ANATOMIA DOS OVRIOS E CORPOS ADIPOSOS DE SCINAX FUSCOVARIA (ANURA, HYLlDAE)

Classius de Oliveira

Umberto Jorge Alves de Andrade

KEV WORDS:

Scinaxfusco varia, Anura, Hylidae, ovary, anatomy, morfology.

Scinax fuscovaria, Anura, Hylidae, ovrio, anatomia, morfologia.

ABSTRACT
ANATOMY
(ANURA, HYUOAE).

OF THE OVARIES
in many

ANO

FAT BOOIES
regions.

OF SCINAX
the inner known.

FUSCOVARIA
for a wide morphological This paper fat bodies aims and

The propitious environmental

Brazilian animaIs

conditions However,

are responsible

diversity of amphibians characteristics

of the majority of these

are not completely

at describing some
ovaries. The capsule, described IV). The attached ovaries

anatomical characteristicsof the Scinax

are lobulated organs bounded

fusco varia
and

by a tenuous

transparent

ovarian

which

a/lows

the identification of different types

of germ

ce/ls. Itis also brief/y oocytes I,11, 111, are 80th their

the histological characteristics fat bodies, which are structures near

of that ce/lular strain (oogonia, juxtaposed

to the reproductive of kidneys and

system, gonads. during

digitiform prolongations ovaries cycle. and

the cranial edges great

structures, reproductive

fat bodies,

present

morphological

changes

Endereo dos Autores: Departamento de Biologia - Instituto de Biocincias, Letras e Cincias Exatas - UNESP. 15054-000 So Jos do Rio Preto, SP.

Acta Biologica Leopoldensia

Julho/Dezembro

174

RESUMO
Uma somatria de condies ambientais privilegiadas em muitas regies do territriobrasileirofavorecem a existncia de uma grande diversidade de anfbios, porm as caractersticas morfolgicas internas da maioria destes animais ainda so pouco conhecidas. Assim, este trabalho descreve algumas caractersticas anatmicas dos ovrios e corpos adiposos do hildeo Scinax fusco varia.Os ovriosso rgos lobulados
delimitados por uma delgada e transparente cpsula ovariana, atravs da qual possvel identificar diferentes tipos celulares germinativos. As caractersticas histolgicas gerais desta linhagem celular (ovognias, ovcitos I, 11, 111e IV)so descritas sucintamente. Os corpos adiposos, estruturas anexas ao aparelho reprodutor, so prolongamentos digitiformes aderidos prximo das extremidades craniais dos rins e gnadas. Ambas estruturas, ovrios e corpos adiposos, manifestam grandes alteraes morfolgicas no decorrer do ciclo reprodutivo.

INTRODUO
A subclasse Lissamphibia a mais recente e a nica existente dentre as trs que compem a classe Amphibia, atualmente com mais de 4.520 espcies descritas. Das trs ordens a mais representativa denominada de Anura (85%), da qual a maioria das espcies encontra-se nas regies tropicais e subtropicais, como na Amrica do Sul, onde ocorrem 11 famlias (DUELLMAN & TRUEB, 1986). Dentre estas, a famlia Hylidae est representada por uma grande variedade de espcies com ampla distribuio geogrfica, alcanando nas regies neotropicais um maior grau de diferenciao, o que ocorre no Brasil (ALMEIDA,1984). As gnadas dos anfbios e os corpos adiposos associados a estas tm uma origem embriolgica comum (HUMPHREY, 1927). Este corpo adiposo uma caracterstica comum a todos os anfbios (DUELLMAN & TRUEB, 1986) e servem como uma reserva nutricional para as gnadas, como inicialmente proposto por DUBOIS (1927) e constatado por FITZPATRICK (1976) analisando vrios outros trabalhos em diferentes espcies. Segundo KKENTHAL et ai. (1986) na margem anterior dos ovrios esto presentes corpos adiposos abdominais com funo e forma peculiares. Os ovrios so estruturas saculares e lobuladas com um epitlio germinativo que confere gnada uma capacidade cclica para proliferao e diferenciao de grandes quantidades de gametas (FRANCHI, 1962; LOFTS, 1974). As fmeas prximas da oviposioapresentamovriosaumentadose com intensa atividade vitelognica, com proporcionalaumento do complexo folculo-ovocitrio (HERMOSILLAet ai., 1986),comodescritopara Rana esculentacujo peso do ovrio e tamanho da desova tm correlaodiretacom o peso corporal, coincidindo com as fases de atividade ovariana ao longo do ano (RASTOGI et ai., 1983).

175 Com base nas informaes apresentadas acima e na escassez de trabalhos que descrevem a anatomia dos rgos reprodutores de anuros tropicais, propomos uma descrio das caractersticas morlolgicas do aparelho reprodutor feminino de Scinax fuscovaria, abordando as gnadas e os corpos adiposos independentemente da fase reprodutiva em que se encontre o animal.

MATERIAL E MTODOS
Pela dificuldade de coleta de indivduos do sexo feminino em seu ambiente natural, foram utilizados apenas cinco exemplares adultos de S. fuscovaria (A. Lutz, 1925), que foram anestesiados por saturao em ter e sacrificados para as anlises morlolgicas. Os animais foram capturados em Botucatu (SP), durante o perodo de junho a dezembro de 1992, que corresponde poca de atividade reprodutiva. As anlises macroscpicas foram realizadas em dois espcimes que foram sacrificados e fixados em formalina neutra 10%. A dissecao foi realizada por meio de uma inciso ventral-mediana da cloaca altura dos membros anteriores. A anlise da sintopia das estruturas e suas descries, bem como a documentao fotogrfica, foi realizada sob estereomicroscpio. Para os estudos histolgicos, trs fmeas foram submetidas a dissecao aps a anestesia e tiveram os rgos reprodutores gotejados" in situ" com a soluo de Bouin. Aps a retirada dos fragmentos gonadais, os mesmos foram fixados em Bouin durante 20 horas, lavados em lcool etlico 70% e encaminhados rotina histolgica de desidratao, diafanizao, incluso em parafina e microtomia. A tcnica de hematoxilinaleosina foi utilizada para colorao.

RESULTADOS
As fmeas de S. fuscovaria apresentam dois ovrios lobulados, localizados ventralmente aos rins e mantidos na posio por uma delgada membrana conjuntiva, o mesovrio (FIGURAS 1 e 2). Em associao com a poro superior de cada ovrio esto aderidas estruturas anexas ao aparelho reprodutorque so denominadas corpos adiposos abdominais e apresentam "in vivo" uma colorao que varia do esbranquiado ao amarelo vivo, com vrias tonalidades intermedirias. Numa descrio geral, so corpos formados por prolongamentos digitiformes dispostos em feixes jungidos pela base e divergentes nos pices. Encontram-se fixos ao mesentrio pela sua base ou "raiz", na altura das extremidades craniais dos rins e gnadas (FIGURA 2). Os prolongamentos podem espalhar-se portoda a cavidade, dependendo da suaforma e volume,o que tambm varivel de acordo com a fase reprodutivaem que se encontrao animal.

176

FIGURA1 Representao esquemtica dos rgos da cavidade corporal em vista ventral: corpos adiposos (CA); estmago (E); fgado (F); intestino (I); ovrio direito (OD) e esquerdo (OE); pulmo (P) e canal retal (R). Aproximadamente duas vezes o tamanho natural.

Md

M gE

SL-

'-..8.

FIGURA2 - Esquema dos rgos em vista dorsal: pores cranial (Cr), medial (Md) e caudal (Cd) do oviduto; corpos adiposos (CA); estmago (E); ovrio esquerdo (OE); pulmo (P); mesovrio (M)e rim (R). Aumento aproximado de 4x.

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Em uma observao superficial foram identificadas granulaes ovarianas, que correspondemaos ovcitosem diferentes estdios de maturao, o que s possvel ser visualizado pela transparncia da cpsula ovariana ou tnica albugnea, uma camada de tecido conjuntivo que envolve o rgo conferindo-lhe forma e consistncia(FIGURA3A). Macroscopicamente,os ovcitos imaturos so menores e tm coloraoesbranquiada.J num estdio intermedirio de desenvolvimento assumem uma cor creme devido ao acmulo de vitelo. Finalmente, quando esto prximos da maturao, encontram-se parcialmente pigmentados, com um hemisfrioque mantm a cor creme e o outro parda (FIGURA 38).

FIGURA 3 - Ovcitos de diferentes tamanhos e coloraes observados pela transparncia da delgada cpsula ovariana sob estereomicroscpio. A - Vista geral de um lbulo (22x). B - Identificao dos ovcitos I (1), 11 (2), 111 (3) em estdio inicial e IV (4), com aumento de 40x.

178 Os ovrios, quando analisados histologicamente, apresentam diferentes tipos celulares germinativos e, de maneira simplificada, esta linhagem celular foi dividida segundo suas caractersticas morfolgicas em ovognias, ovcitos I, 11, 111 e IV (FIGURA 4).

FIGURA 4 A Ovrio com ovognese avanada: ovcitos I (1), 11 (2), 111 (3) e IV (4); cpsula ovariana (c) e interstcio (i) com escasso material entre os ovcitos. Colorao H-E (22x). B - Seco do ovrio imaturo: ninho de ovognias (Og), ovcitos I (1) e 11(2). Colorao H-E (160x).

- -

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As ovognias encontram-se geralmente agrupadas em ninhos na periferia da gnada. So as menores clulas da linhagem germinativa e se caracterizam por apresentarem pouca afinidade aos corantes. Os ovcitos I apresentam um volume celular maior do que as anteriores e seu citoplasma assume intensa basofilia e o ncleo uma discreta acidofilia. Caracterizando o estdio de ovcitos 11,h um progressivo aumento no nmero de nuclolos, que apresentam dimenses variveis e preferencialmente localizam-se na periferia nuclear (FIGURA 48). Nos ovcitos 111 uma caracterstica fundamental refere-se deposio de incluses vitelnicas, que ocorre inicialmente na regio cortical e posteriormente, de maneira centrpeta, preenche praticamente todo o citoplasma; o ncleo est centralizado e proporcionalmente grande (FIGURA 48). Neste estdio inicia-se o processo de polarizao celular, originando dois hemisfrios (animale vegetal) morfologicamente distintos. Nos ovcitos IV a polarizao celular ntida. Nestes, uma distinta camada de citoplasma perifrico repleta de pigmentos e com a vescula germinal (ncleo) deslocada para esta poro representa o hemisfrio animal e a metade complementar, cujo citoplasma est preenchido pelo vitelo denominada hemisfrio vegetal (FIGURA 4A). Neste estdio final, o ovcito atinge seu maior volume e macroscopicamente, na gnada ou na massadesovada, os ovcitos apresentam duas tonalidades distintas: cor creme no hemisfrio vegetal e marrom no hemisfrio animal (FIGURA 3). Quando o ovrio prossegue em direo da maturao, ocorre um aumento extraordinrio do ovcito e da prpria gnada, bem como uma diferenciao de estruturas periovocitrias que constituiro o envoltrio folicular. Com o desenvolvimento gonadal as clulas germinativas pr-vitelognicas (ovognias, ovcitos I e 11)se localizam na periferia, mantendo contato direto com a cpsula ovariana, j os ovcitos em vitelognese final e maduros so deslocados para a regio central do lbulo. Simultaneamente, o interstcio ovariano torna-se cada vez mais escasso (FIGURA 4A). importante salientar que no foram descritas outras estruturas ovarianas de considervel significado como os envoltrios foliculares, folculos atrsicos e ps-ovulatrios.

DISCUSSO
A estrutura morfolgica geral e relao sintpica dos rgos e tecidos que integram o aparelho reprodutor de S. fuscovaria, apresentam o mesmo padro de organizao geral da maioria dos anfbios da ordem Anura. Os ovrios dos anfbios so rgos pares retroperitoneais, cuja estrutura a de uma vscera sacular e lobulada, com um epitlio germinativo que propicia uma ciclicidade na proliferao e diferenciao de gametas (FRANCHI, 1962;

180 LOFTS, 1974; HILDEBRAND, 1995). Esta ciclicidade gonadal segue a sazonalidade reprodutiva de cada espcie e geralmente acarreta mudanas morfolgicas muito acentuadas. Em S. fuscovaria, os ovrios so rgos lobulados e geralmente assimtricos em forma e volume, sua consistncia frouxa e a forma conferida pelo arranjo dos ovcitos em diferentes estdios de desenvolvimento. Estes ovcitos so envolvidos conjuntamente pela cpsula ovariana, sendo a gnada sustentada pelo mesovrio ventralmente aos rins. Os ovrios moldam-se, com muitas variaes, aos segmentos do tubo digestivo em suas diferentes pores e estados funcionais. Obviamente esta plasticidade visceral ocorre de forma mais notvel nas espcies que tm grandes alteraes morfolgicas cclicas, o que tambm depende do nmero e tamanho dos ovcitos produzidos. A descrio acima concordante com aquelas propostas para Caudiverbera caudiverbera (HERMOSILLA et ai., 1986) e Rheobatrachus silus (HORTON & TYLER, 1982), ambos da famlia Leptodactylidae. Assim, para C. caudiverbera, os ovrios so delimitados por uma membrana transparente que possibilita visualizar os folculos em diferentes estdios de desenvolvimento. Esta membrana se reflete constituindo o mesovrio, o qual segura as gnadas, por sua poro dorsal, parede anterior dos mesonefros. HORTON & TYLER (1982) constataram assimetria no nmero de lobos ovarianos na maioria dos indivduos analisados, sendo que na maior parte, havia mais lobos no ovrio direito. KYRIAKOPOULOU-SKLAVOUNOU & LOUMBOURDIS (1990) observaram, em Rana ridibunda, que o ovrio esquerdo usualmente maior. Em C. caudiverbera, a diferena de lobulao no representa diferena significativa de peso entre os ovrios. possvel que a lobulao permita melhor acondicionamento do material ovariano (HERMOSILLA et aI., 1986). Em nossas observaes, tornou-se muito evidente a necessidade morfofuncional destas assimetrias, uma vez que os rgos associados ao aparelho reprodutor sofrem drsticasvariaes, principalmente de forma e volume. Estes, em conseqncia, acomodam-se de maneiras distintas na cavidade corporal. Em uma observao preliminar e pouco detalhada da granulao ovariana em S. fuscovaria, foram identificados ovcitos em distintos estdios de diferenciao e quando estes associam-se com clulas somticas ao seu redor formam os complexos folculo-ovocitrios. HERMOSILLA et ai. (1986) relataram que os maiores folculos possuem clara polarizao de pigmento melnico no hemisfrio animal e que, na teca externa, h abundncia de vasos sanguneos, fibras colgenas e fibroblastos. Essa amplificao na vascularizao, supem os autores, contribui para os processos vitelognicos e, possivelmente, seja necessria para dar expresso funcional s clulas foliculares, cujas interaes com o ovcito do mesmo complexo foiculo-ovocitrio so evidentes nos processos de maturao folicular. Acreditamos que estas estruturas e suas possveis funes sejam semelhantes em S. fuscovaria. Apesar de no existir consenso e padronizao na diviso dos estdios de desenvolvimento dos tipos celulares germinativos, a maioria dos autores

181 costuma divid-Ios em cinco ou seis estdios, embora nem sempre se equivalham. A nomenclatura utilizada tambm no apresenta um padro comum para as descries em diferentes espcies. Desta forma alguns autores referem-se a estdios foliculares (REDSHAW, 1972; HERMOSILLA et a!., 1986; BEROIS & DE s, 1988), enquanto que outros denominam de fases ovocitrias (PANCHARATNA & SAIDAPUR, 1985; DUMONT, 1972; AGOSTINHO, 1988). Independentemente destas classificaes, entendemos que as clulas pr-vitelognicas e em vitelognese inicial se localizam na periferia ovariana em funo do extraordinrio crescimento pelo qual passaro, o que torna-se facilitado pela capacidade de distenso da cpsula ovariana. Por outro lado, caso as clulas em desenvolvimento estivessem intercaladas aos enormes ovcitos maduros, ao crescerem seriam simplesmente comprimidas por estes. A anlise dos corpos adiposos de S. fuscovaria revelou que so constitudos por prolongamentos digitiformes amarelados, presos ao mesentrio na altura das extremidades craniais dos ovrios e rins, podendo espalhar-se por toda a cavidade corporal em funo da forma, volume e fase reprodutiva. Descries semelhantes so encontradas para outras espcies (RASTOGI et ai., 1983; KKENTHAL et a!., 1986; AGOSTINHO, 1988). De maneira similar quelas observaes em S. fuscovaria, foram documentadas variaes morfolgicas sazonais em Rana ridibunda (KYRIAKOPOULOU-SKLAVOUNOU & LOUMBOURDIS, 1990), Rana cyanoph/yctis (PANCHARATNA & SAIDAPUR, 1985) e vrias outras espcies (FITZPATRICK, 1976). Em Chthonerpeton indistinctum (BEROIS & DE s, 1988), os corpos adiposos so rgos lobados presentes em ambos os sexos, sendo o nmero de lobos varivel, e que se estendem do fgado cloaca aderidos parede dorso-medial pelo mesentrio. So compostos de tecido adiposo bem desenvolvido e a irrigao sangunea ocorre nos ngulos intercelulares.Em S. fuscovaria, aps observaes nos animais recm-sacrificados, foi constatada a presena de vasos sanguneos percorrendo longitudinalmente toda a extenso dos prolongamentos e a ocorrncia de variao na colorao (do esbranquiado ao amarelo vivo), provavelmente associada com a fase de maturao gonadal. As estruturas denominadas corpos gordurosos ou adiposos, associados s gnadas, so tpicas da classe Amphibia (DUELLMAN & TRUEB, 1986). Constituem a principal fonte de energia lipdica nos anfbios (FITZPATRICK, 1976), embora suas funes ainda no estejam esclarecidas, podendo estar relacionadas com hibernao, servindo de reserva energtica neste perodo (BUSH, 1963). Os corpos adiposos so rgos de reserva nutricional cuja principal funo suprir as gnadas. Os maiores corpos adiposos observados ocorrem em fmeas na poca da desova e podem bem ser um reservatrio de nutrientes. So proporcionalmente muito menores em fmeas com ovos imaturos (NOBLE, 1931). AGOSTINHO (1988) sugeriu que os corpos adiposos, aderidos poro superior dos ovrios, supostamente armazenam energia para ser utilizada durante o acasalamento e como reserva durante o inverno.Suavariao sazonal

182 foi correlacionada com perodos de dormncia durante tempo desfavorvel e com reproduo (produo de gametas e vitelo, atividade de procriao e cuidados com a ninhada) em muitos anfbios, como nos gneros Bufo, Rana, Scaphiopus (FITZPATRICK, 1976). Embora ainda persistam algumas dvidas sobre os aspectos funcionais destas estruturas, seu arranjo estrutural muito semelhante entre as espcies integrantes do mesmo grupo, como constatado para os anuros.

AGRADECIMENTOS
FUNDUNESP pelo auxlio financeiro (proc. 109/94 DFP/F/CBS) e ao CNPq (PIBIC 95/96) pela concesso da bolsa de iniciao cientfica para Umberto J. A. Andrade. Aos Professores Gisele Manganelli Fernandes, Joo Carlos Gonalves e Dra. Nvea Conforti Froes pela colaborao na verso do resumo para lngua inglesa.

REFERNCIAS
AGOSTINHO, CA 1988. Estimativa dos parmetros genticos e fenotpicos de caractersticas de produo em r-pimenta Leptodacty/us /abyrinthicus (Spix, 1824). Dissertao do Curso de Ps-Graduao em Gentica da Universidade Federal de Viosa, para Mestrado em Cincias. Viosa. ALMEIDA, C.G. 1984. Aspectos biolgicos e citogenticos de Hy/a fuscovaria (Amphibia-Anura). Dissertao do Curso de Ps-Graduao em Biologia Celular na Universidade de Campinas, para Mestrado em Cincias. Campinas. BEROIS, N. & DE s, R. 1988. Histology of the ovaries and fat bodies of Chthonerpeton indistinctum. J. Herpetol. 22(2): 146-151. BUSH, F.M. 1963. Effects of light and temperature on the gross composition of the toad, Bufo fowleri. J. Exp. Zool. 153: 1-13. DUBOIS, A.M. 1927. Les corrlations physiologiques entre les glandes gnitales et les corps jaunes chez les batraciens. Rev. Suisse Zool. 34: 499-581. DUELLMAN, W.E. & TRUEB, L. 1986. Biology of amphibians. McGraw-Hill, New York, pp.670. DUMONT, J.N. 1972. Oogenesis in Xenopus laevis (Daudin). I. Stages of oocyte development in laboratory maintained animais. J. Morphol. 136: 153-179. FITZPATRICK, L.C. 1976. Ufe history patterns of storage and utilization of lipids for energy in amphibians. Amer. Zool. 16: 725-732.

183

FRANCHI, L. 1962. The structureof the ovaryvertebrates.In: ZUCKERMAN, S.S. (Ed.). The Ovary. Academic Press, New York, pp.129-131. HERMOSILLA, I.B.; COLOMA, L.S.; WEIGERT, G.T.H.; REYES, E.T. & GOMEZO, V. 1986. Caracterizacion dei ovario de Ia rana Chilena Caudiverbera caudiverbera (Linne, 1758) (Anura, Leptodactylidae). BoI. Soe. Biol. 57: 37-47. HILDEBRAND, M. 1995. Anlise da estrutura dos vertebrados. Atheneu, So Paulo, 700p. HORTON, P. & TYLER, M.J. 1982. The female reproductive system of the Australian gastric brooding frog, Rheobatrachus silus (Anura: Leptodactylidae). Aust. J. Zool. 30: 857-863. HUMPHREY, R.R. 1927. Extirpation of the primordial germ cells of Ambystoma: its effects upon the development of the gonad. J. Exp.Zool. 49: 363-399. KKENTHAL, W.; MATTHES, E. & RENNER, M. 1986.Amphibia.ln: KKENTHAL, W.; MATTHES, E. & RENNER, M. (Eds.). Guia de trabalhos prticos de zoologia. Almedina, Coimbra, p.391-418. KYRIAKOPOULOU-SKLAVOUNOU, P. & LOUMBOURDIS, N. 1990. Annual
ovarian cycle in the frog, Rana ridibunda, in northern Greece.

J. Herpetol.

24(2): 185-191. LOFTS, B. 1974. Reproduction. In: LOFTS, B. (Ed.). Physiology ofthe amphibia. Academic Press, New York, pp.107-218. NOBLE, G.K. 1931. The biology 01 the amphibia. McGraw-Hill, New York, pp.577. PANCHARATNA, M. & SAIDAPUR, S.K. 1985. Ovarian cycle in the frog Rana cyanoph/yctis: a quantitative study of follicular kinetics in relation to body mass, oviduct and fat body cycles. J. Morphol.186(2): 135-147. RASTOGI, R.K.; IZZO-VITIELLO, 1.;DI MEGLlO, M.; DI MATTEO, L.; FRANZESE, R.; DI COSTANZO, M.G.; MINUCCI, S.; IELA, L. & CHIEFFI, G. 1983. Ovarian activity and reproduction in the frog, Rana escu/enta. J. Zool. 200: 233-247. REDSHAW, M.R. 1972. The hormonal control of the amphibian ovary. Am.

Zoologist 12: 289-306.

Recebido em 06/05/97 Aceito em 16/06/97