BIOCOMBUSTIBLES DE LTIMA GENERACIN: ALTERNATIVA AL USO DE BIOCOMBUSTIBLES DE 1ra GENERACIN Y COMBUSTIBLES FSILES

(BIOETANOL DE 2da GENERACIN)

Ponente: Mariano W. Lujn Corro malprice9@gmail.com TRUJILLO- Junio 2013

Universidad Nacional de Trujillo Mariano W. Lujn Corro

El mundo actual gira a torno de la utilizacin de una diversidad de tipos de energas. Para la produccin de stos fundamentalmente se utiliza carburantes (combustibles) de origen fsil. Dado que estos combustibles son limitados y no regenerativos adems de considerar su problemtica ambiental, el mundo cientifico tiene la necesidad y obligacin de buscar nuevas alternativas que sean sostenibles en el tiempo y espacio no slo del punto de vista ambiental sino tambien social y econmico. Una de las posibles altenativas es el uso de biocarburantes!

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La OECD (Organisation for Economic Cooperation and Development) define a los biocarburantes como carburantes slidos, lquidos o gaseosos producidos por conversin de biomasa (OECD, 2002).

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Biocarburantes de primera generacin Biocarburantes de segunda generacin Biocarburantes de tercera generacin Biocarburantes de cuarta generacin

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Son aquellos producidos principalmente de cultivos alimentarios como semillas, caa de azcar y aceites vegetales.
Biodiesel Aceites vegetales puros Bioetanol (de cereales, materias primas azucareras) bio-ETBE (bio-ethyl-ter-butylether) del bioetanol y el biogas.

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El biodisel, que se obtiene a partir de semillas oleaginosas, aceites vegetales usados o grasas de animales, puede emplearse en motores disel en estado puro o mezclado con gasleo convencional en diferentes proporciones. El bioetanol, o alcohol obtenido a partir de material vegetal diverso, puede utilizarse en motores de gasolina convencionales mezclado hasta el 15%. En mayores proporciones (hasta un 85%) slo puede emplearse en vehculos especficos, denominados flex fuel.
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Son muy prometedores por su potencial para reducir los costes de produccin. Se producen a partir de materias primas con coste nulo o reducido pero de elevado potencial, como son los residuos orgnicos y biomasas lignocelulsicas. Cultivos energy crop.
Mejoran prestaciones de los biocarburantes comunes, y se diferencian de ellos principalmente por la tecnologa empleada, ms compleja, la no competicin con cultivos alimenticios y en fase de optimizacin.
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El bioetanol producido a partir de materias primas celulosas, el biohidrgeno, el syngas, los bioaceites, el biometanol, el biobutanol o los biocarburantes sintticos obtenidos a travs de sntesis o de la reaccin de Fischer-Tropsh (diesel sintetico), pertenecen a esta categora. Tambin se incluyen los biocarburantes producidos a partir de microalgas, aunque emplean tecnologas convencionales.

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Estos biocombustibles utilizan mtodos de produccin similares a los de segunda generacin, pero empleando como materia prima cultivos bioenergticos especficamente diseados o adaptados (a menudo por medio de tcnicas de biologa molecular) para mejorar la conversin de biomasa a biocombustible. Un ejemplo es el desarrollo de los rboles bajos en lignina, que reducen los costes de pre-tratamiento y mejoran la produccin de etanol, o el maz con celulasas integradas.

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Llevan a los de tercera generacin un paso ms all. La clave es la captacin y almacenamiento de carbono (CAC), tanto a nivel de la materia prima como de la tecnologa de proceso. La materia prima no slo se adapta para mejorar la eficiencia de proceso, sino que se disea para captar ms dixido de carbono, a medida que el cultivo crece. Los mtodos de proceso (principalmente termoqumicos) tambin se combinan con tecnologas de captacin y almacenamiento de carbono que encauza el dixido de carbono generado a las formaciones geolgicas (almacenamiento geolgico, por ejemplo, en yacimientos petrolferos agotados) o a travs del almacenamiento en minerales (en forma de carbonatos).
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Se cree que los biocombustibles de cuarta generacin contribuyen ms a reducir las emisiones de GEI (gases de efecto invernadero), porque son ms neutros o incluso negativos en carbono si se comparan con los biocombustibles de las otras generaciones. Los biocombustibles de cuarta generacin encarnan el concepto de bioenerga con almacenamiento de carbono.

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Por balance energtico se entiende la relacin entre la energa producida por el biocarburante y la energa utilizada en su proceso productivo. En lnea de principio, mientras ms elevada es sta relacin mayor ser el beneficio energtico que brinda el biocarburante.

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Balance energtico Biocarburantes Sin subproductos* Biodiesel de girasol Biodiesel de colza Aceites vegetales puros de girasol Aceites vegetales puros de colza Bioetanol de remolacha Bioetanol de sorgo azucarero Bioetanol de maz Bioetanol de biomasa lignocelulosica Bio-ETBE de remolacha Bio-ETBE de sorgo azucarero Bio-ETBE de maz Bio-ETBE de biomasa lignocelulosica Biogas
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con subproductos* 3,1 3,0 4,3 3,4 2,2 2,4 2,2-2,5 5,6 1,2 1,7 1,2 1,5 13

2,0 1,7 2,8 1,8 1,1 1,2-1,4 1,0-1,1 1,8 0,8 1,0 0,8 1,1 2,5-6,7
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Producido de la fermentacin de materia prima de naturaleza azucarera o amidacea, derivado de cultivos dedicados. Produccin poco sostenible dado que deriva principalmente de fuentes alimenticias: cereales, caa de azucar, remolacha azucarera, etc. Se produce ya a nivel industrial en muchos pases.
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Pas 1. USA 2. Brasil 3. Cina 4. Unin Europea de ellos: Francia Alemania Espaa Suiza Italia 5. India 6. Canada 7. Sud frica 8. Tailandia 9. Colombia 10. Australia 11. Altros

2008 34 068 24 500 3 800 2 777

2007 24 600 19 000 3 777 2 159

1 000 568 317 78 60 1 900 900 386 340 300 100 100

539 394 348 120 60 1 640 800 330 300 284 100 82
Mariano W. Lujn Corro 53 072

Universidad Nacional de Trujillo Total 69 171

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BIOETANOLO 2 generazione

Obtenido de materia prima lignocelulsica cuyo origen puede ser cultivos dedicados o de biomasa residual (agroforestal, residuos slidos orgnicos urbanos, residuos de la industria alimentaria) Permite reducir la fuerte competicin hacia la produccin alimentaria y zootecnica y de valorizar la m.p. a bajo costo. Actualmente tiene lugar slo sobre escala piloto, dado que an estan en curso de optimizacin las principales fases de produccin.
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MATERIA PRIMA PRE TRATAMIENTO HIDROLISIENZIMTICA FERMENTACIN DESTILACIN

Fermentazione ad opera di S. cerevisiae

DESHIDRATACIN
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Un efecto indeseado del pre-tratamiento es la formacin de subproductos (derivados del furano, cidos orgnicos de bajo peso molecular, compuestos fenlicos), que inhiben la actividad fermentetiva micrbica. Del pre-tratamiento depende el posterior rendimiento de la hidrlisis enzimtica.

Uno de los campos de investigacin sobre el bioetanol de 2da generacin respecta al desarrollo de micrrorganismos tolerantes a inhibidores y dotados de alto poder fermentativo.

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- esenciales: . Capacidad de fermentacion de azucares exosas y si es posible pentosas . Alta capacidad fermentativa . Resistencia a altas concentraciones de etanol . General tolerancia a los procesos industriales

- deseables:
. Fermentacin simultnea de azucares . Reutilizabilidad de la biomasa . Mnima necesidad de nutrientes . Posibilidad de manipulacin genetica.
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Del modelo SHF ------> modelo CBP

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UNIVERSIT DEGLI STUDI DI PADOVA

Dipartimento di Agronomia Animali Alimenti Risorse Naturali e Ambiente

ISOLAMENTO E CARATTERIZZAZIONE DI LIEVITI DOTATI DI NUOVE PROPRIET PER LA PRODUZIONE DI BIOETANOLO DI SECONDA GENERAZIONE

Tesista: Mariano Lujn Relatore: prof. Marina Basaglia Correlatore: dott. Lorenzo Favaro
Anno Accademico 2012-2013
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Il presente lavoro di tesi finalizzato alla selezione di ceppi di lievito S. cerevisiae con caratteristiche idonee al loro utilizzo per la produzione di bioetanolo da matrici lignocellulosiche di scarto. Con caratteristiche:

. Alto vigore fermentativo in presenza di elevate

concentrazioni di glucosio e/o xilosio. . Tolleranza a differenti inibitori (acidi organici e derivati del furano) . Termotolleranza

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ISOLAMENTO DA VINACCIA

IDENTIFICAZIONE DEI CEPPI

VALUTAZIONE DELLE PERFORMANCES

Identificazione mediante sequenziamento ITS

Sac18 rev
18s rDNA
ITS 5.8s ITS

Sac26 rev
26s rDNA
NTS 5s NTS

18s rDNA

Sac18 fw

Sac26 fw

Gen Bank

Piastra YPD

Sospensione Amplificazione cellulare (PCR)

Elettroforesi in Secuanziamento Identificazione gel di agarosio 1% BMR genomics

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Vigore fermentativo
- Valutato per 21 giorni in duplicato determinando il consumo di glucosio di ciascun ceppo a 25C e 40C in due mezzi colturali:
MNS + 200 g/L glucosio MNS + 100 g/L glucosio + 50 g/L xilosio

- Inoculo: pre-coltura overnight in YPD Concentrazione finale 7,5 x106 cellule/ml in bottiglie da 120 ml incubate in condizioni statiche

- Giornalmente (a 2, 7, 14, 21 giorni) stato registrato il calo di peso

dovuto allevoluzione di CO2.

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Tolleranza agli inibitori

(Originati dal pre-trattamento di fonti lignocellulosiche)

Inoculazione in terreno colturale YPD, a concentrazioni crescenti sia di singoli inibitori come dei cocktails di questi. Incubazione 40 h a 30C in shaker orizzontale Misura della densit ottica mediante spettrofotometro.

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Vigore fermentativo: in MNS (Glu200g/l) MNS (Glu 100g/l + Xyl 50g/l) di ceppi di S. cerevisiae incubati a 25C e 40 C

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a)

B4 B5

A12 B6

A16 B8

A1 A10

A2 B15

b)

A20 A5

A7 A11

A15 A10

A8 A12

A4 B14

200

GLS

Consumo glucosio (g/l)

Consumo glucosio (g/l)

25 C

200

40 C

150

150

100

100

50

50

0 0 5 10 15 20

0 0 5 10 15 20

Tempo (giorni)

Tempo (giorni)

VIGORE FERMENTATIVO
c)
B17 A20 B20 B19 A12

d)

B16 A18

A1 A11

A2 A6

A7 A14

A10 B14

Consumo glucosio (g/l)

Consumo glucosio (g/l)

GLS + XYL

B18

A18

B8

A3

A16

100 80 60 40 20 0

25 C

100 80 60 40 20 0

40 C

0 5 Universidad Nacional de Trujillo

Tempo (giorni)

10 15 20 Mariano W. Lujn Corro

10

Tempo (giorni)

34

15

20

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a)
100
Crescita relativa (OD %)

b)
100

c)
100
Crescita relativa (OD %)

d)
100
Crescita relativa (OD %)

Crescita relativa (OD %)

80

80

80

80

60

A7 A10

A9 A17 B1 B14 B18

60

A15 B4

B2 B6 B8 B13 B19

60 A3 40 A12 B2 B12 20 B18 A4 A17 B11 B13 B20

60 A2 40 A4 A6 A8 20 B15 A3 A5 A7 A13 B16

40

A19 B2

40

B7 B12

20 B15 0 0,00

20

B15

1,80

3,60

5,40

7,20

0 0,00

0,61

1,22

1,83

2,44

0 0,00

0,94

1,88

2,81

3,75

0 0,00

0,69

1,39

2,08

2,77

Acido acetico(g/l)

Acido formico (g/l)

HMF(g/l)

Furfurale (g/l)

A12 100
Crescita relativa (OD %)

A17 B5 B7 B17 B19

B2 B6 B8 B18

80

60

40

20

0 0,00

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Sono stati isolati ceppi di S. cerevisiae che potrebbero essere efficientemente utilizzati per la produzione di bioetanolo di seconda generazione. Alcuni ceppi di lievito hanno dimostrato sia notevoli capacit fermentative a 30 e 40C che promettente tolleranza a inibitori. Larricchimento di ceppi di lievito fermentanti e tolleranti ottenuto aggiungendo progressivamente concentrazioni crescenti di inibitori (cocktail A e B) alla vinaccia si rivelato uno strumento molto efficace per selezionare ceppi di S. cerevisiae capaci di tollerare furani e acidi deboli.
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PROSPETTIVE FUTURE
I ceppi di S. cerevisiae pi promettenti verranno valutati in futuro per la capacit di produrre etanolo sia da cocktails di inibitori sia da differenti idrolizzati lignocellulosici. Isolati di lievito con simili caratteristiche costituiscono inoltre un importante punto di partenza verso lo sviluppo di un ceppo CBP per la conversione di matrici lignocellulosiche in etanolo.

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