MTODOS DE CALIBRAO

Sinais obtidos por equipamentos e instrumentos devem ser calibrados para evitar
erros nas medidas.


Calibrao, de acordo com o INMETRO, o conjunto de operaes que estabelece, sob
condies especificadas, a relao entre os valores indicados por um instrumento de
medio ou sistemas de medio ou valores representados por uma medida
materializada ou material de referncia, e os valores correspondentes das grandezas
estabelecidas por padres.
MTODOS DE CALIBRAO
Modos de calibrao:
a) Calibrao Pontual determina-se o valor de uma constante K com um nico
padro, a qual expressa a relao entre a medida instrumental e a concentrao do
analito de interesse. Esta hiptese deve ser testada experimentalmente.

b) Calibrao Multipontual calibrao com mais de dois padres.
*O mtodo mais empregado consiste na calibrao multipontual com at 5 nveis de
concentrao, podendo apresentar uma relao linear (sensibilidade constante na faixa
de concentrao de trabalho) ou no-linear (sensibilidade funo da concentrao do
analito).
Para muitos tipos de anlises qumicas, a resposta para o procedimento analtico deve ser
avaliado para quantidades conhecidas de constituintes (chamados padres), de forma
que a resposta para uma quantidade desconhecida possa ser interpretada.

1. Curva de calibrao externa ou curva analtica

2. Curva de adio de padro

3. Padro interno
MTODOS DE CALIBRAO
AMOSTRA PADRO
uma amostra de referncia que contm o analito de interesse.


Padro externo:
Amostra e padro so injetados separadamente e a identificao do composto
desejado feita atravs da comparao de alguma caracterstica, por exemplo, em
cromatografia, tempo de reteno.

Padro interno:
Adio de quantidade conhecida de elemento de referncia nos padres e na
amostra.
BRANCO
Os brancos indicam a interferncia de outras espcies na amostra e os traos de analito
encontrados nos reagentes usados na preservao, preparao e anlise. Medidas
frequentes de brancos tambm permitem detectar se analitos provenientes de amostras
previamente analisadas esto contaminando as novas anlises, por estarem aderidos
aos recipientes ou aos instrumentos.

1.Branco do mtodo

2.Branco para reagentes

3.Branco de campo
BRANCO
Branco de mtodo: uma amostra que contm todos os constituintes exceto o analito, e
deve ser usada durante todas as etapas do procedimento analtico.

Branco para reagente: semelhante ao branco de mtodo, mas ele no foi submetido a
todos os procedimentos de preparo de amostra.

Branco de campo: semelhante a um branco de mtodo, mas ele foi exposto ao local
de amostragem.

Obs.: O branco de mtodo a estimativa mais completa da contribuio do branco para
a resposta analtica, sendo que sua resposta deve ser subtrada da resposta de uma
amostra real antes de calcularmos a quantidade de analito na amostra.
Determinao de cido ascrbico (vitamina C) em suco de laranja:
Branco: sinal = 0,10 unidade
Padro: [AA] = 2 mol L
-1
; sinal = 2,39 unidade

sinal = K [AA]
padro
(2,39-0,10) = K (2)
K = 1,145 unidade L mol
-1

Amostra: [AA] = x mol L
-1
; sinal = 6,11 unidade
sinal = K [AA]
padro
(6,11-0,10) = 1,145 [AA]
[AA] = 5,24 mol L
-1
CALIBRAO PONTUAL
Correlao e regresso
CONCENTRAO DO PADRO
SINAL
Quando se usam mtodos instrumentais, necessrio calibrar, freqentemente, os
instrumentos usando uma srie de amostras (padres), cada uma em uma concentrao
diferente e conhecida do analito CURVA DE CALIBRAO EXTERNA
Dois procedimentos estatsticos devem ser aplicados curva de calibrao:
a) Verificar se o grfico linear ou no
b) Encontrar a melhor reta (ou melhor curva) que passa pelos pontos.
Coeficiente de correlao
Para verificar se existe uma relao linear entre duas variveis x
1
e y
1
, usa-se o coeficiente
de correlao de Pearson, r:
n = nmero de pontos experimentais
O valor de r deve estar entre -1 e +1.
( ) | | ( ) | | { }




=
2
1
2
1
2
1
2
1
1 1 1 1
y y n x x n
y x y x n
r
r = +1,0
x
y
r = 0,0
x
y
r = -1,0
x
y
r = 0,0
x
y
Quanto mais prximo de 1, maior a probabilidade de que exista uma relao linear
entre as variveis x e y.
Valores de r que tendem a zero indicam que x e y no esto linearmente
correlacionados.
Regresso linear
Determinar a melhor reta que passa pelos pontos experimentais REGRESSO
LINEAR OU MTODO DOS MNIMOS QUADRADOS.

A equao de uma linha reta : y = a + bx
y = varivel dependente
x = varivel independente
b = inclinao da reta
a = interseco no eixo dos y
( )

=
2
1
2
1
1 1 1 1
x x n
y x y x n
b
x b y a =
1
1
x de valores os todos de mdia x
y de valores os todos de mdia y
=
=
Pela curva de calibrao
a = interseco
b = coeficiente angular = Ay/Ax
0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
0
5
10
15
20
25
Interseco
Ax
Ay
y
x
Clculo x computador
Concentrao 0,00 0,10 0,20 0,30 0,40
Sinal 0,00 5,20 9,90 15,30 19,10
x
1
y
1
x
1
2
y
1
2
x
1
y
1

0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
0,10 5,20 0,01 27,04 0,52
0,20 9,90 0,04 98,01 1,98
0,30 15,30 0,09 234,09 4,59
0,40 19,10 0,16 364,81 7,64
Ex
1
=1,00

Ey
1
= 49,5 Ex
1
2
= 0,30 Ey
1
2
=723,95 Ex
1
y
1
=14,73
Equao y = 0,24 + 48,3x e r = 0,9987
( ) | | ( ) | | { }




=
2
1
2
1
2
1
2
1
1 1 1 1
y y n x x n
y x y x n
r
Clculo x computador
0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
0
5
10
15
20
25
S
i
n
a
l
Concentrao
Computador
Equao y = 0,24 + 48,3x e r = 0,9987
Erros na inclinao e interseco da reta
( )

|
.
|

\
|
= 2 /
^
1 /
n y y S
x y
regresso de reta da partir a valores y =
^

=
2
1 /
) ( / x x S S
x y b

=
2
1
2
1 /
) ( / x x n x S S
x y a
Desvio padro da inclinao:
Desvio padro da interseco:
RESULTADO: b ts e a ts
Erro na estimativa da concentrao
( )
( )
2 / 1
2
2
2
0
/
1
1
(
(
(

+ + =

x x b
y y
n b
S
S
x y
xc
Exemplo
Calcule os desvios padres da inclinao e da interseco da reta y = 48,3x + 0,24 para
intervalo de confiana a 95% .
Concentrao (g mL
-1
) 0,00 0,10 0,20 0,30 0,40
Resposta 0,00 5,20 9,90 15,30 19,10
( )

|
.
|

\
|
= 2 /
^
1 /
n y y S
x y

=
2
1 /
) ( / x x S S
x y b

=
2
1
2
1 /
) ( / x x n x S S
x y a
Desvio padro da inclinao:
Desvio padro da interseco:
O sucesso do mtodo da curva de calibrao muito dependente da exatido com
que so conhecidas as concentraes dos padres e quo prxima a matriz dos padres
est da matriz das amostras a serem analisadas.


Infelizmente, estabelecer esta similaridade de matriz entre amostras complexas e
padres geralmente difcil ou impossvel de ser feita, e os efeitos da matriz levam a
erros de interferncia.


Para minimizar os efeitos da matriz, normalmente necessrio separar o analito do
interferente antes de obter a resposta medida do instrumento.
Mtodo da adio de padro
-Adies de quantidades conhecidas do analito na amostra (spiking)

-Elimina ou minimiza interferncias introduzidas pela matriz de amostras complexas

-A matriz permanece quase inalterada aps cada adio, a nica diferena
concentrao do analito.
t
x x s s
V
c kV c kV
S
+
=
S = resposta instrumental
k = constante de proporcionalidade
V
s
= volume da soluo padro
c
s
= concentrao da soluo padro
V
x
= volume da soluo problema
c
x
= concentrao da soluo problema
V
t
= volume total
A equao da reta : y = a + bx
y = resposta do instrumento
x = concentrao da soluo padro
b = inclinao da reta
a = interseco no eixo dos y
t
s
V
kV
b =
t
x x
V
c kV
a =
Determinao por extrapolao
( )
2 / 1
2
1
2
2
/
1
(
(
(

+ =

x x b
y
n b
S
S
x y
xE
Desvio padro do valor extrapolado
Determinao da concentrao por extrapolao
0 =
+
=
t
x x s s
V
c kV c kV
S
x
s s
x
V
c V
c
0
) (
=
Via grfico
Exemplo
Alquotas de 10,00 mL de uma amostra de gua natural foram pipetadas em frascos
volumtricos de 50,00 mL. Exatamente 0,00, 5,00, 10,00, 15,00 e 20,00 mL de uma
soluo padro contendo 11,10 ppm de Fe
3+
foram adicionados a cada um, seguidos por
um excesso de ons tiocianato para formar o complexo Fe(SCN)
2+
e posterior diluio
para o volume final. A resposta para cada uma das cinco solues, medida com um
colormetro foi determinada como sendo 0,240, 0,437, 0,621, 0,809 e 1,009,
respectivamente. Qual era a concentrao de Fe
3+
na amostra de gua?
0 5 10 15 20 25
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
S
,

a
b
s
o
r
b

n
c
i
a
V
s
(mL)
( )

=
2
1
2
1
1 1 1 1
x x n
y x y x n
b
x b y a =
x
1
y
1
x
1
2
y
1
2
x
1
y
1

0,00 0,240 0,00 0,0576 0,00
1,11 0,437 1,23 0,1910 0,48
2,22 0,621 4,93 0,3856 1,38
3,33 0,809 11,09 0,6545 2,69
4,44 1,009 19,71 1,0181 4,48
Ex
1
=11,1

Ey
1
= 3,116 Ex
1
2
= 36,96 Ey
1
2
= 2,3068 Ex
1
y
1
= 9,03
( )

=
2
1
2
1
1 1 1 1
x x n
y x y x n
b
x b y a =
x
1
y
1
x
1
2
y
1
2
x
1
y
1

0,00 0,240 0,00 0,0576 0,00
1,11 0,437 1,23 0,1910 0,48
2,22 0,621 4,93 0,3856 1,38
3,33 0,809 11,09 0,6545 2,69
4,44 1,009 19,71 1,0181 4,48
Ex
1
=11,1

Ey
1
= 3,116 Ex
1
2
= 36,96 Ey
1
2
= 2,3068 Ex
1
y
1
= 9,03
Equao S = 0,24 + 0,171 [Fe
3+
]
( )

=
2
1
2
1
1 1 1 1
x x n
y x y x n
b
x b y a =
Determinao da concentrao por extrapolao
0 = 0,24 + 0,171 [Fe
3+
] [Fe
3+
] = 1,404 ppm
10 mL de amostra em um balo de 50,00 mL
[Fe
3+
] = 7,018 ppm
Mtodo do padro interno
-Adio de quantidade conhecida de elemento de referncia nos padres e na amostra
-Corrige variaes no sinal analtico devido a mudanas nas condies de anlise.
R
p
= k
p
C
p
V
R
a
= k
a
C
a
V
R = resposta
C = concentrao
V = volume utilizado
k = constante de proporcionalidade
p = padro interno
a = analito
a a
a
p p
p
C k
R
C k
R
=
Uma soluo padro contendo iodoacetona 6,3x10
-8
mol L
-1
e p-diclorobenzeno 2,0x10
-7

mol L
-1
(um padro interno) deu reas de pico de 395 e 787, respectivamente; 3,00 mL de
uma soluo desconhecida de iodoacetona foram tratados com 0,100 mL de p-
diclorobenzeno 1,6x10
-5
mol L
-1
e a mistura foi diluda para 10,00 mL. As reas dos picos
foram de 633 e 520 para a iodoacetona e p-diclorobenzeno, respectivamente. Encontre a
concentrao de iodoacetona nos 3,00 mL da soluo desconhecida original.
Sensibilidade de calibrao
- uma medida de sua habilidade em discriminar entre pequenas diferenas na
concentrao de um analito.
-Dois fatores limitam a sensibilidade: a inclinao da curva de calibrao e a
reprodutibilidade ou preciso do dispositivo de medida.
-Para dois mtodos que tenham a mesma preciso, aquele que tem a curva de calibrao
mais inclinada ser o mais sensvel.
-Definio: INCLINAO DA CURVA DE CALIBRAO A UMA DADA CONCENTRAO DE
INTERESSE (m).

Sensibilidade analtica: = m/s
S
m = inclinao da curva de calibrao
s
S
= desvio padro da medida
0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
0
5
10
15
20
25
m
y
x
br
br
m
ks S S + =
calibrao de curva da inclinao m
deteco de limite LD
branco do medidas das padro desvio s
3 constante k
branco do mdio sinal S
el distinguv mnimo analtico sinal S
br
br
m
=
=
=
= =
=
=
m
s
m
S S
LD
br
br
m
3
=

=
Limite de deteco
-Pode ser definido como a concentrao mais baixa de um analito que pode ser
distinguida com confiana razovel do branco operacional (uma amostra que contm o
analito em concentrao zero)

-Este limite depende da razo entre a magnitude do sinal analtico e o tamanho das
flutuaes estatsticas no sinal do branco.
Sinal < LD
Espcie no detectada ao limite de
deteco da concentrao x, porm
h presena de sinal analtico no
presente no branco.
Limite de quantificao
- a menor concentrao do analito que pode ser determinada com um nvel
aceitvel de preciso e veracidade.

-Pode ser considerado como sendo a concentrao do analito correspondente
ao valor da mdia do branco mais 5, 6 ou 10 desvios padro.



Sinal < LQ
Espcie no detectada ao limite de
determinao ou quantificao da
concentrao x, porm h presena
de sinal analtico no presente no
branco.
O clculo do desvio padro do branco pode ser feito com base na variao das
medidas do branco analtico, da linha de base ou de um padro de concentrao
muito baixa da(s) espcie(s) analisada(s). A escolha depende da tcnica e/ou
instrumentao analtica, sendo funo do parmetro que est sendo medido.
Especificidade e seletividade
-A especificidade e a seletividade esto relacionadas ao evento da deteco.

-Um mtodo que produz resposta para apenas um analito chamado
especfico e respostas para vrios analitos, mas que pode distinguir a resposta
de um analito da de outros, chamado seletivo (livre de interferncia).
Recuperao ou fortificao:
-Consiste na adio de uma quantidade conhecida de analito amostra para testar se a
resposta da amostra corresponde ao esperado a partir da curva de calibrao. As amostras
fortificadas so analisadas da mesma forma que as desconhecidas.

-Deve-se adicionar pequenos volumes de um padro concentrado para evitar mudana
significativa no volume de amostra.



Exemplo: Sabe-se que em uma amostra desconhecida existem 10,0 g de um analito por
litro. Uma adio intencional de 5,0 g L
-1
foi feita numa poro idntica da amostra
desconhecida. A anlise da amostra modificada forneceu uma concentrao de 14,6 g L
-1
.
Determine o percentual de recuperao da substncia intencionalmente adicionada.
100 % x
C
C C
o recupera
adicionada
a fortificad no amostra a fortificad amostra

=
Repetibilidade ou repetitividade:

Mxima diferena aceitvel entre duas repeties, vale dizer dois resultados
independentes, do mesmo ensaio, no mesmo laboratrio e sob as mesmas condies.

a) Mesma amostra;
b) Mesmo analista;
c) Mesmo equipamento;
d) Mesmo momento;
e) Mesmo ajuste;
f) Mesma calibrao
Reprodutibilidade:

Mxima diferena aceitvel entre dois resultados individuais para um mesmo processo e
com demais condies como especificado.

a) Amostras diferentes do mesmo ponto amostral, ou
b) Diferentes analistas, ou
c) Diferentes equipamentos, ou
d) Diferentes tcnicas, ou
e) Diferentes calibraes, ou ajustes.
Exatido:
1.Testes de calibrao: a cada dez anlises realizadas um padro de concentrao
conhecida e diferentes dos usados para construir a curva de calibrao deve ser
analisado.
2. Recuperao da substncia fortificada.
3.Amostra de controle de qualidade: so medidas do controle de qualidade que ajuda a
eliminar vcios introduzidos pelo analista, que sabe a concentrao das amostras de
verificao de calibrao. Amostras de composio conhecida so fornecidas ao analista
como se fossem desconhecida.
4.Brancos.

Preciso:
1.Amostras repetidas (repetibilidade).
2.Pores repetidas da mesma amostra (reprodutibilidade).
Apresentao de resultados calculados
Algarismos significativos
O termo algarismo representa qualquer um dos dez primeiros nmeros, incluindo zero.
O nmero de algarismos significativos o nmero mnimo de dgitos para escrever um
dado valor em notao cientfica sem a perda da exatido.
O zero um algarismo significativo, exceto quando ele o primeiro algarismo do nmero.
142,7 4 algarismos significativos (1,427 x 10
2
)
1,4270 x 10
2
CORRETO?
6,302 x 10
-6
4 algarismos significativos (0,000006302)


As quantidades observadas devem ser registradas com um algarismo duvidoso.
O ltimo algarismo significativo ( direita) numa quantidade medida ter sempre uma
incerteza associada a si.

A incerteza mnima dever ser de 1 no ltimo dgito.

Em geral, quando se l a escala de qualquer aparelhagem, deve-se interpolar entre as
marcaes.

H incerteza em qualquer quantidade medida, mesmo que o instrumento de medida
possua uma leitora digital que no flutue.

Alguns nmeros so exatos com um nmero infinito de dgitos significativos no-
escritos. Para calcular a altura mdia de 4 pessoas, voc dever dividir a soma das alturas
(a qual uma quantidade medida com alguma incerteza) pelo nmero inteiro 4. So
exatamente 4 pessoas, e no 4,000 0,002 pessoas!!!!
Um volume que est entre 20,5 mL e 20,7 mL deve ser escrito como? 20,6 mL ou 20,60
mL?

O arredondamento deve ser feito somente na resposta final (no em resultados
intermedirios).

Adio e subtrao
-se os nmeros a serem adicionados ou subtrados tm igual nmero de algarismos
significativos: resposta deve ficar com o mesmo nmero de casas decimais do nmero
individual
Ex: 5,345 + 6,728 = 12,073
-se os nmeros a serem adicionados ou subtrados no possurem o mesmo nmero de
algarismos significativos: limita-se pelo de menor nmero
Ex: 18,9984032 + 83,80 = 102,7984032 102,80
Ex: 1,632 x 10
5
+ 4,107 x 10
3
+ 0,984 x 10
6
= ?????
A soma ou diferena entre duas ou mais quantidades no pode ter preciso maior do
que a da quantidade que tem a maior incerteza.

Multiplicao e diviso
-limita-se ao nmero de dgitos contidos no nmero com menos algarismos
significativos
Ex: 3,26 x 10
-5
x 1,78 = 5,80 x 10
-5
Ex: 4,3179 x 10
12
x 3,6 x 10
-19
= 1,6 x 10
-6
Ex: 34,60 / 2,46287 = 14,05

A potncia de 10 no influencia em nada o nmero de algarismos significativos que
devem ser mantidos.
Logaritmos e antilogaritmos
Um logaritmo composto de uma caracterstica e uma mantissa. A caracterstica a
parte inteira e a mantissa a parte decimal.
Ex: log 339 = 2,530



O nmero de algarismos significativos na mantissa de log 339 deve ser igual ao
nmero de algarismos significativos existentes em 339. A caracterstica 2, corresponde
ao expoente 3,39 x 10
2
.

Convertendo um logaritmo em seu antilogaritmo, o nmero de algarismos
significativos no antilogaritmo deve ser igual ao nmero de algarismos significativos
existentes na mantissa.
Ex: antilog (-3,42) = 10
-3,42
= 3,8 x 10
-4
Ex: log 0,001237 = ????
Mantissa
Caracterstica
Arredondamento de dados
Ex:
61,60
61,46
61,55
61,61
61,555
61,55
61,56
Regra: arredondar o nmero 5 para o nmero par mais prximo eliminao de tender
a arredondar apenas em uma nica direo.
ou
?