Bacteria PGPR crecida en placa de agar para preparacin de un inculo.

Preparacin de inculo de PGPR.

Colocacin de semillas de soja en agar para su germinacin.

Semillas de soja comenzando a germinar en agar.

Inoculacin de semillas de soja pregerminadas con bacteria PGPR (sumergiendo la semilla en una solucin con la bacteria PGPR).

Semillas de soja comenzando a germinar en agar.

Semillas de soja comenzando a germinar en placas agar.

Placas de agar con semillas de soja incubndose en estufa para su germinacin.

Plantas de soja en un experimento de promicin del crecimiento y efecto en el perfil de isoflavonas por PGPR en cmara de cultivo.

Efecto de una PGPR en la promocin del crecimiento y en el perfil de isoflavonas en plantas de soja (inoculadas a la izquierda y no inoculadas a la derecha).

Plantas de soja.

(1) (2a) (2b)

Extraccin de isoflavonas de soja mediante agitacin (1) en metanol (2a) o genapol X-080 (2b) de pulverizados de la parte area y radical y posterior filtrado de los mismos (2a y 2b)

10

Prueba de resistencia de varias bacterias a varios metales pesados. Los halos transparentes ponen de manifiesto. la sensibilidad de la bacteria al metal ensayado (placa de la derecha), mientras que el crecimiento normal alrededor. del pocillo que contiene el metal pesado indica la resistencia de la bacteria a ese metal (placa de la izquierda).

11

Inoculacin de races de plantas de altramuz con una bacteria PGPR para ensayo de rizorremediacin.

Inoculacin de races de plantas de maz con una bacteria PGPR para ensayo de rizorremediacin.

12

Efecto del inculo de bacterias PGPR (Aur6 y M12) en plantas de altramuz en suelo contaminado con cadmio.

13

Estudio de la estructura de la comunidad de bacterias del grupo de Betaproteobacterias de una muestra de suelo mediante electroforesis en gradiente de agentes desnaturalizantes (DGGE).

14

Dendrograma realizado con los resultados de la electroforesis de DGGE.

15

Dendrograma realizado con los resultados de la electroforesis de DGGE.

16

Anlisis de correspondencias cannicas realizado con los valores de absorbancia en placa Biolog Eco de las bacterias de una muestra de suelo.

17

1.0

t12 SQA t12 SQB t12 QRA t12 QB t12 QRB t12 QA t11 QRB

T A T B

t3 SQA

t11 S QA t11 Q B t11 SQB t1 QRA t1 QRB t1 SQ A t1 SQB t1 QB t1 QA t2 QA t13 SQA t2 S QA t13 QRA t2 QB t13 QRB t13 QA t13 SQ B t2 QRA t2 SQB t13 QB t2 QRB

t10 SQ A t10 QRB t10 QB t10 SQB

t11 QA t11 QRA t3 QRA

t10 QA t7 QRA

t9 SQA

t10 QRA

Td

t9 QRB t3 QRB t3 Q A t9 QB t9 SQB t3 S QB t9 QA t9 Q RA t3 QB t7 SQA t4 SQA t4 QRA t8 QRA t8 QA t4 QRB t8 Q B t8 SQ A t8 QRB t8 SQB t6 SQ A t4 SQB t7 S QB t7 QRB t4 QA t6 Q RB t7 QB t6 QA t6 SQ B t6 QB t5 QRA t5 QA t5 SQA t5 QRB t5 S QB t5 Q B

t7 QA t6 Q RA

Anlisis de correspondencias cannicas realizado con los valores de absorbancia en placa Biolog Eco de las bacterias de una muestra de suelo.

Eje II 26.1 %

Humedad

t4 QB

-1.0

-1.0

Eje I 65.6 %

1.0

18

Anlisis de correspondencias realizado con los valores de absorbancia en placa Biolog Eco de las bacterias de una muestra de suelo.

19

Hongos aislados de muestras de suelo y crecidos en placas de agar.

20

Hongos aislados de muestras de suelo y crecidos en placas de agar

21

Hongos aislados de muestras de suelo y crecidos en placas de agar

22

Placa Biolog ECO, para caracterizacin de comunidades bacterianas por sus perfiles metablicos.

Hongo aislado de muestras de suelo y crecido en placas de agar

23

Parcela de experimental de un estudio de efecto del fuego en la ecologa de los microorganismos edficos.

Extraccin de muestras de suelo a distintas profundidades

24

Deteccin de produccin de AHLs por una bacteria mediante una cepa bacteriana sensor.

Plantas de Arabidopsis thaliana crecidas en pocillos con agar que contiene LPS bacterianos.

25

Rizosfera de planta de maz

26

Tres lneas de callos de soja

27

Plantas de soja en un experimento de promocin del crecimiento, efecto en el perfil de isoflavonas y produccin de etileno por PGPR en cmara de cultivo.

28

Sistema para ver el crecimiento de races de plantas de soja.

29

Plantas de soja en un experimento de promocin del crecimiento, efecto en el perfil de isoflavonas y produccin de etileno por PGPR en cmara de cultivo.

30

Callos de soja en cultivo lquido agitndose en cmara de cultivo

31

PGPR Aur 9 observada con fluorescencia con Syto 9.

32

Arabidopsis thaliana con el gen gus tras el promotor del gen de las auxinas tratadas con distintas PGPR.

Control M70

M70

L62

33

Control

L62

M70

Arabidopsis thaliana con el gen gus tras el promotor del gen de las auxinas tratadas con distintas PGPR.

34

Cepa sensor inactiva = rojo Cepa sensor activa = rojo+ verde (= amarilla) Cepa productora = rojo + azul (= rosa) Burkholderia graminis Micrografa de CLSM en la que se aprecia la fluorescencia a tres longitudes de onda distintas de un pelo radical de Arabidopsis thaliana, colonizado por la bacteria productora de AHLs Burkholderia graminis y una bacteria sensor

35

Micrografa de CLSM en la que se aprecia la fluorescencia a tres longitudes de onda distintas de un pelo radical de Arabidopsis thaliana, colonizado por la bacteria productora de AHLs Burkholderia graminis y una bacteria sensor

36

Micrografa de CLSM en la que se aprecia la fluorescencia a tres longitudes de onda distintas de un pelo radical de Arabidopsis thaliana, colonizado por la bacteria productora de AHLs Burkholderia graminis y una bacteria sensor

37

Micrografa de CLSM en la que se aprecia la fluorescencia a tres longitudes de onda distintas de un pelo radical de Arabidopsis thaliana, colonizado por la bacteria productora de AHLs Burkholderia graminis y una bacteria sensor

38

Micrografa de CLSM en la que se aprecia la fluorescencia a tres longitudes de onda distintas de un pelo radical de Arabidopsis thaliana, colonizado por la bacteria productora de AHLs Burkholderia graminis y una bacteria sensor

39

Cepa sensor inactiva = rojo Cepa sensor activa = rojo+ verde (= amarilla) Cepa productora = rojo + azul (= rosa) Burkholderia graminis Micrografa de CLSM en la que se aprecia la fluorescencia a tres longitudes de onda distintas de un pelo radical de Arabidopsis thaliana, colonizado por la bacteria productora de AHLs Burkholderia graminis y una bacteria sensor

40

Control Sin Tratamiento

AUR9

I26

M84

L62

L81

DC3000 (patgeno)

SAL (60mM)
Experimento de proteccin de plantas de Arabidopsis thaliana varias bacterias PGPR frente a patgeno y salinidad por

41

Tratamiento experimental de pinos en el invernadero mediante PGPR para su posterior transplante en repoblacin.

42

Fotografa tomada a travs de la lupa de races de Pinus pinea asociadas con un hongo ectomicorrcico formador de manto naranja.

43

Fotografa tomada a travs de la lupa de races de Pinus pinea asociadas con un hongo ectomicorrcico formador de manto naranja.

44

Fotografa tomada a travs de la lupa de races de Pinus pinea asociadas con un hongo ectomicorrcico formador de manto naranja.

45

Fotografa tomada a travs de la lupa de races de Pinus pinea asociadas con un hongo ectomicorrcico formador de manto naranja.

46

Fotografa tomada a travs de la lupa de races de Pinus pinea asociadas con un hongo ectomicorrcico formador de manto naranja.

47

Deteccin de produccin de AHLs por una planta de tabaco modificada genticamente mediante una cepa bacterinana sensor.

48

Determinacin de la produccin de distintos tipos de AHLs producidas por bacteria PGPR mediante TLC, revelado mediante bacteria biosensor y deteccin mediante luminometria.

49

Cepa sensor inactiva = rojo Pseudomonas putida Cepa sensor activa = rojo+ verde (= amarilla) Pseudomonas putida Cepa productora = rojo + azul (= rosa) Burkholderia graminis Micrografa de CLSM en la que se aprecia la fluorescencia a tres longitudes de onda distintas de un pelo radical de Arabidopsis thaliana, colonizado por la bacteria productora de AHLs Burkholderia graminis y la bacteria sensora Pseudomonas putida.

50

Plantas de tabaco modificadas genticamente para la produccin de las molculas bacterianas AHLs en experimento en cmara de cultivo.

51

Plantas de tabaco modificadas genticamente para la produccin de las molculas bacterianas AHLs en experimento en cmara de cultivo.

52

Plantas de tabaco modificadas genticamente para la produccin de las molculas bacterianas AHLs en experimento en cmara de cultivo.

53

Experimento de patognesis en plantas de Arabidopsis thaliana crecidas en placas con pocillos con arena de ro.

54

Invernadero de la Facultad de Farmacia de la Universidad CEU San Pablo

55

Invernadero de la Facultad de Farmacia de la Universidad CEU San Pablo

56

Bacteria PGPR hibridada con una sonda de ADN fluorescente y observada mediante microscopa de fluorescencia

57

Bacteria PGPR hibridada con una sonda de ADN fluorescente y observada mediante microscopa de fluorescencia

58

Bacteria PGPR hibridada con una sonda de ADN fluorescente y observada mediante microscopa de fluorescencia

59

Races de Pinus pinea asociadas con un hongo ectomicorrcico.

60

P. pinaster Zonas A y B

Lactarius deliciosus Micosfera Rizosfera

P. pinea Zonas C y D

3 rplicas 2g de suelo (rizosfera y micosfera)

2 mL H2O

Homogeneizado Diluciones seriadas 100 L

10-110-210-310-410-510-610-710-810-9

720 cepas

Plaqueo (500 L)

Aislamiento y clasificacin de las colonias

Bacillus Corineformes

Bacilos Gram -

Cocos Bacterias Gram + filamentosas

Esquema del aislamiento de PGPR de la rizosfera de una planta forestal.

61

Gel de agarosa correspondiente al anlisis gentico de diversas cepas PGPR mediante PCR-RAPDs

62

G36

Arbol de homologa gentica entre distintas cepas PGPR con diversas actividades bioqumicas.

Fosfato Auxinas Siderforos ACC Corineformes rizosferas: G y H P.pinaster K y L P.pinea. 63

35 30 25 20 15 10 5 0 1

ndice de diversidad en las Rizosferas 0.5818 decibits

Abundancias grupos parataxonmicos en las Rizosferas

Estudio de diversidad estructural (aplicando el ndice de Shannon-Weaber) en la rizsofera de Pinus pinea y en la micosfera del hongo micorrizgeno asociado Lactarius deliciosus.

18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 1 2

ndice de diversidad en las Micosferas 0.8627 decibits

10

Abundancias grupos parataxonmicos en las micosferas 64

1.0

i14

Me16

16:1w7c br17.0 17.1w8

C T15 18.2w6 I26

i16:0 a15

i16:1 20.0

cy17 16:1w9 20.5 M12 i15 i17

M14 Me18 L62

19.1b 20.4 Me17 a17

T40M29 L81
18.1

cy19 16:1w7t br16.0 18:1w9

i17.1w8c

M70 T30
14.0 15.0

I17
18.0 16.0
-0.4

br18.0

20.3

17.0 16:1w5 19.1a 18:1w7

N79 M84

T0
0.8

-0.6

Factores de carga del anlisis de correspondencias para los cidos grasos de las comunidades bacterianas de la rizosfera de pino.

65

Fotografa tomada a travs de la lupa de races de Pinus pinea asociadas con un hongo ectomicorrcico formador de manto naranja.

66

Saccharomyces AY529200 Azul

I26

EctomycoUEC410867 CortinariusAF389149 AlnicolaAY303582 ectomycorrhizalAY310842 HebelomaAY312979 RUSSUL02AY656942 Control Naranja

Estudio de la diversidad micorrcica asociada a races de pino mediante separacin por DGGE de los ADNr 18s de los hongos.

M70 L62

Partial 18S + GC clamp

Coprinus AY145856 oatrootbasidioBSP246161 Amarillo

UnculturedEctomycorrhiza AY351 UncultectoAJ633598 EurotiumAF455536 AspergillusAY373884 PenicilliumAY373930 PezizaAY818334 UncumycorrTREFEZI1 UnculectoAJ879640 UnculectoAF440666 TirmaniaAF276669 Terfezia AF396863 0.1

DGGE

Arbol filogentico de las regiones ITS de los hongos micorrizgenos asociados a Pinus pinea

C I26 L62 M70 M70

67

Plntulas de pino tratadas con PGPR

68

Sample: Burkholderia sp.

pSB401
C6-C8-HSLs

pSB536
C4 HSLs

pSB1075
C10_C14 HSLs

4h
M12 M14 A

C4 OC6 OC10 OC8 OC12 OC14

O H M12 M14 A O H M12 M14 A O

pSB401
C6-C8-HSLs

pSB536
C4 HSLs

pSB1075
C10_C14 HSLs

24h
M12 M14

OC6 C6OC8 C8
A O H

?HC6

C4 C6 C8
M12 M14 A O H

HC6

OC10 OC12 OC14

M12 M14 A O

A = C-HSL O = OC-HSL H = HC-HSL Determinacin de la produccin de distintos tipos de AHLs producidas por bacteria PGPR mediante TLC, revelado mediante bacteria biosensor y deteccin mediante luminometria

69

Patrn de ruptura en espectrometra de masas de la AHL 3OHC12-HSL producida por una cepa PGPR.

+EPI (300.24) Charge (+0) CE (25) CES (5) FT (112.775): Exp 3, 5.460 to 5.488 min from Sample 1 (M12) of Alex M12.wiff (Turbo Spr a... 1.28e5 1.25e5 1.20e5 1.15e5 1.10e5 1.05e5 1.00e5 9.50e4 9.00e4 8.50e4 8.00e4 7.50e4 7.00e4 6.50e4 6.00e4 5.50e4 5.00e4 4.50e4 4.00e4 3.50e4 3.00e4 2.50e4 2.00e4 1.50e4 1.00e4 5000.00 80 91.1 95.0 100 107.2 109.0 115.2 120 135.1 140 149.2 181.3 166.2 170.4 160 180 198.4 212.2 200 224.0 240 220 m/z , amu 236.4 258.2 265.3 260 272.0 280 305.0 300 320 264.3 184.4 300.3 121.2 163.2 254.4 282.4 102.1

Max. 1.3e5 cps.

340

70

Micrografa de CLSM en la que se aprecia la fluorescencia a tres longitudes de onda distintas de un pelo radical de Arabidopsis thaliana, colonizado por la bacteria productora de AHLs Burkholderia graminis y una bacteria sensor

71

Micrografa de CLSM en la que se aprecia la fluorescencia a tres longitudes de onda distintas de un pelo radical de Arabidopsis thaliana, colonizado por la bacteria productora de AHLs Burkholderia graminis y una bacteria sensor

72

Micrografa de CLSM en la que se aprecia la fluorescencia a tres longitudes de onda distintas de un pelo radical de Arabidopsis thaliana, colonizado por la bacteria productora de AHLs Burkholderia graminis y una bacteria sensor

73

Cepa sensor inactiva = rojo

Cepa sensor activa = rojo+ verde (= amarilla)

Cepa productora = rojo + azul (= rosa) Cepa sensor inactiva = rojo Pseudomonas putida Cepa sensor activa = rojo+ verde (= amarilla) Pseudomonas putida Cepa productora = rojo + azul (= rosa) Burkholderia graminis Micrografa de CLSM en la que se aprecia la fluorescencia a tres longitudes de onda distintas de un pelo radical de Arabidopsis thaliana, colonizado por la bacteria productora de AHLs Burkholderia graminis y la bacteria sensor Pseudomonas putida.

74

Trece micrografas de CLSM en las que se aprecia la fluorescencia a tres longitudes de onda distintas de un pelo radical de Arabidopsis thaliana, colonizado por la bacteria productora de AHLs Burkholderia graminis y la bacteria sensor Pseudomonas putida tomadas cada micrometro.

75

Planta de tabaco trasngnica en cultivo in vitro diferenciada a partir de callo.

76

Hoja de tabaco transformada diferencindos e hacia callo.

77

Produccin de semillas de Arabidopsis thaliana

78

Secuencia de aminocidos de una lactonasa bacteriana

Cromatograma de secuenciacion de ADN.

79

Secuencia de aminocidos de una lactonasa bacteriana (detalle)

Produccin de semillas de Arabidopsis thaliana

80

Callo diferenciado de Hipericum perforatum crecido en cultivo lquido y elicitado por LPS extraidos de PGPR

81

Separacin mediante HPLC de disitntas isoflavonas de un extracto de soja

82

Hipricum perfaoratum tallos cultivo in vitro en medio lquido.

83

Explantes de Crataegus levigina

84

Callos diferenciados de Hiprico perfaoratum en cultivo in vitro.

85

Callos diferenciados de Hipericum perfaoratum en cultivo in vitro.

86

Hiprico perfaoratum cultivo in vitro de dos lneas de bajo y alto contenido en principios activos.

87

Explantes de Hypericum perforatum.

88

Lo ms bonito del laboratorio. XI Congreso de la SEFIN. El Escorial, Junio 2006

89

Explantes de Hiprico perfaoratum cultivo in vitro en medio sido.

90

Hipricum perfaoratum tallos cultivo in vitro en medio lquido elicitado por LPS extraidos de PGPR.

91

Hipricum perfaoratum tallos cultivo in vitro en medio lquido elicitado por LPS extraidos de PGPR.

92