UNIFESP Disciplina de Reumatologia

Curso de Boas Prticas Laboratoriais

Preparo de solues
parte I I
Silene Peres Keusseyan Abril / 2011

Nenhum trabalho to importante e to urgente que no possa ser planejado e executado com segurana
Protocolo (logstica para seus experimentos) Anote todos clculos e informaes sobre os reagentes todas solues devem estar prontas para o uso pelo menos 1 dia antes doa realizao dos ensaios Preparando solues, determine: - reagentes - segurana (luvas, mscara, etc..) - que gua usar - utenslios plsticos e vidraria - como e onde preparar - como e onde estocar

GUA NO LABORATRIO

gua no Laboratrio
gua com Grau Reagente
Empregada como reagente qumico No preparo de solues para realizao de ensaios clnicos

Processos para obteno de gua com Grau Reagente

1. FILTRAO:
pr-filtros de fibra de vidro ou algodo retm 98% de partculas Pr- filtros de carvo ativado removem grandes quantidades de material orgnico e cloro

2. DESTILAO:
Processo mais antigo de purificao da gua Envolve mudanas de fase: lquida para vapor e vapor para lquida Materiais volteis ficam no frasco de ebulio Remove basicamente sais e outros compostos

3. DEIONIZAO:
Processo usado para produzir solventes Puros (principalmente gua) isentos de ons

A. Resina de troca inica =

polmeros orgnicos derivados de estireno e divinilbenzeno, sob a forma de pequenas partculas esfricas ( <0,5mm) a) catinica = trocam seus ons hidrognio (H+) por contaminantes catinicos b) aninica = trocam seus ons hidroxila (OH+) por contaminantes aninicos

B. Osmose reversa
passagem da gua sob presso atravs de membrana que remove 95 a 97% das substncias orgnicas, bactrias e outras substncias particuladas Remove tambm 90 a 97% de minerais dissolvidos e ionizados
gua (solvente) Aucar (soluto)

Sistema para obteno de gua pura para uso em Laboratrio Combinao de processos:
1. Filtro de carvo ativado para eliminar matria orgnica 2. Deionizador para reter ons 3. Filtro para reter partculas e bactrias

Milli Q

Direct-Q 3 UV

Preciso e exatido

 Exatido
Propriedade do mtodo analtico de fornecer valores muito prximos do valor real da amostra a habilidade que o procedimento analtico tem para fornecer o valor verdadeiro do analito

Preciso
Propriedade do mtodo analtico de fornecer resultados muito prximos entre vrias repeties Concordncia entre medidas repetidas realizadas simultaneamente ou no

Balanas

Balana
Instrumento para medir massa de um corpo = quantidade de matria contida em um corpo = unidade de medida kilograma - Kg) Qualidades de uma balana Sensibilidade e preciso Sensibilidade (d) indica o valor mnimo de massa necessrio para deslocar uma diviso na escala Preciso (e) fornece o desvio dos valores obtidos para a mesma massa

Preciso
ambiente em que se encontra e habilidade do operador correntes de ar variaes de temperatura vibraes resguardar a balana do p e de vapores ou sais corrosivos nunca colocar materiais diretamente no prato da balana = recipientes adequados materiais a temperatura ambiente no final da pesagem limpar a balana e a rea circundante com pano macio ou pincel aps a determinao da massa levar a balana a zero

Balana de Roberval
Inventor Gilles Personne de Roberval matemtico e fsico francs 1669 2 pratos sustentados por uma haste Utilizada principalmente para verificar equilbrio entre tubos para centrifuga com preciso Deve estar no ponto zero de equilbrio antes de se iniciar a medida

Balana eletrnica
Medidas com preciso Prato ou bandeja material a ser pesado Clulas de carga sobre a qual o prato exerce compresso sinal eltrico da compresso microprocessador recebe o sinal eltrico e o interpreta mostrador exibindo a massa calculada Tara = zero Nunca apoiar nada sobre o prato em repouso!

Digimed DG2000 0,5g-2000g e=0,1g e d=0,01g

Marte A500 carga mxima 500g

Balana eletrnica analtica

Usada para se obter massas com preciso e exatido relacionadas com sua localizao = sala de pesagem com uma s entrada, poucas janelas, sem luz solar direta, sem correntes de ar e pouco suscetvel a choques e vibraes Tara = zero Usar para pesar at 1 grama
Mettler Toledo AB 204 e=1mg e d=0,1mg

Cuidados na pesagem
Nvel de bolha circular Esptulas e barquinhas

Como misturar

Misturar corretamente

Velocidade !

Escolha o recipiente correto Adicione aproximadamente 70 - 80% do solvente Utilize bastes de vidro ou plstico para homogeneizar Solues mais concentradas demoram mais para dissolver. agitador magntico e barras magnticas (im) Verifique se a soluo pode ou no ser aquecida S aps acertar o pH complete o volume em frasco com aferio

Vidraria de laboratrio

Becker
usados para preparar solues simples, dissolver diversas substncias slidas vidro borissilicato (mais resistentes ao calor e a maioria dos produtos qumicos) ou plstico variedade de tamanhos e capacidades volumtricas (desde 10mL at vrios litros) lateral com escala graduada que auxilia nas medies mas no precisa indica volume aproximado

Balo de fundo chato

usado para aquecer e preparar solues, realizar reaes com desprendimento de gases (destilao) normalmente de vidro volume varivel, sem preciso

Erlenmeyer
armazenar e misturar solues, cultivo de organismos e tecidos, titulaes vidro ou plstico parede em forma de cone invertido e boca estreita, evita evaporao e respingos escala lateral graduada sem preciso

Balo volumtrico
envolve a medio de determinada quantidade de lquido ou diluio de solues com volumes precisos e exatos - trao de aferio tamanhos variam de 5mL a 10L vidro ou plstico no usado para aquecer substncias

Proveta
plstico ou vidro sua principal caracterstica a presena de escala graduada em toda a sua extenso utilizada para medio de volumes de lquidos, com escala de preciso diferentes volumes e graduaes

Trao de aferio (menisco)

As anlises volumtricas que utilizam balo volumtrico, proveta, pipeta graduada = com linha de aferio, necessitam ateno especial na hora de definir o menisco A superfcie do lquido assume uma forma curva, a que chamamos menisco. medida correta - recipiente em superfcie nivelada parte de baixo do menisco = cncavo tangenciando a linha de graduao

Funil
Usado em transferncias de lquidos e em filtraes de laboratrio

Frascos para reativos

para armazenamento de solues cor mbar (substncias que se decompem em presena da luz) ou brancos Autoclavao (nem todos)

Pipetas

Pipetas graduadas: medio e transferncia rigorosa de volumes lquidos, escalas variveis com preciso

Micropipetas: mono ou multicanal Medir volumes muito pequenos com alta preciso variando de 1L a 1mL

Pipeta Pasteur: quantidades pequenas e sem volume pr-definido

Ponteiras: adequao de volumes, com ou sem filtro, autoclavveis

Acessrios para pipetas

potencial Hidrogeninico

pH potencial hidrogeninico
ndice que indica a acidez, neutralidade ou alcalinidade de um meio qualquer Escala de pH pode variar de zero (cido) a 14 (base)

Medida de pH
Papel tornassol
Fitas indicadoras de pH

Indicadores de pH
Substncias orgnicas com propriedade de mudar de colorao com a variao de pH do meio Ex: meios para cultura de clulas

pHmetro
Aparelho usado na medida de pH Eletrodo + potencimetro Trs pontos de calibrao : 4, 7 e 9 Ajustes com NaOH 1N ou HCl 1N Eletrodo gera leituras em milivolts quando submerso na amostra Milivolts so convertidos para uma escala de pH Eletrodo: mantido em soluo KCl 3M deve ser lavado com dHO e delicadamente seco a cada troca de soluo
MP 225 Mettler Toledo com sensor de temperatura

Eletrodo combinado
Eletrodo indicador (externo) e um eletrodo de referncia (interno) combinados em uma nica unidade A bulbo de vidro = membrana de vidro B tubo com eletrodo interno C eletrodo de prata- cloreto de prata + soluo HCl 0,1M D tubo com eletrodo externo E - eletrodo de prata-cloreto de prata + soluo saturada KCl 3 M Manter imerso em soluo KCl 3M Lavar com dHO secar delicadamente a cada troca de soluo

Etiquetas de identificao
Rtulo, rtulo e rtulo!
Qualquer frasco com qualquer substncia (mesmo gua) deve ser rotulado! Mesmo que voc esteja deixando a bancada por um minuto

GUA DESTILADA 12/04/11 NPS

SOLUO ESTOQUE PBS 0,01M [20X ] 12/04/11 SPK

NaOH 5N 12/04/11 SHR

SOLUO ESTOQUE [5X] TAMPO DE TRANSFERNCIA BLOT 12/04/11 tila Triton X-100 5% em dH2O 12/04/11 SPK

SOLUO DE USO TAMPO TRANSFERNCIA BLOT 12/04/11 tila usado II TRIS-HCl 1M pH 6,8 12/04/11 SHR

Gelatina 1% em PBS 12/04/11 SPK

Diluies

Terminologia
Amostra teste - parte representativa do que ser estudado Amostra padro amostra com composio definida, caracterstica em estudo exatamente conhecida Amostra controle simula a composio qumica e as caracterstica fsico/qumicas das amostras teste, avalia as medidas efetuadas nas amostras teste Analito substncia em anlise nas amostras teste Ex: glicose Soluto e solvente - Uma soluo sempre composta de duas coisas: uma que dissolve, que chamaremos de solvente (Ex: gua, PBS), e outra que dissolvida, que chamaremos de soluto (Ex: sal, soro).

Diluindo

Diluies seriadas
Para reduzir concentraes de um reagente, amostras de cluas, de um padro ou amostra teste Ex: titulao de amostras teste para IFI, reaes de aglutinao e outras Ex: base 10 Tubo 1 diluio 1:10 = 1mL soluto puro + 9mL de solvente (10mL final)= (/10) 0,1mL + 0,9mL (1mL final) = (/10) 0,01mL + 0,09mL (0,1mL ou 100L final) = (x5) 0,05mL + 0,45mL (0,5mL ou 500L final)

1:10
SOLUTO SOLVENTE

Tubo 2 diluio 1:100 = 1mL da diluio 1:10 + 9mL de solvente Tubo 3 diluio 1:1000 = 1mL da diluio 1:100 + 9mL de solvente Tubo 4 diluio 1:10000 = 1mL da diluio 1:1000 + 9mL de solvente

Diluies seriadas
Base 2 ( vol/vol ) = 1:2 = 1+1 = 100L + 100L, etc... Tubo1 diluio 1:10 = 1+9 = 1mL soluto puro + 9mL de solvente (10mL final) Tubo 2 diluio 1:20 = 1mL da diluio 1:10 + 1mL de solvente Tubo 3 diluio 1:40 = 1mL da diluio 1:20 + 1mL de solvente Tubo 4 diluio 1:80 = 1mL da diluio 1:40 + 1mL de solvente Tubo 5 diluio 1:160 = 1mL da diluio 1:80 + 1mL de solvente Tubo 6 diluio 1:320 = 1mL da diluio 1:160 + 1mL de solvente 5mL

Diluies seriadas
Sem base definida Ex: 1:100 = 1 + 99 500 / 100 = 5 diluio base 5 = 1:5 = 1+4 1:500 = ? 1000 / 500 = 2 diluio base 2 = 1:2 = 1+1 1:1000 1:3 1500 / 1000 = 1,5 diluio base 1,5 =1 + 0,5 !!! 1:1500 1:3000 1:4000 OBSERVAR O VOLUME FINAL DESEJADO E OS VOLUMES QUE SERO RETIRADOS PARA REALIZAO DE OUTRAS DILUIES, DEVE SOBRAR O SUFICIENTE PARA UTILIZAR NO ENSAIO

Sugesto de leitura
Na Bancada - Manual de iniciao cientfica em laboratrio de pesquisas biomdicas, Kathy Baker, Editora Artmed, 2002 www.goldanalisa.com.br/.../Garantia_e_Controle_da_Qualidade_no _Laboratorio_Clinico.pdf Homero Jackson Lopes MG, 2003 Boas Prticas de Laboratrio , Maria de Ftima da Costa Almeida, Editora Difuso, 2008

Bom trabalho!