UNIVERSIDAD TECNICA DE AMBATO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE LABORATORIO CLNICO INFORME N4 DE HEMATOLOGA BSICA 1.

DATOS INFORMATIVOS INTEGRANTES: * Calvache Marcelo * Miranda Erika CURSO: Tercer Semestre PARALELO: A PROFESOR: Dr. Rebeca Mazn FECHA: 04 de Junio del 2013 2. TEMA: EXTENSIN SANGUINEA PARA LA FRMULA LEUCOCITARIA Y CONTAJE DE GLBULOS BLANCOS 3. OBJETIVOS GENERAL: Conocer el procedimiento para realizar una extensin sangunea para la formula leucocitaria y contaje. ESPECFICOS: Realizar una extensin sangunea apropiada. Aplicar el procedimiento a seguir para realizar el contaje de glbulos blancos. Identificar el nmero de glbulos blancos en la cmara de Neubauer. 4) MARCO TERICO

EXTENSIN SANGUNEA La extensin sangunea es de gran importancia en algunas enfermedades hematolgicas, ya que su diagnstico puede realizarse o sospecharse slo con observar la morfologa de las clulas de la sangre. Uno de los mtodos ms empleados para la realizacin del frotis sanguneo es el mtodo de los dos portaobjetos. Consiste en la extensin de una gota de sangre sobre un portaobjetos mediante otro portaobjetos. La tcnica es la siguiente: Depositar una pequea gota de sangre en el extremo de un portaobjetos. Con el borde de otro portaobjetos a 45 grados, tocar la gota, esperar a que la sangre se distribuya por capilaridad y despus deslizar suavemente un portaobjetos sobre el otro en sentido longitudinal hasta que la gota quede bien extendida sobre la superficie del primer portaobjetos. Dejar secar el frotis. Cuando la extensin se realiza por este procedimiento, el frotis presenta tres zonas diferenciadas, en las que la morfologa eritrocitaria puede variar y la distribucin de leucocitos puede ser diferente. La zona en que inicialmente se deposit la gota (cabeza) es excesivamente gruesa y no puede ser valorada adecuadamente. A continuacin se extiende el cuerpo de la extensin, que corresponde a la regin intermedia del frotis y en ella existe un reparto equilibrado de las clulas; es la zona ideal para la observacin microscpica. Por ltimo, al final de la extensin, se encuentran las la cola, es una zona fina dnde las clulas adoptan una disposicin de cordones.

Partes de un frotis sanguneo Cabeza: Es la parte donde se coloc la gota de sangre, tiene gran concentracin de los eritrocitos

 Cuerpo: Parte media de un frotis, esta parte se emplea para la evaluacin microscpica Cola: Zona final del frotis, esta zona se encuentra diluida, la morfologa de las clulas se ve alterada. Hay gran concentracin de plaquetas. Fijacin de la muestra La fijacin de la muestra se realiza agregando unas gotas de alcohol metlico y dejando secar. Otros mtodos que se pueden emplear para realizar la extensin son el de los dos cubreobjetos o mediante dispositivos automatizados. RECUENTO DE GLBULOS BLANCOS Para el conteo de leucocitos, se usan mtodos sistemticos que son ms rpidos y precisos, y los mtodos manuales. Todo mtodo manual de recuento celular incluye 3 fases: Dilucin de la sangre Muestreo de la sangre diluida en un volumen Recuento de clulas en ese volumen Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que corresponden a los campos 1, 3,7 y 9.

Para su dilucin, se hace lo mismo que para los hemates pero empleando la pipeta de blancos, de modo que la solucin que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como diluyente el lquido de Turk. Este lquido es hipotnico de modo que se destruyen los hemates y as no entorpecen en el recuento. El lquido de Turk consta de cido actico glaciar 2ml, violeta de genciana disolucin de 1% 1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deber filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos.

En un principio es un poco difcil distinguir los leucocitos de los restos de membranas de los hemates hemolizados. Se debe tener en cuenta que los leucocitos son ms refringentes (ms brillantes) al moverlo con el microscopio que los restos de hemates. Se debe observar la presencia de la membrana citoplasmtica y de la membrana nuclear (a veces ms) como lneas finas y brillantes. Esto se observa fcilmente moviendo el microscopio hacia delante y hacia atrs. Se debe tener en cuenta que el conteo tambin incluye a los leucocitos que estn en el borde de los cuadrantes, y no contar los cuatro bordes. SOLO DOS. Valores referenciales GRUPO DE LEUCOCITOS NEUTROFILOS LINFOCITOS MONOCITOS EOSINOFILOS BASOFILOS Valor % 55 70 20 40 28 14 0-1 Valor absoluto 2500 8000 /mm3 1000- 4000 /mm3 100 700 /mm3 50 500 /mm3 25 100 /mm3

Los medicamentos que pueden incrementar los conteos de Glbulos Blancos sanguneos son: Epinefrina, Alopurinol, Aspirina Cloroformo Heparina Quinina Corticoesteroides Triamtereno.

Los medicamentos que pueden disminuir los conteos de leucocitos sanguneos son: Antibiticos Anti convulsionantes Antihistamnicos, Drogas anti tiroideas Arsenicales, Barbitricos Agentes quimioteraputicos

 Diurticos Sulfonamidas. Fuentes de error Observacin de leucocitos en los extremos de la placa. Realizar el recuento diferencial con un objetivo que no sea el lente de inmersin. Hacer la frmula diferencial en base de menos de clulas blancas. 5) PROCEDIMIENTO EXTENSIN SANGUNEA Colocar la gota de sangre sobrante de la jeringuilla en el portaobjetos.

Con otro portaobjetos hacer un ngulo de 45 y extender la gota de sangre por toda la superficie de la placa y dejarla secar.

CONTAJE LEUCOCITARIO Adaptar el extremo de la pipeta para blancos a un tubo de goma con boquilla, cargar la pipeta de blancos hasta 0.5 con sangre, para una dilucin de 1:20.

 Limpiar la punta de la pipeta con una gasa o papel absorbente.

Cargar la pipeta hasta 11 con el reactivo de Turk. Tapar con los dedos sus dos extremos y agitar a la pipeta durante 3 minutos.

Dejar caer las 3 primeras gotas de la pipeta, la cuarta colocarla en la cmara de Neubauer.

Colocamos la cmara en el microscopio y enfocamos comenzando con el lente de menor aumento, luego enfocar con el objetivo de 10X los cuadrantes 1, 3, 7 y9. La suma de todos los cuadrantes se debe multiplicar por 50.

6) MATERIALES Y REACTIVOS EXTENSIN SANGUNEA Muestra de sangre. Dos portaobjetos. CONTAJE LEUCOCITARIO Muestra de sangre. Pipetas para glbulos blancos. Tubo de goma con boquilla. Cmara de Neubauer. Reactivo de Turk.

7) RESULTADOS PACIENTE: Erika Raquel Miranda Buenao EDAD: 18 SEXO: Femenino. Cuadrante superior derecho: Cuadrante superior izquierdo: Cuadrante inferior derecho: Cuadrante inferior izquierdo: 20 23 18 23 84 * 50 = 4200 leu/mm3

CONTAJE TOTAL DE LEUCOCITOS:

PACIENTE: Marcelo Segundo Calvache Moreno EDAD: 19 SEXO: Masculino Cuadrante superior derecho: Cuadrante superior izquierdo: Cuadrante inferior derecho: Cuadrante inferior izquierdo: 26 26 29 35 116 * 50 = 5800 leu/mm3

CONTAJE TOTAL DE LEUCOCITOS:

8) CONCLUSIONES Se conoci el procedimiento para realizar una extensin sangunea para la formula leucocitaria y contaje de los mismos ya que al aprender de la forma manual es decir con la pipeta de glbulos blancos se adquiere mas destreza para un mejor anlisis de los elementos figurados encargados de la inmunidad. Se realizo una extensin sangunea apropiada, debido a que en prcticas anteriores ya se haba realizado extensiones para adquirir experticia en la misma, ya que si no se conoce el procedimiento no se puede realizar anlisis de laboratorio mas avanzados. Se aplic el procedimiento a seguir para realizar el contaje de glbulos blancos. Ya que como se nombro anteriormente la forma manual es la mas confiables debido que existe menos margen de error. Se identifico el nmero de glbulos blancos en la cmara de Neubauer. Ya que gracias a la ayuda del microscopio se realizo el recuento de uno por uno para conocer el estado cuantitativo de los Leucocitos. 9) RECOMENDACIONES Al extraer la muestra de sangre con la pipeta de leucocitos tratar de recordar el limpiar la pipeta con papel absorbente para evitar la contaminacin de todo el reactivo. Al extraer el reactivo mantener la serenidad para no expulsar nuevamente el reactivo mezclado con sangre y contaminar todo el recipiente del reactivo. Al estar contando en la cmara de Neubauer recordar que solo se deben contar dos bordes del cada cuadrante. Igualmente al estar contando tener en cuenta que solo se debenm contar los leucocitos que estn en el borde limitante y no los que estn mas afuera.

10) BIBLIOGRAFIA

MULLINS,Carole.; Manual de Tcnicas de Laboratorio Pginas 360-365

Martnez Fragoso, Vicente. Manual de Biometra Hemtica.CBTis199, Mxico,

2012. Pp. 22-24.

Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos, articulo web

consultado el da 12 de junio del 2013 en: http://html.rincondelvago.com/fundamentos-y-tecnicas-de-analisishematologicos-y-citologicos.html

UNIVERSIDAD TECNICA DE AMBATO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE LABORATORIO CLNICO INFORME N4 DE HEMATOLOGA BSICA 4. DATOS INFORMATIVOS INTEGRANTES: * Calvache Marcelo * Miranda Erika CURSO: Tercer Semestre PARALELO: A PROFESOR: Dr. Rebeca Mazn FECHA: 04 de Junio del 2013 5. TEMA: RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS 6. OBJETIVOS GENERAL: Ejecutar el procedimiento para el contaje de glbulos rojos. ESPECFICOS: Realizar la correcta dilucin para el recuento de glbulos rojos. Mezclar y realizar el correcto llenado de la cmara de Neubauer. Determinar el contaje de glbulos rojos en la cmara de Neubauer.

4) MARCO TERICO GLOBULOS ROJOS

La sangre se diluye en un lquido que nos permite observar claramente los hemates, luego esta dilucin se coloca en una cmara de Neubauer con la ayuda de una pipeta automtica y se cuentan en el microscopio a un objetivo de 40X para calcular el nmero de glbulos rojos por mm3. Los glbulos rojos son las clulas sanguneas que contienen en su interior la hemoglobina. Los glbulos rojos son los principales portadores de oxgeno a las clulas y tejidos del cuerpo. Tienen una forma bicncava para adaptarse a una mayor superficie de intercambio de oxigeno por dixido de carbono en los tejidos. Adems su membrana es flexible lo que permite a los glbulos rojos atravesar los mas estrechos capilares. La hemoglobina es una protena que contiene hierro lo que le da el color rojo a la sangre, por ello el nombre de glbulos rojos o Eritrocitos: eritro (rojo) + citos (clulas.) FUNCIONES DE LOS GLOBULOS ROJOS El oxigeno que es necesario para producir energa en los diferentes tejidos entra en el cuerpo humano a travs de los pulmones. Atraviesa las membranas de los alveolos pulmonares y es captado por los glbulos rojos unido a la hemoglobina. Luego es transportado por el sistema circulatorio a los tejidos. El oxigeno se difunde a travs de la pared de los capilares para llegar a las clulas. Al mismo tiempo, el CO2 que producen las clulas es recogido por la hemoglobina de los glbulos rojos y es transportado a los pulmones, donde es expulsado. PARA QUE SE HACE ESTE EXAMEN Es un examen de sangre que determina el nmero de glbulos rojos que una persona tiene en el cuerpo. Los glbulos rojos contienen hemoglobina, que transporta oxigeno. La cantidad de oxigeno que los tejidos corporales reciben depende de cuantos glbulos rojos tenga usted y de que tan bien funcionen. El recuento de hemates, la medicin de hemoglobina y el volumen de hemates, proporciona la informacin acerca de los glbulos rojos, que transportan el oxigeno desde los pulmones hacia el resto del organismo. Estos niveles suelen medirse para detectar anemia, una afeccin comn que se presenta cuando el organismo no tiene suficientes glbulos rojos. PORQUE SE REALIZA EL EXAMEN

El conteo de hemates casi siempre forma parte de un CSC (conteo sanguneo completo). Este examen puede ayudar a diagnosticar anemia y otros problemas de salud que afectan los glbulos rojos. Afecciones adicionales bajo las cuales se puede realizar el examen: Sndrome de Alport Anemia hemolitica inmunitaria inducida por medicamentos. Anemia hemoltica debido a la deficiencia de G6PD (glucosa-6-fosfato deshidrogenasa) Anemias hereditarias, como la talasemia Anemia hemoltica auto inmunitaria idioptica Anemia hemoltica inmunitaria Macroglobulinemia de Waldenstrom Hemoglobinuria paroxstica nocturna Mielofibrosis primaria. Fuentes de error Desintegracin de los eritrocitos cuando se deja la muestra mucho tiempo sin procesar. Pipetas mal calibradas Presencia de levaduras o suciedad en el liquido de dilucin Calculo errneo de las clulas contadas Uso de la cmara y laminilla sucios y hmedos Usar laminillas corrientes Puntas defectuosas Cmaras de mala calidad. VALORES NORMALES DE GLOBULOS ROJOS EN SANGRE Recien nacido 4 5 millones / mm3 A los 3 meses 3.2 4.8 millones / mm3 Al ao de edad 3.6 5 millones / mm3 Entre los 3 y 5 aos 4 5.3 millones / mm3 De los 5 a los 15 aos 4.2 5.2 millones / mm3 Hombre adulto 4.5 5 millones / mm3 Mujer adulto 4.2 5.2 millones / mm3 5) MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS Pipetas de glbulos rojos Papel absorbente

Cmara de Neubauer Cubrehematimetro Muestra de sangre con EDTA Reactivo de Hayem Manguerilla de goma con boquilla Microscopio 6) PROCEDIMIENTO Llenar la pipeta de glbulos rojos con sangre hasta la marca de 0.5 para realizar una dilucin de 1/200, y si se carga hasta 1 ser 1/100.

Limpiar la punta de la pipeta con papel absorbente o gasa. Hay que evitar a entrada de burbujas de aire, ayudndonos de un papel de filtro para conseguir el enrasado.

Introducir la pipeta en el tubo del reactivo de Hayem y absorber el lquido hasta la marca 1.1. Se homogeniza suavemente de 2 3 minutos.

Descartar las 3 primeras gotas del tallo, luego colocar una gota cerca del extremo de la cmara de Neubauer para que por capilaridad se llene exactamente. Dejar reposar por 3 minutos.

Enfocar la cuadricula a 10X, luego con el objetivo de 40X contar sobre le cuadrado grande central de la cmara solo en 5 cuadrados pequeos: uno central y cuatro angulares (80 cuadritos en total). Contar solo las clulas que cubren o tocan por dentro o fuera de las lneas limitantes superior e izquierda.

7) RESULTADOS REPORTE UNIVERSAIDAD TECNICA DE AMBATO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE LABORATORIO CLNICO Nombres: Erika Raquel Edad: 19 aos Sexo: Femenino Mesa: 1 Responsable: Marcelo Calvache Apellidos: Miranda Buenao C.I: 1804645198 Domicilio: Ambato Fecha: 04/ Junio / 2013 Profesor: Dr. Rebeca Mazn

REPORTE CON PIPETA MANUAL EN CMARA DE NEUBAUER Cuadrante superior derecho: Cuadrante superior izquierdo: Cuadrante inferior derecho: Cuadrante inferior izquierdo: Cuadrante medio: 93 60 55 65 65 338 eritrocitos 338* 10000 = 3380000 eritrocitos / mm3 CONTAJE DE GLOBULOS ROJOS: 3380000 eritrocitos / mm3 8) CONCLUSIONES Se ejecuto el procedimiento para el contaje de glbulos rojos. Ya que se utilizo nicamente la tcnica con las pipetas manuales, el cual nos ayudo mucho mas para tener precaucin en la absorcin de muestra y reactivo con la manguerilla. Se realizo la correcta dilucin para el recuento de glbulos rojos. Ya que se mantuvo serenidad a la hora de aspirar la cantidad correcta de muestra y reactivo. Se mezclo y realizo el correcto llenado de la cmara de Neubauer. Ya que al aadir la pequea cantidad en el extremo de la cmara se noto que por si solo recorra la superficie de la misma y se distribuyo uniformemente. Se determino el contaje de glbulos rojos en la cmara de Neubauer. 9) RECOMENDACIONES Tener todos los materiales necesarios para la realizacin de la placa Debemos cambiarnos de guantes en caso de haberse manchado con sangre Limpiar el mesn con gel desinfectante antes de iniciar el anlisis No dejar torundas de alcohol sobre el mesn. Antes de extraer la sangre para realizar el conteo de rojos debemos homogenizar la muestra. Llenar los cuadrantes de la cmara de Neubauer al tratar de enfocar la muestra. Debemos comenzar a enfocar con el lente de menor aumento Debemos limpiar la punta con papel absorbente con la que absorbemos la sangre para eliminar el exceso de muestra ya que puede afectar los resultados

Al concluir el anlisis debemos dejar limpio el mesn y los materiales utilizados 10) CUESTIONARIO

11) BIBLIOGRAFA Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos, articulo web consultado el da 8 de marzo de 2012 en: http://html.rincondelvago.com/fundamentos-y-tecnicas-de-analisishematologicos-y-citologicos.html Cmara de Neubauer, consultado el da 15 de abril de 2011 en http://2l2mlaboratoristaclinico.blogspot.com/2009/04/camara-de-neubauer.html Martnez Fragoso, Vicente. Manual de Biometra Hemtica. CBTis199, Mxico, 2012. Pp. 9-11