El Descubrimiento de la Transcriptasa Reversa

Por una serie de experimentos conducidos en la dcada de 1940, 1950 y 1960, los principios por los que la informacin gentica es transferida en el sistema biolgico fue demostrada. El ADN sirvi como el cdigo, que era entonces transcrito en un tipo de ARN (ARNm), eso llev el mensaje que ser traducido a protenas. Esto experimentos formaron un paradigma firmemente credo, era conocido como el dogma central. Sin embargo, en 1970, un trabajo sobre el virus del tumor del ARN demostr que quizs el dogma central no explic el cuadro entero.

Trasfondo
En 1961, Howard Temin comenz a recolectar evidencia que era contraria al dogma central. Temin, que dedic su vida a estudiar los virus del tumor del ARN (ahora conocidos como retrovirus), centr sus primeros trabajos en el virus del sarcoma de Rous (RSV). Este ARN virus es capaz de transformar clulas normales en clulas cancerosas. Temin sinti que la mejor explicacin para el comportamiento del virus era modelo porque el virus permanece inactivo, o en estado pro-viral en la clula. Sin embargo, puesto que el ARN es notoriamente inestable, Temi propuso que el genoma del ARN de RSV es convertido en un ADN pro-virus. Con este modelo en mente, l precis para probar su hiptesis. l reuni los datos que demuestran que RSV es sensible a los inhibidores de la sntesis de ADN y sugiriendo que el ADN, complementario al genoma ARN de RSV, es presente en clulas transformadas. Otros investigadores, sin embargo, seguan siendo escpticos. Un experimento definitivo sera requerido para probar su modelo finalmente. Mientras tanto, otro virlogo, David Baltimore, haba estudiado la replicacin de los virus. l tom un acercamiento bioqumico, observando directamente
Javiera Muoz S.

el ARN y sntesis de ADN en los viriones mismos. l tena previamente un ARN-dependiente de la actividad de ARN polimerasa en viriones del virus de estomatitis vesicular, un ARN virus no-tumorigenico Su atencin entonces dio vuelta al tumor del ARN virus, finalmente colocando en el virus murino de la leucemia de Rauscher (R-MLV). Con este organismo, l probara independientemente el modelo de Temin.

El experimento
Notablemente, estos dos cientficos viajaron caminos separados al mismo sistema crtico de experimentos. Ambos comenzaron con la accin pura del virus, el cual interrumpieron parcialmente usando detergentes no inicos. Con una accin de los virus interrumpidos a disposicin, podran hacer la pregunta crtica: puede un retrovirus realizar sntesis de ADN? Para responder esta pregunta, cada grupo agreg el trifosfato radioactivo de la dioxitimidina (dTTP) junto con los otros tres trifosfatos del dioxinucletido (dATP, dCTP. dGTP) a las preparaciones del virion, y observando la incorporacin del dTTP radioactivo del ADN. De hecho, en cada experimento el dTTP radioactivo fue incorporado en el cido nucleico. Cuando Baltimore agreg un ribonucletido radioactivo trifosfato (rNTP) y los tres otros ribonucletidos trifosfatos a los virus interrumpidos, l no podra detectar ninguna sntesis de ARN.Para probar que el producto que fue formado estaba dentro del ADN, ellos lo trataron con enzimas que degradan especficamente el ARN (ribonucleasa o RNasa) o ADN (desoxirribonucleasa o DNasa). Encontraron que el producto era sensible solo a la DNasa. Los resultados de estos simples experimentos, resumidos en la tabla de arriba, demostraron que una enzima en las partculas podra sintetizar el ADN. Sin embargo, segua habiendo una pregunta Cul era la plantilla? Para demostrar de una vez por todas que el ADN se podra sintetizar de una plantilla de ARN, Baltimore y Temin pre-incubaron los viriones con RNasa, la que cataliza la degradacin de ARN en ribonucletidos monofosfatos (rNMPs). Si el ARN era realmente la plantilla, entonces la degradacin de la plantilla prevendra la sntesis de ADN por las preparaciones de virion. ste de hecho era el caso.
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Ms largo el tratamiento previo de los viriones con RNAasa, ms baja era la cantidad de actividad de ADN sintetizado, asi probando que una enzima en el virion podra catalizar la sntesis de ARN dependiente de la sntesis de ADN. Porque eta actividad era al revs de la bien conocida sntesis de ADN dependiente de ARN considerada en la transcripcin, la enzima que la cataliz pronto fue referida como transcriptasa reversa. Inicialmente, muchos cientficos estaban poco dispuestos a creer que exista la transcriptasa reversa porque su actividad violaba el dogma central. Aislamiento subsecuente y caracterizacin del paradigma de enzima pronto convenci a los escpticos.

Discusin
Temin y Baltimore fueron llevados independientemente por diversas deducciones al descubrimiento de la transcriptasa reversa. Temin crey firmemente en la existencia de la actividad. Para l, era el proceso de hacer experimentos bioqumicos en viriones purificados, algo que en las clulas infectadas, le permitieron probar al mundo lo que l saba. Baltimore, por otro lado, crea que los virus llevaron sus actividades de la polimerasa con ellos. Su penetracin dominante era probar la actividad del ARN dependiente de la polimerizacin de ADN que Temin haba propuesto. Ambos cientficos, sin embargo, debieron tener la conviccin para creer y divulgar lo que vean, a pesar de ser contrario a un paradigma aparentemente inquebrantable. El descubrimiento de la transcriptasa reversa ha afectado la vida dentro y fuera de la ciencia en una mirada *(cantidad muy grande o indefinida*) de formas. La capacidad de convertir ARNm en ADN permiti la creacin de la biblioteca de ADNc, colecciones de ADN que compusieron solamente de los genes expresados en un tejido particular. Esto ha facilitado la clonacin y el estudio de los genes implicados en todas las facetas de la biologa. El descubrimiento tambin caus una explosin de la investigacin en retroviruses (retrovirus en plural xD) virus del ARN que repliegan va transcripcin reversa. Esta base fue 15 aos crticos despus cuando el virus de inmunodeficiencia humana (VIH), que causa SIDA, fue demostrado que
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era un retrovirus. La importancia del trabajo de Temin y Baltimore fue rpidamente reconocida, llevndolos a recibir el Premio Nobel por Fisiologa y Medicina en 1975 debido al descubrimiento de la transcriptasa reversa.

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