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COMPLEXO PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDADE (MHC) E RECEPTORES DE CLULA T PAPEL NAS RESPOSTAS IMUNES

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IMUNOLOGIA CAPTULO DEZ COMPLEXO PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDADE (MHC) E RECEPTORES DE CLULA T PAPEL NAS RESPOSTAS IMUNES
Dr Gene Mayer
Traduo: PhD. Myres Hopkins

LEITURA Male et al. Immunology 7th edio captulo 5 OBJETIVOS

Fornecer uma viso geral do papel do complexo principal de histocompatibilidade nas respostas imunes. Descrever a estrutura e funo das molculas de MHC classe I e II. Discutir a natureza dos polimorfismos nas molculas de MHC de classe I e II. Descrever a estrutura do receptor para antgenos em clula T. Discutir a base gentica da gerao da diversidade de TCR. Discutir o papel do complexo CD3 e molculas coestimuladoras. Descrever a natureza da sinapse imunolgica.Discutir os requisitos para a ativao da clula T.

I. RESENHA HISTRICA
Produtos gnicos codificados no Complexo Principal de Histocompatibilidade foram inicialmente identificados como sendo importantes na rejeio a tecidos transplantados. Alm disso, genes no MHC foram considerados altamente polimrficos (i.e. na populao existem muitas formas allicas diferentes dos genes). Estudos de endocruzamento em camundongos mortraram que genes no MHC tambm estavam envolvidos no contrle tanto da respostas imune humoral como resposta na mediada por clulas. Por exemplo, algumas linhagens de camundongos podiam responder a um antgeno particular mas outras linhagens no e essas linhagens diferiam somente em um ou mais genes do MHC. Estudos subsequentes mostraram que existiam dois tipos de molculas codificadas pelo MHC: Molculas de classe I e de classe II. Molculas de classe I foram encontradas em todas a clulas nucleadas (no em clulas vermelhas do sangue) enquanto que molculas de classe II foram encontradas somente nas clulas apresentadoras de antgenos (APCs), que incluem clulas dendrticas, macrfagos, clulas B e alguns outros tipos (Figura 1). Somente aps a descoberta de como o receptor de clula T (TCR) reconhece o antgeno que o papel dos genes de MHC na resposta imune foi compreendido. Foi demonstrado que o TCR reconhece peptdios antignicos em associao com molculas de MHC. Clulas T reconhecem pores de protenas antignicas que so ligadas covalentemente a produtos dos genes de MHC. Clulas T citotxicas (Tc) reconhecem peptdios ligados a molculas de MHC classe I e clulas T auxiliares (Th) reconhecem peptdios ligados a molculas de MHC classe II. As estruturas tridimencionais das molculas de MHC e TCR foram determinadas por cristalografia de raios X de forma que pudemos ter uma viso clara de como os produtos de genes de TCR, MHC e antgeno interagem.

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Figura 1 Distribuio das molculas de MCH classe I e II nas

II. ESTRUTURA DE MOLCULAS DE MHC CLASSE I

As molculas de MHC classe I so compostas de duas cadeias polipeptdicas: Uma longa cadeia e uma
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classe I e II nas clulas humanas

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As molculas de MHC classe I so compostas de duas cadeias polipeptdicas: Uma longa cadeia e uma curta cadeia chamada 2-microglobulina (figura 2). A cadeia tem quatro regies: Primeiro, uma regio citoplasmtica, contendo stios de fosforilao e de ligao a elementos do citoesqueleto. Segundo, uma regio transmembrana contendo aminocidos hidrofbicos pelos quais a molcula ancorada na membrana celular. Terceiro, um domnio altamente conservado tipo imunoglobulina 3 ao qual se liga CD8. Quarto, uma regio de ligao a peptdio altamente polimrfica formada a partir dos domnios 1 e 2. A 2microglobulina se associa com a cadeia e auxilia a manter a conformao apropriada da molcula. . Uma anlise de qual parte das molculas de MHC classe I mais varivel demonstra que a variabilidade mais pronunciada nos domnios 1e 2, que compreende a regio de ligao ao peptdio (Figura 3). A estrutura da fenda de ligao, revelada pela cristalografia de raios X, mostra que composta de duas helices formando uma parede de cada lado e oito lminas de folha-beta formando um assoalho. O peptdio ligado no interior da fenda e os resduos que a cobrem fazem contato com o peptdio (Figura 4). Esses so os resduos que so mais polimrficos. A fenda ir acomodar peptdios com comprimento de aproximadamente 8-10 aminocidos. Se um peptdio em particular vai ligar ou no fenda vai depender dos aminocidos que cobrem a fenda. Devido ao fato de molculas de classe I serem polimrficas, molculas de classe I diferentes se ligaro a peptdios diferentes. Cada molcula de classe I ir se ligar somente a certos peptdios e haver um conjunto de requisitos que o peptdio deve cumprir para se ligar fenda. Por exemplo, Figura 5 mostra que uma molcula de classe I ir se ligar a peptdios que tenham uma leucina (L) como aminocido no terminal carboxlico e tirosina (Y) ou fenilalanina (F) como 4 aminocido a partir do terminal carboxlico. Se essas duas condies so cumpridas um peptdio ir se ligar, independentemente de quaisquer que sejam os outros aminocidos. Similarmente uma molcula de classe I diferente ir se ligar a qualquer peptdio que tenha uma tirosina (Y) como segundo aminocido a partir do terminal amnico e uma valina (V), isoleucina (I) ou leucina (L) no terminal carboxlico (Figura 5). Assim, para cada molcula de classe I h certos aminocidos que precisam estar em locais determinados no peptdio para se ligar molcula de MHC. Essas regies no peptdio so chamadas de regies de ancoragem. No MHC h 6 genes que codificam molculas de classe I: HLA-A, HLA B, HLA-C, HLA-E, HLA-F e HLA-G. Entre estas HLA-A, HLA B e HLA-C so as mais importantes e so as mais polimrficas. A tabela 1 mostra o grau de polimorfismo em cada um desses loci.

Figura 2
A molcula de MHC classe 1 tem trs domnios globulares: alfa 1 (amarelo), alfa 2 (verde) e alfa 3 (azul). O domnio alfa 3 estreitamente associado com com a molcula no codificada pelo MHC beta 2 microglobulina (rosa). Esta ltima estabilizada pela ponte dissulfeto (vermelha) e semelhante a um domnio de imunoglobulina na estrutura tridimensional. Os stios aloantignicos que carreiam determinantes especficos para cada indivduo esto nos domnios alfa 1 e 2. O ltimo tambm tem uma cadeia de carboidrato (azul, CHO). Existe um fosfato no domnio citoplasmtico. Papana cliva prximo da superfcie externa da membrana plasmtica.

Figura 3 A maior parte da variabilidade de aminocidos em

Figura 4 posies diferentes a. Fenda de ligao ao peptdio de molculas de MHC classe I. ao longo da cadeia b. Fenda ressaltando resduos altamente variveis. Os resduos variveis se aglomeram em volta do bolso de alfa de molculas de ligao do peptdio. MHC classe I ocorre nas regies alfa 1 e alfa 2. O maior polimorfismo encontrado em Figura 5 aminocidos que Regies de ancoragem em peptdios que se ligam a molculas de MHC classe I (adaptado de Janeway et al. limitam a parede e o Imunobiologia 6th Edition). assoalho da fenda que liga os peptdios.

CHIME Tabela 1. Polimorfismo de genes de MHC classe I Locus

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Nmero of alelos (alotipos) 218

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HLA-A

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Apresentao do Chime mostrando as regies de variabilidade de molculas de MCH I e a interao da cadeia alfa com outras sub-unidades do complexo MHC I e o peptdio ligado (requer plugin
do Chime. Baixe o Chime aqui)

HLA-A HLA-B

218 439 96

HLA-C HLA-E, HLA-F e HLA-G

Relativamente poucos alelos

Figura 6 Molculas de
MHC classe II compreendem dois peptdios no idnticos (alfa e beta) que so associados no covalentemente e atravessam a membrana plasmtica com o terminal N para fora da clula. Os domnios mais prximos da membrana em cada cadeia esto relacionados estruturalmente com imunoglobulinas. Com a exceo do domnio alfa 1, todos os domnios so estabilizados por pontes de sulfeto (vermelho). Ambas as cadeias alfa e beta so glicosiladas. A cadeia beta mais curta do que a cadeia alfa (MW de beta = 28,000) e contm os stios aloantignicos. H algum polimorfismo na cadeia alfa de algumas molculas de MHC II

III. ESTRUTURA DE MOLCULAS DE MHC CLASSE II

Molculas de MHC classe II so compostas de duas cadeias polipeptdicas uma e uma de tamanho aproximadamene igual (Figura 6). Ambas as cadeias tm quatro regies: primeiro, uma regio citoplasmtica contendo regies de fosforilao e elementos de ligao ao citoesqueleto; segundo, uma regio transmenbrana contendo aminocidos hidrofbicos pelos quais a molcula ancorada na membrana celular, terceiro, um domnio 2 altamente conservado e um domnio 2 altamente conservado ao qual se liga CD4, e uma regio de ligao a peptdio altamente polimrfica formada pelos domnios 1 e 1. Assim como no caso das molculas de MHC Classe I, uma anlise de qual parte das molculas de MHC classe II mais varivel demonstra que a variabilidade mais pronunciada nos domnios 1 e 1, que compreende a regio de ligao ao peptdio (Figura 7). A estrutura da fenda de ligao ao peptdio, revelada por cristalografia de raios X, mostra que, como nas molculas de MHC classe I, a fenda composta de duas helices formando uma parede de cada lado e oito oito lminas de folha-beta formando um assoalho. Ambas as cadeias 1 e 1 contribuem para a estrutura da fenda de ligao ao peptdio. O peptdio se liga fenda e os resduos que cobrem a fenda fazem contato com o peptdio. Esses so os resduos que so mais polimrficos. A fenda de molculas de Classe II aberta em um dos lados de forma que esta pode acomodar peptdios mais longos de aproximadamente 13-25 aminocidos com alguns dos aminocidos localizados do lado de fora da fenda. Se um peptdio particular ir ligar fenda ou no vai depender dos aminocidos que cobrem a fenda. Devido ao fato de que molculas de classe I so polimrficas, diferentes molculas de classe II iro ligar diferentes peptdios. Assim como no caso das molculas de classe I, cada molcula de classe II ir ligar somente certos peptdios e haver um conjunto de critrios que um peptdio deve cumprir para se ligar fenda ( (i.e. regies de ancoragem). No MHC h 5 loci que codificam molculas de classe II, cada um deles contendo um gene para uma cadeia e pelo menos um gene para uma cadeia . Os loci so designados como HLA-DP, HLA DQ, HLA-DR, HLA-DM, e HLA-DO. Dentre esses, HLA-DP, HLA DQ, e HLA-DR so os mais importantes e os mais polimrficos. Tabela 2 mostra o grau de polimorfirmo de cada um desses loci.

Figura 7
O maior polimorfismo de cadeia beta de molculas de MHC classe II encontrado entre os aminocidos na regio de beta 1 que cobre a parede e o assoalho da fenda que liga o peptdio.

IV. IMPORTANT ASPECTS OF MHC

A. Although there is a high degree of polymorphism for a species, an individual has maximum of six different class I MHC products and only slightly more class II MHC products (considering only the major loci). B. Each MHC molecule has only one binding site. The different peptides a given MHC molecule can bind all bind to the same site, but only one at a time. C. Because each MHC molecule can bind many different peptides, binding is termed degenerate. D. MHC polymorphism is determined only in the germline. There are no recombinational mechanisms for generating diversity. E. MHC molecules are membrane-bound; recognition by T cells requires cell-cell contact.
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E. MHC molecules are membrane-bound; recognition by T cells requires cell-cell contact.

F. Alleles for MHC genes are co-dominant. Each MHC gene product is expressed on the cell surface of an individual nucleated cell. G. A peptide must associate with a given MHC of that individual, otherwise no immune response can occur. That is one level of control. H. Mature T cells must have a T cell receptor that recognizes the peptide associated with MHC. This is the second level of control. I. Cytokines (especially interferon-) increase level of expression of MHC. J. Peptides from the cytosol associate with class I MHC and are recognized by Tc cells. Peptides from within vesicles associate with class II MHC and are recognized by Th cells. K. Polymorphism in MHC is important for survival of the species.

Tabela 2. Polimorfismo de genes de MHC classe II Locus Nmero de alelos (alotipos) 12 88 17 42 2 269 30 7 12 Relativamente poucos alelos

HLA-DPA HLA-DPB HLA-DQA HLA-DQB HLA-DRA HLA-DRB1 HLA-DRB3 HLA-DRB4 HLA-DRB5 HLA-DM e HLA-DO

V.

ESTRUTURA DO RECEPTOR DE CLULA T (TCR)

O TCR um heterodmero composto de uma cadeia e uma de aproximadamente igual tamanho (Figura 8). Cada cadeia tem uma cauda citoplasmtica curta mas de tamanho suficiente para transduzir um sinal de ativao para a clula. Ambas as cadeias tm uma regio transmembrana que compreende os aminocidos hidrofbicos pelos quais a molcula ancorada na membrana celular. Ambas as cadeias tm uma regio constante e uma regio varivel semelhante s cadeias de imunoglobulina. A regio varivel de ambas as cadeias contm regies hipervariveis que determinam a especificidade para o antgeno. Cada clula T carrega um TCR de uma nica especificidade (i.e. h excluso allica). A base gentica para a gerao da grande variedade de receptores de antgenos nas clulas B foi discutida anteriormente (veja aula sobre gentica das Ig). A gerao da grande variedade de TCRs conseguida por mecanismos similares. Os genes da linhagem germinaativa para os genes de TCR so compostos de segmentos gnicos V, D e J que se rearranjam durante o desenvolvimento da clula T para produzir muitas cadeias de TCR diferentes (Figura 9). Os genes da linhagem germinativa para cadeia de TCR so compostos de segmentos V e J que se rearranjam para produzir as cadeias . A especificidade do TCR determinada pela combinao de cadeias e . H uma pequena populao de clulas T que expressam TCRs que tm cadeias e ao invs de cadeias e . Essas clulas gama/delta predominam no epitlio de mucosas e tm um repertrio tendencioso para antgenos bacterianos e virais. Os genes para cadeias tm segmentos gnicos V, D e J enquanto que genes para cadeias tm apenas segmentos V e J mas o repertrio consideravelmente menor do que o das clulas alfa/beta. As clulas gama/delta reconhecem antgenos de maneira MHC-independente, ao contrrio das clulas T alfa/beta.

Figura 8
O heterodmero receptor de clula T compreende duas glicoprotenas transmembrana e as cadeias alfa e beta. H dois domnios na parte externa de cada cadeia e estas se parecem com as regies variveis e constantes da imunoglobulina. H cadeias de acares em cada domnio. H uma pequena sequncia semelhante regio de dobradia que conecta os domnios tipo domnio de imunoglobulina

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sequncia transmembrana. Esta contm cistenas que formam uma ponte dissulfeto. As estruturas helicoidais hidrofbicas transmembrana so peculiares por conterem aminocidos carregados positivamente (aminocidos bsicos). A cadeia alfa tem dois resduos carregados positivamente enquanto a cadeia beta tem um.

TABELA 3 COMPARAO ENTRE AS PROPRIEDADES PRINCIPAIS DOS GENES E PROTENAS DA IMUNOGLOBULINA (Ig) E DOS RECEPTORES DE CLULAS T (TCR) GENES

Propriedades Muitas VDJs, Poucas C's Rearranjo VDJ Pares V formam regio de reconhecimento antignico

Ig Sim Sim Sim Sim PROTENAS

TCR Sim Sim Sim No

Estrutura de receptor de clula A6-T ligado a molcula de MHC classe I complexada com um peptdio alterado Htlv-1 Peptdio Tax Y8a. O peptdio HIV mostrado em cinza. A molcula de MHC classe I est em azul escuro, a microglobulina beta 2 associada est em azul claro. O receptor de clula T est em verde e amarelo. Y. H.Ding, B. M.Baker,
D. N.Garboczi, W. E.Biddison & D. C.Wiley MMDB Id: 11766 PDB Id: 1QSF Imagem preparada usando RasMol

Hipermutao somtica

Formas transmembrana Formas secretoras Isotipos com funes distintas Valncia

Sim Sim Sim 2

Sim No No 1

Adaptado de Janeway e Travers, Imunobiologia

Figura 9
Rearranjo dos genes de cadeia beta de TCR

CHIME
Estrutura cristalina de um complexo de um receptor de clula T humana, peptdio antignico de influenza Ha e uma Molcula de MHC Classe II. As cadeias alfa e beta das molculas de MHC II esto em azul escuro e claro. O receptor de clula T est em amarelo e verde. O peptdio de influenza est em cinza.
Hennecke, J., Carfi, A., Wiley, D.

CHIME

Clique na imagem acima para ver a estrutura rotatria e Clique na imagem acima para ver a estrutura rotatria e identificar cadeias de protenas do MHC I e TCR identificar cadeias de protenas do MHC II e TCR interagindo com o peptdio do HTLV tax (requer plugin Chime. interagindo com o peptdio do HA (requer plugin Chime. Baixe o
Baixe o Chime aqui) Chime aqui)

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C. MMDB Id: 14648 PDB Id: 1FYT. Imagem preparada usando RasMol

Figura 10
O receptor de antgenos de superfcie de clula T compreende oito protenas. (a) Duas cadeias do receptor de clula T ligadas por pontes dissulfeto que formam um heterodmero. Estas reconhecem peptdios associados com molculas de MHC. (b) Quatro cadeias coletivamente denominadas de CD3, que se associam com o dmero receptor de clula T e participam no seu transporte superfcie da clula. O complexo CD3 junto com as cadeias zeta, que formam um heterodmero, tranduzem o sinal depois que o antgeno ligado.

VI. COMPLEXO TCR E CD3

O TCR est ntimamente associado com um grupo de 5 protenas coletivamente chamadas de complexo CD3 (Figura 10). O complexo CD3 composto de uma cadeia , uma , duas e 2 . Todas as protenas do complexo CD3 so invariantes e elas no contribuem para a especificidade de jeito nenhum. O complexo CD3 necessrio para a expresso na superfcie celular do TCR durante o desenvolvimento da clula T. Alm disso, o complexo CD3 transduz sinais de ativao para a clula aps a interao do antgeno com o TCR.

VII. A SINAPSE IMUNOLGICA

A interao entre o TCR e molculas de MHC no muito forte. Molculas acessrias so necessrias para ajudar a estabilizar a interao (Figura 11). Estas incluem: 1) CD4 ligando-se a MHC de Classe II, que assegura que clulas Th somente interajam com APCs; 2) CD8 ligando-se a MHC classe I, que assegura que clulas Tc possam interagir com clulas alvo; 3) CD2 ligando-se a LFA-3 e 4) LFA-1 ligando-se a ICAM-1. As molculas acessrias so invariantes e no contribuem para a especificidade da interao, que apenas determinada pelo TCR. A expresso de molculas acessrias pode ser aumentada em resposta a citocina, que uma maneira pela qual citocinas modulam as respostas imunes. Alm das molculas acessrias que ajudam a estabilizar a interao entre o TCR e antgeno em associao com molculas de MHC, outras molculas so tambm necessrias para a ativao de clulas T. Dois sinais so necessrios para a ativao de clulas T um a unio do TCR com Ag/MHC e o outro sinal vem da unio de molculas co-estimulatrias com seus ligantes. Uma das mais importantes (mas no a nica) molcula co-estimulatria CD28 em clulas T que precisam interagir com B7-1 (CD80) ou B7-2 (CD81) em APCs . Assim como nas molculas acessrias, as molculas co-estimulatrias so invariantes e no contribuem para a especificidade da interao. As interaes mltiplas do TCR com Ag/MHC e as molculas acessrias e co-estimulatrias com seus ligantes tm sido denominadas de sinapse imunolgica. A co-estimulao no somente necessria para a ativao das clulas T. Uma falta de coestimulao pode resultar em anergia (i.e., inabilidade de responder a antgeno) ou regulao negativa da resposta. Figura 12 mostra os possveis resultados de uma clula T recebendo um ou ambos os sinais necessrios para a sua ativao. A unio do TCR com Ag/MHC em condies de no coestimulao leva anergia. A unio somente da molcula co-estimulatria no tem efeito. A unio do TCR com Ag/MHC e as molculas co-estimulatria com seus ligantes leva ativao. A unio do TCR com Ag/MHC e a unio do ligante B7 com CTLA-4, molculas similares a CD28, levam regulao negativa da resposta. A interao CTLA-4/B7 envia um sinal inibidor clula T ao invs de um sinal ativador. Esta uma das maneiras pelas quais as respostas imunes so reguladas. CTLA-4 expressa nas clulas T mais tarde em uma resposta imune e isso ajuda a desligar a resposta.

Figura 11 A. Molculas envolvidas na interao entre clulas T e clulas apresentadoras de antgeno. Algumas citocinas produzidas por cada clula so mostradas

B. Ligantes envolvidos na interao de clulas T citotxicas e suas clulas-alvos.

VIII. ETAPAS CHAVE DA ATIVAO DE CLULAS T

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A. APC deve processar e apresentar peptdios s clulas T B. Clulas T devem receber um sinal co-estimulador usualmente vindo de CD28/B7 C. Molculas acessrias de adeso devem auxiliar a estabilizar a ligao de clulas T e APC (CD4/MHC classe II, CD8/MHC classse I, LFA-1/ICAM-1 e CD2/LFA-3) D. Sinais de superfcie celular devem ser transmitidos para o ncleo via mensageiros secundrios. E. Citocinas, incluindo IL-2, ajudam a dirigir a diviso celular

TABELA 4 MOLCULAS ACESSRIAS IMPORTANTES Molcula de clula T CD4 em clulas T auxiliares Figura 12 Molculas envolvidas na interao entre clulas T e clulas apresentadoras de antgeno. Algumas citocinas produzidas por cada clula so mostradas CD8 em clulas T citotxicas LFA-2 (CD2) LFA-1 Ligante na segunda clula Molculas de MHC classe II Molculas de MHC classe I LFA-3 ICAM-1, ICAM-2

LFA = Antgeno associado a funo leucocitria ICAM = Molcula de adeso intercelular

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