EFEITO DA POLPA DE AA (Euterpe oleracea Mart) NA REVERSO DE ANEMIA EM RATOS (Rattus norvegicus) WISTAR var. ALBINUS1.

Vanessa MORAES DA SILVA2, Luciana R. T. MANHES3, Gilson T. BOAVENTURA4, Armando U. O. SABAA-SRUR5. 1 Trabalho experimental desenvolvido no Laboratrio de Nutrio Experimental da UFF, 2 Estudante de Nutrio da UNIBENNET, 3 Mestre em Cincia e Tecnologia de Alimentos, Prof Assistente do Curso de Nutrio da Universidade Veiga de Almeida, 4 Dr. Em Cincia dos Alimentos, Prof. Associado do Instituto de Nutrio da UFF & 5 Dr. Cincia dos Alimentos, Prof. Adjunto do Instituto de Nutrio da UFRJ. RESUMO O aa considerado uma excelente fonte de ferro pela populao da regio amaznica, onde largamente consumido. No entanto, a anemia ainda se apresenta um problema de sade pblica nessa regio e no Brasil. Dessa forma, essa pesquisa visou avaliar o potencial desse fruto, com e sem adio de cido ascrbico, na recuperao do quadro anmico das cobaias. Para tal, ratos anmicos foram divididos em 03 grupos com 06 animais cada, que receberam rao controle, rao com ferro proveniente da polpa de aa e outra com ferro proveniente da polpa de aa acrescida de cido ascrbico. Ao final do perodo de repleo foi retirada alquota de sangue de todos os animais para determinao da hemoglobina e ferro srico. Os resultados revelaram que os animais anmicos alimentados tanto com rao controle como com a rao a base de aa apresentaram nveis normais de hemoglobina, mostrando que o aa como fonte de ferro foi suficiente para recuperar o quadro anmico. Tambm demonstrou-se mais eficiente quando essa rao foi adicionada de cido ascrbico que possivelmente atuou como agente facilitador. Foi possvel observar que aps o perodo de recuperao, o ferro srico dos animais encontraram-se dentro do limiar de normalidade em todos os grupos da pesquisa. Ento, pode-se concluir que o ferro presente no aa foi capaz de reverter a anemia em ratos, indicando a possibilidade dos mesmos efeitos em humanos, principalmente no combate a anemia ferropriva. Palavra-chave: ferro, hemoglobina, cido ascrbico

Rev. Univ. Rural, Sr. Ci. Vida. Seropdica, RJ, EDUR, v. 30, n. 2, jul-dez, 2010, p. 00-00.

ABSTRACT Aai is considered an excellent source of iron for the population of the Amazon region, where wide it is consumed. However, the anemia still presents a problem of public health in this region and Brazil. Of this form, this research aimed at to evaluate the potential of this fruit, with and without addition of acid ascorbic, in the recovery of the anemic rats. For such, anemics rats had been divided in 03 groups with 06 animals each, that had received ration have controlled, ration with iron proceeding from the pulp of aai and another one with iron proceeding from the pulp from aai increased of acid ascorbic. To the end of the period of repletion it was removed aliquot of blood of all the animals for determination of the hemoglobin and iron. The results had disclosed that the anemics animals fed with ration controlled as with the ration the base of aai, they had presented normal levels of hemoglobin, showing that aai as iron source was enough to recoup the anemic rats. Also it was demonstrating itself more efficient when this ration was added of acid ascorbic that possibly acted as easiness agent. It was possible to observe that after the period of recovery, the blond iron of the animals had inside met of the threshold of normality in all the groups of the research. The possibility of the same effect in human can be concluded that the present iron in aai was capable to revert the anemia in rats, then indicating mainly in the combat the ferropriva anemia. Keywords: iron, hemoglobin, acid ascorbic 1 - INTRODUO A carncia de ferro em humanos a deficincia nutricional mais importante do mundo, responsvel pelo surgimento da anemia ferropriva que atinge de 30% a 60% das mulheres e crianas em pases subdesenvolvidos (NOGUEIRA et al., 1998). Mesmo em pases desenvolvidos, esses seguimentos da populao tambm so acometidos e considerados grupos de risco, principalmente as crianas pr-termo, pr-escolares e mulheres grvidas (BAKER, 1978). As principais conseqncias dessa deficincia esto relacionadas com maior suscetibilidade s infeces e a reduo da fora muscular. Os reflexos dessa doena tm despertado interesses cada vez maiores diante das evidncias que tem causado no aumento do desenvolvimento psicomotor e da funo cognitiva (FLIER, 1990). Por definio, anemia um processo patolgico no qual a concentrao de hemoglobina contida nos glbulos vermelhos encontra-se em nveis inferiores ao recomendado (respeitando-se as variaes segundo idade, sexo e altitude em relao ao nvel do mar), podendo ser conseqncia de vrias situaes como infeces crnicas, problemas sanguneos hereditrios, carncias de nutrientes necessrios formao de hemoglobina, como ferro, cido flico, vitaminas B6, B12 e C. No entanto, no resta dvida que a maior parte das anemias so causadas por deficincia de ferro (WHO, 1983). Esse mineral encontrado em vrios alimentos, tanto de origem animal (carnes de todos os tipos, leite e ovos), como vegetal (verduras de cor verde escura, feijo soja entre outros). No entanto, no basta ingerir alimentos ou suplementos que contenham ferro, mas preciso conhecer a frmula qumica que esse mineral se apresenta, importante para saber se ser utilizado em todo ou em parte pelo organismo para as mais diversas funes vitais, determinando a biodisponibilidade desse mineral (SOUZA QUEIROZ & TORRES, 2000). Para que ocorra a absoro de ferro no duodeno necessrio que ele seja solvel, ionizvel e ultrafiltrvel (MANGUEIRA et al., 2002),

Rev. Univ. Rural, Sr. Ci. Vida. Seropdica, RJ, EDUR, v. 30, n. 2, jul-dez, 2010, p. 00-00.

logo importante nesse processo a natureza qumica do ferro presente no lmen intestinal, bem como a presena de fatores facilitadores ou inibidores na dieta. O ferro pode ser encontrado no organismo sob duas formas: A heme, que se apresenta na forma inica reduzida, a ferrosa (Fe+2), proveniente de fontes de alimentos de origem animal. O ferro heme bem absorvido devido a alta biodisponibilidade. A outra forma a no-heme, que se encontra na forma oxidada, a frrica (Fe+3), presente em alimentos de origem vegetal. Ento durante a digesto, ele parcialmente reduzido para a forma ferrosa sob ao do cido clordrico, bile e suco pancretico, o que facilita a sua absoro (SOUZA QUEIROZ & TORRES, 2000). Sua biodisponibilidade menor em relao ao ferro heme e influenciada pelas reservas de ferro do organismo e pela quantidade de substncias potencializadoras ou inibidoras que so consumidas na mesma refeio (WISE, 1997). Aps o processo de digesto, a maior parte do ferro no-heme forma um depsito intraluminal, sendo sua absoro determinada por fatores facilitadores, como o cido ascrbico, ctrico e succnico, alguns aminocidos como a lisina, cistena e histidina e acares como frutose, ou inibidores como os fitatos presentes nos cereais, os compostos fenlicos como flavonides, os cidos fenlicos, os polifenis e taninos, encontrados em ch preto e mate, caf e certos extratos vegetais usados em refrigerantes, (sais de clcio e fsforo encontrados em fontes proteicas lcteas, alm das fibras e a protena do ovo) (SOUZA QUEIROZ & TORRES, 1995). No sentido de minimizar o problema da anemia na Regio Norte do Brasil, uma soluo seria a explorao dos recursos naturais, em especial, dos frutos com potencial nutricional, como, o aa (Euterpe oleracea, Mart.), fruto de uma palmeira abundante no esturio do rio Amazonas, em terrenos de vrzea, igaps e terra firme, (CAVALCANTE, 1996; NOGUEIRA et al.., 1995) e com um considervel teor de ferro (FIBGE, 1982). Entre os estados produtores desse fruto, o Par, Maranho, Amap, Acre e Rondnia so os mais valorizados pela sua obteno, sendo o primeiro, responsvel por 95% da produo de aa, calculada em 100 a 180 mil litros/dia em Belm (HOMMA & FRAZO, 2002; OLIVEIRA et al.., 2002). Hoje sua expanso econmica, j atinge novos mercados no sudeste do pas e alguns pases da Europa, Estados Unidos, Japo e China (SOUTO, 2001; SILVA, 2002). O suco de aa conhecido por vinho de aa, um complemento bsico na alimentao das classes populares da Regio Norte, e na maioria das vezes, deixa de ser apenas complemento, para se constituir no principal alimento (CAVALCANTE, 1996). Tendo em vista que a anemia ferropriva um problema de sade pblica nvel mundial, a busca por novas fontes biodisponveis desse mineral importante e se faz necessria. Considerando a sua presena na polpa de aa e a sua incorporao na dieta da populao, essa pesquisa visou avaliar o potencial desse fruto, com e sem adio de cido ascrbico, na recuperao do quadro anmico ratos Wistar.

2 MATERIAL E MTODOS 2.1 Materiais Polpa de aa foi adquirida no comrcio de Belm PA e imediatamente transportada via area e sob refrigerao para o Laboratrio de Avaliao Nutricional (LABNE) do Instituto de Nutrio da Universidade Federal Fluminense (UFF).
Rev. Univ. Rural, Sr. Ci. Vida. Seropdica, RJ, EDUR, v. 30, n. 2, jul-dez, 2010, p. 00-00.

Foram utilizados 4 ninhadas de ratos (Rattus norvegicus), linhagem Wistar var. Albinus, sendo que cada grupo era constituda de 01 fmea e 06 filhotes. 2.2 Mtodo 2.2.1 Preparo da farinha de aa A polpa de aa depois de pesada e distribuda uniformemente em bandejas de ao inoxidvel foi desidratada em secador tipo cabine, com circulao de ar quente e sistema de aquecimento eltrico com controle de temperatura. Antes da desidratao, as amostras foram submetidas sulfitao atravs de pulverizao de soluo contendo 1000 ppm de metabissulfito de sdio. Em seguida o sistema de aquecimento e ventilao foi acionado e a temperatura ajustada para 55C at que a polpa atingisse um teor de umidade at aproximadamente 10%, quando ento, foi transformada em farinha com o auxlio de um moinho de facas e acondicionada em sacos de polietileno com alta proteo ao vapor dgua. 2.2.3 Determinao de ferro da farinha de polpa de aa A determinao do teor de ferro da farinha foi realizada atravs de amostras secas (n=3), pesando 5 0,0035g, que foram calcinadas em mufla a 550C, por perodo mnimo de 2 horas e as cinzas obtidas foram dissolvidas em HCl 2ml/L. Ento, as cinzas foram analisadas por espectrometria de massa com plasma indutivamente acoplado no modo semiquantitativo, utilizando o equipamento ELAN 6000 da Perkin Elmer-Sciex (AOAC, 1995). 2.2.4 Preparo das raes Foram preparadas 4 raes, sendo a rao controle sem citrato frrico (RC), rao controle com citrato frrico (RCFe), rao sem citrato frrico e adicionada de polpa de aa (rao 1) e rao sem citrato frrico e adicionada de polpa de aa com cido ascrbico (rao 2). Tanto a RC como RCFe foram elaboradas segundo a recomendao proposta por REEVES et al. (1993), sendo utilizada no preparo dessas raes 3,5% de mistura salina AIN-93M fabricadas pela RHOSTER (SP). Considerando que essa mistura continha 6,0600g de citrato frrico/ Kg de mistura e que 16,5% desse composto era de ferro, o contedo desse mineral na rao RCFe foi de 3,5mg/100g rao. As raes 1 e 2 tambm foram elaboradas segundo a recomendao de REEVES et al. (1993), sendo suprimida da mistura salina a fonte de ferro (citrato frrico), que foi substituda por 77,77g de polpa de aa desidratado/100g rao, correspondendo a 3,5mg de ferro/ 100g rao, A rao 2 foi elaborada de forma idntica a rao 1, tendo sido ainda adicionado 60 mg de cido ascrbico/ 100g rao. 2.2.5 - Ensaio Biolgico O ensaio biolgico foi subdividido em dois perodos: depleo e repleo. No perodo de depleo (28 dias), foram utilizadas 4 ratas com 6 filhotes cada uma, provenientes do biotrio do LABNE da UFF. Durante a lactao (21 dias), uma rata recebeu rao controle com citrato frrico (RCFe), enquanto trs ratas receberam rao controle (RC), isenta de citrato frrico da soluo salina. Aps o desmame, os filhotes continuaram recebendo as mesmas raes por mais sete dias. Durante todo esse perodo,
Rev. Univ. Rural, Sr. Ci. Vida. Seropdica, RJ, EDUR, v. 30, n. 2, jul-dez, 2010, p. 00-00.

os animais foram mantidos em caixas de polipropileno com tampas de ao inoxidvel, com umidade e temperaturas controladas, com ciclo de luz de 12 horas por dia. Ao final desse perodo, amostras de sangue foram coletadas, pela cauda dos animais recm desmamados, para determinar a concentrao de hemoglobina (Hb) srica individual e selecion-los para o perodo de repleo, tendo sido utilizado como ponto de corte, Hb menor que 7g/dL para ratos anmicos e Hb maior que 11g/dL para ratos normais (MCKAY et al.., 1983). No perodo de repleo (30 dias), animais anmicos provenientes do perodo de depleo, recm desmamados foram sorteados e divididos aleatoriamente em trs grupos com seis filhotes cada (n = 18), sendo: grupo controle (GC) animais anmicos alimentados com a rao controle com citrato frrico (RCFe); grupo 1 (G1) os animais anmicos alimentados com a rao 1; grupo 2 (G2) os animais anmicos alimentados com a rao 2. Esses animais foram mantidos em gaiolas individuais com bebedouro e comedoura, onde receberam as respectivas raes e gua ad-libitum durante todo esse perodo. Tambm foram mantidos sob umidade e temperatura controlada, com ciclo de luz de 12 horas por dia. No 30 dia do perodo de repleo, os animais foram anestesiados para realizao da puno cardaca para coleta de sangue utilizada para dosagem de Hb, a partir de teste colorimtrico da cianometahemoglobina (MITRUKA & RAWNSLEY, 1997) e de ferro srico dos ratos com o auxlio do Kit da Bioclim Quibasa Qumica Bsica LTDA. 2.2.6. Anlise estatstica As anlises estatsticas dos resultados foram realizadas utilizando-se o programa SAEG verso 5.0, para teste de F em nvel de 5% de probabilidade, com os procedimentos de ANOVA e teste de Turkey. 3 RESULTADOS E DISCUSSO A farinha de polpa de aa produzida nessa pesquisa continha 4,5mg ferro/100g polpa, diferente do valor encontrado por TOAIARI et al.. (2005), que foi de 12mg/100g farinha de aa. Essa diferena pode ser creditada aos teores de umidade presentes nas respectivas matrizes. Os resultados desse trabalho mostraram que todas as fontes de ferro utilizadas nas raes fornecidas aos animais dos grupos GC, G1 e G2 foram suficientes para recuperar o quadro anmico dos mesmos aps o perodo de repleo, quando se utilizou como ponto de corte para ratos anmicos Hb menor que 7 g/dL e para ratos normais maior que 11g/dL. A avaliao estatstica dos dados mostrou que no houve diferena significativa entre os valores de Hb dos grupos no incio (p=0,386786) e no final (p=0,624001) do experimento. Possivelmente esse oligomineral se encontra no aa numa forma biodisponvel semelhante a encontrada na mistura salina (Tabela 1). Tabela 01 Evoluo da concentrao mdia de hemoglobina (g/dL) de ratos anmicos alimentados com diferentes fontes de ferro durante o perodo de repleo. Animais Hemoglobina (g/dL) Hemoglobina (g/dL) Inicial (m + d.p.) Final (m + d.p.) GC 4,6 + 0,5 12,52 + 1,14 G1 4,7 + 0,5 10,66 + 1,11 G2 4,7 + 0,5 12,07 + 1,59
Rev. Univ. Rural, Sr. Ci. Vida. Seropdica, RJ, EDUR, v. 30, n. 2, jul-dez, 2010, p. 00-00.

p = 0,386786 p< 0,05, n = 6

p = 0,624001

Apesar do G1, que recebeu rao ferro proveniente somente da polpa de aa, ter apresentado Hb mdia de 10,66g/dL, quando essa rao foi suplementada com cido ascrbico e oferecida ao G2, a Hb mdia dos animais desse grupo foi 13,22% superior ao apresentado no G1 e foi bem semelhante a resposta dos animais do GC (Tabela 01), onde a fonte de ferro foi citrato frrico, mostrando que a polpa desse fruto foi suficiente para suprir as necessidades de ferro do animal, tendo o cido ascrbico favorecido beneficamente a absoro desse mineral j que houve um aumento nos valores de hemoglobina do G1 para o G2, supostamente em funo do efeito sinergstico que esse cido possui sobre o ferro no-heme, auxiliando na sua absoro (COZZOLINO, 1997). Com relao aos teores de ferro srico encontrados nas cobaias do grupo controle (GC) e experimentais (G1 e G2) aps o perodo de repleo, foi observado que no houve diferena significativa (p = 0,871699) entre eles, reafirmando que foi possvel, com a utilizao dessas fontes recuperar o quadro anmico das cobaias. Os resultados do grupo GC foram semelhantes aos encontrados por Toaiari et al. (2005). No entanto os nveis desse mineral no G1 foram diferentes quando comparados com Toiari et al. (2005) (Tabela 02),que precisam ser melhor avaliados, j que a forma do ferro na polpa de aa encontra-se biodisponveis para esse tipo de cobaia conforme comprovado nesta pesquisa. No foi possvel comparar o teor de ferro srico encontrado nas cobaias do G2 desse estudo com os resultados de Toiairi et al. (2005), visto que no foi objeto de estudo desses autores avaliar a associao do ferro da polpa de aa com cido ascrbico (Tabela 2). Tabela 02 Nveis sricos de ferro (mg/dL) dos filhotes aps o perodo de repleo. GC G1 G2 RCFe Toaiari et Rao 1 Toaiari et Rao 2 Toaiari et al. (2005) al. (2005) al. (2005) M + d.p. 2,68 + 1,18 2,8 + 0,08 2,47 + 0,62 0,5 + 0,12 2,42 + 0,73 -

4 CONCLUSES Pode-se concluir que tanto o citrato frrico como a polpa de aa, suplementada ou no com cido ascrbico mostraram efeitos benficos na recuperao do quadro anmico das cobaias, indicando a possibilidade dos mesmos efeitos em humanos. No entanto, estudos clnicos devem ser realizados para avaliar o efeito dessa polpa no combate a anemia ferropriva em humanos.

5 - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Rev. Univ. Rural, Sr. Ci. Vida. Seropdica, RJ, EDUR, v. 30, n. 2, jul-dez, 2010, p. 00-00.

A.O.A.C. Association Official Analytical Chemist. Official methods of analysis.1995, 14 Ed. Arlington, 1141p. BAKER, S.J. Nutricional Anemia a Major Controlable Public Health Problem. Bull WHO, 1978, 56:659-75. CAVALCANTE, P.B. Frutas comestveis da Amaznia. 1996. 6 ed. Belm:CNPq/Museu Paraense Emilio Goeldi. 279p. COZZOLINO, S.M.F. Biodisponibilidade de Minerais. Rev. Nutrio da Puccamp.10 (2):87-98.1997. FIBGE. Tabela de Composio Alimentar. Estudo Nacional de Despesa Familiar., 1982. FIBGE, 213p. FLIER, L.S.J. Iron needs during rapid growth and mental development. J. Pediatrics, v.117, p. 143-46, 1990. Homma, A.K.O; Frazo, D.A.C. O despertar da fruticultura amaznica. Fruticultura em Revista, Novembro: 27-31. 2002. MANGUEIRA, T.F.B.; TRAVASSOS, A.E.R.; FIOREZE, R.; MEDEIROS, R.S. Adio de ferro ao leite e sua reteno na coalhada dessorada. Rev. Cinc. Tecnol. Alimentos., Campinas, v. 22, n.3, 305-307p., set./dez. 2002. MICKAY, R.H.; HIGUCHI, D.A.; WINDER, W.W.; FEEL, R.D.; BROWN, E.B. Tissue effects of iron deficiency in the rat. Biochem. Biophys. Acta. 1983. 757(3):352. MITRUKA, B.M.; RAWNSLEY, H.M. Clinical Biochemical and hematological reference values in normal experimental and hematological reference values in normal experimental animals. 1997. New York. Masson Publishing. NOGUEIRA, N.N., MARREIRO, D.N.; PARENTE, J.V., COZZOLINO, S.M.F.P. Estado nutricional de adolescentes grvidas suplementadas com ferro, zinco e cido flico. In: XVI CONGRESSO BRASILEIRO DE CINCIA E TECNOLOGIA DE ALIMENTOS, 1998, Rio de Janeiro, SBCTA, 35p. NOGUEIRA, O.L.; CARVALHO, C.J.R.; MULLER, C.H.; GALVO, E.U.P.; SILVA, H.M.E.; RODRIGUES, J.E.L.F.; OLIVEIRA, M.S.P.; CARVALHO, J.E.U.; ROCHA NETO, O.G.; NASCIMENTO, W.M.O.; CALZAVARA, B.B.G. A cultura do aa. 1995. Braslia: EMBRAPA. 49p. 1995. OLIVEIRA, M.S.P.; CARVALHO, J.E.U.; NASCIMENTO, W.L.O.; MLER, C.H. Cultivo do Aaizeiro para Produo de Frutos. Circular Tcnica. n. 26. Embrapa Amaznia Oriental. Belm, Par. 2002. REEVES,P.G.; NIELSEN.F.H.; FAHEY,G.C. AIN-93 Purified Diets for Laboratory Rodents: Final Report of the American Institute of Nutrition Ad Hoc Writing Committee on the Reformulation of the AIN-76A Rodent Diet. J. Nutr. 123: 19391951, 1993.. SOUZA QUEIROZ, S.; TORRES, M.A.A. Anemia carencial ferropriva: aspectos fisiopatolgicos e experincia com a utilizao do leite fortificado com ferro. Ped. Mod., 31:441-55, 1995. SOUZA QUEIROZ, S.; TORRES, M.A.A. Anemia ferropriva na infncia. J. Pediatr., 76:298-304, 2000. TOAIARI, S.D.A.; YUYAMA, L.K.O.; AGUIAR, J.P.L.; SOUZA, R.F.S. Biodisponibilidade de ferro do aa (Euterpe oleracea Mart.) e da farinha de mandioca fortificada com ferro em ratos. Rev. Nutr. vol.18. n.3. Campinas, May/June 2005. WISE, A. Phytate and zinc bioavailability. J. Food Sci. Nutr., v..46, n.1, p. 53-63, 1997. WORLD HEALTH ORGANIZATION (WHO). Nutritional anemias. Reports of a WHO Scientific Group. Technical Report Series n405. 1983. Genebra.
Rev. Univ. Rural, Sr. Ci. Vida. Seropdica, RJ, EDUR, v. 30, n. 2, jul-dez, 2010, p. 00-00.

ANEXO 1 Mistura Salina AIN-93M-MX Ingredientes Carbonato de clcio, anidrido, 40,04% Ca Fosfato de potssio, monobsico, 22,76% P; 28,73% K Cloreto de sdio, 39,34% Na; 60,66% Cl Sulfato de potssio, 44,87% K; 18,39% S Citrato de potssio, tri-potssio, monohidratado, 36,16% K xido de magnsio, 60,32% Mg Citrato frrico, 16,5% Fe Carbonato de zinco, 52,14% Zn Carbonato de mangans, 47,79% Mn

g/Kg 357,00000 250,00000 74,00000 46,60000 28,00000 24,00000 6,06000 1,65000 0,63000

Rev. Univ. Rural, Sr. Ci. Vida. Seropdica, RJ, EDUR, v. 30, n. 2, jul-dez, 2010, p. 00-00.

Carbonato cprico, 57,47% Cu Iodeto de potssio, 59,3% I Selenato de sdio, anidrido, 41,79% Se p-Molibdato de amnia, 4 mol H2O, 54,34% Mo m-Silicato de sdio, 9 mol H2O, 9,88% Si Sulfato de potssio e cromo, 12 mol H2O, 10,42% Cr cido brico, 17,5% B Fluoreto de sdio, 5,24% F Carbonato de nquel, 45% Ni Cloreto de ltio, 16,38% Li Vanadato de amnia, 43,55% V Sacarose p

0,30000 0,01000 0,01025 0,00795 1,45000 0,27500 0,08150 0,06350 0,03180 0,01740 0,00660 209,80600

Rev. Univ. Rural, Sr. Ci. Vida. Seropdica, RJ, EDUR, v. 30, n. 2, jul-dez, 2010, p. 00-00.