MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO SECRETARIA DE DEFESA AGROPECURIA INSTRUO NORMATIVA N 82, DE 6 DE DEZEMBRO DE 2004.

O SECRETRIO DE DEFESA AGROPECURIA, DO MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 15, inciso II, Anexo I, do Decreto n 4.629, de 21 de maro de 2003, e o que consta do Processo n 21000.008367/2004-83, resolve: Art. 1. Oficializar o MTODO ANALTICO DE ANLISE DE RESDUOS DE SULFONAMIDAS, NAS MATRIZES BOVINA, SUNA, EQINA E DE AVES, POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA - CDD/DENSITOMETRIA, em conformidade com o anexo desta Instruo Normativa, determinando que sejam utilizados no Sistema de Laboratrio Animal do Departamento de Defesa Animal. Pargrafo nico. A metodologia de que trata este artigo ser atualizada, sempre que a inovao tecnolgica assim recomendar, por meio de ato do Diretor do Departamento de Defesa Animal. Art. 2. Esta Instruo Normativa entra em vigor na data de sua publicao. MAAO TADANO ANEXO MTODO ANALTICO DE ANLISE DE RESDUOS DE SULFONAMIDAS, NAS MATRIZES BOVINA, SUNA, EQINA E DE AVES, POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA CDD/DENSITOMETRIA 1. Objetivos e alcance do mtodo A metodologia objetiva detectar e quantificar resduos de sulfametazina, sulfadimetoxina, sulfatiazol e sulfaquinoxalina em fgado usando sulfapiridina como padro interno e empregando cromatografia em camada delgada (CCD) e quantificao por densitometria. Os limites de deteco e quantificao do mtodo definidos em procedimentos de validao intralaboratorial so 25 g/kg. 2. Fundamentos Os resduos de sulfonamidas so extrados do tecido com acetato de etila e purificados por partio em tampo de glicina pH 12,25. O pH da fase aquosa ajustado para 5,25 e as sulfonamidas extradas com diclorometano, que evaporado secura e os resduos reconstitudos em metanol. A separao entre as sulfonamidas e as substncias co-extradas feita em placa de slica contendo uma camada pradsorvente. A visualizao realizada em uma cmara com lmpada UV de comprimento de onda de 366 nm, aps imerso da placa em soluo de fluorescamina. 3. Reativos e padres Acetato de etila p.a.r.; Acetona p.a.r.; cido clordrico p.a.; lcool ter-butlico p.a.;

Clorofrmio p.a.; Diclorometano p.a.r.; ter de petrleo p.a. ou hexano p.a.; Fluorescamina; Fosfato de potssio dibsico p.a.; Fosfato de potssio monobsico p.a.; Glicina p.a.; Metanol p.a.r.; Padres de sulfadimetoxina, sulfametazina, sulfatiazol, sulfaquinoxalina e sulfapiridina. 4. Materiais Bales volumtricos de 10, 25, 50 e 100 mL (mbar e incolor); Bandeja de ao inoxidvel; Cuba para desenvolvimento de placas cromatogrficas; Dosador tipo bico de papagaio de 2, 10 e 25 mL ou dispensador automtico; Esptula para pesagem; Faca de ao inoxidvel; Frasco de polipropileno de 50 e 100 mL, incolor e escuro; Funil de separao de 1000 mL; Gs nitrognio comum; Grade para tubos de centrfuga de 15 e 50 mL; Microsseringa de 100 L; Pesa-padro ou similar; Pipetas graduadas de 20 mL; Pipetas volumtricas de 1, 10, 25 e 50 mL; Pipetas Pasteur; Placa de slica-gel 20 x 20 Whatman LK6D ou similar; Provetas de 100 e 1000 mL; Saco plstico de tamanho aproximado de 15x30 cm e 0,10 mm de espessura ou similar; Tubos para centrfuga de 15 e 50 mL, de polipropileno, com tampa de rosca.

5. Equipamentos Agitador de tubos tipo Vortex ou similar; Agitador mecnico horizontal (250 ciclos por minuto); Aplicador automtico com aquecimento e controle de temperatura; Aspirador a vcuo; Balana analtica; Banho de gua equipado com sistema de evaporao sob fluxo de nitrognio; Cmara de visualizao com lmpada UV de comprimento de onda de 366 nm; Centrfuga com capacidade para tubos de 50 mL; Densitmetro; Estufa a 60C; Freezer; Liquidificador, mquina de moer ou similar; Micropipeta automtica de 20 a 1000L; Potencimetro; Refrigerador; Seladora de embalagens plsticas. 6. Precaues analticas As etapas da anlise que utilizam acetato de etila, acetona, clorofrmio, diclorometano, ter de petrleo, hexano e metanol devem ser executadas em capela de exausto eficiente. Esses solventes so inflamveis, corrosivos e txicos, seus vapores so irritantes para os olhos, mucosas, pele e sistema respiratrio. Cuidados devem ser tomados no manuseio dos padres das sulfonamidas como o uso de equipamentos de proteo individual. Estes compostos tm sido associados a reaes de hipersensibilidade. 7. Procedimentos Durante a anlise, preencher o formulrio de acompanhamento de anlise, com todas as informaes pertinentes, permitindo a rastreabilidade de dados sobre amostras, reagentes, padres, equipamentos, analista, entre outros, conforme os procedimentos operacionais especficos. 7.1 Preparo de solues reagentes 7.1.1 HCl 1,7M: transferir 14,1mL de cido clordrico concentrado para balo volumtrico de 100mL e completar o volume com gua destilada. 7.1.2 HCl 1N: transferir 8,5mL de cido clordrico concentrado para balo volumtrico de 100mL e completar o volume com gua destilada.

7.1.3 NaOH 10N: solubilizar 40g de hidrxido de sdio em gua destilada e completar o volume para 100mL. 7.1.4 NaOH 1N: transferir 10mL da soluo de hidrxido de sdio 10N para balo volumtrico de 100 mL e completar o volume com gua destilada. 7.1.5 Tampo glicina 0,2M pH 12,25: solubilizar 15g de glicina em 1000mL de gua destilada e ajustar o pH para 12,25 0,05 com NaOH 10N. 7.1.6 Tampo fosfato 0,2M pH 7,55 + 0,05: a) soluo fosfato de potssio dibsico 0,2M: pesar 45,6g de K2HPO4.3H2O e solubilizar em gua destilada suficiente para 1000mL. b) soluo fosfato de potssio monobsico 0,2M: pesar 27,2g de KH2PO4 e solubilizar em gua destilada suficiente para 1000mL. Ajustar o pH da soluo (a) em 7,55 0,05 com a soluo (b). 7.1.7 Tampo fosfato 2 M/HCl 1,7M pH 1,65: a) soluo fosfato de potssio monobsico 2M: pesar 27,2g de KH2PO4 e solubilizar em gua destilada suficiente para 100mL. b) soluo fosfato de potssio dibsico 2M: pesar 45,6g de K2HPO4.3H2O e solubilizar em gua destilada suficiente para 100mL. Adicionar a soluo (b) soluo (a) at atingir pH 5,25. Adicionar HCl 1,7M at atingir pH 1,65. 7.1.8 Soluo de fluorescamina: solubilizar 30mg de fluorescamina em 250mL de acetona. Estvel por 1 ms se conservada ao abrigo da luz e sob refrigerao, na faixa de 2 a 10C, ou utilizada no mximo para 8 anlises. 7.1.9 Fase mvel - clorofrmio:lcool ter-butlico (80:20 v/v): 800mL de clorofrmio + 200 mL de lcool ter-butlico. Para permitir uma melhor separao entre sulfatiazol, sulfapiridina e sulfametazina, o sistema de solvente clorofrmio/lcool terbutlico deve ser saturado com gua destilada antes do uso. 7.2 Preparo de solues padres 7.2.1 Para densitometria 7.2.1.1 Soluo estoque 1000g/mL Pesar 100mg dos padres das sulfonamidas em separado, solubilizar em acetona e transferir para bales volumtricos de 100 mL. Estocar em frascos de polipropileno. Validade de 6 meses, se conservada na faixa de -14 a -20C. 7.2.1.2 Soluo intermediria 10 g/mL Diluir em separado 1 mL da soluo estoque de 1000g/mL de cada sulfonamida de interesse e do padro interno (sulfapiridina) em balo volumtrico de 100mL, com tampo fosfato 0,2M pH 7,55. Estocar em frasco de polipropileno. Validade de 1 ms, se conservada na faixa de 2 a 10C, prevalecendo o prazo de validade do padro ou soluo de origem, quando houver. 7.2.1.3 Soluo de fortificao 5g/mL Diluir 50mL da soluo intermediria de cada sulfonamida de interesse em separado ou a mistura das

mesmas em balo volumtrico de 100mL, com tampo fosfato 0,2M pH 7,55. Estocar em frasco de polipropileno. Validade de 1 ms, se conservada na faixa de 2 a 10C, prevalecendo o prazo de validade do padro ou soluo de origem, quando houver. 7.2.1.4 Soluo de fortificao 2,5g/mL Diluir 25mL da soluo intermediria de cada sulfonamida de interesse ou a mistura das mesmas em balo volumtrico de 50mL, com tampo fosfato 0,2M pH 7,55. Estocar em frasco de polipropileno. Validade de 1 ms, se conservada na faixa de 2 a 10C, prevalecendo o prazo de validade do padro ou soluo de origem, quando houver. 7.2.1.5 Soluo de fortificao 2,5g/mL de sulfapiridina Diluir 25mL da soluo intermediria de sulfapiridina em balo volumtrico de 100mL, com tampo fosfato 0,2M pH 7,55. Estocar em frasco de polipropileno. Validade de 1 ms, se conservada na faixa de 2 a 10C, prevalecendo o prazo de validade do padro ou soluo de origem, quando houver. 7.2.1.6 Soluo de fortificao 1,25g/mL Diluir 25mL da soluo de fortificao de 2,5g/mL de cada sulfonamida de interesse ou a mistura das mesmas em balo volumtrico de 50 mL, com tampo fosfato 0,2M pH 7,55. Estocar em frasco de polipropileno. Validade de 1 ms, se conservada na faixa de 2 a 10C, prevalecendo o prazo de validade do padro ou soluo de origem, quando houver. 7.2.2 Para anlise qualitativa 7.2.2.1 Soluo estoque 1000g/mL Pesar 100mg dos padres das sulfonamidas em separado, solubilizar em acetona e transferir para bales volumtricos de 100 mL. Estocar em frascos de polipropileno. Validade de 6 meses, se conservada na faixa de -14 a -20C. 7.2.2.2 Soluo intermediria 25 g/mL Diluir 1250L da soluo estoque de 1000g/mL de cada sulfonamida de interesse e, em separado, do padro interno (sulfapiridina) em bales volumtricos de 50mL, com tampo fosfato 0,2M pH 7,55. Estocar em frascos de polipropileno. Validade de 1 ms, se conservada na faixa de 2 a 10C, prevalecendo o prazo de validade do padro ou soluo de origem, quando houver. 7.2.2.3 Soluo de fortificao 2,5g/mL Diluir 1000L da soluo intermediria de cada sulfonamida de interesse ou da mistura das mesmas, formando um pool, em balo volumtrico de 10mL, com tampo fosfato 0,2M pH 7,55. Estocar em frasco de polipropileno. Validade de 1 ms, se conservada na faixa de 2 a 10C, prevalecendo o prazo de validade do padro ou soluo de origem, quando houver. 7.2.2.4 Soluo de fortificao 2,5 g/mL (sulfapiridina) Diluir 1000L da soluo intermediria de sulfapiridina em balo volumtrico de 10 mL, com tampo fosfato 0,2 M pH 7,55. Estocar em frasco de polipropileno. Validade de 1 ms, se conservada na faixa de 2 a 10C, prevalecendo o prazo de validade do padro ou soluo de origem, quando houver. 7.2.2.5 Soluo de fortificao do limite de deteco 0,625g/mL

Diluir 2,5mL da soluo de fortificao do pool de sulfonamidas em balo volumtrico de 10mL, com tampo fosfato 0,2M pH 7,55. Estocar em frasco de polipropileno. Validade de 1 ms, se conservada na faixa de 2 a 10C, prevalecendo o prazo de validade do padro ou soluo de origem, quando houver. 7.3 Preparo de amostras As amostras devem ser recebidas, avaliadas, identificadas, registradas e armazenadas conforme procedimentos operacionais padres. Antes de iniciar o preparo de uma amostra, todo o material (bandeja, faca, peas da mquina de moer ou liquidificador) e a bancada devem ser devidamente submetidos limpeza com detergente neutro e secagem. Imediatamente aps o recebimento, a amostra deve ser preparada de acordo com os procedimentos descritos abaixo. 7.3.1 Deixar a amostra temperatura ambiente somente o tempo suficiente para adquirir consistncia de corte. 7.3.2 Desembalar a amostra, coloc-la na bandeja e, quando necessrio, limpar o tecido enviado. No caso de fgado, retirar a pelcula e veias. 7.3.3 Cortar a amostra em pedaos menores e homogeneizar. Transferir uma pequena quantidade para o copo do liquidificador ou para a mquina de moer, triturar fazendo ambiente e descartar. 7.3.4 Transferir o restante da amostra para o copo do liquidificador ou mquina de moer, triturar recolhendo em um saco plstico identificado e retirar o ar da embalagem. 7.3.5 Lacrar o saco plstico com seladora, se necessrio, e encaminhar imediatamente para armazenamento na faixa de -14 a -20C, onde deve permanecer at o incio da anlise. 7.3.6 Lavar e secar o material utilizado. 7.3.7 Previamente anlise, retirar a amostra do congelamento e aguardar at que atinja consistncia de corte. 7.3.8 Pesar 2,5 0,1g de cada amostra de fgado, em um tubo de polipropileno de 50mL. 7.4 Extrao 7.4.1 As amostras pesadas no dia anterior anlise podem ser deixadas sob refrigerao durante a noite. 7.4.2 Para densitometria, preparar uma curva de calibrao pesando 7 tubos contendo 2,5 0,1g de um tecido branco e proceder da seguinte maneira: Tubo 1: Branco, obtido conforme descrito no procedimento operacional especfico; Tubo 2: Adicionar 100L da soluo de 5g/mL de sulfametazina e sulfadimetoxina; Tubo 3: Adicionar 100L da soluo de 2,5g/mL de sulfametazina e sulfadimetoxina; Tubo 4: Adicionar 100L da soluo de 1,25g/mL de sulfametazina e sulfadimetoxina; Tubo 5: Adicionar 100L da soluo de 5g/mL de sulfaquinoxalina e sulfatiazol; Tubo 6: Adicionar 100L da soluo de 2,5g/mL de sulfaquinoxalina e sulfatiazol; Tubo 7: Adicionar 100L da soluo de 1,25g/mL de sulfaquinoxalina e sulfatiazol. 7.4.3 Adicionar 100L da soluo de 2,5g/mL de padro interno (sulfapiridina) ao branco, curva de

calibrao e a todas as amostras. 7.4.4 Para anlise qualitativa, pesar 3 tubos contendo 2,5 + 0,1g de um tecido branco obtido conforme descrito no procedimento operacional especfico e proceder da seguinte maneira: Tubo 1: Branco; Tubo 2: Adicionar 100L da soluo de 2,5g/mL do pool de sulfonamidas; Tubo 3: Adicionar 100L da soluo de 0,625g/mL do pool de sulfonamidas. Adicionar 100L da soluo de 2,5g/mL de padro interno (sulfapiridina) ao branco e a todas as amostras. 7.4.5 Adicionar 25mL de acetato de etila e homogeneizar em Vortex por 60 segundos. 7.4.6 Agitar em agitador horizontal por 20 minutos aproximadamente 250 ciclos/minuto. 7.4.7 Centrifugar por 5 minutos a 2500rpm. 7.4.8 Transferir o sobrenadante para um outro tubo de 50mL. 7.5 Purificao 7.5.1 Adicionar 10mL de tampo glicina 0,2M ao extrato e homogeneizar em agitador mecnico horizontal por 5 minutos. 7.5.2 Centrifugar por 5 minutos a 2500rpm. 7.5.3 Remover a fase orgnica (camada superior) com aspirador a vcuo, tomando cuidado para no remover qualquer material slido ou emulsificado remanescente na interface ou aderido parede do tubo. 7.5.4 Adicionar 2mL de tampo fosfato 2 M/HCl 1,7M Ph 1,65 e ajustar o pH para 5,25 + 0,10 com HCl 1N ou NaOH 1N. 7.5.5 Adicionar 10mL de hexano ou ter de petrleo e agitar por 5 minutos em agitador mecnico horizontal. 7.5.6 Centrifugar por 5 minutos a 2500rpm. 7.5.7 Remover a fase orgnica (camada superior) com aspirador a vcuo, tomando cuidado para no remover qualquer material slido ou emulsificado remanescente na interface ou aderido parede do tubo. 7.5.8 Adicionar 10mL de diclorometano e agitar por 5 minutos em agitador mecnico horizontal. 7.5.9 Centrifugar por 5 minutos a 2500rpm; se existir emulso, centrifugar por 10 minutos a 3000rpm. 7.5.10 Remover a fase aquosa (camada superior) com aspirador a vcuo. A fase pode ser completamente removida pela inclinao do tubo, conservando a pipeta aspiradora na parede. Evitar aspirar as partculas de gordura da interface. Se uma camada gelatinosa estiver presente entre as fases aquosa e orgnica, no remov-la, pois resultar em perda dos analitos. 7.5.11 Evaporar at a secura em banho de gua a 40 + 0,5C sob fluxo de nitrognio. 7.6 Deteco e quantificao 7.6.1 Retomar o extrato em 100L de metanol, homogeneizar em Vortex por 30 segundos e deixar em repouso por 5 minutos. 7.6.2 Lavar a placa previamente ao uso com metanol.

7.6.3 Usando uma micropipeta ou microsseringa aplicar 20L do branco, curva de calibrao e das amostras na camada pr-adsorvente da placa aquecida a 85C. Tomar cuidado para no aspirar qualquer frao oleosa que causa distoro da cromatografia. Posicionar a mancha aproximadamente a 1,0-1,5cm da interface da camada pr-adsorvente. Nenhum ponto de aplicao deve ser feito nos canais extremos da placa, pois podem distorcer tanto a forma da mancha quanto o Rf, fornecendo quantificao imprecisa. 7.6.4 Eluir a placa 1cm da interface em metanol. Remover e secar por 1 minuto em estufa a 60 + 5C. 7.6.5 Eluir a placa 7cm da interface na fase mvel clorofrmio/lcool ter-butlico em uma cuba saturada. Remover e secar por 1 minuto em estufa a 60 + 5C. 7.6.6 Eluir a placa 14cm da interface na fase mvel clorofrmio/lcool terbutlico para assegurar valores consistentes de Rf. Remover e secar por 1 minuto em estufa a 60 + 5C. 7.6.7 Mergulhar a placa em soluo de fluorescamina. Mant-la na soluo por somente 1 a 2 segundos aps completa submerso para evitar colorao excessiva do fundo. 7.6.8 Deixar a placa em repouso no escuro e temperatura ambiente por 15 a 30 minutos e visualizar sob luz UV para avaliao da anlise qualitativa. 7.6.9 Para densitometria, fazer a leitura no densitmetro usando 410nm para comprimentos de onda de excitao e de emisso. 7.6.10 Examinar um canal no utilizado para determinar o background da placa para correo da linha de base. Nota: No mergulhar a placa em fluorescamina, se no for quantific-la no mesmo dia, pois poder ocorrer diminuio inaceitvel da fluorescncia quando mantida temperatura ambiente. Isto pode ser superado guardando-a em saco plstico fechado a 10C. Pode-se tambm aplicar o extrato em um dia e eluir em outro, ou eluir em um dia e derivatizar em outro. 7.7 Pontos crticos 7.7.1 Peso da amostra: 2,5 g 0,1g. 7.7.2 Volume final do extrato: 100L. 7.7.3 Ajuste do pH em 5,25 + 0,1. 7.7.4 Aspirao a vcuo: cuidado para no remover qualquer material slido ou emulsificador e remanescente na interface ou aderido parede do tubo. 7.7.5 Etapa de evaporao: deve ser realizada com constante observao, pois a secagem excessiva pode acarretar perda dos resduos analisados. 7.7.6 Armazenamento: todas as solues padres devem ser armazenadas em frascos de polipropileno incolor exceto a sulfaquinoxalina e sulfatiazol, cujos frascos devem ser escuros. 7.7.7 Derivatizao: no mergulhar a placa em fluorescamina, se no for quantific-la no mesmo dia, pois poder ocorrer diminuio inaceitvel da fluorescncia quando mantida temperatura ambiente. Isto pode ser superado guardando-a em saco plstico fechado a 10C. Pode-se tambm aplicar o extrato em um dia e eluir em outro, ou eluir em um dia e derivatizar em outro. 8. Resultados

8.1 Critrios de aceitabilidade dos resultados 8.1.1 Coeficiente de correlao (r) da curva de calibrao: =0,990. 8.1.2 Branco com resultado no detectado para os resduos analisados. 8.2 Clculos e emisso dos resultados 8.2.1 Avaliar o resultado do branco, caso no esteja dentro do aceitvel, repetir a anlise se estiver adequado, continuar os clculos. 8.2.2 Avaliar o resultado da anlise qualitativa pela medida do Rf de cada composto e comparar a intensidade das manchas da amostra e do branco fortificado com 25g/kg. Para amostras com resultados menores que 25g/kg ou sem manchas no mesmo Rf da amostra fortificada, emitir o resultado com ND <25g/kg. Caso a intensidade da mancha da amostra seja igual ou maior, emitir o resultado como positiva e encaminhar a amostra para quantificao por densitometria. 8.2.3 No procedimento de quantificao por densitometria, avaliar o resultado do coeficiente de correlao da curva de calibrao obtida pela injeo das amostras adicionadas de padro. Caso no esteja aceitvel, repetir a anlise. Se estiver adequado, continuar os clculos. 8.2.4 Calcular a concentrao dos resduos nas amostras utilizando a seguinte equao da curva de calibrao: y = ax + b em que: x = concentrao em g/kg; y = relao entre altura do pico da sulfonamida e altura do pico da sulfapiridina (padro interno); a = inclinao da reta; b = interseo com o eixo y. Para resultados obtidos nas amostras menores que 25g/kg, emitir o resultado como ND <25 g/kg e, para resultados >25g/kg, deve-se registrar o valor obtido. Nas amostras com concentrao de sulfonamidas >1000g/kg, adicionar 25L da soluo estoque de 1000g/mL do padro interno de sulfapiridina, proceder como descrito a partir do item 7.4.5 at o item 7.5.10 e aplicar 20L do extrato diretamente na placa, multiplicando o resultado obtido por 100. 8.3 Controle de qualidade intralaboratorial - Critrios de aceitabilidade: 8.3.1 Branco com resultado no detectado para os resduos analisados. 8.3.2 Nenhum resultado falso positivo ou falso negativo para anlise qualitativa. 8.3.3 Coeficiente de correlao (r) da curva de calibrao: = 0,990 para densitometria. 8.3.4 Repetibilidade e porcentagem de recuperao: Concentrao (g/kg ou L) >1 a 10 >10 a 100 > 100 Recuperao (%) 60 a 120 70 a 110 80 a 110

Coeficiente de variao repetib (%) 30 20 15

Fonte: Codex (1993) e Mercosul (1994).

8.4 Controle de qualidade inter laboratorial - Critrios de aceitabilidade: 8.4.1 Branco com resultado no detectado para os resduos analisados. 8.4.2 Nenhum resultado falso positivo ou falso negativo para anlise qualitativa. 8.4.3 Coeficiente de correlao (r) da curva de calibrao: 0,990 para densitometria. 8.4.4 Reprodutibilidade e porcentagem de recuperao: Concentrao (g/kg ou L) >1 a 10 >10 a 100 > 100 Recuperao (%) 60 a 120 70 a 110 80 a 110

Coeficiente de variao repetibilidade 45 32 23

Fonte: Codex (1993) e Mercosul (1994). 8.5 Aes corretivas Em caso de necessidade de repetio dos procedimentos analticos para todas as amostras analisadas, observar os cuidados nos pontos crticos de anlise e todos os procedimentos associados. As alteraes introduzidas pelo laboratrio para melhorar o desempenho do mtodo e que no sejam consideradas um ponto crtico devero ser registradas como "alteraes" em anexo metodologia, conforme procedimento especfico. 9. Referncias bibliogrficas CODEX ALIMENTARIUS. Volume 3. Resduos de medicamentos veterinrios en los alimentos. 2 ed. Roma. 1993. MERCOSUL Mercado Comum do Cone Sul. Critrios para a validao de metodologias analticas para determinao de resduos de princpios ativos de medicamentos veterinrios (RMV) em produtos de origem animal. Resoluo 57/94, [s.n.l.], 1994. NBR 14029 AGROTXICOS - Validao de metodologia analtica para analise de teor de ingrediente ativo em produtos tcnicos e populaes de agrotxicos. Janeiro de 1998. UNITED STATES DEPARTMENT OF AGRICULTURE. Food Safety and Inspection Service. Analytical Chemistry Laboratory Guidebook, SUL 5.018-9, 1991 D.O.U., 08/12/2004