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Doenas diarricas uma das mais importantes causas de mortalidade infantil ate 5 anos Consumo de alimentos imprprios e proximidade entre animais Cultura de fezes so largamente utilizadas no diagnstico de gastroenterite inespecficas
Coprocultura
Patgenos
rotina :
pesquisados na
Salmonella sp Shigella sp Escherichia coli enteropatognica clssica ( inf. a 1 ano ) Escherichia coli enteroinvasora
Coprocultura
Indicao: Diagnstico de diarria aguda OMS: diarria aguda = mais de 3 evacuaes lquidas ou pastosas por dia durando at 14 dias. Evoluo: mais de 2 semanas: diarria persistente mais de 2 semanas : diarria crnica
Coprocultura
Etiologia:
Poucos membros da famlia Enterobacteriaceae so capazes de produzir doenas entricas primrias Procedimentos de rotina diagnstica so direcionados para aos gneros
Salmonella sp Shigella sp E. coli clssica (<1 ano) E. coli invasora-EIEC (qualquer idade)
Coprocultura
Salmonella sp
Causa febre tifide e paratifide e febres entricas Muito invasiva So encontradas em animais e algumas espcies adaptadas ao homem (S typhi e S. paratyphi) Contaminao por manipulao de alimentos. Ex 106-8 para infeces sistmicas
Coprocultura
Shilgella sp
Menos freqente que Salmonella sp Causa desinteria bacilar com agresso da mucosa intestinal Alta reao inflamatria e presena de leuccitos So patgenos efetivos :100-200 organismos para causar infeco Shigelose estritametne humana Contaminao oral-fecal
Coprocultura
E. coli
Causam enterites em crianas de faixas etrias baixas (epidemias em berrios) E. coli importante para crianas < 1 ano EIEC;em qualquer idade-teste sorolgico EPEC ETEC EHEC Infeces de origem endgena
Coprocultura
Outras espcies
Yersinia enteroltica Campylobacter jejuni Vibrio choleraea Rotavrus Nem sempre so pesquisados na rotina Outros gneros de Enterobacterias no so considerados patognicos
Coprocultura
Coleta de Fezes As amostras devem ser coletadas no incio da doena e antes de ser iniciada a antibioticoterapia Transporte Enviadas ao laboratrio dentro de 2 horas (temperatura
Ambiente) , em recipientes estreis, onde sero imediatamente processadas Emulsionar quantidade de fezes aproximada de 1-2 g no meio de transporte (equivalente a uma azeitona grande) e enviada ao laboratrio Ou coletar com swab Selecionar a parte mucide/ sanguinolenta
Meio de Transporte
Coprocultura
Amostras imprprias para cultura: Fezes obtidas h mais de 3 horas e sem conservante Vrias amostras colhidas no mesmo dia Fezes lquidas colhidas ou enviadas em fraldas Meio de transporte com alterao visvel do pH (Cary & Blair ) OBS: Fase preliminar pode-se realizar exame microscpico
de uma gota de suspenso fecal com azul de metileno de Loefler para observar aumento de leuccitos ( processo inflamatrio) caracterstico de Shigella sp e E. coli invasora
Coprocultura
Campylobacter jejuni
Vibrio cholerae
Meio de Transporte
Coprocultura
Selecionar fragmentos de muco ou secreo, caso estejam presentes Semear a amostra em uma placa contendo meio de cultura pouco seletivo diferencial Agar MacConkey (incubar a 35C 24 horas) Optativo Semear em caldo de enriquecimento seletivo Incubar 36,5 C, por 4 a 6 horas
Coprocultura
Do caldo de enriquecimento sub-cultivar em placas de meio seletivo diferencial e incubar 36,5 C Meios de cultura utilizados: gar XLD ( Xilose-lisina-deoxicolato)
Lactose, xilose e sacarose e lisina-alterao da cor das colnias decorrentes da fermentao de C e descarboxilao da lisina E. coli crescem de cor amarela Shigella crescem transparente
gar Hektoen
gar Salmonella Shigella (Agar SS) Colnias vermelhas Lac (+) E. coli Colnias transparente- Lac(-) Shigella sp Colonias transparente com ponto escuro_ Lac (-) e H2S (+) Proteus ou Salmonela sp
Coprocultura
Pesquisa de Salmonella spp
agar Hektoen: No utilizao de lactose, sacarose e salicin: colnias verdes inoculado Produo de H2S: colnias pretas Salmonella Colnias suspeitas: colonias verertes com ou sem o centro preto
No inoculado E.coli
Coprocultura
Pesquisa de Salmonella spp
Agar Hektoen:
Colnia salmo
Colnia azul/verde
Hektoen
Coprocultura
Pesquisa de Salmonella spp
Agar SS
Contm sais biliares, verde brilhante e citrato de sdio (inibe Gram positivoos e Gram negativos Fermentao da lactose (colnias vermelhas) e produo de H2S (centro negro) Colnias suspeitas de salmonela = incolor com centro negro ou no
Agar SS
Coprocultura
Pesquisa de Salmonella spp
Selenito-cistina
sorotipagem Ag O
Ag H
XLD
Coprocultura
Pesquisa de Campylobacter
Campylosel: agar Columbia com 5% de sangue de carneiro, 32 mg/L de cefoperazona, 10 mg/L de vancomicina e 3 mg/L de anfotericina Skirrow: agar 7% sangue de cavalo (lisado), 5 mg/L de trimethoprim, 2500 UI/L de polimixina B e 10 mg/L de vancomicina
Coprocultura
Sais biliares, cristal violeta (inibem Gram+) Fermentao do manitol muda a cor do vermelho neutro
COPROCULTURA
agar CIN
Yersinia: pequenas colnias de 1 mm, centro vermelho e zona translcida ao redor (precipitao de sais biliares). Colnias vermelhas: mannitol + Colnias amarelas: mannitol -
Coprocultura
Vibrio cholerae: Enriquecimento em gua peptonada alcalina por 3h
Clera Aeromonas spp: Agar para Gram negativos Escherichia coli O:157-H:7 agar MacConkey sorbitol (SMAC): Teste de gglutinao
Coprocultura
Antibiograma
Identificao Bioqumica
A utilizao adequada da triagem bioqumica impede a realizao de identificaes bacterianas e antibiogramas desnecessrios. Se for necessrio a realizao da sorologia para o gnero Shigella, testar primeiramente a S. flexneri e posteriormente a S. sonnei , pois estas representam 95% das cepas de Shigella isoladas em nosso meio.
Quando realizada a pesquisa de Salmonella , em um surto, portadores assintomticos ou manipuladores de alimentos, repicar para a triagem bioqumica apenas as colnias com as caractersticas morfolgicas de Salmonella:
MacConkey: lactose negativa Hektoen ou SS: lactose negativa ou H2S positiva XLD: H2S positiva ou transparente ( rosa )