TRABAJO PRCTICO DE LABORATORIO N 2 Tcnicas microbiolgicas bsicas

Objetivos
Adquirir experiencia en el manejo de los materiales y tcnicas bsicas que se utilizaran a lo largo del curso de trabajos prcticos. Reforzar los conocimientos previos sobre el trabajo de laboratorio en condiciones de esterilidad. Coordinar la operativa de trabajo en el laboratorio y las normas de seguridad

Preparacin de cultivo
En esta parte, se realizaron los medios de cultivo en los cuales se desarrollarn los microorganismos en los que se realizar la siembra en el prctico siguiente. Se prepara agar nutritivo, este medio permite cultivar cualquier organismo en general. En este caso se prepararon 250 mL, disolviendo 5 g del agar nutritivo en dicho volumen de agua desmineralizada, calentando en un bao de agua hirviendo o en una corriente de vapor y autoclave (15 min a 121C) para la esterilizacin. Despus se vierte en partes iguales, en 3 erlenmeyer, se pone el tapn y se lleva a la heladera para luego ser utilizado. Preparacin de Czapek Dox Agar: este medio permite cultivar slo hongos (lo utilizamos para hacer repiques de Aspergillus Nger). El pH de trabajo est entre 7,3 0,1. En este caso la preparacin parte de 12 g de Czapek en 250 mL de agua desmineralizada, calentando en un bao de agua hirviendo o en una corriente de vapor y autoclave (15 min a 121C) para la esterilizacin. Despus se vierte en partes iguales, en 3 erlenmeyer, se pone el tapn y se lleva a la heladera para luego ser utilizado. Preparacin de caldo nutritivo: Se prepararon 200 mL de solucin acuosa a partir de la frmula; como la concentracin utilizada es de 8 g/L, utilizamos 2,0 g. El caldo obtenido se distribuye en partes iguales en tubos de ensayo.

Siembra
Asegurando la completa esterilidad del rea del trabajo, prendemos el mechero de Bunsen, y trabajamos en una zona cercana a la llama. Habiendo colocado previamente los medios de cultivo en las cpsulas de Petri, se procede a sembrar sobre los mismos. La toma de muestra se realiz en diferentes lugares para identificar qu tipo de organismos existen. Para ello, a las ansas se las esteriliza llevndolas al rojo vivo, y despus dejndolas enfriar lentamente y se colocan en un tubo de ensayo, con agua destilada y un tapn para asegurar la esterilidad. La toma de muestra debe realizarse rpidamente frotando sobre el lugar seleccionado. Los tiempos deben ser lo menor posibles para asegurar la esterilidad.

Las muestras fueron tomadas de: escaleras, botn de ascensor, Aspergillus Nger, picaporte, aliento humano, muestra de virus, etc. Luego el ansa se coloca rpidamente en el agua destilada para formar la solucin con la que se realizar la siembra en el laboratorio. Realizamos siembra por estras, siembra en masa con pipeta, con especial cuidado de frotar suavemente para no romper la superficie del medio de cultivo.

Medio lquido

Agar inclinado pico de flauta

Puncin

En placa por estras

En masa

En masa por dilucin

En placa
Por estras Al aadir una sustancia slida a un medio lquido que contiene clulas bacterianas, se inmoviliza cada clula en el lugar que se encuentra, en lugar de flotar de un lado a otro como sucede en un medio lquido, cada una origina una colonia de clulas fijas que crece hasta formar una masa viable. Si las clulas primitivas son atrapadas distantes entre s, cada clula viable o grupo de clulas origina una colonia separada o diferenciada. Se prepara una placa de Petri con medio, cuidando de no contaminar.

Se lo deja solidificar y posteriormente se lo lleva a estufa a 37 C donde se colocan invertidas tanto la tapa como la placa para evaporar el agua de condensacin. Se siembra con un ansa esterilizada con movimientos segn las siguientes figuras.

En masa Se utilizan para recuentos de microorganismos en anlisis de agua de consumo y alimentos. Consiste en mezclar un volumen conocido de la suspensin microbiana con el medio de cultivo agar lquido a 45C. Las colonias se desarrollan en toda la masa del medio y en la superficie.

Por dilucin Cuando las muestras poseen una carga microbiana es necesario realizar diluciones para hacer un recuento correcto de microorganismos. Utilizamos diluciones 1/10, 1/100 y 1/1000, segn muestra la figura de la pgina 3. Luego se siembra de la misma manera que la siembra en masa.