Proliferacin y razn de crecimiento tumoral INTRODUCCIN Por qu un tumor crece ms rpido que otro?

Los tres factores ms importantes son la razn en la que la clula del tumor realizan el ciclo celular, la fraccin de clulas tumorales que estn pasando por un ciclo, y la razn de la prdida de clulas del volumen del tumor. Estas caractersticas son en gran parte determinadas por el perfil gentico subyacente de las clulas tumorales, determinadas por el tejido de origen y los cambios causados por la transformacin maligna. La velocidad del desarrollo de la evolucin de la enfermedad en pacientes con cncer depende en gran medida de la razn de crecimiento, de la eleccin primaria tumoral y la metstasis. En pacientes en los que los tratamientos no funcionan, en tiempo en volverse a producir y por tanto la supervivencia del paciente dependen de la razn del crecimiento del tumor. Otros factores determinantes son el efecto sobre el paciente desde la localizacin, la capacidad invasiva y las propiedades bioqumicas de las lesiones.

EL ORIGEN DEL CNCER El cncer se origina a partir de una sola clula. Cuando un tumor es detectable ha adquirido ya un tamao considerable, alrededor de 0.5 cm de dimetro para su deteccin por rayos X, y de 1 cm por palpacin. Por lo tanto, est constituido por un elevado nmero de clulas, desde 100 hasta incluso 1.000 millones. Hoy sabemos que todas las clulas de un tumor benigno o maligno derivan de una sola clula, es decir, que los tumores son monoclonales. Esto no significa, sin embargo, que las clulas de un tumor sean genticamente idnticas. El proceso de formacin de un tumor a partir de una clula implica necesariamente la acumulacin sucesiva de alteraciones en los genes durante el perodo de aos de crecimiento hasta que se hace aparente. Durante este proceso dinmico de tipo evolutivo, aquellas clulas que van adquiriendo alteraciones en su material gentico que les proporcionan una ventaja en cuanto al crecimiento, van siendo seleccionadas y sern mayoritarias en el tumor. As, las clulas cancerosas son inestables genticamente, siendo esta seleccin de clulas de crecimiento progresivamente ms rpido la caracterstica que las hace ms competitivas frente a las clulas normales circundantes y que las lleva primero a proliferar sin restricciones, y posteriormente a adquirir capacidad invasiva y formar tumores secundarios o metstasis. Este proceso de carcinognesis tumoral se compone de alteracin gnica (mutacin), competicin y seleccin celular, y tiene lugar durante aos de modo similar a la seleccin natural que dirige la evolucin de los organismos en perodos mucho ms largos. Por ello se dice que la carcinognesis tumoral tiene un carcter microevolutivo. Ms adelante volveremos a analizar este proceso con mayor detalle.

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Composicin celular de los tumores segn el modelo monoclonal.

El cncer es una enfermedad gentica, pero generalmente no hereditaria. El hecho de que todas las clulas de un tumor provengan de una nica clula que resulta alterada implica que esta anormalidad de origen se transmite de la clula inicial a sus clulas descendientes. Es importante entender que la transmisin de las alteraciones de unas clulas cancerosas a sus clulas progenie no implica que el desarrollo de un cncer en un individuo sea heredado por su descendencia. Existen otros defectos genticos hereditarios en los que se transmite una predisposicin a desarrollar bien un tipo especfico o bien mltiples tipos de cnceres. El cncer se inicia por mutacin de genes que controlan la proliferacin celular. Las clulas se dividen cuando y donde conviene, de acuerdo a las necesidades del organismo. Hay clulas que, unas vez especializadas en realizar una funcin cesan de dividirse y nunca ms lo vuelven ha hacer durante toda la vida del individuo. El cncer se inicia a partir de una clula que crece sin control. La proliferacin excesiva es el resultado de la prdida del control de un proceso bsico celular como es la capacidad de duplicar su contenido en ADN y otros muchos componentes, dando lugar a dos clulas hijas. Si tanto el funcionamiento como la morfologa de la clula son el resultado de la expresin de un conjunto de los genes, el cncer debe originarse como

Proliferacin y razn de crecimiento tumoral consecuencia de la alteracin o mutacin inicial de algn gen. Esta mutacin iniciadora debe conferir una mayor capacidad de proliferacin, permitiendo sobrepasar los mecanismos que controlan la divisin celular. Otra posibilidad en el caso de clulas que mantienen un ciclo activo de divisin, es que esta mutacin cause la inhibicin de la diferenciacin de las clulas es decir, la adquisicin de las caractersticas de clulas maduras especializadas en una funcin determinada. Como resultado de la mutacin iniciadora, o de la acumulacin de varias mutaciones en distintos genes, una clula puede crecer formando un tumor. El cncer aparece cuando las clulas de los tumores primarios que crecen en un determinado lugar, adquieren la capacidad de escaparse e invadir otros tejidos, colonizarlos y crecer en ellos volviendo a generar tumores secundarios. Estos fenmenos de invasividad y metstasis implican nuevas mutaciones, ya que en condiciones normales las clulas ocupan una localizacin definida en el organismo. As pues, son las mutaciones de genes que controlan la proliferacin celular y su localizacin en un sitio determinado las que causan la aparicin de clulas cancerosas que pueden originar la destruccin de tejidos y rganos. Qu genes estn alterados en el cncer? Las mutaciones causantes de los procesos que conducen a la aparicin de un cncer tienen lugar en tres tipos de genes: los proto-oncogenes, los genes supresores de tumores y los genes de reparacin del ADN. Los oncogenes son, en realidad, formas mutadas de genes normales, los protooncogenes. Es al mutar estos, y originar protenas con funcin alterada que estimulan el crecimiento o la invasividad celular, cuando se convierten en oncogenes. Un segundo grupo lo constituyen los llamados genes supresores de tumores, cuya funcin normal es controlar el ciclo de divisin celular, evitando el crecimiento excesivo y promoviendo el mantenimiento de las caractersticas que especifican la localizacin de las clulas en un lugar determinado. Estos genes inducen la aparicin de cnceres cuando, al mutar, dejan de expresarse o producen una protena no funcional. Los genes de reparacin del ADN son responsables de subsanar los errores producidos en la incorporacin de los nucletidos durante la replicacin del ADN, y de reparar las alteraciones inducidas en la molcula de ADN por radiacin o agentes qumicos.

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Modelo de los efectos de proto-oncogenes y genes supresores sobre la proliferacin celular. Las mutaciones en uno u otro tipo de genes conducen a la aparicin de tumores.

BIOLOGA DEL CRECIMIENTO TUMORAL La evolucin natural de la mayora de los tumores malignos puede dividirse en cuatro fases:1) transformacin o cambio maligno de la clula diana, 2) crecimiento de las clulas transformadas, 3) invasin local, 4) metstasis a distancia. La formacin de una masa tumoral por los descendientes clonales de una clula transformada es un proceso complejo en el que intervienen muchos factores. Algunos como el tiempo de duplicacin de las clulas tumorales, son intrnsecos a las propias clulas, mientras que otros, como la angiognesis, representan las respuestas que las clulas tumorales o sus productos despiertan en el husped. Cintica del crecimiento de las clulas tumorales Cuando un tumor slido se hace clnicamente detectable, ha cumplido ya una parte importante de su ciclo vital. Nos planteamos las siguientes preguntas en relacin a la cintica celular: Cul es el tiempo de duplicacin de las clulas tumorales? Cul es la fraccin de clulas tumorales que forman el conjunto de replicacin? Cul es la velocidad a la que se desprenden y pierden las clulas de la lesin en crecimiento? El crecimiento de los tumores no se asocia, en general, a una duracin menor del ciclo celular. 4

Proliferacin y razn de crecimiento tumoral Factores que afectan a la razn de crecimiento del tumor El tiempo en el que se duplica el volumen de un tumor (Td) est determinado por tres factores: El tiempo de ciclo celular(T c), la fraccin de crecimiento(GF) y la proporcin de prdida de clulas. Los tumores crecern ms rpido si el tiempo de ciclo es breve, la fraccin de crecimiento es alta, y la prdida de clulas es baja. Tabla 1(2.2). El tiempo potencial de duplicacin (Tpot) est definido como el tiempo en el cual las clulas del tumor se duplicaran si no existiesen prdidas de clulas. Esto depende del tiempo del ciclo celular y la fraccin de crecimiento.

T pot

Ts

LI

donde LI es el ndice de marcaje de timidina o fraccin de fase S. Ts la duracin de la fase S. es un parmetro de correccin con valores entre 0.7 y 1. La prdida de clulas de un tumor puede ser calculada del factor de prdida de clulas. T Factor de prdida de celulas 1 pot Td Este factor es solo la razn de prdida de clulas como una fraccin de la tasa de natalidad celular. El lento crecimiento de muchos tumores humanos es en gran parte el resultado de una proporcin alta de la prdida celular. La proporcin de clulas de la poblacin tumoral que se encuentran en el conjunto de proliferacin reciben el nombre de fraccin de crecimiento. Durante la fase precoz , submicroscpica, del crecimiento del tumor, la mayora de las clulas transformadas forman parte del conjunto en proliferacin. A medida que el tumor contina creciendo, las clulas van abandonando el conjunto replicativo en nmeros siempre crecientes, por desprendimiento o por carencia de elementos nutritivos, por diferenciacin o por inversin hacia la fase G01. La mayor parte de las clulas de los cnceres permanecen en las fases G0 o G1 . Por tanto en el momento en que el tumor se hace detectable clnicamente, la mayora de las clulas no forman parte del conjunto de replicacin. Incluso en algunos tumores de crecimiento rpido, la fraccin de crecimiento corresponde a alrededor del 20%. El crecimiento progresivo de los tumores y la velocidad a la que crecen dependen del exceso de produccin en relacin con la prdida de clulas.
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Ciclo celular Consta de 4 fases: G1, S, G2 y M. El ciclo completo dura unas 24 horas. La fase G1 es el perodo de 6 a 12 horas que sigue a una divisin celular, previo a la sntesis(fase S) o replicacin del ADN. Durante este tiempo, la clula dobla su tamao y su masa debido a la sntesis continua de todos sus componentes como resultado de la transcripcin y traduccin de los genes que codifican las protenas responsables de su fenotipo particular. Hay clulas que pueden parar su progresin en este estado y permanecer durante das, meses, o aos en estado de reposo sin aumento de masa, en lo que se ha denominado fase G 0. La fase S corresponde al tiempo (6-8 h) durante el cual se replica el ADN. El perodo comprendido entre la finalizacin de la replicacin del ADN y el inicio de la divisin es la fase G2(3-4h). Durante ella, las clulas se preparan para la escisin en dos clulas hijas. Finalmente, las clulas entran en la fase de mitosis, M(1h).

Proliferacin y razn de crecimiento tumoral La velocidad de crecimiento del tumor depende de la fraccin de crecimiento y del grado de desequilibrio entre la produccin y la prdida de clulas.

Representacin esquemtica del crecimiento tumoral. A medida que la poblacin celular se expande, crece el porcentaje de clulas tumorales que abandona el conjunto proliferativo, por regresin a G0, por diferenciacin o muerte celular.

Crecimiento exponencial. El crecimiento exponencial es donde el volumen del tumor aumenta proporcionalmente a intervalos iguales de tiempo. La ecuacin del crecimiento exponencial es: V = exp (0.693 x tiempo / Td) Donde 0.693 es loge2. El logaritmo del volumen de tumor aumenta linealmente con el tiempo. Esto es normal para dibujar las curvas de crecimiento de tumor sobre una escala logartmica de volumen con el propsito de que las desviaciones del crecimiento exponencial puedan ser vistas fcilmente . Por qu es tan importante la idea del crecimiento exponencial? ste es, a decir verdad, el modo ms simple de crecimiento. Una clula producir 2 clulas por divisin, que producir 4 despus del prximo ciclo, 8, 16 y 32 en los prximos tres ciclos, y etctera. ste es el crecimiento exponencial. Si las clulas son permitidas proliferar bajo las condiciones constantes, sin prdidas de clulas o esterilidad, su nmero aumentar de manera exponencial. El crecimiento no exponencial puede aparecer por cualquier combinacin de tres factores: incremento del tiempo del ciclo celular, reduccin de la fraccin de crecimiento y el crecimiento de la razn de prdida de clulas (Steel, 1977). El monogrfico en la figura nos demuestra la relacin entre el volumen del tumor, la cantidad de clulas y el nmero de divisiones, comenzando de una nica clula. La fraccin de crecimiento de las clulas tumorales ejerce un profundo efecto sobre su sensibilidad a la quimioterapia.

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La relacin entre el peso de un tumor, el nmero de clulas que contiene y el nmero de duplicaciones de una clula simple.

El aumento exponencial de tumores en animales de laboratorios es poco comn. Es ms usual encontrar que el tiempo de divisin se incrementa progresivamente a la vez que el tumor se pone ms grande. El perodo de latencia, antes de que un tumor se haga clnicamente detectable, es muy largo e impredecible, probablemente de aos, y es necesario insistir en que los cnceres humanos slo se diagnostican cuando se encuentran en una fase bastante avanzada de su ciclo vital. Una vez que se hacen clnicamente detectables, el tiempo medio de duplicacin del volumen de tumores tan frecuentes como el cncer de pulmn o de colon es de unos 2 o 3 meses. Cintica de compartimientos celulares de un tumor. Las clulas neoplsticas dentro de un tumor pueden ser divididas en cuatro compartimientos basados en sus propiedades cinticas. El compartimiento ms importante es el de divisin celular activa. Todas las clulas en este compartimiento estn sufriendo el ciclo celular y pueden ser distinguidas usando tcnicas de marcaje celular de celular. Todas las nuevas clulas tumorales son producidas desde este compartimiento, que es por lo tanto el mayor contribuyente al crecimiento del volumen de tumor. Este compartimiento es llamado fraccin de crecimiento y las clulas dentro de l suelen ser llamadas clulas "P" (por proliferacin).

Proliferacin y razn de crecimiento tumoral Adems de las clulas P, hay otros dos compartimientos: clulas de descanso (o G0) y clulas estriles (o diferenciadas). La diferencia ms importante entre ellas es que las clulas G0 son capaces de volver a entrar en el ciclo celular, pero las clulas estriles o diferenciadas no se pueden dividir nunca ms. Las clulas G0 son llamadas a menudo "Q, (por inactivo- quiescent en ingls- ). Algunas clulas G0 pueden ser clonognicas (y por lo tanto, capaces de volver a repoblar un tumor), son por lo tanto peligrosas y tienen que ser destruidas aplicando terapia. No es a menudo fcil distinguir clulas G0 de clulas estriles con las tcnica cinticas, aunque las clulas diferenciadas ( estriles) en fase terminal pueden ser distinguidas algunas veces morfolgicamente en tumores bien diferenciados2. Las clulas diferenciadas no son un peligro para el paciente, pero contribuyen al volumen del tumor. El otro principal colaborador para el volumen del tumor es el estroma: clulas de tejido normal como clulas sanguneas y fibroplastos que en algunos casos pueden exceder el nmero de clulas neoplsticas. Adems, existen en la mayora de los tumores un compartimiento que consta de clulas muertas y moribundas. La necrosis es una caracterstica de tumores y es el resultado de un suministro de sangre interno inadecuado. El volumen ocupado por la necrosis vara extensamente de un tumor a otro pero puede ser extensivo. Las clulas apoptticas (clulas de muerte programadas) son tambin a menudo visibles en las secciones histolgicas. La transferencia de clulas de un compartimiento a otro ocurre constantemente. El movimiento de clulas de Q al compartimiento de P, que puede ocurrir despus o durante algunos tratamientos, es llamado reclutamiento. La transferencia de P a Q tambin debe ocurrir, por lo tanto, la proporcin de clulas Q disminuiran hasta anularse en un tumor en crecimiento, atribuible a la multiplicacin de clulas P. Algunas clulas podran tener un suministro inadecuado de nutrientes como oxgeno y podran dejar de dividirse ms lejos; las clulas pueden ser empujadas demasiado lejos de vasos sanguneos como consecuencia de la presin del crecimiento. Las clulas tambin entran en el compartimiento diferenciado por procesos de diferenciacin naturales. Finalmente, las clulas pueden dejar el volumen de un gran tumor principal, como clulas viables (esto puede resultar por metstasis), la clula muere, la descomponen y quitan sus componentes. Estos procesos contribuyen al fenmeno general de la prdida de clulas de tumores. Velocidad de regresin del tumor. Despus del tratamiento, algunos tumores muestran una respuesta de disminucin de volumen rpida y otros responden mucho ms despacio. Es importante distinguir entre la velocidad de reduccin y la probabilidad de control local del tumor, algunos tumores que se han reducido rpidamente se reproducen pronto. Algunos estudios clnicos han mostrado una correlacin entre la tasa de reduccin y el control local, pero esto no es el caso en todas las situaciones clnicas. La respuesta del conjunto del volumen de un tumor para el tratamiento est ilustrada en la siguiente figura.

Los tumores bien diferenciados son, los compuestos por clulas que recuerdan a las clulas maduras normales del tejido del que proceden.

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La respuesta de volumen de un tumor incontrolado es el resultado de dos procesos: la regresin y recrecimiento. La repoblacin durante el perodo de la regresin podra tener lugar en una proporcin que puede ser diferente de la razn de crecimiento de un tumor sin tratar.

Hay dos componentes de la reaccin, la regresin y recrecimiento, y la forma de la curva de recrecimiento es un tema de debate actual. El tiempo y la profundidad del nadir (volumen de tumor mnimo) podra depender de ambos componentes. Para juzgar la eficacia del tratamiento de tumor es necesario escoger una medida que refleje la componente de recrecimiento en vez de la velocidad de regresin, ya que el componente de recrecimiento depende del grado de clulas destruidas. La remisin parcial es un criterio deficiente. Es ms usual utilizar la duracin del intervalo de zona libre de enfermedad. Para lesiones medibles en animales, el parmetro ms utilizado es la demora de crecimiento de tumor: esto demuestra la diferencia entre los tiempos en los que los tumores tratados o sin tratar llegan a un mltiplo fijado del tamao de tumor de pretratado (por ejemplo dos veces el tamao del comienzo del tratamiento). MTODOS CINTICA CELULAR Porcentaje de marcaje de mitosis. Con esta tcnica, las clulas son pulso-marcadas con [3H]TdR, un precursor de cido de nucleico radioactivamente marcado que es incluido especficamente en el ADN, y no en el ARN. Pulso-marcar representa dar solamente una exposicin breve al precursor marcado. Las muestras son tomadas desde ese momento varias veces y marcadas y detectadas por autoradiografa (i.e.. Cubrir diapositivas histolgicas con pelcula fotogrfica). La fraccin de mitosis marcadas aumentar y disminuir como las clulas marcadas con 3H, que estn en S inicialmente. Esto tendr lugar antes, despus y durante la mitosis. Este patrn se repetir un ciclo celular ms tarde. Esta tcnica era un progreso en cintica celular cuantitativa, aunque el uso de timidina radiomarcadora ha

Proliferacin y razn de crecimiento tumoral sido reemplazado por el uso de los anlogos de timidina no radioactivos en gran parte, que admitan la ms rpida y menos laboriosa deteccin. Anlogos Timidina. La sustitucin del grupo de metilo de timidina con tomos de halgenos de tamao similar al yodo o bromo crea los anlogos Yodo- o Bromo-deoxiuridina (IdUrd, BrdUrd). Las enzimas responsables de la sntesis de ADN no pueden distinguir fcilmente entre timidina y sus anlogos y stos son por lo tanto, incluidos en el ADN de la misma manera que la timidina. Una vez en el ADN, pueden ser detectados por anticuerpos especficos, que reconocen las distorsiones pequeas en la molcula de ADN causada por su incorporacin. El desarrollo de estos anticuerpos ha resultado en su uso extendido para los estudios de cintica celular. Los anticuerpos pueden ser marcados con una enzima por turno (generalmente un perxido), que son manchados por inmunocitoqumica, o un marcaje fluorescente (generalmente la molcula fluorescente verde FITC) por citometra de flujo. De este modo, todas las clulas que han tomado el anlogo, y estaban por lo tanto en la fase S en el momento de su administracin, pueden ser detectadas por un color caracterstico. Inmunocitoqumica. La disponibilidad de anticuerpos monoclonales especficos ha facilitado enormemente la identificacin de productos celulares y de marcadores de superficie. Citometra de flujo. La citometra de flujo permite medir, rpidamente y de manera cuantitativa, varias caractersticas de las clulas, como los antgenos de membrana t el contenido de ADN. La identificacin de los antgenos de la superficie celular mediante la citometra de flujo se utiliza ampliamente en la clasificacin de las leucemias y los linfomas. La deteccin de la ploida con este tipo de tcnica se aplica a muestras procedentes de diversas fuentes, como biopsias quirrgicas congeladas, derrames pleurales o peritoneales asociados al cncer, aspirados de mdula sea y clulas obtenidas por irrigacin de la vejiga urinaria. Se sabe que existe una relacin entre el contenido anormal de ADN y el pronstico de distintos tipos de neoplasia malignas. En general, parece que la aneuploida se asocia a un peor pronstico en el cncer de mama en estadios precoces, en el carcinoma de vejiga urinaria, de pulmn, de prstata y colorrectal. Marcadores tumorales. Los marcadores tumorales son indicadores bioqumicos de la presencia de un tumor. Entre ellos se encuentran: antgenos de la superficie celular, protenas citoplasmticas, enzimas y hormonas. No puede considerarse que los marcadores tumorales constituyan un mtodo fundamental para el diagnstico del cncer. Su utilidad principal en la medicina clnica es la de una prueba analtica que apoya el diagnstico. Algunos de ellos son tambin tiles para establecer la respuesta al tratamiento y para indicar las recidivas durante el perodo de seguimiento.

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Proliferacin y razn de crecimiento tumoral Se han descrito muchos marcadores tumorales y cada ao aparecen otros nuevos. Sin embargo, solo algunos resisten la prueba del tiempo y demuestran ser tiles en la clnica.

Obtener informacin cintica de una muestra. El mtodo de movimiento relativo permite que Ts, LI y Tpot sean calculados de una muestra de tejido. Esto es til para la aplicacin clnica donde es a menudo difcil tomar ms de una biopsia. Muchas horas despus de la inyeccin intravenosa de BrdUrd o IdUrd,se toma una biopsia del tumor, arreglada en etanol, y se hace una suspensin de nuclei posteriormente, manchado y analizado por citometria de flujo. La posicin media (fluorescencia roja) de las clulas etiquetadas que no se han dividido todava, en comparacin con las posiciones de G1 y G2, es medido usando ventanas dibujadas en ordenador alrededor de subpoblaciones apropiadas. Los efectos son cuantificados por el parmetro de movimiento relativo (RM), definido como cero para las clulas en Gl y 1.0 para clulas en G2. Debido a que por trmino medio las clulas etiquetadas sern distribuidas homogneamente dentro de la fase S inmediatamente despus de ser manchadas, es supuesto que RM es 0.5 en ese momento. Posteriormente, las clulas progresan hacia G2 y RM aumenta. El procedimiento recomendado es medir RM en una muestra tomada horas despus del etiquetado, entonces se pinta una lnea entre RM=0.5 en t=0 y la medida de RM en el tiempo t. Esta es la extrapolacin al tiempo requerido para que RM llegue al valor 1.0, que da el clculo aproximado de Ts . El clculo supone que la trama de versus de RM temporal es lineal, aunque en teora es curvado. Hay mtodos ms rigurosos para calcular Ts de RM de forma matemtica, teniendo en cuenta esta curvatura. Para las mediciones de Ts exactas, el intervalo de tiempo entre la inyeccin y la biopsia deben ser ms largos que G2 + M: 6-8 horas es recomendada para la mayora de los tumores humanos.

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Proliferacin y razn de crecimiento tumoral Seales de proliferacin endgena. El uso de anlogos de timidina puede suministrar informacin sobre el ciclo celular. Una desventaja para estudios clnicos es la necesidad de administrar un compuesto potencialmente txico in vivo, aunque ninguna toxicidad aguda o atrasada ha sido observada todava de IdUrd o BrdUrd cuando se usa en dosis bajas para estudios cinticos celulares. La alternativa ensaya para la proliferacin que no requiere administracin de drogas. Hay muchas protenas que parecen ser exprimidas principalmente en proliferar pero no en clulas inactivas. Ejemplos de esto son las polimerasas de ADN usadas para la replicacin, H2 - 4 de histones, ki67, proliferando clulas nucleares antgenas(PCNA), y algunas de las cyclins. Los anticuerpos estn disponibles para estas protenas que pueden ser usadas para tasar la proliferacin por immunocitoqumica o mtodos de circulacin - citometra. El marcador ms comnmente usado actualmente es Ki67, una protena nuclear asociada con clulas proliferando que pueden ser detectadas usando el anticuerpo originalmente descubierto, o por MIB1, un anticuerpo en contra de la misma protena pero que trabaja mejor materiales arraigados en parafina. La citometra de flujo tambin puede ser usada para la deteccin. La funcin de la molcula es actualmente desconocida, aunque el progreso est siendo realizado desde que el gen ha sido clonado. No se puede dar clculos aproximados de fraccin de crecimiento exactos bajo todas circunstancias, especialmente despus de los tratamientos citotxicos, aunque es atentamente proliferacin y es extensamente usado para clasificar las fracciones de proliferacin de tumores y tejidos normales bajo condiciones no perturbadas. PCNA es una protena involucrada en tanto la reparacin de ADN como en la sntesis de ADN, siendo una protena auxiliar para la polimerasa-delta de ADN. Cuando PCNA est unido fuertemente al ncleo est relacionado con la replicacin de ADN. La fraccin de clulas PCNA-positivas es por lo tanto una medida de la fraccin de fase S. PCNA es expresado en otras fases del ciclo, sin embargo, donde est unido con holgura. La medicin de PCNA total (ajustado + holgado) es entonces en principio una medida de la fraccin de crecimiento (i.e. Clulas en todas fases del ciclo). Tcnica de preparativos de diferentes tejidos en el retiro o no de protena unida con holgura resultarn en ndices de PCNA diferentes, teniendo cuidado en las interpretaciones. Como con Ki67, los mtodos de immunocitoqumica o citometra de flujo pueden ser usados para la deteccin. Muchos genes son solamente exprimidos en fases especiales del ciclo, admitiendo su uso como indicadores de fase. Los Histones 3 y 4 son expresados en la fase S, ya que son necesarios para la asamblea de nucleosome sobre el ADN recin sintetizado. La expresin de H3 de histone ha sido usada como un indicador para la fase S y se ha demostrado que da informacin similar (i.e.Fraccin de clulas en S) a una etiqueta de thimidina- o ndice BrdUrd. Cidina es una clase de la molcula que normalmente est expresada en un modo cclico durante el ciclo celular, por lo tanto de ah su nombre. Son decisivas en controlar las transiciones entre las fases del ciclo celular, por ejemplo de G1 a S o de G2 a M. Las ciclinas activan quinasas especiales (enzimas que protenas fosforizadas) moldeando complejos con ellos. Las ciclinas D y E son ciclinas G1; la ciclina A se encuentra principalmente en la fase S; la ciclina B se encuentra en G2. Hay muchos subtipos de

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Proliferacin y razn de crecimiento tumoral las ciclinas B y D. Los anticuerpos son asequibles a casi todas las ciclinas conocidas y stos admiten la deteccin por immunocitoquimica o mtodos de citometra. En una poblacin asncrona, la expresin de ciclinas especiales puede indicar la posicin aproximada de clulas individuales en el ciclo. La ciclina B, por ejemplo, ha sido usada como un marcador de clulas de G2, y es tambin utilizada en distinguir jubones de clulas de G1 de verdaderas clulas de G2 en citometra de flujo. La fraccin de clulas contenidas en una ciclina particular puede ser usada como un ndice de proliferacin, por ejemplo para clasificar diferentes tumores, asumiendo que es proporcional a la fraccin de crecimiento. La precisin de fase de las ciclinas es mala y un sealador como Ki67 sera mejor para este propsito. Debe tambin tenerse en cuenta que las ciclinas controlan la funcin de ciclinas quinasas dependientes (CDK), pero hay algunos otros controles de esta maquinaria celular esenciales, y por lo tanto los niveles de ciclina no necesariamente reflejan la actividad de CDK directamente. Es importante darse cuenta de que estos marcadores de proliferacin producen los parmetros estticos, por ejemplo los clculos aproximados de la fraccin de fase S, la fraccin de G2 o la fraccin de crecimiento, y no dan la informacin sobre la tarifa de la evolucin de las clulas a travs del ciclo. Esto es en contraste con la situacin con timidina etiquetada o anlogos de timidina, que puede producir tanto fracciones de fase como los tiempos de fase. Los mtodos ms seguros, flexibles y fuertes son probablemente aquellos que usan anlogos de timidina, aunque el uso de los marcadores descrito arriba puede preveer a menudo la informacin til en material clnico, donde hay restricciones considerables sobre el nmero de muestras la administracin de drogas y el trabajo. Cintica de tumor humana in vivo usando un anlogo de timidita. Alguna informacin cintica puede ser obtenida etiquetando material de biopsia de tumor humano in vitro con [3H]TdR o un anlogo de timidina, por tanto obteniendo la fraccin de clulas sintetizadas de ADN . La mejor informacin puede ser obtenida por etiquetacin in vivo, y esto evitan algunos artefactos potenciales del procedimiento in vitro. Los tumores humanos pueden ser etiquetados por la inyeccin in vivo de IdUrd o BrdUrd porque estos anlogos causan poco o nada de toxicidad en las dosis bajas requeridas para estudios de pulso etiquetado cintico. La presencia de clulas no malignas en una biopsia tumoral puede perturbar la exactitud de los clculos aproximados de parmetro para clulas tumorales. Los intentos de superar esto han sido realizados utilizando citometra de flujo para medir Ts y combinarlo con el ndice BrdUrd - etiquetacin de clulas de tumor contadas en secciones de tejido usando immunoperoxidasa, donde las reas de tumor pueden ser distinguidas morfolgicamente de reas de stromal. Por otra parte, un segundo anticuerpo, si est disponible, puede ser usado como un marcador de tumor, y medir los parmetros de BrdUrd solamente en clulas que son positivas por el marcador de tumor. Ningn mtodo puede medir Tc directamente de una biopsia ha sido proporcionado, aunque si la fraccin de crecimiento es sabida poda ser calculado de Tpot. Una fraccin de crecimiento tal como Ki67 (o MIB1) poda ser usado para este propsito, aunque no puede dar clculos aproximados de fraccin de crecimiento exactos en tumores humanos.

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Proliferacin y razn de crecimiento tumoral Etiquetacin de patrones. Los tumores slidos muestran patrones de etiquetamiento heterogneo generalmente con tanto marcadores cinticos celulares exgenos como endgenos tales como BrdUrd o MIB1. Un ejemplo es el decrecimiento en etiquetacin con el incremento en la distancia de un vaso sanguneo (Tannock, 1968) porque la fraccin de crecimiento es ms alta cuanto ms cerca a las vasos y ms bajo para clulas que bordean la necrosis que carecen de nutrientes y oxgeno. Adems, algunas reas de tumores humanos muestran valores de timidina relativamente alto, es anlogo a etiquetar, mientras los otros indican no o nivel ms bajo de etiquetacin en el mismo tumor, a pesar de la presencia de vasos sanguneos. Estas regiones podran ser tambin positivas para un marcador de proliferacin de endgeno como H3 de histona . La causa probable es una reduccin de la circulacin en vasos sanguneos del acceso de rea y limitando el acceso del anlogo de timidina. Este es compatible con las observaciones de los cambios agudos de circulacin de hipoxia en muchos tumores, incluyendo algunos en seres humanos. Los mtodos de anlogo de timidina pueden subestimar el potencial de proliferacin, aunque en la mayora de los casos la fraccin de vasos temporalmente cerradas o "Bajo - flujo es pequea. En carcinomas los modelos caractersticos de etiquetacin son observados a menudo, incluyendo etiquetacin en una capa fina alrededor de tumor "Islas" o estructuras glndula, similar a la de etiquetamiento de base-clula en el epitelio. Los otros tumores indican clula de etiquetamiento aleatorio, mientras que algunos muestran modelos intermedios. Estos modelos pueden tener trascendencia en el pronostico para tumores tratados con radioterapia. Los modelos de etiquetacin celular heterogneos pueden ser atribuibles a la diferenciacin, y las clulas no-etiquetadas resultan en valores ms bajos de LI y por tanto contribuyen, correctamente, a los clculos aproximados de la fraccin de no crecimiento. Otras estrategias contra el cncer. Se estn empezando a emplear nuevas estrategias, algunas de ellas prometedoras, en el tratamiento del cncer. Se pueden utilizar agentes biolgicos denominados modulares de la respuesta biolgica, para modificar la respuesta del organismo ( y en especial del sistema inmunolgico) al cncer. Otro planteamiento es utilizar agentes biolgicos para estimular a determinadas clulas para que ataquen a las clulas malignas. El mejor ejemplo es la utilizacin de la interleuquina 2 para estimular a los linfocitos Killer sensibles a linfoquinas ( clulas LAK). Se ha investigado en profundidad la existencia de antgenos especficos de algunos tumores que permitan la elaboracin de anticuerpos antitumorales: stos atacaran al cncer de manera directa o constituyendo el vehculo para un frmaco quimioteraputico. As, el anticuerpo identificara la clula maligna a la que se adherira permitiendo al frmaco ejercer su accin. PUNTOS CLAVE 1. La medicin exacta del tamao de un tumor ayuda enormemente al criterio clnico sobre la razn de la evolucin o la respuesta al tratamiento de tumores.

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Proliferacin y razn de crecimiento tumoral 2. Las curvas de crecimiento tumorales deben siempre ser dibujadas con el tamao sobre una escala logartmica para ver si el crecimiento es exponencial y comparar las tasas de crecimiento entre tumores. 3. La tasa de crecimiento de tumores puede variar extensamente entre tumores del mismo tipo. Los tiempos de duplicacin de Volumen en la regin de 3 meses son comunes. 4. El tasa de la regresin following el tratamiento vara a menudo extensamente entre tumores del mismo tipo histopatologico. La regresin lenta hace que no necesariamente represente una respuesta clnica mala. 5. La tasa de crecimiento del tumor es determinado por el tiempo del ciclo celular, la fraccin de crecimiento y la tasa de prdida celular. El tiempo potencial de duplicacin demuestra la razn de produccin celular y es el tiempo pronosticado de duplicacin de la poblacin celular con no la prdida celular. 6. Los tiempos de ciclo celular son de alrededor de 2 - 3 das en tumores humanos, comparado con el tiempo de duplicacin de volumen de ms de 2 meses. La prdida celular es alta en muchos tumores humanos, particularmente en los carcinomas. 7. Hay una variacin amplia en los parmetros cinticos celulares entre tumores humanos del mismo tipo histolgico. 8. El movimiento de clulas por el ciclo celular puede ser medido usando los anlogos de thymidine bromo y. Iodo - deoxyuridine,, junto con cytometry de circulacin o immuno - histochemistry. 9. Anticuerpos para protenas reguladas ciclo celular pueden ser usadas como sealadores endgenos de proliferacin. stos dan estimaciones de las fracciones de fase o las fracciones de crecimiento, pero no razones de la evolucin a travs del ciclo celular. Su ventaja es que ninguna droga tiene que ser administrada al paciente. 10. La cintica celular tumoral humana puede ser medida in vitro con la etiquetacin de biopsias, o inyectando a los pacientes con dosis bajas de los anlogos de thymidine. Anlisis de circulacin cytometry permiten el clculo del tiempo potencial de duplicacin el tiempo de una biopsia.

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Proliferacin y razn de crecimiento tumoral BIBLIOGRAFA: BASIC CLINICAL RADIOBIOLOGY. G. Gordon Steel PATOLOGA ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL. Robbins CNCER. GENES Y NUEVAS TERAPIAS. Alberto Muoz http://personales.ya.com/erfac/llamaca.htm http://www.oftalmo.com/sco/revista-13/13sco04.htm http://www.qb.fcen.uba.ar/quimicabiologica/Celula.html http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/acta_cancerol%C3%B3gica/vol32_n1/o nco_vira.htm http://www.opolanco.es/Apat/quimio.html http://www.biologia.edu.ar/virologia/virologia2.htm http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S003498871999001100014&lng=es&nrm=iso http://148.216.10.83/biologiaQFB1/teoria_celular.htm http://www.opolanco.es/Apat/quimio.html

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