NCLEO

LA PLOIDA
La mayor parte de las clulas son diploides, es decir, poseen dos juegos de cromosomas uno materno y otro paterno. Se expresa como nmero de cromosomas (2n) o cantidad de DNA (2c). la cantidad de DNA se estudia en clulas en metafase con colorantes especficos para cada cromosoma, ya que los cromosomas ya estn formados y son visibles en el microscopio. La ploida indica el nmero de juegos de cromosomas. Las clulas poliploides poseen ms de dos juegos. Los gametos son haploides, es decir, poseen un nico juego de cromosomas, mezcla de maternos y paternos. Una clula diploide humana tiene 46 cromosomas: 44 autosomas y 2 cromosomas. La cantidad de DNA no es constante a lo largo del ciclo celular. As, durante la G1 posee 2c, en la S pasa de 2c a 4c, en la G2 mantiene 4c y en la mitosis se pasa de 4c a dos clulas de 2c. La inmensa mayora de las clulas son mononucleadas y diploides. Hay una reducida poblacin de clulas mononucleadas poliploides, como los hepatocitos que se generan por endorreduplicacin. La encorreduplicacin consiste en que tras la G2 con el DNA duplicado la clula salta a la G1 lo que provoca un aumento de la cantidad de DNA. El ncleo aumenta de tamao y se produce mayor cantidad de RNA. En estas clulas mononucleadas el tamao nuclear depende de la actividad transcripcional y de la ploida (en ambos casos a ms, ms). Tambin hay clulas multinucleadas, que son poliploides como el plasmodio (osteoblastos) por endomitosis o algunas fibras musculares esquelticas por fusin celular. La endomitosis consiste en la realizacin de la mitosis completa con la formacin de los dos ncleos, pero no se produce la citocinesis. Entonces posee dos ncleos pudiendo aumentar. La fusin celular consiste en la unin de varias cluals formando clulas gigantes, pero sin fusionar sus ncleos.

ORGANIZACIN Y FUNCIN DEL NCLEO

Est delimitado por la envoltura nuclear. Contiene la informacin gentica en los cromosomas. Est subdividido en compartimentos nucleares no limitados por endomembranas. Estos compartimentos concentran unas molculas determinadas para aumentar la probabilidad de interaccin entre las molculas. En l se produce la replicacin del DNA y la transcripcin de RNAs. Adems madura y transporta los RNAs. Su maduracin incluye el splicing de los pre-mRNAs que permite eliminar los intrones (regiones que no codifican protenas) y empalmar los exones.

COMPARTIMENTOS DEL NCLEO

Territorio cromosmico: el volumen que ocupa cada cromosoma. Nucleolo: sitio de la biognesis de rRNAs. Cuerpos de Cajal: biognisis de los snRNPs y snoRNPs necesarios para el procesamiento de mRNAs y rRNAs. reas de factores de splicing: depsitos de factores de splicing para el procesamiento de los mRNAs. Fibrillas pericromatnicas: son sitios de transcripcin y procesamiento de los mRNAs. Envoltura nuclear: regula el trfico ncleo-citoplasma.

ENVOLTURA NUCLEAR
Est formada por dos membranas concntricas, interna y externa, que encierran el espacio perinuclear. Est perforada por numerosos complejos del poro nuclear (NPC). En la membrana externa se encuentran ribosomas asociados y casi simpre continua con la membrana del retculo endoplasmtico rugoso. A la membrana interna se asocia la lmina densa nuclear formada por filamentos intermedios de lminas A,B y C. Es bsica para mantener la estructura nuclear.

Las protenas emerina y el receptor de la lmina B conectan la membrana interna con la lmina y con el DNA. Enteraccionan en puntos especficos lo que permite la ordenacin espacial de la cromatina. Posee el receptor para el inositol-3-fosfato (I3PR), que es una protena canal de Ca2+. Cuando se recibe el Ca2+ se activan los genes dependientes de l.

COMPLEJO DEL PORO NUCLEAR

El complejo del poro nuclear es un punto de gran actividad para el movimiento de RNA y protenas en ambas direcciones entre los compartimentos que separa. El nmero de poros nucleares oscila de 6 a 50 por m2, dependiendo de la actividad celular. El NPC est formado por 2 anillos, nuclear y citoplasmtico de ocho subunidades cada uno, ocho radios centrales y 8 columnas. Del anillo citoplasmtico se proyectan las fibrillas citoslicas, y del nuclear la cesta del NPC que son proyecciones hacia el centro no siempre constantes. El NPC tiene numerosas protenas denominadas nucleoporinas. Las nucleoporinas del canal central del NPC tienen repeticiones de los aminocidos fenilalanina y glicina (FG) que son sitios de interaccin con las importinas. El NPC regula el transporte ncleo-citoplasma.

TRANSPORTE NCLEO-CITOPLASMO DE PROTENAS

Los iones y pequeas molculas, menores de 5 kD, difunden por el NPD. Las protenas menores de 40kD se transportan libremente, pero las de mayor peso necesitan de poseer una secuencia de localizacin nuclear (NLS) consistente en Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val.

IMPORTACIN NUCLEAR DE PROTENAS

La NLS interacciona con la importina . En una segunda etapa, este complejos se une a la importina . El complejo protena-importina- / es reconocido por los dominios FG de las nucleoporinas y transportado a travs del NPC. La interaccin del complejo y Ran-GTP libera la protena en el nucleoplasma. Ran-GTP/importina se exporta y, en las fibras citoslicas, RanGTP se hidroliza a Ran-GDP (Ran-GAP).

EXPORTACIN NUCLEAR DE PROTENAS

Para la exportacin nuclear, las protenas tienen una secuencia de exportacin nuclear (NES) que interacciona con una exportina. A este complejo se une Ran-GTP que induce la translocacin. La hidrlisis de la Ran-GTP a Ran-GDO, mediada por la Ran-GAP de las fibrillas citoslicas, libera a la protena en el citosol.

TERRITORIOS CROMOSMICOS
El territorio cromosmico es el volumen que ocupa cada cromosoma. Estructuralmente corresponde a dominios de cromatina. La cromatina es un complejo de DNA, histonas y otras protenas asociadas. Hay una distribucin ordenada y no aleatoria. Hay interacciones entre los cromosomas que modula la expresin de genes. La cromatina tiene dominios de heterocromatina (cromatina condensada) y eucromatina ( cromatina descondensada), que dependen del nivel de plegamiento de la molcula de DNA. El DNA de la heterocromatina est reprimido y no se transcribe. El DNA de la eucromatina es activo o inducible para la transcripcin. Hay dos tipos de heterocromatina: facultativa, que posee genes que no se expresan (reprimidos) y cosntitutiva, que es DNA no codificante del telmero y el centrmero del cromosoma condensado. Cuanto mayor sea la cantidad de eucromatina mayor ser la actividad transcripcional de la clula.

NIVELES DE PLEGAMIENTO DEL DNA

Hay diferentes niveles: un primer nivel formado por el filamento de DNA desnudo de 2 nm, un segundo nivel consistente en la cadena polinucleosomal de 10nm, tambin llamado collar de perlas. Aproximadamente, por cada 200 pares de nucletidos se asocia una partcula, al nucleosoma, el DNA desnudo para formar la cadena polinucleosomal.

Cada nucleosoma est formado por ocho histonas: dos de cada una de las siguientes: H2A, H2B, H3 y H4. Las histonas son protenas bsicas que forman un enlace muy fuerte con los grupos fosfato del DNA. El tercer nivel se compone de la fibra cromatnica de 30nm. El plegamiento helicoidal o en zigzag de la cadena polinucleosomal origina la fibra cromatnica. La histona H1 induce el plegamiento. En el cuarto nivel, las fibras cromatnicas se pliegan y compactan en la heterocromatina. La histona H1 y la protena HP1 (heterochromatin Protein 1) son esenciales para estabilizar la heterocromatina.

TRANSCRIPCIN
Las marcas de las histonas regulan la transcripcin. La acetilacin de lisinas en las histonas H3 y H4 favorece la transcripcin porque se produce un remodelamiento de la cromatina. La tri-metilacin de lisinas en las histonas H3 y H4 es caracterstica de la heterocromatina y se asocia a represin transcripcional.

FIBRILLAS PERICROMATNICAS
Los trnscritos primarios (pre-mRNAs) asociados con protenas forman complejos de RNPs denominados fibrillas pericromatnicas. Las fibrillas pericromatnicas se visualizan como estructuras fibrilares muy sutiles asociadas a sitios activos en transcripcin.

LA PROGERIA
Es una patologa de la lmina densa nuclear que provoca una malformacin de la envoltura nuclear. Esto provoca un envejecimiento precoz, conocido como el sndrome de Hutchinson-Gilfor.

REAS DE FACTORES DE SPLICING

Dominios que concentran factores de splicing. Cada rea est formada por agregado de granualciones intercromatnicas de 25nm. Concentran dos tipos factores de splicing: snRNPs y protenas SR (serina/arginina). No son sitios transcripcin y carecen de DNA. Almacenan factores de splicing para su distribucin a los sitios de transcripcin. En los sitios transcripcin, los factores de splicing se ensamblan en el espliceosoma. un de de de

CUERPO NUCLEAR DE CAJAL

Fue descubierto por Cajal en 1903 en diferentes tipos de neuronas y utilizando un mtodo de tincin con nitrato de plata. Cajal lo bautiz con el nombre de cuerpo accesorio del nucleolo. Se localiza libre en el nucleoplasma y asociado al nucleolo. Est formado por hebras densas arrolladas embebidas en una matriz amorfa. Concentra una protena estructural que sirve de marcador, la coilina, una protena nucleolar, la fibrilarina, el factor de superviviencia de las neuronas motoras (SMN), snRNPs espliceosomales y snoRNPs. No es un sitio de transcripcin, carece de DNA, pero su formacin es dependiente de transcripcin (cuantos ms cuerpos haya, mayor es la actividad transcripcional). Est implicado en la biognesis de snRNPs y snoRNPs necesarias para el procesamiento de pre-mRNAs y pre-rRNAs, respectivamente. La mutacin o deleccin del gen SMN produce la atrofia muscular espinal (impide el desarrolllo de la caja torcica y de los pulmones), la principal causa de enfermedad de mortalidad en la infancia de base gentica.

NUCLEOLO
El nucleolo es el sitio de transcripcin de los genes ribosomales: sintetiza los rRNAs 28S, 18S y 5,8S. Las clulas diploides humanas tienen aproximadametne 400 copias de genes ribosomales (70% es rRNA). Los genes ribosomales se localizan en las regiones organizadoras nucleolares (NORs) de los cromosomas (10 en clulas humanas). Un NOR es un segmento del cromosoma que contiene mltiples copias de genes ribosomales ordenados en tndem. Los genes ribosomales activos de varios NORs convergen en el nucleolo. Los inactivos quedan atrapados en la heterocromatina.

ESTRUCTURA DEL NUCLEOLO

El nucleolo tiene 4 componentes estructurales: centros fibrilares (CF), componente fibrilar denso (CFD), componente granular (CG) e intersticios nucleolares. Los CFs son reas circulares fibrilares y de baja densidad electrnica. Concentran RNA plimerasa I, DNA topoisomerasa que desenrolla la doble hlice y UBF (upstream binding factor) que promueve la sntesis de rRNA. El CFD rodea a los CFs, contiene los genes ribosomales, la maquinaria de transcripcin activa y fibrilarina. Acumula el rRNA primario 45S. El CG est formado por partculas de RNPs en las que los rRNAs 28S, 18S, 5,8S y 5S se ensamblan con protenas ribosomales para formar las subunidades de los ribosomas. Adems, concentra la protena B23.

TRANSCRIPCIN DE LOS GENES RIBOSOMALES

Cada gen ribosomal codifica los rRNAs 18S, 5,8S y 28S. La transcripcin produce un trnscrito primario 45S que contiene las secuencias de los diferentes rRNAs. Cada gen activo transcribe mltiples copies de rRNA 45S simultneamente, lo que produce la imagen de Christmas tree de la transcripcin nucleolar. La transcripcin est gobernada por la RNApolimerassa I y el factor de transcripcin UBF. Ocurre en el CFD. En el CDF el rRNA 45S sufre modificaciones de metilacin y pseudouridinacin dirigidas por snoRNPs. Adems, el rRNA 45S se corta para generar los rRNAs 18S, 5,8S y 28S que se transfieren al CG. En el CG se incorporan el rRNA 5S, que se produce en la eucromatina. Los 4 tipos de rRNAs se ensamblan con protenas ribosomales, un proceso regulado por la B23 que es una chaperona.

NMERO Y TAMAO DEL NUCLEOLO

La mayor parte de las clulas diploides humanas de 1 a 3 nucleolos debido a la convergencia de los NORs en el espacio. Durante la diferenciacin se produce una reduccin del nmero de nucleolos. Las clulas tumorales se desdiferencian y tienen mltiples nucleolos. El tamao del nucleolo reflaja la tasa de snteisis y procesamiento de rRNAs. Los Cfs, con la cpsula de CFD que los rodea, se comportan como factoras de transcripcin nucleolar. Su nmero se relaciona con la actividad transcripcional. Tras la mitosis en G1 hay muchos nucleolos pequeos, pero seguido los NOR convergen en el espacio formndose entre uno y tres nucleolos.

MONORRIBOSOMAS
Algunas clulas como los linfocitos, tienen ribosomas aislados llamados monomricos o monorribosomas que no se ensamblan al mRNA. En ausencia de mRNA, los monorribosomas son inactivos en traduccin. Los monorribosomas representan una maquinaria inactiva, pero preparada para su rpida activacin, o reflajan un proceso de degeneracin celular.