PRACTICA N6 Colimetria de agua, tcnica de tubos mltiples Coliformes fecalis OBJETIVOS:

Familiarizarse con los mtodos de recuento, especialmente con el de NMP. Detectar bacterias coliformes totales y fecales. Detectar si la muestra trada es apta para el consumo humano.

INTRODUCCION:
El agua es un recurso natural necesario para el desarrollo de un gran nmero de actividades humanas. Su creciente degradacin por disminucin de su calidad implica la reduccin del nmero de usos que se le da; es por ello, lo que se hace necesario la realizacin de estudios que permitan determinar la calidad de ese agua. Los anlisis que se pueden realizar al agua para controlar su calidad son: fsicos, qumicos y microbiolgicos, en esta ocasin se har una determinacin microbiolgica. Todos los organismos que se encuentran en el agua son importantes en el momento de establecer el control de la calidad de la misma sin considerar si tienen su medio natural de vida en el agua o pertenecen a poblaciones transitorias introducidas por el ser humano; si su crecimiento lo propician los nutrientes presentes en el escurrimiento natural y en aguas residuales municipales o lo frenan los venenos procedentes de la actividad agrcola o industrial; y si tienen capacidad para intoxicar a las personas y a los animales superiores. Se debe conocer la forma de los patgenos hdricos y determinar su presencia y origen, la magnitud y oscilacin de su nmero, el curso de su ciclo vital y el ndice de su supervivencia. Los parmetros biolgicos en las aguas potables son de mucho inters, los microorganismos que puede haber en el agua son virus, bacterias, hongos, algas y protozoos. Aquellos que son inocuos para el hombre no tienen significacin sanitaria, por lo que el control microbiolgico del agua se va a centrar en las especies patgenas para el hombre. Dado que buscar todo tipo de microorganismos patgenos, por su diversidad, es costoso y complicado y como la relacin patgenos/no patgenos es muy pequea, se realiza un control del agua a travs de indicadores microbiolgicos de contaminacin. Hay muchos seres vivos que se emplean como indicadores de la calidad de un agua. As, segn predominen unos organismos u otros, podremos saber el estado de un agua. Para que un microorganismo sea considerado como indicador microbiolgico ha de reunir unas condiciones que son:

Debe ser incapaz de desarrollarse en el agua. Debe tener una supervivencia en el agua superior a los organismos patgenos. Debe soportar mejor a los desinfectantes. Deben ser fciles de aislar, identificar y contar. Deben ser muy abundantes en heces y escasos en otros medios. La normativa recoge una serie de anlisis microbiolgicos segn se efecte sobre el agua un anlisis mnimo: Coliformes Totales y Fecales; uno normal: los anteriores ms: bacterias aerobias a 37 C, Estreptococos Fecales y Clostridios Sulfito-Reductores; o completo: los anteriores ms aerobias a 22 C, microoganismos parsitos y/o patgenos; el anlisis realizado ha sido el normal.

Fundamento
Existen diversos mtodos para cuantificar el nmero de microorganismos presentes en muestras lquidas. Dentro de las tcnicas ms comunes se encuentra el recuento directo por microscopia de fluorescencia, as como los procedimientos basados en diluciones en serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintticos slidos o lquidos, como el recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) o la estimacin por el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP). El mtodo del nmero ms probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente sigue siendo ampliamente utilizado. En un principio este mtodo fue empleado para estimar el nmero de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha demostrado que tambin puede ser aplicado para la determinacin de microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos marinos y suelos contaminados, por tanto este mtodo es aplicable para estimar el nmero de microorganismos en muestras de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como anaerobias. Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales. Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estn formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. stos ltimos se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminacin fecal. Su presencia se interpreta como una indicacin de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades.

Materiales

Muestra: Agua recolectada de un casa ubicada el centro poblado Menor Punto 9 ( panamericana norte 5 Km) pH: 7 T: 18 Procedencia: Agua de sisterna depositado en un deposito hermticamente cerrado

Medios de cultivo: Caldo (presuntivo), agar Endo ( confirmativo) Tubos de dilucin Pipetas Bombilla de aspiracin Placas de Petri Mechero Bunsen Estufa Gradillas Anzas microbiolgicas calibradas

Metodologia
a)Mtodo para coliformes totales y fecalis:

Inoculamos alcuotas de 10 ml en 5 tubos con caldo T.C.L ST. Doble concentrado. Inoculamos alcuotas de 1 ml en 5 tubos con caldo T.C.L ST. Inoculamos alcuotas de 0.1 ml en 5 tubos con caldo T.C.L ST. Incuba 35C x 72 hr. Lectura

los tubos positivos ( con produccin de gas y turbidez). Se resiembra en caldo E. C. Incuba 44C x 24 hr Lectura

los tubos positivos (con produccin de gas y turbidez). Sembrar en placas con Agar ENDO Lectura

Identicar las colonias Lac. Positiva con presencia de brillo metalico.

Proccedimiento:
Homogenizar

Incubar a 35C x 24 hr.

Resultados:
Despus de incubar a 35C x 24 hr. Se obtuvieron los siguientes resultados:

La ausencia de gas en las campanas de Durham y la presencia de turbidez con alcuotas de 10 ml en 5 tubos con caldo T.C.L ST. Doble concentrado. La ausencia de gas en las campanas de Durham y la presencia de turbidez con alcuotas de 1 ml en 5 tubos con caldo T.C.L ST. La ausencia de gas en las campanas de Durham y la presencia de turbidez con alcuotas de 0.1 ml en 5 tubos

Figura N 1.- La ausencia de gas en las campanas de Durham y la presencia de turbidez

Tubos con alcuotas de 10 ml Gas: O tubos

Tubos con alcuotas de 1 ml Gas: O tubos

Tubos con alcuotas de 0.1 ml Gas: O tubos

Turbidez: 5 tubos

Turbidez: 5 tubos

Turbidez: 5 tubos

Cuadro N1.- Muestra la ausencia de coliformes totales Alcuotas 10ml 1ml 0.1ml Lectura 000 < 1,8 < 2 Tubos con produccin 0/5* 0/5 0/5 de gas *Nmero de tubos positivos / nmero de tubos inoculados NMP/100ml.

Discusion
Se puede concluir que despus de realizar la prctica que no se pudo determinar la presencia de coliformes totales por el mtodo de tubos multiples. Se evidencion la ausencia de gas en los tubos con alcuotas de 10,1,0.1 ml pero si la presencia de turbidez. No se pudo determinar la presencia de Coliformes fecalis por este mtodo debido a que no se demostr la presencia de Coliformes totales por este mtodo. La lectura de los tubos dio como cdigo del NMP. (0 0 0)lo cual demuestra la la presencia de coliformes < 1,8 < 2 NMP/100ml.

Conclusion:
Se puede concluir que la muestra de agua por los valores obtenidos de coliformes totales por el mtodo de tubos multiples es < 1,8 < 2 NMP/100ml. y esto demuestra que es apta para el consumo humano. Adems se puede concluir que que este mtodo solo nos permite determinar de forma indirecta la presencia de coliformes totales no siendo un mtodo muy sensibles ya que no permite determinar concetraciones inferires a los 1.8 2 NMP/100ml

Bibliografia

http://www.ispch.cl/sites/default/files/documento_tecnico/2010/10/PRT-712.03005%20rev%205%20NMP%20colif%20y%20colif%20fecales%20aguas.pdf. http://www.docstoc.com/docs/44895852/NORMA-T%C3%89CNICA-NACIONALPARA-LA-CALIDAD-DEL-AGUA-POTABLE---PDF http://www.psa.es/webesp/projects/solarsafewater/documents/libro/02_Capitulo_02 .pdf