Biofisica4 Fis

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J
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.
Biofsica
Modelos de membranas e potencial de membrana
Prof. Dr. Walter F. de Azevedo Jr.
A principal funo da membrana celular manter, de forma seletiva,
molculas to diversas como protenas e pequenos solutos no interior da
clula. A membrana funciona de forma eficiente para regular seletivamente
sua permeabilidade, ou seja, a facilidade com a qual molculas e ons
atravessam a membrana. A composio da membrana celular tem sido
estudada de forma intensa nas ltimas dcadas. Tais estudos fazem uso
de diversas tcnicas e mtodos fsicos, discutiremos a seguir os principais
modelos da membrana celular. No livro clssico de Oparin, A Origem da
Vida, ele props que para qualquer forma de vida necessrio a presena
de uma barreira fsica, que separe a parte viva do meio que a cerca. Este
trabalho destaca a necessidade de uma membrana para isolar, at mesmo
as formas de vida mais simples, do meio exterior.
Modelos de membrana celular
O modelo de bicamada lipdica para membrana celular foi proposto
originalmente por Gorter & Grendel em 1925, o estudo de eritrcitos indicou
que o contedo lipdico das membranas ocupava uma rea duas vezes
maior que a superfcie da clula. Neste estudo os autores detalhavam a
retirada dos lipdios das membranas dos eritrcitos, usando-se acetona
como solvente. A soluo contendo lipdio era colocada numa cuba com
gua. A rea total ocupada pelo lipdio foi determinada usando-se uma
barreira mvel inserida na cuba, tal barreira juntava toda superfcie onde
estava o lipdio, como mostrado no diagrama esquemtico a seguir. A rea
total do filme de lipdio, sobre a superfcie da gua, era aproximadamente
igual ao dobro da rea do eritrcito. Tal observao levou hiptese da
bicamada lipdica, com uma parte polar voltada para os meios intra e extra
celular e a parte hidrofbica voltada para o interior da membrana,
escondida do solvente.
gua
Monocamada lipdica
Balana
Superfcie
sem filme
Flutuadores
Cuba
Cuba para experimentos com filmes de monocamada lipdica
Modelo de Robertson (1957). Posteriormente Schmitt e colaboradores, a
partir de estudos de polarizao da luz, propuseram que eritrcitos
apresentavam lipdios perpendiculares ao plano da membrana, como
espera-se de uma bicamada (Schmitt et al., 1937, 1938). Outros cientistas
propuseram a presena de protenas nas membranas (Danielli & Davson,
1935), com a participao protica estendendo-se at 60 % da membrana.
Baseado nessas informaes Robertson (1957, 1981) props que as
protenas estivessem distribudas sobre a superfcie da membrana.
O modelo de Robertson era coerente com a informao sobre a presena de
protenas nas membranas, bem como com a presena da bicamada lipdica,
contudo falhava ao colocar protenas globulares na superfcie da membrana
de forma contnua. A presena de uma camada de protena na membrana
formava uma blindagem na superfcie da membrana, o que impossibilita a
comunicao entre os meios intra e extra-celular.
Referncias:
Protena
globular
Bicamada
lipdica
Modelo de Robertson para membrana celular
Protena intrnseca, ou
transmembrana
Protena extrnseca
Experimentos mais detalhados
mostraram deficincias nos diversos
modelos de membrana. Em 1972
Singer e Nicolson propuseram um
modelo de mosaico fluido,
constitudo de uma bicamada
lipdica, onde encontram-se inseridas
protenas. Neste modelo temos dois
tipos de protenas, uma que
atravessa toda a membrana,
chamada protena intrnseca, ou
transmembrana. O segundo tipo de
protena localiza-se sobre a
membrana, sendo encontrada tanto
no exterior como voltada para o
citoplasma. O segundo tipo de
protena chamado extrnseca.
O modelo de mosaico fluido indica duas protenas inseridas
na bicamada lipdica (elipsides cinzas). A protena da
esquerda uma protena extrnseca e a da direita uma
protena intrnseca. Os fosfolipdios so indicados com a
cabea polar em preto e a cauda hidroffica pelas linhas que
saemda esfera preta.
Referncia : Singer SJ, Nicolson GL. Science. 1972 ;175(23):720-
31.
Este modelo prev a passagem
seletiva de ons pelas protenas
intrnsecas, que so chamadas de
canais ou bombas como veremos no
estudo do potencial de
membrana. Outra caracterstica do
modelo liberdade de
movimentao das protenas na
bicamada. De acordo com
caractersticas bsicas do modelo,
mosaicismo e difuso, previu-se a
liberdade lateral e rotatria, assim
como a distribuio aleatria de
componentes moleculares na
membrana.
Protena intrnseca, ou
transmembrana
Protena extrnseca
Referncia Singer SJ, Nicolson GL. Science. 1972 ;175(23):720-31.
Composio lipdica da membrana
CH
2
CH CH
2
O P O
X
O
O
-
O
C
R
1
O
O
C
R
2
O
Biomembranas so baseadas
principalmente em lipdios, com
predominncia de fosfolipdeos. A
estrutura qumica geral de uma
molcula de fosfolipdio mostrada na
ao lado (figura a). Tal molcula
basicamente um glicerol (figura b),
sobre a qual foram ligadas as cadeias
de cidos graxos (R
1
e R
2
), via ligaes
do tipo ster. O grupo fosfato permite a
ligao de qualquer molcula,
designada na figura por pelo grupo X.
a)
b)
HO CH
2
C CH
2 OH
OH
H
Fosfolipdio
Glicerol
Composio lipdica da membrana
Um dos cidos graxos tpicos, encontrados nos fosfolipdios, chamado cido
palmtico. A molcula de cido palmtico apresenta 16 carbonos e 31 hidrognios
(molcula da direita, sem indicao dos hidrognios). Este cido graxo dito saturado,
pois apresenta o maior nmero de possvel de hidrognios ligados. A presena de
ligaes duplas na cadeia de cido graxo indica que o mesmo no-saturado. As
duas cadeias R
1
e R
2
no precisam ser homogneas, ou seja, podem apresentar
cadeias de tamanhos distintos. Nos fosfolipdios uma parte da molcula polar, a
cabea hidroflica, e a parte no-polar composta pelas duas cadeias de cidos
graxos. O diagrama esquemtico abaixo ilustra uma molcula de fosfolipdio.
Molculas que apresentam parte polar e parte hidrofbica so chamadas anfipticas.
Na figura da direita temos a representao CPK do fosfolipdio.
Cabea polar
Caudas hidrofbicas
Caudas hidrofbicas
Cabea polar
Simulao da membrana
Referncia: Heller, H., Schaefer, M. & Schulten, K. (1993). J. Phys. Chem. 97:8343-8360.
Um grande nmero de modelos
computacionais de membranas celulares
foram construdos e submetidos
simulao de dinmica molecular. Tais
modelos usam diferentes componentes
para a formao da bicamada, no exemplo
ao lado foram usadas de molculas de 1-
palmitoil-2-oleoil-sn-glicerol-3-
fosfatidilcolina, formando uma caixa
retangular, onde temos molculas de gua
interagindo com a parte polar da bicamada.
No modelo computacional vemos
claramente que as caudas hidrofbicas no
interagem com as molculas dgua.
H
i
d
r
o
f
l
i
c
a

H
i
d
r
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f
b
i
c
a

H
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l
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c
a

Simulao da membrana
Referncia: Heller, H., Schaefer, M. & Schulten, K. (1993). J. Phys. Chem. 97:8343-8360.
Modelo computacional da membrana Diagrama esquemtico da membrana
H
i
d
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i
c
a

H
i
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f
b
i
c
a

H
i
d
r
o
f
l
i
c
a

Interao com a membrana
As estruturas de protenas
transmembranares indicaram que
tomos da cadeia principal tinham que
participar ligaes de hidrognio,
protegendo-se do contato com as
cadeias polares da membrana. Uma
estrutura secundria, com
caractersticas de proteger os tomos
da cadeia principal de participarem de
ligaes de hidrognio, a hlice alfa,
mostrada ao lado.
Peptdeo de 14 resduos de aminocidos, destacando
as cadeias laterais na figura da esquerda, que esto
expostas ao solvente, na direita um diagrama
esquemtico da hlice alfa do mesmo peptdeo.
Como exemplo de protena
transmembranar temos o complexo
protico, centro de reao fotossinttico da
bactria prpura R. viridis, que o local da
etapa inicial da captura de energia
luminosa na fotossntese. Este complexo
protico composto de quatro cadeias
polipeptdicas (tetrmero), indicadas na
figura ao lado, nas cores azul, vermelha,
cinza e dourado. H tambm quatorze
cofatores de baixo peso molecular,
indicados em amarelo. Entres os cofatores
temos cromforos, que absorvem a
energia de excitao, que convertida em
potencial eletroqumico, atravs da
membrana.
Referncia: Deisenhofer, J. & Michel, H. (1989) EMBO J. 8:2149-2170.
Na presente viso, a molcula est
deslocada aproximadamente 90
o
em
relao anterior, considerando-se o eixo
vertical paralelo tela. Ambas vistas
mostram a estrutura com todos os tomos
da protena como esferas. So excludas
desta representao os tomos de
hidrognio. Este complexo protico foi a
primeira protena de membrana a ter sua
estrutura 3D elucidada, usando-se
tcnicas de cristalografia em 1989
(Deisenhofer e Michel, 1989), fato este que
foi laureado com o prmio Nobel. O
complexo protico apresenta dimenses
aproximadas de 72 x 72 x 132 ,
sendo 1 = 10
-10
m.
132
72
Nesta representao os resduos de
aminocidos hidrofbicos esto em cinza,
os polares em verde, os cidos em
vermelho e os bsicos em azul. tomos
pertencentes aos co-fatores esto em
ciano. Vemos claramente uma
heterogeneidade na distribuio de cargas
na superfcie das protenas. No centro
temos uma regio preponderantemente
hidrofbica, e nas partes superior e inferior
uma concentrao de resduos de
aminocido carregados e polares, o que
caracteriza uma regio hidroflica
132
72
H
i
d
r
o
f
l
i
c
a

H
i
d
r
o
f
b
i
c
a

H
i
d
r
o
f
l
i
c
a

A representao esquerda indica os
elementos de estrutura secundria,
notadamente: hlices alfa, fitas beta e
regies de coil. As cadeias L e M
(estruturas do meio) apresentam
preponderantemente hlices, enquanto o
citocromo (estrutura de cima) e a cadeia H
(estrutura da parte debaixo) apresentam
outros elementos de estrutura secundria.
Observao: As coordenadas atmicas
usadas para representar a estrutura do
centro de reao fotossinttico esto
depositadas no banco de dados de
estruturas PDB (Protein Data Bank) com
cdigo de acesso: 1PRC. O endereo do
PDB www.rcsb.org/pdb .
Cadeia H
Cadeia M
Cadeia L
Citocromo
Hlice alfa a estrutura secundria
comumente encontrada em segmentos
transmembranares de protenas de
membranas, constituindo-se na grande
maioria de protenas encontradas na
membrana plasmtica e nas
membranas internas das organelas
celulares. Normalmente temos a
combinao de vrios segmentos de
hlice, formando feixes de hlices
transmembranares, como nas estruturas
das cadeias L e M da estrutura do
centro de reao fotossinttico
mostrada ao lado.
Cadeias L e M do centro de reao fotossinttico.
Cdigo PDN: 1PRC
Cadeia M
Cadeia L
Citoplasma
Interao das cadeias L e M do centro de reao fotossinttico com a bicamada lipdica.
A partir da anlise da estrutura do centro de reao fotossinttico podemos
propor um modelo para interao da protena com a membrana. Neste
modelo temos que a parte hidrofbica, formada por hlices alfa, interage
com a membrana.
Meio extracelular
Muitas das protenas, que interagem
com a membrana celular, apresentam
regies em hlice alfa. Para
entendermos esta interao protena-
membrana, vamos olhar alguns
detalhes da estrutura da hlice alfa.
Uma hlice alfa, como mostrada na
figura a, tem as cadeias laterais
apontando para fora da hlice
(indicadas com setas). Esta hlice alfa
pode ser representada como um cilindro
(figura b). Nas figuras c e d temos a
viso de cima de cada uma das
representaes de hlice alfa. As
vises, indicadas nas figuras c e d,
facilitam a identificao das regies
hidrofbicas e hidroflicas das hlices
alfa.
a) b)
c) d)
Cadeias laterais
Cadeias laterais
Nas estruturas de feixes de hlices alfa
transmembranares, verifica-se que o
lado da hlice, que toca os lipdios,
relativamente mais hidrofbico que o
lado que participa do contato hlice-
hlice. No diagrama esquemtico ao
lado temos um feixe de 4 hlices alfa
(figura b), onde vemos que a regio
entre as hlices mais hidroflica que a
regio em contato com a bicamada
lipdica. A regio das hlices alfa, em
contato com as caudas hidrofbicas da
bicamada fosfolipdica, esto indicadas
por setas.
a) Hlice transmembranar
b) 4 hlices transmembranares
Superfcie mais hidrofbica
Superfcie mais hidroflica
Outra estrutura possvel, para protenas
transmembranares, a folha beta. Um
arranjo onde a folha beta fecha-se
sobre si forma um arranjo similar a um
barril, sendo denominado barril beta. A
estrutura em barril proporciona as
caractersticas fsico-qumicas
desejveis para uma protena
transmembranar, tal como blindagem
dos tomos da cadeia principal que
participam de ligaes de hidrognio. A
figura ao lado mostra a estrutura de
uma porina.
Barril beta da porina de Rhodopseudomonas blastica.
Cdigo de acesso PDB: 8PRN
Citoplasma
Interao do barril beta da porina de Rhodopseudomonas blastica com a bicamada lipdica.
Porina
Meio extracelular
Toxinas da vespa solitria
Anterhynchium flavormarginatum
micado. Esta vespa injeta seu veneno
em lagartas e deposita seus ovos
prximos vtima. Devido ao txica
de seu veneno a lagarta fica paralisada,
mas viva. Ao eclodirem, as jovens
vespas tero um banquete fresco e vivo.
Tal comportamento, indicou que o
veneno da A. flavormarginatum micado,
poderia ser uma rica fonte de molculas
com atividades antimicrobianas.
Podemos imaginar o veneno das vespas
como um coquetel de molculas. A
questo : qual ou quais molculas
apresentam as atividades biolgicas de
interesse?
Foto: Cortesia do Dr. K. Konno.
Mastoparanos so peptdeos isolados
em vespas e abelhas, muitos deles
apresentam atividade biolgicas, tais
como, degranulao de mastcitos,
atividades antimicrobiana e hemoltica.
Estas molculas atuam principalmente
na membrana, provavelmente
rompendo a integridade da bicamada
lipdica. O mastoparano, identificado
no veneno da A. flavormarginatum
micado (EMP-AF), apresenta atividade
hemoltica e de degranulao de
mastcitos (Sfora et al., 2004).
Referncia: Sfora, M. L., Oyama, S. Jr., Canduri, F., Lorenzi,
C. C., Pertinhez, T. A., Konno, K., Souza, B. M., Palma, M. S.,
Ruggiero Neto, J., Azevedo, W. F. Jr., Spisni, A. (2004).
Biochemistry 43:5608-5617.
Abaixo temos as estruturas primrias (sequncia de resduos de aminocido) de um
mastoparano tpico e do EMP-AF, os resduos Asn, Lys e Ser so polares. Ambos
peptdeos apresentam 14 resduos de aminocido. Uma das caractersticas destes
peptdeos que eles apresentam o C-terminal amidado, como pode ser visto no final
da estrutura primria. A numerao acima da sequncia indica o nmero do resduo de
aminocido. As sequncias so indicadas com o cdigo de trs letras, com o cdigo de
uma letra entre parnteses abaixo do cdigo de trs letras.
Referncia: Sfora, M. L., Oyama, S. Jr., Canduri, F., Lorenzi, C. C., Pertinhez, T. A., Konno, K., Souza, B. M., Palma, M. S.,
Ruggiero Neto, J., Azevedo, W. F. Jr., Spisni, A. (2004). Biochemistry 43:5608-5617.
Mastoparano tpico
EMP-AF
Abaixo temos as estruturas secundrias de um mastoparano tpico e do EMP-AF, os
resduos de asparagina Asn (N) e serina Ser (S) so indicados em rosa. Os resduos
de lisina Lys (K) indicados em vermelho. Os peptdeos apresentam estrutura em hlice
alfa, com o resduos polares de um lado da hlice e resduos apolares do lado oposto,
o que d um carter anfiptico ao peptdeo.
Referncia: Sfora, M. L., Oyama, S. Jr., Canduri, F., Lorenzi, C. C., Pertinhez, T. A., Konno, K., Souza, B. M., Palma, M. S.,
Ruggiero Neto, J., Azevedo, W. F. Jr., Spisni, A. (2004). Biochemistry 43:5608-5617.
Mastoparano tpico EMP-AF
Toxinas da vespa solitria
Anoplius samariensis. Esta vesta
injeta seu veneno em aranhas e
deposita seus ovos prximos
vtima, da mesma forma que a A.
flavormarginatum micado. A ao
txica de seu veneno paralisa a
aranha, que ser comida viva pelas
vespas ao eclodirem.
Referncia: Konno, K., Hisada, M., Fontana, R., Lorenzi, C. C., Naoki, H., Itagaki, Y., Miwa, A., Kawai, N., Nakata, Y.,
Yasuhara, T., Ruggiero Neto, J., de Azevedo, W. F. Jr., Palma, M. S., Nakajima, T. (2001). Bioch. Biophys. Acta. 1550:70-80.
Anoplin. O veneno da A. samariensis
uma possvel fonte de molculas
com atividades biolgicas. O peptdeo
Anoplin, um decapeptdeo (10
resduos de aminocido) com o C-
terminal amidado e sequncia,
GLLKRIKTLL, foi identificado no
veneno da A. samariensis. Testes de
atividade biolgica mostraram ao
antimicrobiana deste peptdeo, sendo
o menor peptdeo que se tem notcia
a apresentar tal ao. A verso sem o
C-terminal no-amidado apresenta
atividade antimicrombiana reduzida,
quando comparada com o Anoplin-
NH
2
.
A membrana clula apresenta uma bicamada lipdica de aproximadamente
60 de extenso, o que possibilita que protenas, como os canais inicos,
atravessem a membrana, contudo peptdeos pequenos, como os
mastoparanos e o anoplin, possuem comprimento de 21 e 15 ,
respectivamente, no permitindo que estes peptdeos atravessem a
membrana celular. Resta a questo sobre a forma de ao destes
peptdeos, visto que evidncias experimentais indicam que os mesmos
atuem na membrana, desestabilizando-a. Uma possvel forma de ao
destes peptdeos, por meio do desmonte da camada externa da
membrana, o que levaria sua desestruturao e consequente quebra da
membrana celular.
~
6
0

O anoplin apresenta um comprimento de 15 e o mastoparano de 21 ,

ambos so mostrados abaixo e apresentam dimenses menores que a
espessura da membrana celular, contudo so capazes de romp-la.
Mastoparano EMP-AF Anoplin
1
5

2
1


A interao do peptdeo com a membrana um fenmeno complexo, que
no possvel acessarmos diretamente por tcnicas experimentais.
Contudo, baseado nas estruturas tridimensionais dos peptdeos e da
membrana, foi possvel propor diversos modelos para interao do
peptdeo mastoparano com a membrana. Um dos modelos prope que esta
interao um processo de diversas etapas (indicada abaixo e no
esquema do slide seguinte).
1) Ancoragem do peptdeo na membrana celular;
2) Incio da desestabilizao da membrana celular;
3) Incio da desmontagem da primeira camada lipdica;
4) Incio da desmontagem da segunda camada lipdica;
5) Desmontagem da bicamada lipdica;
6) Fluxo de substncias para o interior e exterior da clula leva morte da
clula.
~
6
0

~
6
0

~
6
0

~
6
0

~
6
0

~
6
0

1) 2)
3) 4)
5) 6)
Bomba de Na
+
/K
+
A bomba de sdio e potssio uma protena intrnseca com atividade enzimtica.
Ela catalisa a clivagem de ATP (adenosina trifosfato), atividade de ATPase. ATP
(mostrado nas figuras abaixo) um nucleotdeo contendo 3 grupos fosfato. ATP
uma reserva de energia qumica para o metabolismo celular. O mecanismo de
funcionamento da bomba de Na
+
/K
+
pode ser descrito nas seguintes etapas.
a) ATP (Estrutura 2D) b) ATP (estrutura 3D)
Bomba de Na
+
/K
+
A bomba de Na
+
/K
+
segue as seguintes etapas:
1) A bomba de Na
+
/K
+
, comATP ligado, liga-se a 3 ons de Na
+
intracelulares.
2) ATP hidrolisado, causando a fosforilao de um resduo de Asp, da bomba de
Na
+
/K
+
com a liberao de ADP.
3) A mudana conformacional, da bomba de Na
+
/K
+
, expe os ons de Na
+
, que
por apresentarem baixa afinidade pela bomba de Na
+
/K
+
, so liberados para o meio
extracelular.
4) A bomba de Na
+
/K
+
liga-se a 2 ons de K
+
extracelulares, isto causa a
desfosforilao da bomba, trazendo-a de volta sua conformao anterior,
transportando K
+
para dentro da clula.
5) A forma desfosforilada da bomba de Na
+
/K
+
apresenta afinidade mais alta por
ons de Na
+
, os ons de K
+
so liberados, a molcula de ATP liga-se bomba.
6) O sistema est pronto para um novo ciclo.
Bomba de Na
+
/K
+
ATP P
I
ADP
P
I
P
I
P
I
ATP
ATP
Na
+
Na
+
K
+
1 2
3
4
5
6
Canais de K
+
so os canais usualmente abertos na membrana plasmtica de
neurnios em repouso. Assim h sada de ons K+, o que deixa um excesso de
carga negativa no interior da clula e, como resultado, um potencial negativo.
Meio intracelular
Meio extracelular
Meio extracelular
Meio extracelular
Meio extracelular
Meio extracelular
Meio extracelular
Meio intracelular
Meio intracelular
Meio intracelular
Meio intracelular
Meio intracelular
Bomba de Na
+
/K
+
e canal de K
+
P
I
Na
+
Meio extracelular
Meio intracelular
K
+
A ao conjunta da bomba de Na
+
/K
+
e do canal de K
+
leva a um acmulo
de carga positiva no meio extracelular. Tal situao, tem como
consequncia uma diferena de potencial negativa do meio intracelular com
relao ao meio extracelular. Se colocarmos um eletrodo no interior de um
neurnio em repouso teremos um potencial eltrico de algumas dezenas de
milivolts negativo, tal potencial chamado potencial de repouso.
Bomba de Na
+
/K
+
canal de K
+
Bomba de Na
+
/K
+
Aproximadamente um tero de todo ATP
da clula usado para o funcionamento
da bomba de Na
+
/K
+
, o que indica a
importncia para o metabolismo celular
da bomba de Na
+
/K
+
. Em 2007 foi
elucidada a estrutura tridimensional da
Na
+
/K
+
, mostrada na figura ao lado
(Morth et al., 2007). A anlise da
estrutura indicou uma diviso clara de
regies hidrofbicas e hidroflicas, que
sugerem a insero na Na
+
/K
+
na
membrana conforme o modelo mostrado
no prximo slide.
Referncia: Morth JP, Pedersen BP, Toustrup-Jensen MS,
Srensen TL, Petersen J, Andersen JP, Vilsen B, Nissen P.
Nature. 2007;450(7172):1043-9.
Bomba de Na
+
/K
+
Meio extracelular
Citoplasma
Referncia: Morth JP, Pedersen BP, Toustrup-Jensen MS,
Srensen TL, Petersen J, Andersen JP, Vilsen B, Nissen P.
Nature. 2007;450(7172):1043-9.
A membrana pode ser modelada em situao de repouso (sem estmulos externos) a
um circuito RC (resistivo-capacitivo). Vamos rever alguns conceitos simples de
eletricidade para modelarmos a membrana. Colocando-se eletrodos, dentro e fora de
um neurnio, temos uma diferena de potencial (ddp) de 70 mV, ou seja, h um
potencial negativo de 70 mV no interior do neurnio em relao ao meio extracelular.
O instrumento usado para medir a diferena de potencial o voltmetro, sua colocao
est representada do diagrama esquemtico abaixo.
V
Voltmetro
+ -
I
V
Eletrodos
Neurnio
Potencial de membrana
Corrente eltrica (I): o movimento de cargas eltricas em meios condutores,
medida em Ampres (A), o que equivale a 1 Coulomb/segundo, uma unidade
relativamente grande para os propsitos da biofsica, assim normalmente trabalha-se
com submltiplos desta unidade fsica, tais como, miliampre (mA, 10
-3
A),
microampre (A, 10
-6
), nanoampre (nA, 10
-9
) e picoampre (pA, 10
-12
A). As cargas
para os fenmenos eltricos na membrana celular so ons, tais como, Na
+
,K
+
, Ca
++
e
Cl
-
.
A
Ampermetro
+ -
I
+++++++++++++++++++++++++
--------------------------------------------
--------------------------------------------
+++++++++++++++++++++++++
Neurnio
Axnio
Amplificador
Oscilscopio Eletrodos
-70mV
Dois eletrodos,
inseridos no axnio de
um neurnio em
repouso, detectam a
pequena diferena de
potencial, entre os
meios extra e
intracelular, este sinal
amplificado e
mostrado num
osciloscpio.
Meio extracelular
Meio intracelular
R
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
++++++++++++++++++++++++
Circuito RC Modelo de membrana celular
+++++
- - - - -
Como j foi destacado, do ponto de vista eltrico, podemos fazer a analogia da
membrana celular com um circuito RC (resistivo-capacitivo). O C indica a
capacitncia, e o R a resistncia eltrica. Capacitncia a quantidade de carga
eltrica (Q) acumulada, dividida pela tenso aplicada. Quanto maior a carga eltrica
acumulada (Q), para uma dada tenso (V), maior a capacitncia (C). A capacitncia
medida em Farads (1 F = 1 C/V). Devido diferena de potencial nas placas h uma
corrente eltrica (I) presente no circuito. Na figura do lado direito vemos o modelo da
membrana com a distribuio de cargas eltricas, similar distribuio de cargas num
capacitor.
V
I
Q
A equao abaixo expressa a capacitncia (C) em funo da tenso aplicada s
placas do capacitor (V) e a carga eltrica acumulada em um dado instante (t). A
modelagem da membrana celular como um capacitor suficiente para explicar o
surgimento da tenso, bem como a resposta celular a estmulos eltricos (prximos
situao de repouso). Estmulos eltricos na membrana, abaixo de um valor limiar,
levam a membrana a responder de forma anloga a um capacitor. Inicialmente numa
situao de carga e posteriormente num sistema em descarga. A carga eltrica (Q),
nesta situao, fica dependente do tempo, bem como a tenso.
C
Q
V
V
Q
C = =
R
+++++
- - - - -
V
I
Q
Circuito RC
O resultado lquido da ao conjunta da bomba de Na
+
/K
+
e do canal de K
+
uma
diferena de potencial entre o meio extra e intra-celular, com uma tenso
caracterstica. Tal tenso da ordem de algumas dezenas de milivolts negativos.
A ao contnua da bomba de Na
+
/K
+
, leva a um acmulo de ons de Na
+
, no meio
extra-celular, e um acmulo de ons de K
+
no meio intra-celular. Tal situao
ocorre com o gasto de energia, obtida da molcula de ATP. Concomitante ao
da bomba de Na
+
/K
+
h um canal de K
+
, que fica aberto, permitindo a sada do
excesso de ons de K
+
. O resultado uma tenso negativa do meio intra-celular
com relao ao meio extra-celular. Tal tenso chamada de potencial de
repouso, pois no necessrio a aplicao de estmulo na clula para que
ocorra.
Amplificador
-70mV
Potencial de repouso
Considere uma cuba com gua onde
foram dissolvidos um on, indicado pelo
crculo vermelho. No instante inicial
temos uma alta concentrao inica do
lado esquerdo [on]
esquerdo
, e do lado
direito uma baixa concentrao
[on]
direito
. As duas metades da cuba
so separadas por uma membrana
semipermevel. Temos duas foras
principais atuando no sistema, a fora
difusional (F
D
) e uma fora eltrica (F
E
).
| |
| |
|
|
.
|
\
|
=
direito
esquerdo
D
on
on
RT F ln
zeA V F
r E
=
Onde R constante dos gases, T a temperatura absoluta, V
r
a diferena de
potencial, z a valncia do on, e a carga do eltron e A o nmero de Avogadro.
Depois de um certo tempo atingimos
um equilbrio entre as duas foras, e
podemos obter um expresso para a
diferena de potencial entre os dois
lados da cuba, assim temos:
| |
| |
| |
| |
|
|
.
|
\
|
|
.
|
\
|
=
=
|
|
.
|
\
|
=
direito
esquerdo
r
r
direito
esquerdo
E D
on
on
zeA
RT
V
zeA V
on
on
RT
F F
ln
ln
r
a diferena de
V
r
Esta equao chamada de equao
de Nernst e determina a diferena de
potencial (V
r
), devido diferena de
concentrao inica presente num
sistema separado por uma membrana
semipermevel. Tal sistema uma
aproximao da membrana celular,
onde teremos as concentraes
extracelular ([on]
extracelular
) e intracelular
([on]
intracelular
) na equao, como
segue:
| |
| |
|
|
.
|
\
|
|
.
|
\
|
=
racelular
ar extracelul
r
on
on
zeA
RT
V
int
ln
r
a diferena de
V
r
Meio extracelular
Meio intracelular
[on]
fora
[on]
dentro
Diferena de potencial atravs da membrana
Concentrao
do on monovalente
dentro da clula
Concentrao
do on monovalente
fora da clula
Constante universal dos gases
Temperatura absoluta
Valncia do on
V
r
=
RT ln ( )
zeA
Carga eltrica do eltron
Nmero de Avogadro
[on]
fora
[on]
dentro
V
r
=
RT ln ( )
zeA
V
r
=
8,315 J/mol.K 293 K
1. 1,602.10
-19
C.6,022.10
23
1/mol
[on]
fora
[on]
dentro
ln ( )
V
r
= 25 mV
[on]
fora
[on]
dentro
ln ( )
V
r
= (58 mV) log ( )
[on]
fora
[on]
dentro
Concentrao
do on monovalente
dentro da clula
Concentrao
do on monovalente
fora da clula
V
r
= (58 mV) log ( )
[K
+
]
fora
[K
+
]
dentro
Concentrao
do on potssio dentro
da clula
Concentrao
do on potssio fora
da clula
A equao de Nernst uma idealizao, que considera que a membrana celular
permevel a apenas um tipo de on. Tal idealizao leva expresso simples da
equao de Nernst, contudo, a sua aplicao, no consegue prever o valor final do
potencial presente na membrana celular, levando-se em considerao a ao dos
diversos ons presentes nas regies intra e extra celular. Outra considerao sobre a
forma simplificada da equao de Nernst, da forma apresentada ela vlida para ons
monovalentes, para ons de outra valncia necessrio dividir pela valncia do on (z),
como mostrado na equao abaixo.
V
r
= (58 mV) log ( )
[on]
fora
[on]
dentro
z
Introduzindo dois microeletrodos no
neurnio, conforme o esquema da
figura ao lado, temos o primeiro
eletrodo injetando corrente eltrica
e o segundo medindo a tenso.
Inicialmente temos um potencial
negativo, no interior da membrana
(potencial de repouso), sem injeo
de corrente pelo eletrodo 1. O
eletrodo 1 estimula o axnio com
um pulso de corrente de 1 nA (1
nanoAmpre) e durao de 1 ms (1
milisegundo). A subida da tenso
da ordem de mVs (milivolts), sem
contudo ficar positiva, o neurnio
retornar ao potencial de repouso.
C
o
r
r
e
n
t
e

n
o

e
l
e
t
r
o
d
o

1
T
e
n
s
o

n
o

e
l
e
t
r
o
d
o

2
eletrodo 1
eletrodo 2
Tempo(ms)
Tempo(ms)
0
C
o
r
r
e
n
t
e

n
o

e
l
e
t
r
o
d
o

1
T
e
n
s
o

n
o

e
l
e
t
r
o
d
o

2
eletrodo 1
eletrodo 2
Tempo(ms)
Tempo(ms)
Carga do capacitor
Como foi destacado anteriormente,
a membrana do neurnio tem um
comportamento eltrico similar a um
circuito resistivo-capacitivo (RC).
Vejamos a figura ao lado, ao
estimularmos a membrana, a
mesma responde com uma subida
suave da voltagem (grfico inferior,
seta vermelha), este
comportamento similar a um
capacitor em situao de carga.
Aps algum tempo, a tenso cai
suavemente (seta azul), num
comportamento similar a um
capacitor em descarga eltrica.
Descarga do capacitor
Danielli, J. F. & Davson, H. (1935). J. Cell. Comp. Physiol., 5:495-508.
Garcia, E. A. C. Biofsica. Editora Savier, 2000.
Gorter, E. & Grendel, F. (1925). J. Exp. Med. 41:439-443.
Purves, W. K., Sadava, D., Orians, G. H., Heller, H. G. Vida. A Cincia da Biologia. 6a
ed. Artmed editora. 2002.
Schmitt, F. O., R. S. Bear, and E. Ponder. (1937) . J. Cell. Comp. Physiol 9: 89-92.
Schmitt, F. O., R. S. Bear, and E. Ponder. (1938) . J. Cell. Comp . Physiol. 11 :309-313.
http://www1.umn.edu/ships/9-2/membrane.htm
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