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Nucleotídeos
Dalvania Pinho Domingues
Fralini dos Santos Marcilio
Gabriel Machado Carvalho
Leonardo Teles Faber
Patricia de Sá Almeida
Rita de Cássia Costa de Carvalho
Kary Banks Mullis
PCR
PCR=Polymerase Chain Reaction
Reação em Cadeia da
Polimerase –técnica que
utiliza a enzima DNA
polimerase ,responsável
pela síntese de DNA ,para
amplificar in vitro,qualquer
segmento de DNA utilizado
como molde através de
ciclos .
PCR amplifica uma sequência alvo:
Sequência alvo
Histórico
Polimerização-síntese de cadeia
complementar de DNA
Princípios
Requer:
DNA molde
DNA polimerase termoestável
2 primers
Deoxinucleotídeos trifosfato(dNTPs)
Cátion divalente(MgCl2)
Tampão
Termociclador
Ciclos:são repetidos de 30 a 45 vezes.
Limitações
Contaminação por DNA estranho
Incorporação errônea de bases
Difícil aplicação a sequências maiores que 500
Daltons
Inibidores:
• Fenol
• Proteinase K
• Agentes quelantes em excesso(EDTA)
• Hemoglobinas e outras proteínas das hemácias
• SDS(dodecil sulfato de sódio)
• Elevadas concentrações de sal
Aplicações
1.Estudo do padrão de expressão gênica
(transcritos raros)
9.Teste de paternidade
Avanços
Utilização de DNA polimerase termoestável(Taq
polimerase)
Eletroforese
Capilar
Limitações
Taxa de migração do DNA nos géis de
agarose
1.Tamanho molecular do DNA
2.Concentração da agarose
3.Conformação do DNA
4.Presença de Brometo de Etídio
5.Voltagem aplicada
6.Tipo de agarose
7.Tampão
Limitações
Não é adequada para determinação
de compostos voláteis,não-polares e
de massa molar baixa(menores que
200 Daltons)
Sequenciamento de DNA(eletroforese
capilar)
PCR
Teste de paternidade
Referências
Alberts B, Jonhson A, Lewis J, Raff M, Roberts K, Walter P. Biologia
Molecular da Célula. 4 ed. Porto Alegre: Artmed; 2004.
http://www.dbbm.fiocruz.br/helpdesk/mbiology/PCRcurso.pdf
(Acesso em 08 de agosto de 2008)
http://www.chemkeys.com/bra/md/mds_11/elecap_4/elecap_4.htm
(Acesso em:18 de agosto de 2008
http://nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laureates/1993/illpres/pcr.html
http://nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laureates/1993/illpres/pcr.html
(Acesso em 18 de agosto de 2008)
http://www.etall.hpg.com.br
(Acesso em 18 de agosto de 2008)
Discussão
Porque foi tão importante o
desenvolvimento da PCR?
É possível extrair-se DNA de um fio de
cabelo,uma célula do epitélio oral ou
de uma gota de sangue?
A eletroforese de nucleotídeos é mais
simples do que a de proteínas?