Revista Colombiana de Fsica, vol. 40, No.

1, Abril 2008

Anlisis de la Actividad Fotosinttica de Plantas de Caf Utilizando la Tcnica Fotoacstica

F. Gordillo Delgado1, F. Zrate Rincn 1, C. Meja Morales 1, L. Y. Rivera Puentes 2, H.Ariza Caldern.
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Laboratorio de Optoelectrnica, Universidad del Quindo. Apdo. Postal 2639 Armenia

Corporacin para el desarrollo de la microbiotecnologa y modalidades agropecuarias sostenibles (Biointegrados Recibido 22 de Oct. 2007; Aceptado 3 de Mar. 2008; Publicado en lnea 15 de Abr. 2008

Resumen
En la dcada del 50 empez la tecnificacin de los cultivos de caf en Colombia debido a la alta demanda del grano en el mercado internacional, en la cual prim la utilizacin de fertilizantes de origen qumico. Este proceso result ser insostenible a largo plazo por el costo de insumos y por los efectos nocivos que provoca al medio ambiente. Recientemente, algunas comunidades de pequeos productores han retomado las tcnicas ancestrales de cultivo con el uso de fertilizantes orgnicos con el objetivo de proteger el medio ambiente e independizarse del comercio de fertilizantes y pesticidas. Este cambio necesita del acompaamiento de las ciencias naturales y sociales para agilizar el proceso de tal forma que sea rentable y eficiente. En esta direccin, es de mucho inters el estudio de la fotosntesis, estrechamente relacionada con la aceptacin de nutrientes. En este trabajo se us la tcnica fotoacstica, la cual permite medir procesos fotobricos, para comparar la actividad fotosinttica de plantas tratadas con biofertilizantes con la de aquellas en las cuales se usaron productos qumicos. Palabras claves: Fotoacstica, fertilizantes, fotosntesis.

Abstract
The use of coffee growing technical methods in Colombia began in fifties due to the high demand of the bean in the international market; this fact prioritized the chemical fertilizers utilization. This process turned out to be unsustainable by the chemical products economical costs and the environmental negative effects. Recently, some communities of small producers have retaken the ancestral cultivation techniques with the composting use in order to protect the soil and to obtain independence of the fertilizers and pesticides business. This change needs the support of natural and social sciences to make agile the process of such form that is profitable and efficient. In this way, the photosynthesis study is interesting what is linked with the acceptance of nutrients. In this work the photoacoustic technique was used to measure the photobaric processes, used in plants with biofertilizers and with chemical agents to compare the photosynthetic activity. Key Words: photoacoustic, biofertilizers, photosynthesis. 2008 Revista Colombiana de Fsica. Todos los derechos reservados.

1. Introduccin

La fotosntesis es uno de los procesos ms importantes y complejos que soportan la vida en el planeta. Las plantas realizan este proceso de transformacin de la materia inorgnica en materia orgnica y al mismo tiempo convierten la energa solar en energa qumica. Este fenmeno ocurre en los cloroplastos, que son organelos presentes en las hojas, en algas o en tallos verdes. En los cloroplastos se 186

localizan las membranas tilacoidales que contienen pigmentos, principalmente clorofila a y b, agrupados en centros de reaccin capaces de absorber energa lumnica en diferentes rangos de longitud de onda, abarcando el visible y parte del ultravioleta del espectro electromagntico. Luego de la excitacin de estos centros de reaccin se dan una serie de pasos trmicos que facilitan la transferencia de electrones evitando la recombinacin de carga. Esto lleva a la polari-

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zacin de estos centros y de la misma membrana fotosinttica, en donde luego se generan reacciones complejas de reduccin y oxidacin. Finalmente el resultado de este proceso en plantas mayores lleva a la fijacin del carbono producto de la reduccin qumica de dixido de carbono y a la evolucin de oxgeno desde la oxidacin de agua. Las hojas poseen en su superficie pequeas aberturas o estomas que tienen la capacidad de abrirse o cerrarse para dar paso a la entrada o salida de agua y gases como el dixido de carbono y oxgeno [1]. En este trabajo el seguimiento de la actividad de fotosntesis de colinos de cafeto, a los cuales se les aplicaron tratamientos de fertilizacin utilizando productos de origen sinttico y microbiolgico, se hizo utilizando la tcnica fotoacstica [2]. Est tcnica se basa en los cambios de presin en una celda producidos por procesos de desexitacin no radiativos de la muestra causados por la absorcin de luz pulsada peridicamente. Cuando la muestra presenta adicionalmente actividad fotoqumica, los cambios de presin debidos a la posible produccin de gases son sumados a esta seal fototrmica. De esta forma la razn de evolucin de oxigeno y la energa almacenada en forma de enlaces qumicos en el proceso fotosinttico pueden ser estudiados [3, 4]. Se hizo adems un estudio morfolgico de las hojas utilizando un microscopio ptico para observar fundamentalmente el estado de los estomas. 2. Materiales, Mtodos y Experimentacin El anlisis de la fotosntesis se hizo en plantas de cafeto de 7 meses de edad (colinos), las cuales fueron agrupadas segn el tipo de tratamiento. A un primer grupo se le aplicaron insumos qumicos, a un segundo biofertilizantes y se tom un grupo de control al cual nicamente se le suministr agua. El equipo de fotoacstica que se utiliz para hacer el seguimiento de la actividad fotosinttica de las muestras consta de una lmpara de arco de Xenn de 1000 W, que emite un haz de luz blanca, la cual es dirida hacia un monocromador Triax 190, que se encarga de seleccionar a la salida del mismo una longitud de onda. Esta luz monocromtica se pulsa a travs de un chopper mecnico y se hace incidir sobre un disco de hoja de 5mm de dimetro colocado en el interior de una celda fotoacstica cerrada. En su interior la celda tiene adaptado un micrfono que funciona como detector de los cambios de presin generados por el efecto fotoacstico y fotobrico ocurridos en la muestra, y produce un voltaje proporcional a la intensidad de la seal, el cual es amplificado a travs de un Lock-in. Para observar la contribucin debida a la evolucin de oxgeno se satur la fotosntesis usando una luz de fondo no modulada proveniente de una lmpara halgena de Xenn de 250 W, la cual fue conducida hasta el envs de la hoja por una fibra ptica. 3. Resultados y discusin

Para frecuencias bajas de modulacin de la luz incidente sobre hojas de plantas mayores, entre 10 y 100 Hz, los cambios de presin en la celda FA representados por el vector S, se deben principalmente a la seal fototrmica PT, a la evolucin inmediata de oxigeno, O, y al almacenamiento de energa fotoqumica PL por la fijacin de carbono a travs
Amplitud de la seal FA (u.a.)
1.00

0.95
Fertilizantes sintticos. Control Biofertilizantes

0.90

0.85

0.80 0

Encendido 100 200 300

Apagado

Tiempo (s)

400

500

Fig.1 Curvas de evolucin de oxgeno

-0.8 -1.0 -1.2 -1.4 -1.6 -1.8 -2.0 4 5

Clculo a partir de datos experimetales para hoja de planta tratada con biofertilizantes. ajuste lineal

ln (O/PT)

1/2

(Hz)

1/2

10

Fig.2 logaritmo natural de O sobre PT en funcin de la raz de la frecuencia.

de una reaccin enzimtica retardada, de tal forma que se puede escribir: S=PT (1-PL)+O. La adicin de una fuerte luz blanca de fondo no modulada satura la fotosntesis y genera un valor constante en la evolucin de oxgeno, as que la seal fotoacstica resultante, S + , es debida a la contribucin fototrmica mxima, S +=PT. De aqu, el cambio en la evolucin de oxgeno, se puede obtener de la expresin: O=S- S+(1-PL). El valor de PL se puede hallar infiltrando con agua la hoja o aumentando la frecuencia de modulacin (> 200 Hz), ya que de esta forma

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disminuye la seal debida al cambio en la evolucin de oxigeno. De la solucin de la ecuacin de onda para la concentracin de oxgeno producido se puede obtener la ecuacin 1, donde D0 es la constante de difusin para el oxgeno, A es una constante que depende la muestra y la geometra de la celda FA, y DTH es la difusividad trmica de la muestra [5, 6, 7]. ur uuu r 1/ 2 1/ 2 1/ 2 1/ 2 O / P T = A exp (1) (1 / D O 1 / D T H ) lf La seal FA obtenida de una de las hojas de caf, utilizando una frecuencia de modulacin de 17 Hz, se muestra en la Fig.1. La evolucin peridica de oxgeno se registra luego de que se aplica luz de fondo no modulada durante un tiempo de aproximadamente 150 segundos, de tal forma que la seal decae hasta PT. La componente fotoqumica PL presente en la hoja es despreciable en comparacin con las otras seales [3], por esta razn la informacin obtenida de la curva se puede utilizar para monitorear directamente la razn de evolucin de oxgeno, cuya cuantificacin se encuentra en la tabla 1. En la Fig. 2 se hizo el anlisis del comportamiento de la razn O/PT en funcin de la frecuencia teniendo en cuenta la ecuacin 1. Considerando el valor de la distancia de difusin lineal, l, como 1 m, de acuerdo con un valor reportado para la hoja de tabaco [8]; y el valor de la difusividad trmica previamente medido a travs de la tcnica fotoacstica, de 0,0041 cm2/s, se estim el valor de la constante de difusin de oxgeno en 1,5x10-6 cm2/s. En las Fig.4, 5 y 6 se muestran unas de las microfotografas tomadas con un aumento de 40X de las cuales se obtuvo el conteo de estomas abiertos y cerrados por unidad de rea. Estos valores que se muestran tambin la tabla 1, evidencian el estrs al que son sometidas las plantas a las cuales se les aplica fertilizantes sintticos, pues a pesar de que la actividad fotosinttica es ms alta, el nmero total de estomas en sus hojas es menor, lo cual obliga a que en promedio se tenga igual proporcin de estomas abiertos que cerrados. 4. Conclusiones Se hizo el seguimiento de la actividad fotosinttica de colinos de caf con diferente tipo de tratamiento de fertilizacin usando como herramienta la tcnica fotoacstica. Las mediciones muestran que el porcentaje de la razn de evolucin de oxgeno en las plantas tratadas con abonos sintticos es ms alto que el de las plantas tratadas con biofertilizantes, con el costo del estrs causado en la planta, el cual es evidenciado por la proporcin entre el nmero de estomas abiertos y cerrados en cada caso. Los productos microbiolgicos para la fertilizacin de cafeto son una alternativa limpia y sostenible para este cultivo que puede ser validada por esta tcnica a travs del seguimiento de la actividad fotosinttica considerando diferentes variables en el manejo de estos productos, como dosificacin, frecuencia de aplicacin y microorganismos seleccionados para la fabricacin de los biofertilizantes.

Fig.3 Colinos de 3 meses (biopreparado y control)

Fig.4 microfotografa de una hoja de planta tratada con biopreparados

Fig.5 microfotografa de una hoja de planta tratada con fertilizantes sintticos.

Fig.6 microfotografa de una hoja de planta de control.

Referencias
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[6] R. C. Mesquita, A. M. Mansanares, E. C. da Silva, P. R. Barja, L. C. M. Miranda, H. Vargas, Instrumentation Science & Technology, 34, 33-58 (2006). [7] I. Christov, D. Stefanov, T. Velinov, V. Goltsev, K. Georgieva, P. Abracheva, Y. Genova, N. Christov, Journal of Plant Physiology, 164, 1124-1133 (2007). [8] H. L. Gorton, S. K. Herbert, and T. C. Vogelmann. Plant Physiology; 132(3), 15291539 (2003).

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