BIOQUMICA PARA BACTERIOLOGA DOC. MIGUEL GUZMN N MSc.

CARBOHIDRATOS DE IMPORTANCIA BIOLGICA

cidos urnicos. La oxidacin del grupo alcohlico primario terminal general los cidos

urnicos, conservndose intacto el aldehido. El ms importante de este grupo es el cido D-glucurnico, derivado de la glucosa. En los mamferos, el cido glucurnico, el cual existe en forma cclica (Consultar estructuras), reacciona con varios compuestos poco solubles en agua hacindolos ms solubles, favoreciendo su excrecin por bilis y orina. Entre estos compuestos estn las hormonas sexuales, la bilirrubina conjugada y diversos frmacos y sustancias txicas. Adems, el cido glucurnico forma parte de diferentes polisacridos (ver ms adelante) como el cido hialurnico, constituyente del tejido conjuntivo, y el anticoagulante heparina. Los cidos glucnicos y glucurnico se encuentran generalmente en forma de lactonas. La gulonolactona forma parte, junto con el glucuronato, de un ciclo en el cual se forma en todos los mamferos (menos primates y cobayos) el cido ascrbico (vitamina Q cuya estructura es tambin de tipo lactona (Consultar estructuras).

AMINOAZCARES Estos compuestos no se encuentran en estado libre, sino incorporados a molculas como glucolpidos, glucoprotenas, glucosaminoglucanos, etc. En estado libre, las hexosaminas son txicas para las clulas hepticas. Varios antibiticos como la eritromicina y la carbomicina contienen aminoazcares; se piensa que los aminoazcares estn relacionados con su actividad antibitica. Existen aminoazcares ms complejos, constituidos por una hexosamina acetilada y un cido de tres carbonos, como son los cidos N-acetilmurmico y N-acetilneuramnico (Consultar estructuras). El primero se encuentra formando parte de la pared celular de las bacterias gram-positivas y el cido N-

acetilneuramnico (NANA) y sus derivados, llamados genricamente cidos silicos (del griego sialis, saliva), porque se les hall en las glucoprotenas de la saliva. Tambin se encuentran cido N-acetilneuramnico en algunos ganglisidos cerebrales, de ah su nombre (del griego neuros, cerebro). La Eritromicina fue el primer macrlido descubierto, en 1952, por J. M. McGuire y colaboradores. El compuesto se hall en los productos metablicos de una cepa de, Streptomyces erytherus.

Desoxiazcares. Se denominan as los monosacridos en los que un -OH es

reemplazado por un -H. El ms importante es la 2-desoxi-D-ribosa, componente del cido desoxirribonucleico (DNA). Otros desoxiazcares raros son representantes de la serie L, como la L-fucosa y la L- ramnosa. Estos ltimos se encuentran formando parte de glucoprotenas o como componentes de la pared celular de algunas bacterias. La 2desoxiglucosa es un importante inhibidor del metabolismo de la glucosa

POLISICARIDOS Pectinas. Son polisacridos responsables del aspecto de jaleas que pueden extraerse de
cascaras de manzanas, peras, etc. Se utilizan como medicamentos astringentes en casos de diarreas no infecciosas. Son polmeros de cido galacturnico.

Clasificacin de los glucosaminoglucanos

Las soluciones de cido hialurnico son extremadamente viscosas. Abunda como cemento intercelular, en el lquido sinovial, articulaciones, humor vitreo y en general en el tejido conectivo. Desempea un papel en la hidratacin de estos tejidos, porque fija molculas de agua por sus grupos polares. Es producido, sobre todo, por los tejidos en desarrollo o en proceso de cicatrizacin. La enzima hialuronidasa contenida en algunas bacterias y en el espermatozoide, hidroliza el polisacrido con disminucin de la viscosidad del halo celular.

Condroitina. Es parecida al cido hialurnico excepto que contiene N-acetilgalactosamina

en lugar de N-acetilglucosamina. Sus derivados sulfatados (fig. 6.30) son componentes de cartlados, huesos, crnea, piel, arterias y otros tejidos conectivos. Estructuralmente, el dermatn sulfato est muy relacionado con los anteriores excepto que contiene cido Lidurnico en lugar del cido D-glucurnico (fig. 6.31). El queratn sulfato no contiene cido urnico sino galactosa en su lugar. Por tanto, su acidez depende de la existencia de grupos sulfato (fig. 6.32). El queratn sulfato est casi ausente en el momento del nacimiento y aumenta su contenido hasta los 30 aos. Se localiza en cartlago, crnea, huesos y el ncleo pulposo de los discos intervertebrales. Heparina. Es un polisacrido ms corto que el queratn sulfato pero con la misma estructura base. Su particularidad consiste en no contener grupo acetilado en la funcin amina de la glucosamina, sino un grupo sulfato en unin sulfamida. La heparina deriva su nombre de haber sido encontrada por primera vez en el hgado (del griego hepar, hgado); es fabricada por basfilos y clulas cebadas (mastocitos). Se encuentra en muchos tejidos como pulmn, paredes arteriales y sobre todo, en hgado. Su funcin es impedir la coagulacin prematura de la sangre.

ENFERMEDADES

Mucopolisacaridosis. Son un grupo de enfermedades de almacenamiento lisosomal

producidas por, deficiencia hereditaria de enzimas especficas implicadas en la degradacin de los glucosaminoglucanos. A excepcin de unos cuantos, los glucosaminoglucanos se encuentran como proteoglicanos presentes en la matriz extracelular del tejido conectivo. En condiciones fisiolgicas, estos proteoglicanos son renovados por endocitosis y lisis por parte de las proteasas de los lisosomas que digieren la protena (endoglicosidasas). Cada enzima lisosomal es especfica para determinado tipo de enlace. La deficiencia de alguna de ellas induce a la acumulacin de glucosaminoglucanos parcialmente degradados en los lisosomas, lo cual produce alteraciones del tejido conectivo, sobre todo de corazn, hueso y sistema nervioso central. En la mucopolisacaridosis tipo II (MPS H), conocida como sndrome de Hunter, la enzima ausente (L-sulfoiduronato-suffatasa) est codificada por un gene del cromosona X; todas las dems estn codificadas por cromosomas autosmicos. Las enzimas ausentes pueden ser la a-L-iduronidasa, N-acetil-glucosaminidasa, N-acetil-galactosamina-4-sulfatasa, Pglucuronidasa, etc. (tabla 6.2). En conjunto la incidencia de las mucopolisacaridosis es de 1:30,000 nacimientos. Modelo clnico: MUCOPOLISACARIDOSIS TIPO I O SNDROME DE HURLER Una nia de 4 aos fue enviada al servicio de Gentica. Refiere la madre que la nia empez a manifestar los sntomas al ao de edad, con malformacin de la cara, respiracin ruidosa y retraso en el desarrollo psicomotor. A la exploracin fsica se corroboran los siguientes datos: Paciente con talla y peso bajo, facies grotesca, opacidad corneal bilateral, nariz achatada, labios gruesos, encas hipertrficas, mala oclusin dental lengua gruesa, cuello corto y ancho, abdomen con hepato y esplenomegalia, giba toracolumbar, hirsutismo generalizado. Los exmenes de laboratorio reportan: Prueba de azul de toluidina en orina: positiva Cultivo de fibroblastos en piel: vacuolas intracitoplsmicas por acumulo de polisacridos.

Glicoprotenas Es un grupo heterogneo de protenas que presentan una distribucin universal; la gran mayora de las protenas de la membrana celular y de las protenas secretadas por las clulas son glicoprotenas. Se llaman genricamente mucinas a las glicoprotenas ricas en glcidos aisladas del mucus (secrecin de las glndulas mucosas). Las glicoprotenas estn constituidas por monosacridos (galactosa, maosa), aminoazcares, desoxiazcares y sobre todo, cido N-acetil-neuramnico (NANA). La fijacin a la cadena polipeptdica se hace generalmente sobre la cadena lateral de un residuo de asparagina mediante unin N-glucosdica; tambin puede unirse la cadena oligosacrida con el hidroxilo de serina o treonina mediante unin O-glucosdica (sobre todo en las mucinas) (Consultar estructuras). Las glicoprotenas son generalmente extracelulares. En el plasma sanguneo se encuentran ms de 80 glucoprotenas diferentes con funciones muy precisas (Tabla 6.3)

Las glicoprotenas se encuentran en la superficie externa de todas las membranas celulares. Se usa el trmino glucocliz para referirse a la zona, rica en carbohidratos, de la superficie celular de eucariotas. Estas molculas desempean un importante papel en el proceso de reconocimiento de las clulas entre s y con otras, como bacterias y virus. Por ejemplo, los grupos sanguneos del sistema ABO; los eritrocitos de individuos del grupo A poseen N-acetilgalactosamina y los del grupo B tienen galactosa como monosacrido terminal del oligosacrido antignico; las personas AB tienen ambos monosacridos, los cuales estn ausentes en las personas del grupo O.

Microfotografa electrnica de un glicocalix de epitelio intestinal (izquierda).

Esquema del glicocalix de una clula eucariota Las diferencias entre los grupos sanguneos se hallan determinadas por ciertos oligosacridos muy cortos, presentes en las membranas plasmticas de los glbulos rojos o eritrocitos. Estos oligosacridos slo difieren en sus monmeros terminales y estn ligados a una protena transmembranosa o a una ceramida de la membrana plasmtica. Por ejemplo, los eritrocitos pertenecientes al grupo sanguneo A, presentan como monosacrido terminal una N-acetilgalactosamina y los del grupo B una galactosa. Cuando ambos monosacridos terminales estn ausentes estamos en presencia del grupo 0.

El factor Rh [factor erre hache] es una protena integral de la membrana aglutingena de los glbulos rojos. Son Rh positivas aquellas personas que presenten dicha protena en sus eritrocitos y Rh negativa quienes no presenten la protena. Un 85% de la poblacin tiene en esa protena una estructura dominante, que corresponde a una determinada secuencia de aminocidos que en lenguaje comn son denominados habitualmente Rh+. Alrededor de la sexta semana de gestacin, el antgeno Rh comienza a ser expresado en los glbulos rojos humanos. Vamos a suponer que una mujer con factor Rh- est gestando un feto con factor Rh+. Ante la posibilidad que los eritrocitos fetales tomen contacto con la sangre materna, por ejemplo, tras una cada, toma de muestras de sangre directamente del cordn umbilical, por un aborto o un examen prenatal invasivo, se producir una reaccin con produccin de aglutininas maternas anti Rh y consecuente destruccin de glbulos rojos del feto. Ello es debido a que los eritrocitos maternos consideran extraos a los eritrocitos fetales. Teniendo en cuenta que la formacin de anticuerpos demanda un tiempo relativamente largo, es posible que el feto no sufra consecuencias o bien nazca de manera prematura.En estos casos, la madre qued sensibilizada contra los aglutingenos Rh+. Si con el tiempo sucede otro embarazo de un feto factor Rh+, los anticuerpos antes generados atraviesan la placenta para combatir los eritrocitos Rh+ fetales, ocasionando diversos trastornos que van desde una leve ictericia por aumento de bilirrubina en sangre hasta un cuadro grave de anemia por destruccin de glbulos rojos (hemlisis) que puede ocasionar un aborto espontneo. Esta enfermedad se conoce como eritroblastosis fetal o enfermedad hemoltica del recin nacido. El tratamiento puede realizarse en forma intrauterina (antes del nacimiento) por medio de frmacos o transfusiones de sangre a travs del cordn umbilical.

La forma de evitar esta enfermedad es identificar a las madres Rh- en los primeros meses del embarazo mediante un anlisis de su sangre. Las que poseen dicho factor deben recibir inmunoglobulina Rh en los primeros meses del embarazo y una segunda dosis a las 72 horas de producido el parto. De esa forma se previene que los anticuerpos Rhmaternos reaccionen con las clulas Rh+ fetales. La mujer puede tambin quedar sensibilizada al momento del parto, donde se desprende la placenta y los glbulos rojos del beb Rh+ toman contacto con los de la madre Rh-. El nio nace normalmente, pero la madre queda inmunizada con aglutininas anti Rh que entrarn en accin ante una futura gestacin de un feto Rh+. AMINOCIDOS Y PROTENAS La omitira funciona como intermediario en el metabolismo de la treonina, aspartato y metionina; junto con la citrulina, es un intermediario en la biosntesis de la urea.

La DOPA (dihidroxifenilalanina) es un aminocido neurotransmisor, precursor de la melanina y se encuentra en la va metablica biosinttica de las aminas neurotransmisoras: dopamina, adrenalina y noradrenalina.

Receptores
Hay muchos procesos clave de liberacin de catecolaminas: Los receptores adrenrgicos (noradrenalina y adrenalina): Estos dos neurotransmisores tienen una gran diversidad de efectos, que se explica por la presencia de diferentes receptores, que en cada tipo de clula estn acoplados a vas de transduccin distintas. En el msculo liso puede producir contraccin si se activan los receptores , y se relajan si actan sobre los receptores 2. En los vasos sang uneos

producen vasoconstriccin y vasorelajacin. En los bronquios producen broncodilatacin (al revs que los vasos). En el tubo digestivo provoca constriccin y relajacin. En el corazn aumenta la frecuencia cardaca y su intensidad; incrementando el gasto cardaco. Los receptores adrenrgicos estn estructuralmente relacionados, pero tienen distintos segundos mensajeros. Se distinguen receptores y ; adrenalina y noradrenalina son agonistas para ambos receptores, pero estos tienen ms agonistas y antagonistas. El receptor puede ser 1 2. El 1 puede ser A, B D. Estos tres se diferencian en los antagonistas, la localizacin, la estructura y el mecanismo efector (adenilato ciclasa). En este caso, lo que importa es que en cada sitio del organismo la adenilato ciclasa causa un efecto distinto. Los pueden ser 1, 2 3. Difieren en los antagonistas, y las caractersticas. Pero los 3 estimulan la adenilato ciclasa. Los receptores dopaminrgicos: Son, igual que los anteriores, metabotrpicos. Pueden ser D1, D5, D3, D4 y D2. Los D2 pueden ser S (short) o L (long). Los D1 y D5 estimulan la adenilato ciclasa. Los otros tres la inhiben, pero los D2 y D4 activan canales de potasio. Los D2 pueden inhibir un canal de calcio. Aparte del agonista comn (dopamina), cada canal tiene sus propios agonistas. Algunos, como el sulpirilo y la clozapina tienen efectos anti-psicticos. El AMPc activa a la protena quinasa A, que puede provocar respuestas a corto plazo, o ms largas a travs de factores de transcripcin, de manera directa o indirecta. Esta ltima est mediada por el gen de respuesta inmediata (IEG). A corto plazo es fosforilacin, y a largo plazo es alterando la expresin gnica. Tambin hay receptores en la terminal presinptica (autorreceptores), y tambin en otras terminales presinpticas que no liberan dopamina. Los D4 y D2 son los que tienen demostrada esta caracterstica. Funciones Dos catecolaminas, la noradrenalina y la dopamina, actan como neurotransmisores en el Sistema Nervioso Central y como hormonas en el torrente sanguneo. Las catecolaminas causan generalmente cambios fisiolgicos que preparan al cuerpo para la actividad fsica (como la lucha, la huida,...). En todos los seres vivos se han aislado pptidos de inters biolgico. Uno de los ms sencillos es el tripptido glutatin (y-glutamil- cisteinil-glicina), en el cual el glutamo inicial est unido a la cistena por medio del carboxilo gama (y) en lugar del alfa ( a ), como ocurre con la gran mayora de los pptidos. Este tripptido lleva a cabo funciones oxidorreductoras por su grupo sulfhdrilo (-SH), se requiere para la actividad de varias enzimas y participa en el transporte de aminocidos. Un grupo importante es el de los pptidos cerebrales con actividad de neurotransmisores, como la sustancia P (decapptido) o los analgsicos opiceos como las endorfinas y encefalinas. Tir-Gli-GliFen-Met Encefalina (Metionina) Arg-Pro-Lis-Pro-Gln-Fen- Fen-Gli-Leu-Met Sustancia P. La oxitocina y vasopresina son poliptidos cclicos. Los antibiticos polipeptdicos a menudo contienen D y L-aminocidos y otros no presentes en protenas, por ejemplo, la tirocidina y gramicidina S, que contienen D-fenilalanina y ornitina. Estos poliptidos no son sintetizados en los ribosomas.

PROTENAS Las protenas constituyen sin duda uno de los grupos de molculas de gran trascendencia en los seres vivos. Todas las protenas son polipptidos de peso molecular elevado. Arbitrariamente, como se ha sealado antes, se ha establecido como lnea divisoria entre poliptidos y protenas un peso molecular de 8,000 y 10,000. Una protena simple es aqulla que contiene slo aminocidos; una protena compleja contiene, adems, otras molculas diferentes como el hemo (de la hemoglobina), vitaminas, lpidos, carbohidratos o elementos minerales (metaloenzimas). Las protenas desempean una amplia variedad de funciones que pueden agruparse en dos clases: dinmicas y estructurales. De las funciones dinmicas, la ms importante es la funcin cataltica. De hecho, la mayor partede las reacciones qumicas celulares son catalizadas por enzimas, casi todas ellas de naturaleza proteica. En realidad, estas molculas son tan importantes que merecen un captulo especial dentro de la bioqumica. Otra funcin dinmica de las protenas es el transporte, ejemplos de este grupo son la hemoglobina y mioglobina. Otras protenas actan como hormonas. Las protenas tambin pueden funcionar con un papel protector como las inmunoglobulinas y el interfern. Algunas participan en los mecanismos contrctiles como la miosina y actina. Otras tienen una funcin de reconocimiento, como es el caso de los receptores hormonales situados en la membrana celular o en el citosol. Dentro de las protenas estructurales se encuentran el colgeno, la elastina y la queratina. As pues, las protenas son quiz las macromolculas ms verstiles, que se responsabilizan en gran parte de las funciones metablicas y de la morfologa de los seres vivos. No en vano el trmino protena deriva del griego proteos que significa "primero", "primoridal Clasificacin en base a la solubildad Un sistema de clasificacin basado en la solubilidad todava est en uso, en particular en bioqumica clnica. Sin embargo en esta clasificacin, no se puede hacer una distincin entre albminas y globulinas nicamente en base a sus solubilidades en agua o en soluciones salinas. As, se subdividieron en seudoglobulinas (solubles al agua) y euglobulinas (insolubles en agua exenta de sales). Albminas Solubles en agua y en soluciones salinas. Sin aminocidos distintivos Globulinas Escasamente solubles en agua pero solubles en soluciones salinas. Sin aminocidos distintivos Protaminas Solubles en etanol a 70-80% pero insolubles en agua y en alcohol etilco absoluto. Ricas en arginina Histonas Solubles en soluciones salinas Escleroprotenas Insolubles en agua o en soluciones salinas. Ricas en glicina, alanina y prolina. Clasificacin en base a la funcin Las protenas se pueden clasificar de acuerdo a sus funciones en protenas estructurales, catalticas (enzimas), reguladoras, protectoras (inmunoglobulinas), de transporte, etc.

Hemoglobina y mioglobina
Las hemoglobinas son protenas globulares, presentes en los glbulos rojos, que fijan oxgeno en los pulmones y lo transportan por la sangre hacia los tejidos; al volver a los pulmones desde los capilares, actan como transporte de CO2 y de iones hidrgeno. La hemoglobina (Hb) est formada por la protena globina (una histona) y el grupo prosttico hemo. La protena globina desde el punto de vista de su estructura cuaternaria es un

tetrmero, es decir, la constituyen 4 subunidades, cada una de ellas formada por cadenas polipeptdicas con dos estructuras primarias diferentes y cada subunidad con su grupo hemo. La mioglobina (Mb) es una protena que almacena 02 en el tejido muscular rojo. A diferencia de la hemoglobina, la mioglobina est compuesta por una sola cadena polipeptdica (monmero) y un solo centro de fijacin de 02 (hemo). La cadena polipeptdica consta de 153 aminocidos y tiene un PM de 17,000. El polipptido P de la Hb es muy semejante a la mioglobina. Su distribucin especial es el de una superficie polar y el interior no polar, patrn caracterstico de las protenas globulares. Consultar que son las Talasemias

Estructura y funcin de los anticuerpos

La inmunologa estudia todos los fenmenos bioqumicos y fisiolgicos de defensa gracias a los cuales el organismos distingue lo propio (nuestros tejidos y clulas) de lo no propio (bacterias, virus, hongos, parsitos, clulas tumorales, trasplantes, etc.) y es capaz de destruir a las sustancias extraas. Todas las acciones de respuesta a material extrao se denominan respuesta inmune. Esta respuesta puede ser de tipo celular y de tipo humoral. En la respuesta celular interrvienen clulas sanguneas denominadas linfocitos T (que maduran en el timo), que actan directamente o bien a travs de sustancias por ellas liberadas llamadas linfocinas. En la respuesta humoral intervienen los linfocitos B (de bursa o bolsa de Fabricio de las aves), y su accin se ejerce a travs de los anticuerpos (inmunoglobulinas) que clulas derivadas de estos linfocitos B segregan. Las molculas de anticuerpos (Ab) son protenas que pertenecen a las inmunoglobulinas. Cuando se introduce al organismo una sustancia extraa como una protena, un polisacrido o un cido nucleico, las clulas plasmticas, derivadas de un linfocito B, producen anticuerpos. La molcula de anticuerpo se asocia de forma no covalente con la sustancia extraa y la elimina del organismo. Las sustancias que inducen la produccin de anticuerpos en un organismo se denominan antgenos (Ag). Para que una sustancia acte como antgeno en un organismo debe poseer una estructura qumica distinta de los constituyentes propios de ese organismo. Por ejemplo, la albmina de cualquier mamfero, excepto la humana, es antignica para el hombre cuando se la introduce parenteralmente. Un antgeno puede contener mltiples determinantes antignicos, que son pequeas regiones de la molcula de antgeno que inducen especficamente la produccin de un anticuerpo. En las protenas, por ejemplo, un determinante antignico puede comprender slo seis o siete aminocidos en total de la protena. Un antgeno puede poseer decenas o miles de estos grupos determinantes, de tal manera que inducirn mltiples tipos de anticuerpos, cada uno de ellos capaz de reconocer y unirse a cada uno de los determinantes. En general, un determinante antignico solo o una molcula pequea, no determinan la formacin de anticuerpos pero, al unirse covalentemente a molculas grandes, facilitan la gnesis de anticuerpos dirigidos especficamente contra la molcula pequea. A estas molculas pequeas se les conoce como haptenos.

Al estimularse los linfocitos B con un antgeno se induce una serie de cambios que los hace transformarse en clulas plasmticas. Estas poseen la funcin de sintetizar y secretar inmunoglobulinas a las cuales en un principio, se les denomin anticuerpos; lego, al descubrirse la electroforesis, y ver que emigraban en la fraccin gamma, se les dio el nombre de gammaglobulinas. Sin embargo, al conocerse con precisin su estructura y funcin en 1965, se le denomin inmunoglobulinas (Ig).