtica. Y, de esta manera, si el estudio de los procesos fisiolgicos en trminos de la qumica, haciendo uso de las leyes y los mtodos de la qumica orgnica, origin primeramente una simple yuxtaposicin de conceptos con un fuerte predominio de lo qumico, esta yuxtaposicin, cumplida la misin mezcladora de las nuevas reas del conocimiento durante cerca de medio siglo, no tuvo inconveniente en engendrar un nuevo campo. Precisamente esta fcil autoconversin en un nuevo campo con un mayor equilibrio entre lo qumico y lo biolgico fue la caracterstica ms sobresaliente de la nueva Bioqumica en el primer tercio del siglo XX.

Hacia la madurez de la Bioqumica En el momento de intentar establecer una frontera entre la Qumica Orgnica y la Bioqumica saltan a la vista los productos naturales, ms que como lmite como lugar comn de ambos campos XIV

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del conocimiento. Sin embargo, cuando la Bioqumica entra en su periodo de madurez, all por los comienzos de la dcada de los cuarenta, la Qumica Orgnica llevaba ms de un siglo de aislamientos, caracterizaciones y sntesis de numerosos productos naturales, aminocidos, azcares, alcaloides, pigmentos e, incluso, esencias y aromas vegetales. Sin embargo, la Qumica Orgnica se sinti, quiz, ms incapaz que ajena al enfrentamiento con los problemas estructurales de los productos naturales nacidos bajo el intenso signo de lo biolgico, del tipo de las protenas, los cidos nucleicos y las enzimas; de tal forma que en los libros de Qumica Orgnica, aun de nuestros aos sesenta, se apuntaba que la importancia de las protenas radicaba en su condicin de fuente de aminocidos para los seres vivos. Y al sealar este hecho, en una ocasin, Arthur Kornberg lo comparaba con la importancia atribuida a un automvil como nica fuente de sus piezas. En este intento de hacer de los productos naturales el lugar comn, tambin natural, entre ambos campos del conocimiento, el de la Qumica Orgnica y el nuevo de la Bioqumica, habr que sealar y seguramente que extraarse de ello cmo aquellos sorprendentes qumicos orgnicos, capaces de proporcionar bellsimos ejemplos a las pginas de la biologa y de la medicina tales como el descubrimiento de las estructuras de la riboflavina y la tiamina (Kuhn y Karrer, y Williams y Windaus); la determinacin de la estructura y la sntesis de la biotina (Du Vigneaud); la identificacin de estructuras esterodicas de las hormonas sexuales y de la corteza adrenal (Butenandt, Ruzicka, Kendall y Reichstein), e incluso la sntesis total de la cortisona (Sarett, 1952), y la demostracin de la conversin de colesterol en pregnandiol en el hombre (Bloch en 1945); la construccin de los fundamentos del complejo campo de las porfirinas (Hans Fischer); la aclaracin de la constitucin de la tiroxina (Harington); la sntesis qumica de los famosos nucleotidos, del tipo de ATP y NAD (Todd); y, algunos aos ms tarde, en 1973, la impresionante sntesis total de la vitamina B12 (Woodward), o la mucho ms reciente del taxol (Nicolau, 1994) fracasaran en su enfrentamiento con la estructura de los biopolmeros. Fracaso tanto ms de extraar cuanto que la qumica orgnica contaba ya con recursos metodolgicos sobradamente brillantes y suficientes; habida cuenta, adems, de la excelencia de los qumicos que lo intentaron como Fischer, Abderhalden o Willsttter, entre otros. Cabe preguntarse por los motivos no demasiado normales o lgicos de este fracaso: puede tener que ver con la aceptacin o no del reduccionismo de la Bioqumica a la Qumica? o, sin renunciar a un reduccionismo relativo, bastar con aceptar para la Bioqumica un grado superior de complejidad como el que supone la interpretacin molecular de los fenmenos vitales?, ser necesario tener en cuenta algo ms del sentido de lo biolgico? En cualquier caso es esta, sin embargo, una manifestacin del gran inters por aquello que la Bioqumica intenta descubrir e interpretar acerca del mundo.

El sentido de lo biolgico Hace alrededor de una docena de aos que, en la Medawar Lecture de la Royal Society, Karl Popper asegur que la Bioqumica no puede reducirse a la Qumica, dando como explicacin que las reacciones in vitro no son lo mismo que las in vivo porque estas tienen una finalidad. Lo que para Max Perutz tena un cierto tufillo de vitalismo, y mereci la rplica siguiente: Hopkins ya prob que las reacciones bioqumicas en los seres vivos no son ms que la suma de las reacciones que pueden realizarse en el laboratorio e interpretarse en trminos qumicos. Punto de vista que ha sido vindicado por la demostracin de que los procesos fundamentales al estilo de la replicacin del DNA, su transcripcin al RNA mensajero y la traduccin de este en las protenas, la transduccin de la luz en energa qumica, y toda la serie de reacciones metablicas, pueden ser reproducidas in vitro, sin que ni una mnima parte de sus actividades en la clula sea otra cosa que la suma de las reacciones qumicas de sus partes en el tubo de ensayo. Pudiera argirse que es la organizacin la que otorga la finalidad a la clula y hace que la suma sea algo ms que sus partes. Siendo esto cierto, no lo es menos que la organizacin es intrnseca y qumica. Como fruto de una conversacin personal con Perutz, Popper afirm que para l una reaccin qumica in vitro es diferente de la misma reaccin in vivo que tiene lugar con arreglo a una finalidad, de igual manera que la combustin del petrleo en un tubo de ensayo difiere de la combustin en el motot de un automvil. Finalidad que, a mi juicio, no obsta para que los mecanismos de amXV

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bos tipos de reacciones sean idnticos y que lo que suceda en el tubo de ensayo, sin finalidad, pueda extrapolarse a lo que ocurre tanto en un buque de guerra como en un tractor agrcola, con muy diferentes objetivos. Pero, seguramente que ni una ni otra de estas interpretaciones extremas sea satisfactoria para responder a las cuestiones de por qu las herramientas y los conceptos de la qumica orgnica no fueron suficientes para esclarecer la estructura de las protenas? y tendr o no que ver con la aplicacin reduccionista de la Qumica? Sucede, sin embargo, que el trmino reduccionismo puede tener toda una serie de significados y, de otro lado, no tener el mismo valor en todas las situaciones o fenmenos biolgicos de diferente complejidad. De otra manera, si quiz no quepa hablar de mera reduccin a la qumica de fenmenos globales como la cooperatividad o el sentido biolgico de gran nmero de estructuras oligomricas, con toda seguridad no habra inconveniente en hacerlo referido a cada una de las reacciones componentes o a las situaciones parciales resultantes del despiece de la superior organizacin total de estos fenmenos. Lo que no quita para que estas situaciones de mayor complejidad biolgica, llmense cooperatividad, alosterismo, informacin o redes neuronales, puedan ser objeto de modelizaciones y abstracciones matemticas reduccionismo a fin de cuentas a imitacin de lo que sucede en la fsica. A la vista de estas ideas, y retrocediendo de nuevo ms de medio siglo, no resulta nada extrao que la Qumica Orgnica tropezara con el descubrimiento de la estructura de las protenas y con otros problemas de la naciente Bioqumica, haciendo buen uso de los mtodos de la qumica, pero con una lgica pero significativa ausencia del imprescindible sentido de lo biolgico. Si, en efecto, cuestiones de simple averiguacin estructural qumica, como hubieran sido las de las protenas y los cidos nucleicos, no pudieron ser resueltas a manos de una qumica orgnica sobresaliente, debido a esa carencia de sentido biolgico, qu decir de aquellas otras, ms ricas en esta significacin biolgica, como las de la naturaleza de las enzimas y de la catlisis enzimtica, de la propia biosntesis de las protenas, de la fotosntesis o de simples cuestiones estereoqumicas? Aunque referido particularmente a una de estas cuestiones, no costara mucho trabajo extrapolarlo a todas las dems. Se trata de un artculo de Primo Levi, aparecido en la revista Prometeo, en 1984, titulado La asimetra y la Vida, que trata del problema de la estereoqumica, una silenciosa competicin que dura millones de aos entre las molculas orientadas a derecha o a izquierda, discutiendo de antpodas, racmicos y su resolucin, y concluye: Para m, la noticia de la quiralidad del Universo, o solamente de nuestra galaxia, parece enigmtica: tiene algn sentido?, cul sera este?, a dnde nos conducira?, se trata de un juego de dados, el mismo que Einstein rehusaba atribuir a Dios? Interrogantes que, al menos, nos sitan perfectamente ante ese sentido de lo biolgico que venimos comentando y que se ha echado en falta en la solucin de algunos problemas bioqumicos. Si, efectivamente, la interpretacin en sus comienzos, all por la segunda parte del siglo XX, de las incipientes funciones fisiolgicas que se iban describiendo, se bastaba con los conceptos que la Qumica Orgnica desarrollaba, se hizo insuficiente en algunos casos, como en el de la descripcin molecular de las protenas, para cuya solucin se impuso la incorporacin del sentido biolgico de su funcin y de su especificidad. Ello no ha quitado que hoy, una vez aclarada la responsabilidad estructural de sus actividades, la creacin de novo de protenas y el diseo racional de nuevas estructuras y funciones, incluso la creacin de nuevos dominios de unin, pertenezcan al poderoso campo de la qumica de las protenas. Ms an, que las poderosas herramientas de la qumica combinatoria formen parte de la protemica, campo de conocimiento emergente para la construccin experimental y el anlisis de las propiedades de las protenas creadas.

El concepto de protena Una de las races de estos planteamientos tuvo su origen en el descubrimiento por el holands Mulder, en 1838, en la sangre, los huevos y, obviamente, en el queso, de una sustancia con azufre, que da lugar a sales negras de plomo o de plata, lo que no ocurre tras un tratamiento con lcalis. Se dice que por sugerencia de Berzelius, Mulder denomin a esta sustancia protena la primera entre los materiales de la vida, cuya presencia pudo demostrar en seguida en numerossimas fuentes animales y vegetales. La historia relata la impresin que caus este descubrimiento en las autoriXVI

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dades qumicas de la poca, entre otros en Berzelius (1779-1848), Liebig (1803-1878) y Dumas (1800-1884); alguno que otro disintiendo o acusando una profunda confusin, y otros debatiendo acerca de las prioridades del hecho experimental. A l se refiri Liebig al asegurar que abri un universo de nuevos descubrimientos, lo que no fue inconveniente para que manifestase a continuacin su discrepancia de la idea de protena como sustancia molecular ordinaria cuya frmula pudiera determinarse por los mtodos ordinarios de la qumica. La lnea principal de investigacin de Mulder se basaba en el supuesto bsico de que todo fenmeno fisiolgico tena que comprenderse como manifestacin de reacciones qumicas ordinarias, sujetas a las leyes de la qumica, bajo condiciones iniciales de unin extremadamente complejas. De aqu que, para evitar la presencia de productos de descomposicin, se instaurasen mtodos de aislamiento lo ms suaves posibles, como la extraccin con disolventes o el tratamiento con cidos o bases diluidos. Por medio de los anlisis elementales de la poca, Mulder obtuvo para la denominada protena la frmula C 4 0H 6 2N ]0 O 12 . Para Liebig, sin embargo, el concepto de protena no denotaba una molcula qumica definida, con constitucin y propiedades propias, sino una clase de sustancias relacionadas que compartan la misma composicin atmica pero no la misma distribucin atmica. Segn Liebig, la fcil interconvertibilidad de estas sustancias indicaba que sus tomos se encontraban muy lbilmente unidos, sin formar molculas estables y con grandes posibilidades de redistribucin como consecuencia de los procesos fisiolgicos. Dicha clase de sustancias solamente podran sintetizarse por las plantas y, como tales, seran incorporadas a los tejidos animales por la nutricin. Dado que las grasas y los hidratos de carbono no contienen nitrgeno, Liebig supuso que todas las transformaciones y eliminaciones nitrogenadas habran de tener como origen el metabolismo de las protenas, y estableci los clculos relativos a la composicin elemental relativa de orina, urea, bilis y sangre. Y con la pretensin tanto de obviar el cumplimiento de las leyes de la qumica en los seres vivos, como de posibilitar las transformaciones materiales de una forma econmica, surgi la idea de fuerza vital que, heredera de la gobernabilidad universal por las leyes de la fsica de Newton y bajo formas diversas en manos de Hunter, Barthez, Bichat y algunos discpulos de Kant, penetr hasta buena parte del siglo XIX y habra de extenderse luego, como es bien sabido, a fenmenos del tipo de la fermentacin y la putrefaccin, y que tanto esfuerzo costara desarraigar merced a la imposicin de la metodologa experimental. Con los inevitables solapamientos de la poca, el debate Mulder-Liebig se plante en trminos de enfrentamiento de posiciones lgico-empiristas frente a una argida superioridad de los razonamientos deductivos; es decir, trataba ms de un metadiscurso sobre metodologa cientfica que de la discusin de unos u otros resultados. Mulder y sus partidarios, Berzelius entre otros, desde una posicin empirista, sostena la existencia de relaciones jerrquicas entre hechos y teoras y, as, exiga a las teoras fisiolgicas un estricto fundamento sobre los hechos de la constitucin qumica y las propiedades de las sustancias orgnicas participantes de los procesos fisiolgicos. Por su parte, Liebig propugnaba seguir el mtodo de Galileo y Newton de resolucin y recomposicin, basado en la existencia de relaciones cuantitativas invariantes en una variedad de fenmenos semejantes. Sus explicaciones de la fermentacin y la putrefaccin en trminos de cantidad de movimiento eran claramente newtonianas; de la misma manera, us la nocin de fuerza vital en trminos exclusivamente operacionales, sin referencia alguna a su naturaleza interna y a su esencia. De esta forma, Liebig pretenda superar las vacas teoras empiristas y defenda la superioridad de los mtodos deductivos. Las disputas de este tipo, abundantes de otro lado en la poca, tenan, sin embargo, ms de persuasin retrica que de mtodos racionales de decisin cientfica. En 1837, en las Mmoires de l'Acadmie des Sciences, Chevreul estableci que ningn estudio provechoso acerca de los fenmenos que tienen lugar en los organismos podra realizarse sin el conocimiento de la composicin elemental y las propiedades fsicas y qumicas de las especies moleculares participantes. Sin embargo, mientras aceptaba la validez de este aserto para funciones del tipo de la digestin, la respiracin o la excrecin, guardaba ciertas reservas para otras categoras de fenmenos como el crecimiento y la regulacin. La oposicin antivitalista alemana se inaugur con una contribucin de Schwann a la obra de su maestro y profundo vitalista, Mller, Handbuch der Physiologie, que introdujo en Alemania el mtodo experimental de Magendie. Schwann intentaba sustituir las explicaciones teleolgicas por explicaciones fsicas; para l los fenmenos de la vida se producan por fuerzas que no actuaban segn una idea, sino bajo las necesarias leyes de la fsica; ello sirvi a Schwann para introducir en la estructura de la materia de las clulas el mismo concepto de molcula definido por la qumica, y, por tanto, para preparar el camino qumico de la bioqumica celular. XVII

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Bajo la idea de globalidad En cualquier caso, y ante la no aceptacin, primero, y el olvido, despus, de estas divergentes posiciones metodolgicas de la disputa Mulder-Liebig, y contando con el afianzamiento de los conceptos y los hechos de la qumica, la segunda mitad del siglo XIX se enfrent porfiadamente a la caracterizacin de las protenas y se plante la necesidad de nuevas formas de investigacin cientfica para hacer frente a la idea de globalidad de las condiciones materiales de vida y de los conceptos de estructura, funcin y relaciones estructura / funcin. A la vez que la atencin se fue desviando hacia niveles superiores de organizacin, bajo esta influencia se desarrollaron las sucesivas ideas de la teora celular y, a su lado, las de protoplasma como unidad de la vida, el modelo de cristalizacin sobre el origen de nuevas clulas y el llamado estado coloidal. Entre los autores, Lehmann, Graham, Schwann y Pasteur. El protoplasma constitua un estado especial de la materia, entre el slido y el lquido, al que Graham denomin coloide, como estado dinmico de la materia, mientras que el estado cristalino sera de naturaleza esttica; la sustancia coloidal poseera la actividad considerada la fuente primaria de la fuerza manifestada en los fenmenos vitales. P. Thomas, en el Cours de Chimie Biologique (1926), atribua al estado coloidal los aspectos mecnicos del organismo y la rpida movilizacin de sus componentes. Y Antonio de Gregorio Rocasolano en los Elementos de qumica-fsica coloidal (1920), deca: un gran nmero de fenmenos biolgicos observados no logran interpretacin satisfactoria ms que si se los considera como las consecuencias de formaciones coloidales y lgicamente debe ser as ya que la materia viva es un complejo en el que predomina el estado coloidal. Interpretacin coloidal de la materia viva que, a falta de mejores argumentos y basada en teoras irrelevantes sobre adsorcin y acciones superficiales en la bsqueda de relaciones estructura-funcin, penetr incluso en el segundo cuarto de nuestro siglo y, as, pudo contemplarse en uno de los textos clsicos de los aos cuarenta, Outlines ofBiochemistry, de R. A. Gortner (1938), numerosas referencias a coloides, soles y geles, en el seno de una presentacin global de la teora coloidal. Mientras tanto, el desarrollo de la teora estructural de la qumica orgnica, en manos de Pflger, llev a concebir el protoplasma como un polmero de la protena en el que las molculas individuales se unen a travs de enlaces CN formados por reaccin de los grupos carboxilo (-COOH) de una molcula y los grupos amino (-NH 2 ) de otra. La creacin de estos enlaces dara lugar a una nueva protena mediante la energa liberada en los procesos oxidativos del protoplasma viviente; a su vez, la rotura de los enlaces CN liberara una energa cintica en forma de elevacin local transitoria de temperatura, utilizable como calor de reaccin para procesos metablicos. En oposicin al dogma central de Liebig, Pflger reconoci que los procesos metablicos de grasas, hidratos de carbono y protenas, no constituan entidades separadas sino engarzadas en el conjunto del metabolismo intermediario; y a la vez, llev a cabo la contribucin fundamental del establecimiento de la respiracin como actividad intracelular. Simultneamente a los esfuerzos por aclarar la naturaleza qumica de las protenas figur el de la naturaleza de las enzimas y, lgicamente, hubo de seguir semejantes etapas de esclarecimiento durante el siglo que transcurri desde la formulacin del concepto de accin enzimtica por Berzelius hasta la cristalizacin de la ureasa por Sumner. Modo de accin de las enzimas que, a finales del siglo XIX, se encontraba an en un estado de gran confusin. Y, an bien entrado el siglo XX, Willstttter concluy que las enzimas consistan en material coloidal, que no daba las pruebas de las protenas, combinado con un grupo qumicamente activo. Fodor, de la escuela de Abderhalden, asimil las tesis y actitudes de la qumica coloidal e introdujo la idea de que las enzimas eran sustancias indefinidas y que bajo ciertas circunstancias exhiban la funcin enzimtica. La cristalizacin de varias enzimas digestivas por Northrop incorpor la controversia de la naturaleza qumica de las enzimas a la de la estructura de las protenas. Y el reconocimiento de las enzimas como protenas bien definidas qued unido a la investigacin de las protenas como macromolculas bien definidas; concepto que puso fin al estril medio siglo de biocoloidologa. Veamos cmo estas ideas, antes y despus de Mulder, se reflejaron en algunos textos acadmicos a lo largo del siglo XIX y comienzos del XX. XVI11

PRESENTACIN

La obra titulada Sistema de los conocimientos qumicos y de sus aplicaciones a los fenmenos de la

naturaleza y del arte, escrita por A. F. Fourcroy, miembro del Instituto de Francia y profesor de qumica en el Museo de Historia Natural y en la Escuela Politcnica, traducida al castellano por don Gregorio Gonzlez Azaola, se public por la Imprenta Real en 1808. En su artculo III recoge la sucesin e historia de los descubrimientos sobre la qumica animal, llegando a la ltima poca con las ideas siguientes:
Esta ltima poca comprehende la aplicacin ms fcil e inmediata de las anlisis a la fsica misma de los animales, los felices y no interrumpidos resultados de estas aplicaciones, y la verdadera existencia de una nueva clave, propia para explicar los ms recnditos fenmenos de esta fsica, con tal que no se cese de manejarla. Esta ltima poca debe principiar especialmente de los aos 1787 y 1788, y su duracin llega hasta la actualidad. En ella se encuentran las nuevas y apreciables anlisis de la leche y de la sangre hechas por los ciudadanos Deyeux y Parmentier, de la sinovia y del humor de los vexigatorios por Margueron, del hgado de los pescados cartilaginosos por Vauquelin, del esperma humano por el mismo qumico, de la saliva por Mr. Siebold; y el descubrimiento de un nuevo cido animal formado por la destilacin, y llamado cido zonico por el ciudadano Berthollet (...) Aunque no es este lugar de hacer ver quanto han influido todos estos trabajos y descubrimientos en los progresos de la fsica animal y del arte de curar, sin embargo, por la simple y sucinta exposicin que acabo de hacer, puede comprehenderse fcilmente quantas aplicaciones tiles han debido hacerse de sus resultados, y que ventajas ofrecen a la medicina a (...) Por desgracia el nmero de los que trabajan es muy corto respecto a las muchas indagaciones que exige esta patte de la qumica, y la infinidad de qestiones que presenta para su resolucin. Apenas la vigsima parte de todos los qumicos de Europa se ha dirigido todava hacia este objeto. Qu ser quando extendindose y vulgarizndose estas indagaciones, y precedidas del inters que deben inspirar, se vayan multiplicando; quando se establezcan hospitales destinados al intento con la actividad que pide su importancia; quando los mdicos no pierdan ocasin alguna de analizar las materias morbficas? Entonces, todas las partes hasta el da incoherentes de los nuevos descubrimientos sobre la qumica animal se reunirn y estrecharn por unas relaciones, que an no podemos mas que sospechar y ver en confuso; y entonces se levantar poco a poco el monumento, para el qual nosotros solo recogemos hasta ahora los primeros materiales (...) Estoy bien convencido de que los esfuerzos de la qumica mudarn algn da la faz de la medicina, y que producirn en ella y en todos los ramos de la fsica una revolucin feliz; pero esta poca no ha llegado an, y se encuentran todava muchos vacos para poder admitir estas novedades.

En 1862, en el vol. 4 del Traite de chimie organique de Gerhardt se puede leer:


La composicin de las materias albuminoides es muy compleja y parece ser la misma para todos, a juzgar por los anlisis realizados; al menos si se los considera desde el punto de vista de su comportamiento idntico bajo la influencia de los agentes de transformacin. No son cristalizables y dan en la combustin cantidades variables de cenizas en las que no falta el fosfato calcico. La albmina y la casena, contenidas en forma soluble en los vegetales o animales, suministran cenizas abundantes en carbonatos alcalinos. Si se considera, de otro lado, que con agua acidulada o con una solucin de sales se disuelven la fibrina y la casena coaguladas produciendo un lquido que, como la clara de huevo, se coagula por el calor y desva el plano de polarizacin de la luz... se puede concluir la existencia de un principio nico, un cido dbil que constituir la albmina, la casena o la fibrina, segn que est o no combinada con lcalis... Si se da a este principio el nombre de albmina, se podr decir que la clara de huevo y el suero, solubles y coagulables por el calor se forman de bisalbuminato de sosa; que la casena de la leche, soluble y coagulable por el calor, representa el albuminato neutro de potasa; y que la fibrina es la albmina insoluble, ms o menos mezclada con fosfatos trreos.

En el vol. 4 dedicado a la Qumica Orgnica, el Traite de chimie de Willm y Hanriot, de 1 880, se dice:
Los albuminoides estn dotados de propiedades que los hacen distintos de los dems cuerpos; no son cristalizables ni voltiles, se coagulan bien espontneamente, por la accin del calor o de ciertos reactivos; son nitrogenados y, a veces, contienen azufre y fsforo. Por el calor o por saturacin con cido actico flocula una materia albuminoidea, exenta de azufre y de fsforo, la protena, idntica cualquiera que fuese la materia albuminoidea de partida.

XIX

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As pues, la disposicin de las molculas de protenas en forma de clster cristalinos, las micelas; la naturaleza no homognea del protoplasma y la teora de Ngeli sobre su organizacin jerrquica, la teora de la catlisis de Bunsen por adsorcin de molculas sobre las superficies micelares, fueron, entre otras, hiptesis con las que se lleg a finales del siglo XIX y, en particular, al descubrimiento de Buchner, en 1897, sobre la fermentacin por extractos libres de clulas. Y el mito del protoplasma fue sustituido por tres o cuatro dcadas de lo que Florkin llam, a comienzos del siglo XX, la edad oscura de la biocoloidologa. Y, dentro de ella, sobresalen, de un lado, la hiptesis peptdica lanzada en 1902 independientemente por los qumicos orgnicos Fischer y Hofmeister, sustanciada por la sntesis de varios pptidos pequeos; y, de otro, el descubrimiento por Sumner, en 1926, de que las llamadas enzimas eran protenas. Ya a comienzos del siglo XX, en 1903, el profesor don Jos Rodrguez Carracido, en su Tratado de qumica biolgica, haca el siguiente comentario general: El conocimiento preciso de toda transformacin material exige previamente el de las especies qumicas que, reaccionando entre s, producen nuevos cuerpos a expensas de los preexistentes sin la prdida de un solo tomo en el cambio de sus agrupaciones, cambio que ha de puntualizarse en las ecuaciones qumicas... Es aplicable este criterio a las transformaciones materiales que se efectan en los seres vivos? Hoy puede contestarse afirmativamente, atribuyendo las insuficiencias que restringen el valor de la afirmacin a dificultades de tcnica y de tiempo que sucesivamente se irn venciendo con el concurso del progreso cientfico, pero no a condiciones misteriosas en absoluto inaccesibles a todo esfuerzo del entendimiento humano. Y ms adelante, en un captulo especialmente dedicado a los Albuminoides y productos de sus metamorfosis progresivas, al establecer su concepto asegura: Grandes analogas presentan las numerosas substancias incluidas en este grupo, y, sin embargo, su definicin es tan vaga, que tiene todos los caracteres de agrupacin convencional, de la que nada se puede afirmar sin advertir excepciones. Como los hidratos de carbono antes de Fischer, se estudian empricamente desconociendo la calidad y el nmero de los grupos funcionales constitutivos de sus molculas. Los albuminoides son los compuestos que forman la substancia esencial y fundamental de la organizacin, por lo que se denominan tambin materias proteicas, como por su semejanza a la albmina de la clara de huevo se llaman materias albuminoideas. Son compuestos generalmente sulfonitrogenados cuya composicin centesimal presenta considerables variaciones. Su carcter de coloides cada vez tiene menos valor para caracterizarlos, porque dista mucho de serles exclusivo y, por otra parte, parece ser accidental, como en los dems cuerpos en que se presenta, ante las proporciones en que se va revelando como posible la cristalizacin de los albuminoides. Respecto a la funcin qumica, Berthelot los considera amidas complejas, y Gautier nitrilos, tambin complejos, pero estas opiniones son por todo extremo insuficientes para definirlos (...) La extraordinaria flexibilidad de la materia constitutiva de los organismos para responder a todas las excitaciones del medio ambiente, reside, no slo en lo inestable de la molcula resultado de su enorme magnitud, sino tambin en la coexistencia de numerosos grupos funcionales, que siempre han de presentar un punto de ataque a cualquiera de las acciones fsico-qumicas que sobre ellas incidan. Como el proceso biolgico es resultante de acciones mecnicas, fsicas y qumicas, la doble escala progresiva y regresiva de los albuminoides es la sntesis de toda la Qumica. Siendo hoy indefinibles en los trminos precisos de las especies qumicas de funcin determinada, se expondrn como reveladoras de su especial fisonoma, por decirlo as, los caracteres generalmente utilizados para distinguirlos. Al describir el apartado correspondiente a la Constitucin de los albuminoides, Carracido

afirma:
Las diferencias correspondientes a las varias reacciones coloridas indican lo numerosos y variados que son los grupos moleculares integrantes de las multiformes materias proteicas, y explican las dificultades que presenta el discernir los eslabones de su enmaraada cadena, la cual, adems, es tan delicada que los reactivos qumicos, aun los de menor energa, no obran como escalpelos que disecan sus molculas, sino como hachas que las destrozan. Y acerca de su magnitud molecular dice: Para la resolucin de este problema se han ensayado los procedimientos fsicos, y principalmente el crioscpico; pero los resultados presentan tantos motivos de incertidumbre, que, no obstante su

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indeterminacin, slo se toman en cuenta las magnitudes calculadas por los datos qumicos. Lieberkhn, refiriendo a 1 tomo la proporcin centesimal de azufre y corroborando este dato con el del anlisis de un albuminato potsico, estableci el nmero 1612 como peso molecular de la albmina, representndola por la frmula C 7 2H n 2N| g O 2 2S, la cual indudablemente es muy baja, pero todava se usa en las ecuaciones bioqumicas cuando se expresan metamorfosis de la albmina, en las que, por no ser necesario, o por ignorancia del proceso, slo se simbolizan las relaciones cuantitativas que manifiestan la persistencia del peso de la materia transformada. Apartado que concluye con el comentario: De todo lo expuesto se infiere que las molculas albuminoideas son desmesuradas; pero que la determinacin precisa de sus magnitudes dista mucho de verse realizada, y, por consiguiente, que falta el primer dato para el estudio sistemtico de sus transformaciones, que es el conocimiento de las especies qumicas.

Y no deja de ser digno de mencin el comentario con que Carracido comienza el captulo titulado Formacin de los albuminoides:
A las plantas que tienen clorofila les bastan substancias minerales para su alimentacin, y con ellas fabrican todos sus principios inmediatos, incluso los complicadsimos albuminoides. Cul es el mecanismo de esta asombrosa sntesis? La observacin minuciosa de las condiciones en que la vida los elabora es la que puede dar la respuesta, pero antes de exponer los resultados obtenidos por este medio conviene anticipar para el mejor conocimiento de la ndole del problema las tentativas de la experimentacin en su afn de reproducir la obra de la Naturaleza.

Y en cuanto a estas tentativas de formacin artificial hay que subrayar la comunicacin de Lilienfeld al Congreso de Qumica aplicada, en 1898, acerca de la formacin de productos con caracteres albuminoideos por condensacin de fenol y cido aminoactico en presencia de oxicloruro de fsforo. Lo que cont con la oposicin de los qumicos como Williamson y Pickering, al sealar la presencia de las reacciones coloreadas de los albuminoides en muchos productos de condensacin a partir de tirosina, indol, biuret y otros derivados.

El confuso concepto de las protenas En la segunda edicin, de 1917, del Tratado de Qumica Orgnica aplicada a las Ciencias Mdicas, el profesor don Obdulio Fernndez recoge ya una serie de reacciones coloreadas al estilo de la reaccin de Milln, la reaccin xantoproteica y la reaccin del biuret. Pero, sobre todo, describe ya los trabajos de Haberman, Schtzenberger y Fischer, de hidrlisis de los albuminoides en distintas condiciones experimentales. De los resultados obtenidos por Fischer se deduce que los albuminoides estn formados por aminocidos, pero no sueltos, sino agrupados, constituyendo las sustancias que este investigador llama polipptidos, muy semejantes a las peptonas. Estos polipptidos pueden obtenerse sintticamente, sometiendo los esteres de los aminocidos a la accin del calor e hidratando despus el compuesto resultante para formar un dipptido... y este, convertido en cloruro de cido por el pentacloruro de fsforo se hace reaccionar de nuevo con otro aminocido... y uniendo aminocidos de esta forma se obtienen los polipptidos ms complicados. En el captulo Fermentos se puede leer:
Los fermentos son figurados (seres vivos) a amorfos (polvo extrado de plantas o de animales capaz de realizar las mismas transformaciones que el fermento figurado). Estas transformaciones se efectan por catlisis; es decir, que el fermento queda intransformado a pesar de contribuir a la aceleracin del proceso transformador. La naturaleza qumica de los fermentos amorfos es todava un problema sin resolver; hay algunos que tienen caracteres de albuminoides y otros no llegan a contener nitrgeno en su molcula; mas como producen en su desdoblamiento hidroltico una pentosa, hase credo que tienen la composicin de una pentosana. Y estas diferencias son tanto ms de advertir, cuanto que los fermentos que efectan transformaciones iguales, ofrecen mayor disparidad en su composicin qumica; tal es el caso de las oxidasas. Los fermentos albuminoideos, dicen serios investigadores, son anlogos a las peptonas, salvo el carcter de no dializar como hacen estas sustancias.

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A la vista de estos retazos que evidencian la confusa situacin de las protenas an durante el primer cuarto del siglo XX, la hiptesis peptdica de Fischer era el nico fundamento qumico sobre el que elaborar el fantstico cuerpo de doctrina de las dcadas siguientes. Durante casi un siglo, desde 1820 a 1918, con diferentes tcnicas de hidrlisis se fueron sucesivamente aislando e identificando cada uno de los aminocidos constituyentes de las protenas. El problema qued, pues, planteado acerca del modo de asociacin de los aminocidos en la estructura de las protenas, y de todas las teoras que se propusieron nicamente la teora peptdica se constituy en paradigma de todos los estudios que haban de conducir al reconocimiento de las protenas como macromolculas bien definidas. A este reconocimiento contribuyeron especialmente las ideas y mtodos de Staudinger y Svedberg en la dcada de los 30. Lo que no quita para que las ideas sobre las macromolculas de Staudinger, como profesor de Qumica de la Universidad Tcnica de Zurich primero y de Freiburg despus, fueran objeto de todo tipo de objeciones y enfrentamientos. Algunos de los consejos que recibi eran del siguiente tipo:
Por encima de un peso de 5000 no existen las molculas orgnicas, no existen molculas orgnicas con ms de 40 tomos de carbono, las molculas no pueden tener un tamao superior al de una celdilla cristalogrfica unidad,

y otras sugerencias por el estilo. Lo que, en una tormentosa reunin cientfica en Zurich, le hizo repetir las palabras de Lucero: Aqu estoy, no puedo hacer otra cosa. Y fue as como 33 aos despus de la introduccin de la dea y el trmino de macromolcula, Staudinger recibi el Premio Nobel de Qumica 1953. Los estudios sobre presin osmtica de Adair, de su comportamiento como electrolitos por Cohn, de homogeneidad en campos elctricos por Tiselius y en campos centrfugos por Svedberg, contribuyeron eficazmente a demostrar la homogeneidad o heterogeneidad de las preparaciones de protenas y a introducir el concepto de microheterogeneidad como series heterogneas de molculas semejantes aunque no idnticas.

La unificacin biolgica de las ideas Desvanecidas las doctrinas vitalistas y los conceptos pseudocientficos de la biocoloidologa que haban llenado casi un siglo de especulaciones, afirmado el concepto fsicoqumico de macromolcula y fortalecida la hiptesis qumica de la teora peptdica, faltaba un argumento profundamente biolgico en el que se engarzaran tanto los principios estructurales de la especificidad funcional de las protenas como los esquemas de biosntesis que los hicieran posibles; y, a su lado, los conceptos y los mtodos adecuados para su investigacin de los aos cuarenta, basados fundamentalmente en las tcnicas isotpicas y en los variados procedimientos cromatogrficos. Para situarnos correctamente en el tiempo de estos hechos, recordemos que en la dcada de los cincuenta, cuando comenzaba el ltimo medio siglo, Pauling, en los Proceedings ofthe National Academy of Sciences, extrapolaba a las estructuras de las protenas tanto las configuraciones helicoidales de las cadena deducidas de las distancias interatmicas, los ngulos de enlace, la coplanaridad del sistema amdico y otras propiedades de los polipptidos sintticos, como sus precursoras ideas de la estabilizacin de la estructura de las macromolculas por los enlaces de hidrgeno; y cuando, exactamente en 1952, la filigrana experimental qumico-enzimtica de los trabajos de Sanger sobre la insulina prob definitivamente la teora peptdica. Pero, todava entonces, la biosntesis del enlace peptdico se buscaba a travs de la reversibilidad de la hidrlisis enzimtica y del desplazamiento del equilibrio por variacin de las propiedades fsicas de los productos sintetizados. Y, aunque cada vez ms cercano, segua faltando el argumento biolgico unificador de ideas. Quiz, la etapa definitiva surgi del conocimiento de la estructura y funcin de los cidos nucleicos; a propsito de lo que cabe sealar que si la previa experiencia qumica y metodolgica sobre la estructura de las protenas pudo ser de cierta aplicacin al conocimiento de los cidos nucleicos, tuvieron que ser su nativa heterogeneidad de composicin, tamao y secuencia de bases, y su relacin con la biosntesis de las cadenas polipeptdicas, los conceptos moleculares, iniciales soportes de la idea biolgica de la conexin de la informacin contenida en el material gentico y la especificidad secuencial de las protenas. A la maduracin de la idea, aparte de la corta hiptesis del tetranucleotido como unidad repetitiva de la estructura de los cidos nucleicos deducida de los datos iniciales de composicin de baXXII

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ses, contribuy una coleccin de aportaciones como la sntesis orgnica de esteres fosfricos, la idea de derivados fosfricos con elevadas energas libres de hidrlisis, la activacin qumica de los grupos carboxilo y, en consecuencia, de cidos orgnicos y de aminocidos, la averiguacin de la estructura de la coenzima A y la introduccin del concepto de activacin biolgica, la extensin de las tcnicas de difraccin de rayos X, y la correlacin entre la cantidad de RNA y la velocidad de sntesis de protenas. Aportaciones desde el lado de la qumica, que se completaron con la utilizacin de tejidos, clulas y preparaciones del fraccionamiento celular para investigar el metabolismo intermediario y la incorporacin de aminocidos con las nuevas tcnicas isotpicas. Los aos cincuenta constituyen la dcada ms fructfera en la aparicin del fantstico campo independiente del conocimiento que supuso la Bioqumica. A partir de este momento, toda esta magnfica integracin de conceptos y de tcnicas sirven ya a las propias circunstancias bioqumicas, con las tendencias o soportes que siempre tendrn hacia lo biolgico o hacia lo qumico: de un lado, al descubrimiento de los diferentes RNAs, las implicaciones genticas del DNA, la correlacin DNAprotenas y el origen del cdigo gentico. Y de otro, la interpretacin de los numerosos mecanismos de isomerizacin, condensacin y transposicin; la aromatizacin, desaromatizacin y rotura de los anillos aromticos; la apertura de ciclos; las reacciones de activacin de fragmentos de 1C, 2C y 5C; la degradacin C a C de las complicadas estructuras de esteroides, porfirinas y corrinas; las reacciones de polimerizacin a melanina o caucho; y, sin duda, la sntesis qumica de oligonucleotidos, decisiva en la averiguacin del cdigo gentico.

La nueva concepcin de la Bioqumica Porque fue tambin por estos aos de la nueva concepcin bioqumica cuando, como en el caso de la estructura de las protenas, se resolvieron problemas enmaraados entre las ideas exclusivamente qumicas. Me refiero al concepto de estereoqumica modulado bioqumicamente por el mecanismo de la catlisis enzimtica y la elaboracin de la idea del complejo enzima-sustrato, que sirvieron para confirmar la presencia en el ciclo tricarboxlico del cido ctrico molcula simtrica, con plano de simetra y pticamente inactivo, desde un punto de vista exclusivamente qumico orgnico y que tantas dudas provoc, ya que un compuesto simtrico no podra ocasionar un producto de su transformacin asimtrico. Ocurri, como ahora es bien sabido, que los carboxilos en las posiciones 1 y 5, aunque qumicamente iguales, no lo eran desde el punto de vista estereoqumico en su interaccin enzimtica. De igual manera, el glicerol posee, para la qumica orgnica, dos grupos hidroxilo primarios qumicamente iguales en los carbonos 1 y 3, si bien no lo son desde el punto de vista de la estereoqumica enzimtica, y existen enzimas con ciertas especificidades para uno solo de los hidroxilos primarios. De esta manera, al esterificarse solamente uno de los grupos hidroxilo primarios del glicerol o si se esterifican ambos con cidos grasos diferentes, se destruye el plano de simetra y el tomo de carbono central adquiere quiralidad. Hecho que interpreta la gran variabilidad en la composicin posicional de los triacilgliceroles de diferentes orgenes. Finalmente, otra situacin a la que la naciente Bioqumica aport ideas originales para solucionar los tropiezos iniciales de la qumica orgnica se refiere a la interpretacin de las transformaciones qumicas de la fotosntesis, principalmente en su etapa inicial de fijacin de CO,. La obtencin inicial de los compuestos C-3 isotpicamente marcados tras la fijacin de 14CO, pareca indicar la necesidad de un precursor C-2 que los insistentes empeos de la qumica orgnica nunca lograron identificar. Tras numerosos intentos, tuvo que imponerse en la bsqueda de este mecanismo, como en los casos anteriores, una especie de liberalizacin enzimtica de las reacciones qumicas, y en lugar del C-2 encontrar un C-5, escindible en 2C-3, tal y como hoy se estudia en los libros de texto. En efecto, mucho de lo que hoy aprendemos y aceptamos, con frecuencia sin el menor resquemor crtico, ha tenido su ms o menos importante proceso histrico de esclarecimiento, esos erizamientos de la discontinuidad. Son lecciones de la historia, que si decisivas en la evolucin descriptiva del conocimiento, no dejan de serlo menos como permanentes alertas y enseanzas del espritu humano.

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