Aula de Bioqumica II SQM0424

Bacharelado em Cincias Fsicas e Biomoleculares Tema:

Fosforilao Oxidativa
Cadeia transportadora de eltrons
Prof. Dr. Jlio Csar Borges
Depto. de Qumica e Fsica Molecular DQFM Instituto de Qumica de So Carlos IQSC Universidade de So Paulo USP E-mail: borgesjc@iqsc.usp.br

Fosforilao oxidativa
Fim das rotas metablicas de produo de energia em organismos aerbicos - Representa o estgio 3 do processo Acoplamento da oxidao de NADH e FADH2 e sntese de ATP - o principal stio de produo de ATP - Envolve o consumo de O2 e formao de H20 Teoria Quimiosmtica - Fluxo de eltrons por carreadores criam um gradiente de concentrao de prtons na membrana mitocondrial - A quebra deste gradiente est acoplada com a sntese de ATP

Fosforilao oxidativa
LOCAL: MITOCNDRIA - Organela de eucariotos Possui duas membranas Membrana Mitocondrial externa - MME - Permevel a pequenas molculas Membrana Mitocondrial interna - MMI - Impermevel a maioria das molculas - Inclusive H+ - Necessidade de transportadores de membrana Espao intermembranal - Cristas membranais Matriz mitocondrial - Local de oxidaes - Ciclo de Krebs - -oxidao de lipdeos - Oxidao de Aminocidos

Fosforilao oxidativa
LOCAL: MITOCNDRIA

Fosforilao oxidativa
CADEIA TRANSPORTADORA
DE

ELTRONS

OU

CADEIA RESPIRATRIA

Os carreadores que transportam os eltrons do NADH e FADH2 at O2 esto na MMI - A oxidao de NADH e FADH2 promovida pela cadeia de transporte de eltrons - Alguns desses centros redox so mveis ou protenas integrais de membrana - Dependem dos grupos protticos associados A sequncia de carreadores de eltrons reflete seus potenciais de reduo relativos O processo exergnico Transporte de e 1) 1 e Fe3+ para Fe2+ 2) 1 e + 1 H+ 3) 2 e na forma de :H-

Fosforilao oxidativa
CADEIA TRANSPORTADORA
DE

ELTRONS

Os carreadores de eltrons na mitocndria COENZIMA UBIQUINONA (Q) - Pequena e Lipossolvel PROTENAS COM CENTROS DE FERRO-ENXOFRE - Estrutura varivel simples a complexas - O on Fe sofre reaes de xidoxido-reduo

Fosforilao oxidativa
CADEIA TRANSPORTADORA
DE

ELTRONS

Os carreadores de eltrons na mitocndria Citocromos a, b e c Seus grupos prostticos grupos Heme Citocromo c solvel no espao intermembrana Podem interagir com a MMI

Fosforilao oxidativa
CADEIA TRANSPORTADORA
DE

ELTRONS

O fluxo de eltrons pelos carreadores vai daquele com menor potencial para o maior potencial

Fosforilao oxidativa
CADEIA TRANSPORTADORA
DE

ELTRONS

Os carreadores de eltrons na MMI: 4 complexos Complexo I do NADH para formar Ubiquinol NADH:Ubiquinona NADH: Ubiquinona-oxidoreductase ou NADH NADH-desidrogenase Complexo II do FADH2 para formar Ubiquinol SuccinatoSuccinato -desidrogenase

Complexo III do Ubiquinol para o Citocromo c Ubiquinona: Ubiquinona :Citocromo c-oxidoreductase Complexo IV do Citocromo c para o O2 Citocromo c-oxidase

Fosforilao oxidativa
COMPLEXO I: NADH:UBIQUINONA-OXIDOREDUTASE
OU

NADHNADH -DESIDOGENASE

Porta de entrada dos e do NADH produzidos dentro da mitocndria - O Complexo catalisa 2 processos simultneos e acoplados 1) NADH + H+ + Q NAD+ + QH2 Exergnico Endergnica 2) Transferncia de 4 H+ para o espao intermembrana

Fosforilao oxidativa
COMPLEXO II: SUCCINATO-DESIDOGENASE Porta de entrada dos e do FADH2 produzidos no ciclo do cido ctrico

Porta de entrada dos e do NADH produzidos no citoplasma - Canaliza diretamente os e do succinato para a cadeia transportadora de e FADH2 + Q FAD + QH2 Exergnico

Sem transferncia de H+ para o espao intermembrana Porta de entrada de e de outras vias oxidativas - -oxidao de cidos graxos

Fosforilao oxidativa
COMPLEXO I
E COMPLEXO

II

4)
Vias de entrada de e para a ubiquinona: ubiquinona : 1) NADH mitocondrial, 2) Succinato do ciclo do cido ctrico, 3) e da -oxidao de cidos graxos via AcilAcil -CoACoA-desidrogenase e do glicerol dos triacilglicerois 4) NADH citoslico via glicerol 3 3fosfato

1)

2)

3)

Fosforilao oxidativa
COMPLEXO III: UBIQUINONA:CITOCROMO C-OXIDOREDUTASE Canaliza os 2 e do Ubiquinol (QH2) para o Citocromo c com a transferncia de H+ da matriz mitocondrial para o espao intermembrana - possui duas unidades de Citocromo b enterrados em 1 fenda na membrana QH2 + 2 Citc1 (Oxi) Oxi) + 2 H+N Q + 2 Citc1 (Red) Red) + 4 H+P

Fosforilao oxidativa
COMPLEXO III: UBIQUINONA:CITOCROMO C-OXIDOREDUTASE 2 e do Ubiquinol so afunilados no Citc
1 Ciclo -1 e do QH2 passado para o Citc no primeiro ciclo e o outro e (via citocromo b) para a Q formando Semiquinona - 2 H+ transportados para o espao intermembrana 2 Ciclo -1 e do QH2 passado para o Citc e o outro e (via citocromo b) para a Semiquinona formando outra QH2 - 2 H+ transportados para o espao intermembrana - 2 outros H+ so retirados da matriz

carreador de 1 e

2 ciclos de reduo do Citc com a formao da Semiquinona (.Q-)

1 Ciclo

2 Ciclo

Fosforilao oxidativa
COMPLEXO IV: CITOCROMO OXIDASE Os e do Citocromo c so entregues ao O2 4 Citc (Red) + 8 H+N + O2 4 Citc (Oxi) + 4 H+P + 2 H2O

Envolve a participao de: - Ion CuA - Citocromo a - Citocromo a3-CuB (Centro Fe Fe-Cu) - O2 4 ciclos so necessrios para reduzir 1 O2 a 2 H2O - 4 H+ transportados para o espao intermembrana - 4 outros H+ so retirados da matriz para formar as 2 H2O 2 H+ por par de e

Fosforilao oxidativa
CADEIA TRANSPORTADORA
DE

ELTRONS

Resumo do processo

Equao Vetorial do transporte de Prtons pela cadeia NADH + 11 H+N + FADH2 + 6 H+N + O2 O2 NAD+ + FAD+ + 10 H+P 6 H+ P + + 1 H2O 1 H2O

Fosforilao oxidativa
CADEIA TRANSPORTADORA NADH + H+ + O2
DE

ELTRONS + 1 H2O

NAD+

A G d da a reao pode ser medida a partir da diferena de voltagem entre meias clulas
n+ n+ Aox + Bred Ared + Box

n+ [ A ][ B 0' red ox ] G = G + RT ln n+ n [ Aox ][ Bred ]

- Se G = w' = wel referente ao trabalho eltrico realizado a presso e volume constante -Se o

wel = nfE

onde f a constante de Faraday (96.485 Cmol Cmol-1) e n o nmero de e/mol portanto:

G = nfE

n+ [ A ][ B RT 0' red ox ] Equao de Nernst Reorganizando E = E ln n+ n nf [ Aox ][ Bred ]

- O E0 representa o potencial de reduo padro nas condies padres para bioqumica - Um Valor positivo para o E (potencial de reduo ou fora eletromotiva) eletromotiva) sugere espontaneidade da reao - um valor positivo para o E representa um valor negativo para o G

Fosforilao oxidativa
CADEIA TRANSPORTADORA NADH + H+ + O2
DE

ELTRONS + 1 H2O

NAD+

NADH/NAD+ O2/H2O

E0 = + 0,320 V

E0 = +0,816 V

E0= E0Red + E0oxi = + 1,14 V

G0' = nfE 0' = 2(96,5kJ / V .mol )1 ,14V = 220kJ / mol(deNADH)

Succinato + O2 Fumarato + 1 H2O

G0' = nfE 0' = 2(96,5kJ / V .mol ).0,785V = 150kJ / mol(deNADH)

A razo da [NADH]/[NAD+] >1 o que sugere que a G mais negativa do que -220 kJ/mol!

Fosforilao oxidativa
CADEIA TRANSPORTADORA
DE

ELTRONS

A energia da transferncia de e eficientemente conservada em um gradiente - Gradiente de prtons - Gradiente eletroqumico

Fosforilao oxidativa
CADEIA TRANSPORTADORA
DE

ELTRONS

A G associada ao processo de criao criao dos 2 gradientes :

C2 G = RT ln( ) + zf C1
C2 = H+p C1 = H+n Lado positivo da MMI Lado negativo da MMI Espao intermembrana Matriz mitocondrial 1 para 1 H+

Z = valor absoluta da carga eltrica

= Diferena do potencial transmembrana

pH = log[H + ]

C2 ln = 2,3(log[H + ]p log[H + ]n ) = 2,3( pHn pHp ) = 2,3pH C1

Logo:

G = 2,3RTpH + zf = (5,7kJ / mol ).pH + (95,6kJ / mol ).

Fosforilao oxidativa
CADEIA TRANSPORTADORA
DE

ELTRONS

A pH da MMI de 0,75 unidades de pH A da MMI de 0,150,15-0,20 V

G = (5,7kJ / mol ).0,75 + (95,6kJ / mol ).0,15 = 19kJ / mol

A G associada oxidao de 1 mol de NADH : Equao Vetorial do transporte de Prtons pela cadeia NADH + 11 H+N + O2 NAD+ + Logo: G = 19 kJ/mol*10 = ~190 kJ/mol G0 = 220 kJ/mol 10 H+P + 1 H2O

Fosforilao oxidativa
SISTEMAS
DE

TRANSPORTE MITOCONDRIAL

Espao intermembrana intermembrana: : entre a MME e MMI - equivalente ao citosol no que se refere s concentraes em metablitos e ons A MMI composta por cerca de 75% de protenas mais rica em protenas MME - A MMI permevel a O2, CO2 e H2O - Contm protenas de transporte que controlam a passagem de metablitos, como ATP, ADP, o piruvato piruvato, , o Ca2+ e o fosfato A impermeabilidade da MMI para a maioria dos ons e metablitos permite a formao de um gradiente de ons atravs dessa barreira Resulta na compartimentalizao das funes metablicas entre o citosol e a mitocndria

Fosforilao oxidativa
SISTEMAS
DE

TRANSPORTE MITOCONDRIAL

Transporte seletivo de letrons produzidos no citoplasma para a mitocndria - O NADH produzido no citosol pela gliclise deve ter acesso cadeia transportadora de eltrons para a oxidao aerbica

- No h uma protena transportadora de NADH na MMI - Somente os eltrons do NADH citoslico so transportados para a mitocndria por um dos vrios sistemas de transporte LANADEIRA
DE

MALATO-ASPARTATO

Fosforilao oxidativa
SISTEMAS LANADEIRA
DE DE

TRANSPORTE MITOCONDRIAL

GLICEROL-3-P

A glicerolglicerol-3-fosfato desidrogenase catalisa a oxidao do NADH citoslico pela DHAP para produzir NAD+, o qual retorna gliclise Os eltrons do glicerolglicerol-3-fosfato so transferidos para a Flavoprotena Flavoprotenadesidrogenase da MMI, formando FADH2, O FADH2 fornece eltrons diretamente para Cadeia Transportadora de Eltrons

Fosforilao oxidativa
SISTEMAS TRANSLOCADOR
DE DE

TRANSPORTE MITOCONDRIAL

ATP/ADPATP/ADP - PI

A maior parte do ATP gerado na matriz mitocondrial pela fosforilao oxidativa utilizado no citosol A MMI contm um translocador de ADP ADPATP (ou adeninaadenina-nucleotdeo translocase translocase) ) - Transporta o ATP para fora da matriz mitocondrial acoplado importao de ADP e Pi produzidos no citoplasma a partir de ATP - Sistema antiporte - Mantm balano eletroltico pelo gasto de energia quimiosmtica