Experimento de Meselson y Stahl sobre la sntesis de DNA en procariotas

Meselson y Stahl (1958) demostraron que el DNA de E. coli se replica de forma semiconservativa, tal como haban propuesto Watson y Crick (1953) al elaborar el modelo molecular del DNA y tal como poda deducirse de los experimentos realizados previamente por Taylor (1957) sobre la sntesis de DNA en eucariotas. El experimento de Meselson y Stahl est basado en la variacin de la densidad de flotacin del DNA derivada de la utilizacin del istopo pesado del nitrgeno (N15) y el anlisis de dicha variacin mediante la tcnica de ultracentrifugacin en gradiente de Cloruro de Cesio.
Cultivo de E. coli El DNA de las clulas de este cultivo contiene el istopo pesado del nitrgeno, N15 Incubacin durante varias generaciones en un medio que contiene precursores del DNA con N15 El DNA de las clulas de este cultivo contiene el istopo normal del nitrgeno, N14
Aislamiento de DNA y ultracentrifugacin en gradiente de densidad de ClCs

Absorbancia (260 nm)

DNA N14

Aislamiento de DNA y ultracentrifugacin en gradiente de densidad de ClCs

n de la fraccin del tubo de la ultracentrfuga

+
Absorbancia (260 nm)

densidad de flotacin

DNA N15

n de la fraccin del tubo de la ultracentrfuga

La hiptesis semiconservativa sobre la sntesis de DNA propuesta por Watson y Crick supone que las dos cadenas del DNA se separan y cada una de ellas sirve de molde para que se sintetice la hebra complementaria. El resultado de la sntesis sern dos molculas que tendrn una cadena original y otra de nueva sntesis.

Experimento
Cultivo bacteriano con DNA N15
Aislamiento de DNA (fragmentado) y ultracentrifugaci n en gradiente de densidad de ClCs

Resultados

Interpretacin

Absorbancia (260 nm)

DNA N15

incubacin en medio normal (N 14)

n de la fraccin del tubo de la ultracentrfuga

Las dos cadenas del DNA de las clulas al iniciar el experimento contienen N15 (DNA N15 ). En el esquema de la derecha las cadenas de DNA con N15 se representan en color rojo.

Absorbancia (260 nm)

El DNA en la generacin G1 tiene una densidad intermedia entre la del DNA N15 y la del DNA N14

Primera generacin (G1)

Transcurrido el tiempo correspondiente a una generacin (G1), se aisla el DNA (fragmentado) y se ultracentrifuga en gradiente de densidad de ClCs

n de la fraccin del tubo de la ultracentrfuga

Si el DNA se replica de forma semiconservativa, en las c o nd ic i o ne s de e st e experimento, se espera que el DNA de la primera generacin tenga una cadena original con N15 (pesada) y otra de nueva sntesis con N14 (ligera; en el esquema se representa en color azul). La densidad intermedia del DNA observada en el experimento se ajusta a esta prediccin.

En la generacin G2 la mitad del DNA tiene una densidad intermedia entre la del DNA N15 y la del DNA N14, la otra mitad tiene una densidad igual a la del DNA N14,
Absorbancia (260 nm)

Segunda generacin (G2)

Transcurrido el tiempo correspondiente a dos generaciones (G2), se aisla el DNA (fragmentado) y se ultracentrifuga en gradiente de densidad de ClCs

n de la fraccin del tubo de la ultracentrfuga

Bajo la hiptesi s semiconservativa, se espera que haya dos tipos de DNA en la segunda generacin: la mitad tendr las dos cadenas ligeras (N14) y la otra mitad una cadena pesada (N15 ) y otra ligera (N14). Los resultados obtenidos en el experimento se ajustan a esta prediccin.

En la generacin G3 la cuarta parte del DNA tiene una densidad intermedia entre la del DNA N15 y la del DNA N14, el resto (tres cuartas partes) tiene una densidad igual a la del DNA N14,
Absorbancia (260 nm)

DNA G3

Tercera generacin (G3)

Transcurrido el tiempo correspondiente a tres generaciones (G3), se aisla el DNA (fragmentado) y se ultracentrifuga en gradiente de densidad de ClCs

n de la fraccin del tubo de la ultracentrfuga

Bajo la hiptesi s semiconservativa, se espera que haya dos tipos de DNA en la tercera generacin: tres de cada cuatro molculas de DNA tendrn las dos cadenas ligeras (N14) una de cada cuatro molculas de DNA tendr una cadena pesada (N15) y otra ligera (N 14 ). Los resultados obtenidos en el experimento se ajustan a esta prediccin.
Ramn Girldez