NDICE

Introduccin 1. Definicin de prion

05 06

2. Estructura de los priones 2.1. La protena celular del prion 2.2. Las formas patolgicas de la protena del prion. 2.3. PrP 106-126 2.4. Minipriones 2.5. La barrera de las especies 2.6. La protena X 2.7. Nomenclatura 2.8. Estructura y expresin del gen PrP 2.9. La protena anti-prion 2.10. Prion: naturaleza del agente infeccioso

06 07 07 09 10 10 11 12 12 12 13

3.

Funcin de los priones Funcin de los priones en estado no patgeno (PRPC)

14 14 15 18 21

4. Patologas 4.1. Patologas prinicas en humanos 4.2. Patologas prinicas en animales

5. Conclusin

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6. Bibliografa

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Introduccin

El trmino "prion" es usado para describir el agente infeccioso responsable de varias enfermedades neurodegenerativas encontradas en los mamferos, tambin conocidos como encefalopatas espongiformes transmisibles. Estos agentes son capaces de propagarse dentro de un mismo husped causando una lesin espongitica y de transmitirse de husped a husped con elevados tiempos de incubacin. A diferencia de virus y viroides, son resistentes a tratamientos inactivantes de cidos nucleicos, pero comparten con stos la existencia de una variabilidad de inculos dentro de la misma especie (diferenciables por el patrn de la lesin y la magnitud del tiempo de incubacin) y de una infectividad sujeta a barrera de especie. La bsqueda de la entidad molecular constitutiva de este agente revel como componente mayoritario, si no nico, una protena: PrP , protena del prion de scrapie), y la ausencia de un cido nucleico especfico (Prusiner 1982, 1991). Con estas premisas estructurales unidas a la capacidad de infeccin, Prusiner acua el trmino prion (particula infecciosa de naturaleza proteica) para diferenciarlo de virus y viroides. Dadas las caractersticas poco convencionales de los priones se han elaborado numerosas hiptesis sobre su estructura. En la actualidad la hiptesis con mayor grado de aceptacin es la conocida como "slo protena", delineada inicialmente por Griffith (1967) y, formalmente enunciada y actualizada por Prusiner (1991, 1997). Tras la descripcin de protenas de diferente secuencia pero similar comportamiento en levadura as como los avances interdisciplinares realizados en el conocimento de estos agentes en la ltima dcada, el concepto de prion ha sido acotado adquiriendo una deficin ms precisa y generalizable. As, se denomina prion a la forma alterada de una protena celular funcional (PrP en mamferos) que ha podido perder su funcin normal pero que ha adquirido la capacidad de transformar la forma normal en patolgica.
Sc

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PRIONES 1. DEFINICIN DE PRION La palabra en s deriva de "proteinaceous infectious particle", definicin propuesta por Stanley B. Prusiner. Esta definicin vino dada por la hiptesis inicial, que ms tarde se confirmara, de que este agente infeccioso consista nicamente en una protena, carente de genoma y cidos nucleicos. Se ha observado esta protena en las membranas neuronales de los mamferos sin causar enfermedad alguna, pero se sabe que un cambio conformacional de su estructura terciaria puede provocar la aparicin de la enfermedad. Estas protenas en su forma patgena se multiplican exponencialmente al ponerse en contacto con las protenas normales, ya que les inducen el cambio conformacional que las vuelve infecciosas. La aparicin de estos desordenes estructurales en las protenas, pueden ser transmisibles, heredados, o incluso espordicos, es decir, sin evidencias de transmisin ni herencia. Estos agentes son capaces de propagarse dentro de un mismo husped causando una lesin espongitica y de transmitirse de husped a husped con elevados tiempos de incubacin. A diferencia de virus y viroides, son resistentes a tratamientos inactivantes de cidos nucleicos, pero comparten con stos la existencia de una variabilidad de inculos dentro de la misma especie y de una infectividad sujeta a barrera de especie.

2. ESTRUCTURA DE LOS PRIONES La protena del prion, identificada originalmente en roedores infectados con scrapie, est codificada por un gen cromosmico de copia nica. Este gen se encuentra altamente conservado y se ha identificado en ms de 13 especies de mamferos. Generalmente est compuesto por dos exones no traducidos en 5 separados por un intron de ~2 kb, que tras splicing quedan unidos al exn 3 que contiene la regin codificante (750 bp). El codn de iniciacin se localiza a 10 nucletidos 3 del sitio aceptor de splicing lo que imposibilita la interrupcin del mensaje y la existencia de formas alternativas. Experimentos de clonaje han permitido obtener todo un conjunto de mutaciones ligadas a patologas hereditarias, perfilar posiciones polimrficas y describir una rica variedad de mutaciones sin sentido en distintas especies. La protena PrP est constituida por cuatro regiones de estructura secundaria llamadas H1, H2, H3 y H4, en estas regiones se identifican tres zonas de hlice- llamadas A, B y C, y dos de hoja-, llamadas S1 y S2. Estudios mediante los mtodos FTIR y CD han mostrado que la protena PrPc contiene un 40% de hlice- y muy poca proporcin de hoja-, mientras que la PrPSc se compone de un 30% de hlice- y un 45% de hoja-. Esta dualidad hlice- hoja- parece localizarse principalmente en la regin 106-126, que en forma de pptido sinttico es un neurotxico potente. Con respecto a la expresin del gen de PrP sta ocurre constitutivamente en tejidos neuronales y no neuronales de animales adultos, detectndose los niveles ms altos en neuronas. En cerebros animales, la sntesis de mRNA de PrP ocurre constitutivamente en estados adultos, pero durante el desarrollo se encuentra bajo un control riguroso. En el

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septum, los niveles de los mRNA de PrP y de acetilcolinesterasa aumentan paralelamente C durante el desarrollo. Los niveles ms altos de PrP se encuentran en cerebro, particularmente en el hipocampo, existiendo niveles significativos en corazn y msculo esqueltico y, ms bajos en la mayora de los rganos restantes excepto en hgado y en pncreas. 2.1. La protena celular del prion El producto traducido a partir del mRNA es una cadena polipeptdica de alrededor de 250 aminocidos, dependiendo de la especie, en la que se distinguen una secuencia seal Nterminal de 22 residuos, una serie de repeticiones de un octapptido PHGGGWGQ, cuatro segmentos altamente conservados en las posiciones 109-122, 129-140, 178-191 y 202-218, una regin hidrofbica C-terminal. Esta cadena sufre un proceso de maduracin covalente complejo que supone: la escisin proteoltica de los pptidos seal, la adicin C-terminal de un glicanfosfatidilinositol (GPI), la formacin de un enlace disulfuro intramolecular y, por ltimo, una doble glicosilacin en los residuos de Asn 181 y 197. PrP es una protena capaz de unir especficamente Cu para la cual se postula un papel activo en la homeostasis de este catin implicado en procesos de oxido-reduccin. La C estructura secundaria de PrP , solubilizada en detergentes y en ausencia de cationes, es mayoritariamente helicoidal mientras que la formacin del complejo conlleva un aumento del contenido en estructuras extendidas. Estudios espectroscpicos de alta resolucin con formas recombinantes en ausencia de ligando han puesto de manifiesto que PrP est constituda por dos dominios, el N-terminal ltamente desestructurado y el C-terminal globular. Con respecto al metabolismo celular de PrP , estudios de translocacin in vitro han identificado tres formas topolgicas de PrP: una forma de secrecin (coincidente con la anclada por GPI) y dos formas transmembranas que difieren en su orientacin (el N-terminal luminal y el C-terminal luminal). La forma de secrecin es transportada en vesculas de secrecin a la superficie exterior celular donde queda anclada a travs del GPI en dominios particulares. Una vez all, algunas molculas son liberadas al espacio extracelular por escisin del GPI mientras que la mayora es internalizada en el compartimento endoctico. Estas ltimas bien son recicladas hacia la superficie celular o bien sufren una ruptura proteoltica en la mitad del N-terminal cuyos productos son expulsados al exterior celular. El metabolismo de las formas trasmembrana no se conoce con exactitud, pero la acumulacin por encima de un umbral de las formas con el C-terminal luminal se correlaciona con la aparicin estados neuropatolgicos. 2.2. Las formas patolgicas de la protena del prion. En las patologas de priones PrP se transforma post-traduccionalmente en una isoforma Sc generalmente denominada PrP . Esta conversin, que tiene lugar en dominios de tipo caveola, se caracteriza por un cambio drstico en las propiedades fsicas y qumicas de la C Sc molcula. PrP es soluble en detergentes mientras PrP forma unos agregados amorfos C insolubles. PrP se libera de la membrana en forma soluble por digestin con PIPLC, Sc mientras que PrP no es susceptible a la accin enzimtica requiriendo un tratamiento C desnaturalizante previo para la eliminacin del GPI. PrP es sensible a la accin de Sc proteasas y PrP , por el contrario, sufre una proteolisis limitada generando la forma truncada en el extremo N-terminal que agrega en forma de amiloides y retiene la infectividad. No obstante, existen estados patolgicos en los que no ha podido detectarse
C C C 2+,

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PrP en trminos de resistencia a proteasas pero la descripcin reciente de formas transmembrana podra estar implicada en estos casos. Las modificaciones post-traduccionales de carcter covalente no parecen ser la causa directa del proceso de conversin pero s de su modulacin. De esta forma, el GPI determina la posibilidad de conversin ya que sta ocurre en dominios especializados de membranas donde se confinan las protenas ancladas por GPI. Por otra parte, la glicosilacin va a determinar el trfico intracelular de la protena. Los estudios espectroscpicos han permitido establecer que la estructura secundaria de Sc C PrP dispersada en detergentes, a diferencia de la de PrP , presenta como elemento mayoritario la cadena b estabilizada en lminas y que el comportamiento amilodico est vinculado a la presencia de lminas b intermoleculares. Esta dualidad conformacional hlice a-lmina b parece localizarse principalmente en la regin 106-126, que en forma de pptido sinttico es un neurotxico potente.

Sc

B) Lugar donde se cree que la protena X se liga a la PrPc. C) Lugares que se cree relacionados con la transmisin de priones entre las especies y control de unin de la protena X D) Flexibilidad de la cadena del polipeptido PrP. E) Modelo para la estructura terciaria de la HuPrPSc.

Bsicamente puede decirse que la isoforma mutante difiere de la silvestre en: Alto contenido en hlices. Es insoluble en detergentes, formando agregados amorfos. Sufre una protelisis limitada que genera una forma truncada agragante y que retiene la infectividad. No es susceptible a la accin enzimtica con PIPLC para su liberacin de la membrana, requiriendo un tratamiento desnaturalizante previo para la eliminacin del GPI.

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Localizacin extracelular.

Se sabe que ambas isoformas PrP poseen anclas GPI (glycoinositol phospolipid), gracias a la cual, la PrPc se encuentra anclada en la superficie de la clula. Su transformacin a PrPSc solo tiene lugar cuando la PrPc alcanza dicho lugar de forma que el GPI es determinante para la conversin ya que esta ocurra en dominios de la membrana donde estas protenas se encuentran ancladas. La PrPSc se encuentra dentro de la clula en estructuras del sistema endoctico y fuera de la clula en placas amiloides como PrPSc 27-30 KDa. La adquisicin de la resistencia a las proteasas de la PrPSc, es un proceso posttranslacional, es decir, se adquiere tras el plegamiento. En el estudio de los modelos de PrPSc se hall un pptido menor derivado de este ltimo, que constitua el ncleo proteasaresistente de la PrPSc. Este pptido tena una masa molecular de 27-30 KDa y se le llamo PrP27-30. Se ha encontrado este pptido en todos los casos de enfermedad prion, salvo en las enfermedades del Alzheimer, Parkinson y esclerosis miotrpica lateral. Los residuos 113-128, dentro de la regin H1, son los ms conservados en todas las especies estudiadas, y corresponden a una zona transmembranal de la PrPc que se organiza en hlice- . Los residuos 90-141 de PrP han demostrado ser suficientes para iniciar o bloquear la transformacin de PrPc, probablemente porque constituyen el principal sitio de unin de PrPSc a PrPc durante el proceso de conversin. Posteriormente, se identific un segundo dominio entre los residuos 180-205 que parecen modular la interaccin entre PrPc y PrPSc.

2.3. PrP 106-126 Es una parte que se mantiene constante en todas las isoformas PrP acumuladas en los cerebros de pacientes afectados por enfermedades prion y, por tanto, constituye la partcula infecciosa. Adems, el pptido PrP 106-126 es ms soluble y fcil de manipular para el estudio de cultivos celulares que la partcula entera PrPSc. Se ha demostrado que el pptido 106-126 cataliza la agregacin de la protena prion celular a una forma proteinasa K-resistente e induce la sntesis de una protena prion trasmembrana (PrP), que se ha propuesto como mediadora de la neurotoxicidad en ciertos desrdenes, en lugar de los depsitos de agregados y la PrP proteinasa K- resistente nicamente. Se ha demostrado que PrP 106-126 induce muerte celular por apoptosis en una determinada lnea celular neuronal humana, y lo hace a travs de dos molculas (caspasas y calpainas). Esto implica la mitocondria como un sitio primario de accin de la PrP106-126. Adems, aumenta la secrecin de catecolaminas induciendo una va de entrada de Cd2+ resistente al Ca2+, y altera el acoplamiento de los canales de nativos de Ca2+ con la exocitosis. Segn otro estudio, el pptido artificial PrP106-126 es neurotxico in vitro debido a la adopcin de la estructura fibrilar amiloidognica agregante. Y parece que reduciendo los niveles de Cu2+ y Zn2+ aproximadamente tres veces respecto del nivel fisiolgico, se inhibe

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la agregacin del PrP106-126. Del mismo modo, eliminando por mutagnesis la His-111, Met-109 o Met-112, que se han confirmado como lugares de unin de Cu2+ y Zn2+, se inhibe la neurotoxicidad del PrP 106-126 y su capacidad de formacin de estructuras fibrilares.

2.4. Minipriones Se realizaron diversas pruebas para investigar la naturaleza patgena del prion, y se crearon priones mutantes para facilitar esto. As, la destruccin de cualquiera de las cuatro regiones en hlice- de la protena PrPc, previene la formacin del PrPSc. Mientras que suprimir la regin del extremo N-terminal con los residuos 23-89, as como otros 36 residuos entre las posiciones 141-176 (ambas regiones en verde en la imagen: hlice A y hoja S2) no afectan a la aparicin de PrPSc. La molcula PrP resultante con 106 aminocidos, fue denominada PrP106 (o miniprion). La cual tiene idnticas propiedades al PrPSc original, pero al ser menor tamao, ofrece ms facilidades para el descifrado de su estructura.

Miniprion creado borrando los residuos 23-89 y 141-176 de la PrP.

2.5. La barrera de las especies La barrera fue descubierta por Pattison en los aos 60. La causa de la barrera de las especies es la existencia de genes PRNP diferentes segn las especies. Estos genes se traducirn en protenas PrP con secuencias particulares, que constituirn una estructura terciaria de prion caracterstica para cada especie. As, el gen PrP del ratn difiere del de hmster en 16 codones de los 254 totales; y el de ratn del de humano en 28 codones, lo que da lugar a protenas PrP con configuraciones distintas entre las especies.

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La transmisin interespecfica de una enfermedad prion depende de que el prion patgeno del donante sea suficientemente similar a la protena prion husped como para poder unirse a ella e inducirle el plegamiento. La identidad en el segmento 96-167 es necesaria pero insuficiente, cuanto mayor sea ms eficaz ser la interaccin de PrPSc con PrPc . El grado de compatibilidad de ambas protenas determina el tiempo de incubacin de la enfermedad (meses, aos, dcadas). Como mejor se transmite la enfermedad (menor tiempo de incubacin), es entre animales de la misma especie. La estructura terciaria de las protenas PrP es la que determina los linajes de los priones. Pueden distinguirse varios linajes (strains) de priones en una misma especie. Se aislaron diferentes inculos de priones de scrapie de oveja que se diferenciaba en el tiempo de incubacin y en el patrn de lesin que causaban en los animales de experimentacin. Las protenas aisladas de cada inoculo tenan idntica estructura primaria pero diferan en el grado de glicosilacin y en el tamao del producto de protelisis limitada. As, pueden diferenciarse varios linajes de priones de una misma especie en funcin de tres estados de la protena PrPSc: Sin glicosilar Monoglicosilada Biglicosilada

2.6. La protena X Es un pequeo ligando detectado mediante estudios genticos y moleculares, que se une al PrPc y facilita su transformacin a PrPSc. Su descubrimiento se bas en la teora segn la cual, molculas del husped podan influir en el comportamiento del PrPSc. Para ratificar esta teora se inocularon ratones transgnicos con genes PrP humanos (HuPrP) y con genes PrP hbridos entre ratn y humano (MHu2M). Los ratones con el gen hbrido infectados, desarrollaron la enfermedad ms rpida y frecuentemente que los que posean el gen totalmente humano. Este hecho llev a afirmar la existencia de un factor procedente del ratn que reconoca las "regiones ratn" de la protena PrP hbrida, facilitando el plegamiento de la PrPc hbrida; mientras que este factor no reconoca ninguna "regin ratn" en la protena PrPc totalmente humana (HuPrP) y, por tanto, no favoreca el proceso. La protena X est involucrada en el plegamiento de las protenas naturales a su forma anmala, y para ello debe reconocer ciertos fragmentos de la protena PrP sobre la que acta. De esta forma, priones PrPSc procedentes de especies muy alejadas evolutivamente de la del husped al que infectan no producirn la enfermedad fcilmente, necesitarn un largo periodo de incubacin porque la protena X no las reconocer. Por la funcin que ejerca esta protena se pens que poda tratarse de una chaperona, pero hasta el momento no se ha identificado ninguna chaperona molecular en mamferos que

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intervenga en el proceso de plegamiento de priones. La protena X podra ser la PrPSc si ste hiciera las veces de ligando bidentado.

2.7. Nomenclatura Para simplificar la terminologa se ha sugerido que la isoforma PrP que provoca la enfermedad, sea llamada PrPSc, sin mencionar el origen del prion. Para aadir especificidad un mutante o variante de PrP puede ser anotado entre parntesis. Por ejemplo: el prion encontrado en el ratn I/Ln, que posee una variante del gen PrP con F en el codn 108 y V en el 189, se identifica como MoPrP (108F, 189V) Sc; el prion encontrado en un judo Libio paciente de CJD, homocigtico para la mutacin de K en el codn 200 se identific como HuPrP (200K) Sc. En situaciones de heterocigosis y en las que el alelo que determina la forma PrP es desconocido, se usa HuPrPSc o HuPrPCJD o la enfermedad de la que se trate. 2.8. Estructura y expresin del gen PrP El gen codificante del prion (llamado PRNP) se encuentra en el brazo corto del cromosoma 20. El gen PRNP normal contiene 5 octarepeticiones entre los codones 51 y 91; la ausencia de una octarepeticin en el codn 81-82 no se asocia a ninguna enfermedad por priones. Inserciones adicionales de octarepeticiones se asocian con ECJ familiares, y determinadas mutaciones puntuales con otras enfermedades familiares por prion. El gen PRNP es un nico exon, no se han detectado intrones en ninguno de los genes PrP conocidos de mamferos y aves, a excepcin de los de ratones, ratas, ovejas y vacas, en los que se han encontrado tres intrones. La expresin del gen es constitutiva en tejidos neuronales y no neuronales de animales adultos, aunque es ms importante en neuronas. Es constitutiva en estados adultos, pero durante el desarrollo su expresin est altamente regulada. Los mayores niveles de PrPC se detectan en cerebro, especialmente en hipocampo, aunque existen niveles significativos en corazn y msculo esqueltico, y menores en el resto de rganos excepto hgado y pncreas. El mapeado comparado de los genes PrP del brazo corto del cromosoma 20 de los humanos y de la regin homloga del cromosoma 2 del ratn, aporta argumentos suficientes para pensar en la existencia de genes PrP anteriores a la especiacin de mamferos. 2.9. La protena anti-prion El gen PRNP est muy conservado y tiene una sola pauta de lectura (ORF). Se ha encontrado otro ORF tan grande como el de PrPc en la hebra antisentido de las regiones codificantes del gen de mamferos. Tambin un ARNm de 4,5 kilobases (solo en tejido cerebral) del que se ha deducido una secuencia de aminocidos reflejada a la de PrPc, lo que se ha llamado anti-PrP.

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Se ha comprobado que este ARNm 4,5Kb procede de otro locus distinto del gen PRNP, pero a pesar de esto, codifica una protena anti-prion que podra afectar la funcin normal de la protena prion o tambin interactuar con ella en las clulas infectadas. Mutaciones encontradas en pacientes de GSS en los codones 102 y 117 del PRNP producan cambios en la secuencia primaria del anti-PrP, mientras que mutaciones encontradas en pacientes de CJD en los codones 178 y 200 no lo hicieron. 2.10. Prion: naturaleza del agente infeccioso

Se han realizado multitud de experimentos para demostrar la naturaleza de los priones: Propiedades Fsicas y Qumicas Propiedades Biolgicas Largo periodo de incubacin (meses, aos, dcadas). No producen respuesta inflamatoria No antignicos. Patologa crnica progresiva. Fatal en todos los casos. Carecen de cuerpos de inclusin. Presencia de cido nucleico no demostrada. El nico componente conocido es la protena PrP. Pueden existir en mltiples formas moleculares Periodo de adaptacin a nuevos hospedadores. Control gentico de la susceptibilidad de algunas especies. Existencia de distintas cepas.

Filtrable con poros 25 nm o 100 nm. Es invisibles al microscopio ptico y electrnico. Resistente a: Formaldehido EDTA Proteasas ( Tripsina, pepsina ), aunque reducen la infectividad Nucleasas ( Ribonucleasas A y III, desoxirribonucleica I ) Radiacin ultravioleta ( 2540 ) Radiacin ionizante

Mtodos de inactivacin: Autoclave >134 C, 18 minutos Hipoclorito sdico (20C, 1hora) Hidrxido sdico 2N Fenol 90% ter Acetona Permanganato potsico 0.002 M Urea 6 M 2 Cloroetanol Cloroformo

Los procedimientos rutinarios de desinfeccin y esterilizacin son inadecuados para la eliminacin de priones causantes del CJD. A saber: alcohol, xido de etileno, formaldehido, glutaraldehdo, perxido de hidrgeno, yodo, radiacin ionizante, fenoles, amonios cuaternarios o esterilizacin convencional por vapor de agua a 121C.

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A pesar de los grandes esfuerzos realizados para encontrar el material gentico de este agente infeccioso, solo pequeos fragmentos de menos de 100 nucletidos han permanecido despus de los procesos de purificacin, sospechndose que pueda ser nicamente material contaminante. Tras descartar la presencia de cidos nucleicos en los priones, tambin se desestimaron los carbohidratos y lpidos como elementos infecciosos. Prusiner resume que solo los procedimientos que hidrolizan o afectan a protenas logran modificar la intensidad de la infeccin. Se ha asumido la presencia de un pequeo ligando unido al prion, como componente esencial de la partcula infecciosa, ya que no se ha podido eliminar.

3.

FUNCIN DE LOS PRIONES Funcin de los priones en estado no patgeno (PRPC)

A pesar de que actualmente hay muy poca informacin sobre la funcin que tienen las protenas Prpc (estado no patgeno), algunos experimentos han demostrado que tienen un papel activo en el correcto desarrollo neuronal, que es una protena capaz de unir especficamente Cu2+ (procesos de oxidoreduccin), y tambin se han relacionado los priones con protenas de transduccin de seales, la adhesin celular y la regulacin y distribucin de los receptores de acetilcolina. Las investigaciones tendentes a describir la naturaleza de los priones y los agregados amioloides que forman permitieron observar protenas-priones en organismos en estado natural, es decir, de una manera tal que no puede decirse que estn relacionados con una enfermedad. Modelos en organismos del reino de los hongos (Fungi), particularmente en Sacharomyces cerevisiae, han permitido observar las funciones que podran tener los priones

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en la vida normal de las clulas. En estos organismos, los priones desempean funciones tales como la regulacin metablica del nitrgeno. Los priones actan tambin como mecanismos de la herencia de fenotipos, en el papel de capacitadores evolutivos, y aumentando la diversidad gentica, al introducir regiones nuevas en los extremos del genoma. En el ao 2003, E. R. Kandel y sus colaboradores lograron identificar una protena similar a un prion en Aplysia. Esta protena, la CPEB, est relacionada con procesos de traduccin del ARNm especfico en las sinapsis durante los procesos de plasticidad sinptica y de formacin de la memoria. La capacidad de guardar informacin conformacional de los priones los convierte en candidatos para participar en procesos celulares que requieren estabilidad durante periodos prolongados y, dado que los priones son menos susceptibles a la digestin enzimtica, es posible que ellos sean mecanismos celulares. Es probable que los priones participen en procesos como la formacin de la memoria a largo plazo, la memoria inmunitaria y la evolucin del genoma de muchos organismos. De hecho, con el uso de ratones knockout, ha visto que podran ser los responsables de evitar la excitacin excesiva de los canales de NMDA de las neuronas. El equipo de Gerald Zamponi cree tener la respuesta: su funcin sera la de calmar a las clulas nerviosas, impidiendo que se estimulen de manera exagerada. Como no se conoca su funcin, decidieron crear un ratn que careciera del prin. Examinado al ratn, daran con la funcin de esta protena. En condiciones normales, estos ratones estn perfectamente sanos. Sin embargo, parece que no tienen tanta memoria como los normales y que si el riego sanguneo se vea dificultado, los daos que sufre el cerebro son mayores de lo normal. Todas estas funciones estn reguladas por un mismo tipo de protenas que se encuentran en la superficie de las neuronas. As que decidieron estudiar a fondo las neuronas de los ratones sin priones. Estudiando individualmente las neuronas, vieron que ante el mismo estmulo, las neuronas sin la protena del prin respondan de forma exagerada. Tan exagerada que en algunas ocasiones les causaba la muerte. Basndose en estos datos, los investigadores creen que la funcin de los priones es suavizar las respuestas de las neuronas para evitar el dao que les causara estar activas demasiado tiempo. De este modo, tanto la falta de estas protenas, como su funcionamiento incorrecto, causaran la prdida de su funcin protectora. Esto ltimo, sera parte del motivo por el que, en la enfermedad de las vacas locas, las neuronas de los pacientes mueren. Y con ellas, los propios enfermos.

4. PATOLOGAS Las EETs o enfermedades producidas por priones son un grupo de patologas neurodegenerativas fatales que afectan al hombre y a los animales. Estas enfermedades incluyen una fase psquica, con cambios de comportamiento y de temperamento, adems de una fase orgnica en la que se observan alteraciones motoras graves Entre las EETs de los animales, destaca la Encefalopata Espongiforme Bovina (EEB) conocida

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como la enfermedad de las vacas locas. Esta patologa ha tenido gran impacto en la salud animal as como tambin, ha causado grandes prdidas econmicas en este rubro. Adems, ha adquirido gran importancia en salud pblica, debido a que se ha descrito su transmisin al hombre, dando origen a una nueva variante de ECJ (vECJ), por lo que se le considera una enfermedad zoontica. Las EETs, se caracterizan por cursar con un elevado tiempo de incubacin, signos neurolgicos progresivos y cambios morfolgicos degenerativos en el sistema nervioso central (SNC), que terminan con la muerte del individuo. La teora ms aceptada sobre el agente causante de estas enfermedades es la del prin, que corresponde a la forma alterada de una protena celular (PrPC) que ha adquirido la capacidad de transformar la forma normal en patolgica (PrPSc). Este agente es capaz de propagarse en el sistema nervioso de un mismo husped causando una lesin espongiforme degenerativa en este tejido, adems de transmitirse de un husped a otro con largos tiempos de incubacin. Las EETs se clasifican en enfermedades de tipo hereditarias, cuando su presentacin se debe a una mutacin en el gen que codifica la PrP; de tipo adquiridas, cuando la infeccin es producto del ingreso al organismo de una PrPSc exgena; y de tipo espordicas, cuando se presentan sin evidencia de una mutacin puntual o de infeccin exgena con la PrPSc. A partir de una ingesta contaminada, el agente patgeno es transportado por el epitelio intestinal, desde donde entra a las clulas M (especializadas en el transporte de macromolculas y partculas a travs de las clulas del epitelio intestinal) mediante transcitosis. A continuacin, el agente entra dentro de las clulas migratorias y de los macrfagos (sistema inmunitario). Una vez reconocido, se sintetiza un anticuerpo contra el prion, pero no tiene ninguna eficacia, causa por la cual el prion es transportado por el sistema inmunitario y se acumula en el bazo y los ganglios linfticos, que estn muy inervados. Este hecho produce el contagio al tejido nervioso y la consecuente muerte neuronal y por ello, el cerebro adquiere un aspecto esponjoso. La PrPSc es la protena responsable de la disfuncin del SNC y de la neuropatologa de las enfermedades prinicas al acumularse en las neuronas. Existe evidencia sustancial que demuestra que esta acumulacin precede a la vacuolizacin y a la gliosis astroctica, lesiones que han sido consideradas las caractersticas neuropatolgicas de estas patologas. Sin embargo, los mecanismos precisos que culminan con el dao a las clulas cerebrales son an desconocidos. Las molculas de PrPSc, al agregarse, forman placas amiloides. Este proceso podra ser asistido por una chaperona molecular u otro factor desconocido del husped, referido como un factor o protena X que interacta en una va especie especfica con el C-terminal de la PrPC durante la propagacin prinica. Si estas chaperonas fueran clula-especfica, se podra explicar la propagacin selectiva de los priones en distintas poblaciones neuronales y en tipos particulares de clulas perifricas como las del sistema linfoide reticular (Harris, 1999; Brun et al., 2004; Monleon et al., 2004). La propagacin de la infectividad de los priones es un proceso exponencial, en el cual una molcula de PrPSc al combinarse con una molcula de PrPC produce un heterodmero que es subsecuentemente transformado en dos molculas de PrPSc. En la siguiente fase, estas dos PrPSc combinadas con otras dos PrPC originan cuatro molculas de PrPSc, prosiguiendo as el ciclo de propagacin.

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Los factores que condicionan la tasa de formacin de PrPSc y los tiempos de incubacin de la patologa corresponden a: - la concentracin de PrPSc, que es inversamente proporcional al largo del perodo de incubacin; - la secuencia de ambas isoformas de PrP, ya que s las dos isoformas son idnticas, el tiempo de incubacin es menor; - la cepa o tipo de conformacin de la PrPsc, ya que algunas cepas de priones exhiben un mayor tiempo de incubacin que otras, lo que an no ha podido ser explicado. La posibilidad de transmisin de los priones entre las distintas especies ha permitido definir el concepto de barrera interespecfica. En relacin a esta, se sabe que la secuencia aminoacdica primaria de la PrPC es la determinante principal (Glatzel y Aguzzi, 2000). As la transmisin de los priones entre distintas especies se define como un proceso estocstico, que en el caso de ocurrir es muy poco eficaz y se manifiesta con una prolongacin del tiempo de incubacin hasta la aparicin de los signos clnicos. Sin embargo, despus de subsiguientes pasajes o adaptacin, estos tiempos se acortan y estabilizan, por lo que la transmisin deja de ser un proceso probabilstico. Los priones sintetizados de novo reflejan la secuencia del gen de la PrP del husped o de forma endgena. An cuando el gen de la PrPC est muy conservado entre las distintas especies, siempre presenta algunas diferencias puntuales, las cuales seran las responsables de la barrera interespecfica de los priones. Esto influye, tanto en el comportamiento del prin (replicacin, sntesis de PrPSc, tiempo de incubacin, alteraciones neuropatolgicas) as como, en que la suceptibilidad de una especie a la infeccin con un prin este determinada por la homologa de las secuencias entre la PrPSc y la PrPC. La va natural de infeccin para algunas EETs, incluyendo la vECJ, es la va oral. Epidemiolgicamente, esta ruta es muy relevante porque sera la responsable de la epidemia de la EEB y de la transmisin de esta enfermedad a una variedad de especies incluyendo al hombre. En modelos experimentales, se ha podido determinar que la va ms efectiva para la contaminacin con PrPSc exgena es la va intracerebral, y que la menos efectiva es la va oral. Sin embargo, en la infeccin natural con la PrPSc, especialmente en el caso de la EEB, se ha determinado que puede ser ms infecciosa la va perifrica de contaminacin (incluyendo la oral) ms que la va intracerebral. Una de las principales caractersticas de las EETs, en cualesquiera de las especies afectadas, es el largo perodo de incubacin. Esto se podra explicar por la propagacin de los priones en los tejidos llamados reservorios. Muchos estudios apuntan a la importancia de la replicacin de los priones en rganos linfoides precediendo a la propagacin en el SNC, aunque la va de infeccin sea la intracerebral. La presencia del prin en el cerebro, despus de la administracin oral o perifrica de PrPSc, implica que las vas de neuroinvasin deben ser aquellas que inervan los tejidos extraneurales donde los niveles de expresin de PrPC permitan su transformacin y acumulacin. En el caso de una ingestin por va oral, parece clara la implicancia de los plexos mesentricos y submucosos del tracto intestinal, los que se encuentran prximos a rganos del sistema linfoide reticular asociado al tracto digestivo (placas de Peyer intestinales y ndulos linfoides mesentricos). En ratones inoculados oralmente con priones de Scrapie o de EEB, estos rganos constituyen los sitios iniciales de replicacin. La importancia de los tejidos linfoides en la patognesis de las EETs parece estar en funcin del tipo de prin o de la especie hospedadora. En el hombre, la presencia de PrPSc en el tejido linfoide se ha asociado principalmente con la vECJ. Sin embargo, no se ha podido demostrar la

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funcin de los tejidos linfoides en la patognesis natural de la EEB, pese a la relacin causal entre ambas patologas. El anlisis de la infectividad en los diferentes rganos de animales infectados experimentalmente y escogidos en distintos puntos de tiempo post-infeccin ha demostrado que la neuroinvasin ocurre cerca de la mitad del perodo de incubacin. Es as como, la propagacin de los priones y los primeros cambios patolgicos como la espongiosis, aparecen en el centro de la mdula espinal torcica, al mismo nivel donde los nervios del sistema nervioso simptico (SNS) entran a la mdula espinal. Posterior a estos hallazgos, se descubri una va de acceso adicional al SNC, la que utiliza nervios del sistema nervioso perifrico (SNP) a travs del nervio vago, llegando de este modo a la mdula oblonda. Esta ruta alternativa ha mostrado tener una gran importancia cuando los animales son infectados por va oral, por lo que la va de entrada del agente infeccioso parece ser el factor ms importante y que determina la ruta preferencial de transporte al SNC. 4.1. Patologas prinicas en humanos Las enfermedades prinicas que afectan al hombre se presentan como patologas de tipo espordicas, hereditarias o desrdenes neurodegenerativos transmisibles. Adems pueden ser subdivididas sobre la base de la signologa clnica y por las caractersticas neuropatolgicas con que se manifiestan. Estas corresponden al Kur, el sndrome de Gerstmann-StrusslerScheinker (GSS), el Insomnio Familiar Fatal (IFF), la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ) y ltimamente una nueva variante vECJ la que, a diferencia de las anteriores, se relaciona directamente con la EEB, por lo que actualmente esta ltima corresponde a una zoonosis. Enfermedad de Creutzfeldt Jacob (ECJ) Es la enfermedad prinica ms comn. Se tienen referencia de casos en todo el mundo y su prevalencia se calcula cercana a 1:1000 000 000 de habitantes. El debut aparece entre los 50 y los 60 aos y su curso clnico puede tener varias fases hasta alcanzar una demencia grave con mioclonias. En la mayora de los pacientes el deterioro mental es lentamente progresivo con trastornos cognoscitivos, prdida de la memoria y delirio. La triada clnica incluye demencia progresiva, mioclonias y EEG con complejos perodos trifsicos de 1-2 Hz. Pueden apreciarse cambios en el comportamiento, disfuncin cortical alta y alteraciones visuales (variante de Heidenhain), signos de alteracin cerebelosa (variante de Brownell-Oppenheimer), manifestaciones piramidales, extrapiramidales y disfuncin de neurona motora inferior. En fases avanzadas de la enfermedad puede aparecer mutismo aquintico. La muerte sobreviene entre 1 mes a 10 aos, con una media de 1 ao despus del debut clnico. La forma familiar de la enfermedad (ECJf) representa de 10 a 15% de personas con ECJ y sigue una herencia autosmica dominante. La mutacin ms frecuentemente registrada en todo el mundo es E200K que implica una sustitucin de glutamato (E) por lisina (K) en el codn 200. ECJf debuta, por lo general, ms tempranamente, tiene un curso ms rpido y mayor postracin. La mutacin E200K se caracteriza por determinar la aparicin temprana de prdida de memoria y confusin que luego se acompaan de demencia rpidamente progresiva, signos piramidales y extrapiramidales, ataxia mioclonias. Tambin se ha informado con esta mutacin la ocurrencia de oftalmoplejia supranuclear y neuropata perifrica desmielinizante. Los hallazgos anatomopatolgicos consisten en atrofia cerebral y cerebelosa, vacuolizacin del neuropilo en la substancia gris con disminucin de la poblacin neuronal, astrocitosis marcada, placas amiliodes y ausencia de infiltrado inflamatorio.

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Enfermedad de Gertsmann Straussler Scheinker Se caracteriza por una ataxia grave acompaada de paraparesia espstica. Su inicio puede ser tan temprano como a los 20 aos, pero puede aparecer hasta los 60 aos. La duracin es entre 2 y 10 aos y los pacientes fallecen generalmente por infecciones secundarias. La mutacin ms frecuentemente registrada es en el codn 102, que determina un cambio de prolina a leucina. Tambin se han encontrado mutaciones en los codones 105, 145 y 117. Sigue una herencia autosmica dominante. El estudio anatomopatolgico evidencia varios tipos de placas focales o difusas en la corteza cerebral y cerebelosa, que resultan ser inmunorreactivas a los anticuerpos anti PrP humanos. Adems aparece degeneracin espinocerebelosa. Kuru El trmino Kuru significa en lengua aborigen temblor, con fiebre y fro. Fue inicialmente descrita en la tribu Papa de Nueva Guinea y apareca despus de la ingestin de tejidos cerebrales de personas fallecidas con la finalidad de adquirir su sabidura. Predomina en nios y mujeres adultas. La enfermedad se desarrolla lentamente, y el perodo de incubacin puede prolongarse hasta 30 aos. Progresa usualmente hasta la muerte en aproximadamente 1 ao. Gajdusek descubri tres etapas en su curso clnico: Fase ambulatoria: aparece temblor generalizado con prdida de la capacidad para coordinar los movimientos y disartria, lo cual evidencia una afectacin cerebelosa incipiente. Fase sedentaria: se manifiesta incapacidad de deambulacin independiente, temblores ms fuertes, ataxia, labilidad emocional, depresin y bradipsiquia. Estn conservados los reflejos tendinosos y an no es perceptible la degeneracin muscular. Fase terminal: hay incapacidad para la sedestacin independiente, ataxia severa, temblores, disartira, incontinencia urinaria y fecal, disfagia y ulceraciones cutneas. Est caracterizada por extensa vacuolizacin, gliosis, infiltrado inflamatorio mnimo o ausente y placas amiloides. Insomnio Familiar Fatal (IFF) Constituye una variedad rara de enfermedad prinica. Su aparicin tiene lugar entre los 35 - 55 aos, con una edad media de inicio a los 45 aos. El tiempo de vida media una vez que comienza clnicamente la enfermedad es de 1 ao. Ha sido descrita la mutacin en el codn 178 que provoca cambios en metionina y valina. Se caracteriza por un insomnio intratable que dura semanas o meses. Aparece seguidamente disautonoma, ataxia y signos piramidales y extrapiramidales. Las funciones cognoscitivas se conservan relativamente hasta perodos avanzados de la enfermedad. Estos pacientes pueden presentar alteracin episdica de la

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tensin arterial, la frecuencia cardaca y respiratoria y de la temperatura. En el EEG puede encontrarse un enlentecimiento difuso con ms frecuencia que descargas peridicas. La neuropatologa de esta enfermedad incluye anomalas en tlamo y oliva bulbar inferior. En el tlamo se puede apreciar prdida marcada o subtotal de neuronas, especialmente en los ncleos anterior y dorso medial, asociada con astrogliosis. No se observa espogiosis en el tlamo, pero pueden encontrarse focos aislados en la corteza cerebral y la sustancia blanca subyacente, fundamentalmente en reas lmbicas y en la capa de clulas de Purkinje del cerebelo. Hay notable prdida de clulas de Purkinje en cerebelo. En resumen, a nivel neuropatolgico, se puede considerar una degeneracin tlamo olivar con cambios corticales leves, especialmente lmbicos, en relacin con la duracin de la enfermedad. Otras formas clnicas En los ltimos aos se han descrito otros cuadros clnicos de etiopatognica prinica que se apartan de las descripciones clsicas hasta ahora expuestas y que, aunque se trate de casos familiares de muy baja incidencia amplan considerablemente el espectro clnico de estas enfermedades. La demencia por prin sin patologa caracterstica: describe una demencia familiar de tipo cortical, de inicio en la tercera dcada de la vida y ms de 10 aos de duracin e historia de conducta antisocial previa al inicio del deterioro cognoscitivo. La neuropatologa no mostr hallazgos sugestivos de ECJ, GSS ni de enfermedad de Alzheimer. El diagnstico se realiz mediante estudio gentico, que constat una insercin anmala en el gen de la PrP. La demencia con paraparesia espstica: hace referencia a un cuadro clnico familiar consistente en una paraparesia espstica y demencia de inicio insidioso, entre la cuarta y quinta dcada de la vida, y curso progresivo entre 5 y 12 aos, en ausencia de mioclonias, sndrome cerebeloso ni actividad peridica en el electroencefalograma. La neuropatologa mostr abundantes placas de amiloide en crtex de predominio frontal, con prdida neuronal y gliosis, sin cambios espongiformes. Los tractos piramidales mostraron a nivel de tronco cerebral y medula espinal cambios vacuolares y desmielinizacin. Se atribuye a una mutacin en el codn 105 de la protena PrP. La demencia familiar con placas de amiloide PrP positivas: es el trmino acuado para catalogar de nuevo una demencia familiar que previamente haba sido diagnosticada de Alzheimer familiar. La demencia presenta una edad de inicio entre los 22 y 58 aos con una duracin entre 1.5 y 7 aos. Algunos de los afectados presentaban rigidez, temblor, disartria y excepcionalmente ataxia. El miembro de esta familia que inicio la demencia ms tardamente (58 aos) no mostr manifestaciones extrapiramidales describindose su afectacin cognoscitiva en forma de defectos amnsicos importantes, en la denominacin, orientacin y clculo. La neuropatologa constat una importante presencia de placas de amiloide con escasas degeneraciones neurofibrilares. Las placas de amiloide mostraron fuerte inmunoreactividad al antisuero para protena prinica y nula para la protena A4. La encefalopata espongiforme familiar asociada a nueva mutacin en el gen de la protena prinica: describe una nueva forma de demencia familiar de transmisin autosmica dominante. La demencia presenta su inicio entre la cuarta y quinta dcada de la vida, con una duracin entre 2 y 9 aos. La demencia viene caracterizada por cambios de la personalidad y defectos amnsicos, asocindose frecuentemente un sndrome parkinsoniano. El caso de

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mayor duracin presentaba una invalidez total a los 5 aos de evolucin y mioclonias en las fases finales sin registrarse actividad peridica en el electroencefalograma. El estudio neuropatolgico en 3 pacientes mostr cambios espongiformes importantes y prdida neuronal en las capas corticales profundas y en putamen, con mnima gliosis. Se identific una nueva mutacin en el codn 183 del gen de la PrP. La presencia de depsitos de PrP en casos de Gliosis Subcortical Progresiva ha apuntado la posibilidad de que, al menos, algunas formas de esta enfermedad formen parte del espectro de las enfermedades prinicas. No obstante, ante la revisin autocrtica de uno de estos trabajos cabr esperar ulteriores confirmaciones. Por otra parte, tambin se ha relacionado el origen prinico en algunas enfermedades mentales. 4.2. Patologas prinicas en animales En los animales, las enfermedades asociadas a los priones originan descoordinacin en los movimientos, ceguera o la muerte. Las ms conocidas son la Encefalopata Espongiforme Bovina (enfermedad de las vacas locas, registrada por primera vez en el ao 1984), causada por la alimentacin suplementaria del ganado vacuno con restos ovinos y caprinos que ya presentaban la enfermedad). Otra enfermedad manifestada en animales es el Scrapie (en ovejas y cabras), que no se transmite a los seres humanos pero s a los vacunos, capaces de transmitir la enfermedad a los seres humanos. Esta patologa tambin existe en felinos a pesar de que hay muy pocos casos registrados (la Encefalopata Espongiforme Felina), la Enfermedad del Desgaste Crnico (EDC) en ciervos y alces. Scrapie Esta patologa, que afecta a los ovinos y a los caprinos, fue la primera EET o patologa producida por priones reconocida en los mamferos. La transmisin experimental del Scrapie natural, que es el prototipo animal de las enfermedades prinicas humanas, fue demostrada en 1938. Fue descrita por primera vez en Inglaterra en el ao 1732, siendo desde entonces enzotica en el Reino Unido (Domnguez et al., 1998). Se considera endmica en muchos pases europeos y tambin ha sido reportada en diversos pases de otros continentes. Sin embargo, Australia y Nueva Zelanda han mantenido su condicin de pas libre de Scrapie debido a rigurosas medidas de control. La patognesis del Scrapie, que ha sido investigada en rumiantes y en modelos roedores, revela la existencia de una susceptibilidad gentica para estas patologas que, combinada con un componente infeccioso, determinara las caractersticas de presentacin de la enfermedad. Tambin ha sido transmitida experimentalmente a otros rumiantes, primates y gatos. La transmisin puede ocurrir en forma vertical y horizontal. As, la infeccin de los corderos ocurre en el momento del parto y posiblemente en el perodo prenatal. Las membranas fetales son una fuente importante de transmisin entre animales no emparentados, especialmente cuando las zonas de parto estn en reas confinadas. A pesar de que la causa del Scrapie reside en un agente infeccioso, es un gen ovino y caprino especfico, denominado Sip (Scrapie incubation period) el que influye en la duracin del perodo de incubacin y en la sensibilidad al Scrapie natural y experimental. El perodo de incubacin de esta enfermedad flucta entre los 14 y 22 meses. La mayora de los casos clnicos se presentan en animales entre los 2 a 5 aos de edad, siendo rara su presentacin en menores de 1 ao de edad. Los signos clnicos varan ampliamente en cada

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animal afectado y tienen un desarrollo muy lento. Los primeros en aparecer, incluyen cambios en el comportamiento y en el temperamento, a lo que sigue la tendencia del animal a rascar y frotar su cuerpo contra objetos fijos, para aliviar el prurito que se presenta. A consecuencia de esto hay prdida de lana, particularmente sobre el trax lateral, flancos y cuartos traseros. Otros signos clnicos evidenciables son la prdida de coordinacin, exagerada ingesta de lquido, prdida de peso, mordeduras en las patas y anomalas en el movimiento, frecuentemente acompaadas de temblores y convulsiones. Los signos clnicos pueden confundirse, especialmente en la fase temprana de la enfermedad, con los de otras patologas, como pseudorabia, rabia, encefalitis por Listeriosis, Maedi-Visna, ectoparasitismos, hipomagnesemia, cetosis e intoxicaciones. Al examen histopatolgico los cerebros muestran astrogliosis, vacuolizacin intracelular y prdida neuronal. No parece existir una relacin entre la cantidad de astrogliosis observada y la gravedad de las lesiones vacuolares, por lo que ambos cambios parecen representar respuestas primarias independientes. Encefalopata Espongiforme Bovina (EEB) Esta patologa fue descrita en el ao 1985, en un bovino Frison en el sur de Inglaterra. Se present como un sndrome neurolgico que se inici con hipersensibilidad crnica, descoordinacin marcada y cambio de carcter acompaado de comportamientos agresivos. Posteriormente en el mismo rebao se presentaron nuevos casos con los mismos signos clnicos. El anlisis histopatolgico de los cerebros de estos animales revel una gran similitud con los cerebros de los animales infectados con Scrapie. La confirmacin de que la EEB se origin debido a un agente transmisible asociado a Scrapie, se obtuvo al reproducir satisfactoriamente la patologa en ratones, mediante la inoculacin intracerebral de material infeccioso de EEB. La ausencia de un mtodo de diagnstico prctico y rpido, que permitiera la identificacin de animales en fases preclnicas oblig al sacrificio masivo de animales como medida preventiva, lo que hizo necesario profundizar en la etiologa, patogenia y obtencin de mtodos de diagnstico para esta enfermedad. La edad promedio de presentacin de la EEB es de 5 aos de edad, con un rango que va desde los 20 meses hasta los 18 aos de edad. El tiempo de incubacin hasta el inicio de los signos clnicos, fue estimado como mnimo entre 2,5 a 8 aos. La EEB tiene un inicio insidioso de la enfermedad clnica y usualmente un curso lento y progresivo. Los animales afectados presentan signologa nerviosa, que usualmente incluye cambios de comportamiento, aprehensin e hiperreactividad. Las vacas afectadas pueden ser reacias a entrar a la sala de ordea o pueden patear vigorosamente durante sta. En las vacas secas especialmente, la incoordinacin y debilidad de los miembros plvicos puede ser la primera caracterstica observada. Los signos neurolgicos predominan en todo el curso clnico de la enfermedad y pueden incluir diversos aspectos de alteracin del estado mental as como en el comportamiento, adems de anormalidades de posturas y movimiento. Sin embargo, los signos nerviosos ms comnmente reportados son: aprehensin, ataxia de los miembros plvicos e hiperestesia al tacto y sonido. Los animales afectados pueden estar parados con la cabeza agachada, el cuello extendido y las orejas dirigidas hacia atrs, con anormalidades en el paso, balanceo e hipermetra en los miembros traseros. La ataxia puede afectar tambin a los miembros torcicos, con una avanzada severidad de los signos locomotores y debilidad generalizada, resultando finalmente en cadas que pueden predominar en el cuadro clnico. La

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disminucin de la rumia, bradicardia y disritmias cardacas, aunque no son signos clnicos especficos, sugieren una alteracin del sistema nervioso autnomo (SNA). Caractersticas clnicas generales, como prdida de la condicin corporal y reduccin de la produccin de leche, pueden tambin acompaar la signologa nerviosa. La duracin de los signos clnicos antes de la muerte es de 1 a 6 meses. Al inicio de la enfermedad los signos pueden ser sutiles, variables e inespecficos. Algunos signos clnicos tempranos de EEB pueden mostrarse similares a los signos nerviosos de otras patologas como cetosis, hipomagnesemia, hipocalcemia, encefalitis por Listeriosis u otras encefalopatas. Los signos sutiles pueden generalmente ser exacerbados debido a estrs, como es el caso del transporte. Los cambios histopatolgicos ms notorios consisten en vacuolizacin intracelular y del neuropilo, prdida neuronal, astrogliosis y formacin de placas amiloides ocasionales. La ausencia de variacin observada en los patrones de vacuolizacin del tejido enceflico en el ganado afectado, tanto en infecciones naturales como experimentales, sugiri la posibilidad de que una nica cepa de prin pudiera ser la causante de la epidemia de la EEB, lo que tambin fu apoyado por las caractersticas electroforticas de la PrP 27-30. Esto a diferencia de lo ocurrido con las ovejas infectadas con Scrapie, donde se han podido definir 20 cepas distintas de priones. Sin embargo, en el ao 2003, fueron reportadas cepas distintas de EEB en Italia y Japn y en el ao 2004 en Francia, mediante una prueba de diagnstico rutinario (Western Blot). Esta tcnica mostr bandas de glicosilacin diferentes a las que convencionalmente se detectan en la EEB. Esto podra ser el resultado de una nueva variante del prin introducida en la alimentacin del ganado bovino o bien, una aparicin espontnea de ella. Diagnstico Los mtodos de diagnstico de la EEB ms utilizados actualmente, corresponden a tcnicas inmunolgicas, que presentan mayor sensibilidad y especificidad al detectar la PrPSc mediante el uso de anticuerpos especficos. Esto ha permitido, realizar el diagnstico de esta enfermedad en la ltima fase del perodo de incubacin, es decir, cuando las caractersticas clnicas y el dao neurodegenerativo an no se han manifestado. Estas tcnicas, incluso permiten trabajar con tejido cerebral con cierto grado de autolisis. Las pruebas denominadas rpidas (Western Blot, ELISA e Inmunohistoqumica), estn basadas en la deteccin inmunolgica de la protena prinica patgena que es parcialmente resistente a la proteinasa K y que, debido a su alta hidrofobicidad, se acumula en el SNC formando las SAF. De esta forma, utilizando anticuerpos monoclonales o policlonales dirigidos contra las PrP se puede detectar la PrPSc resistente a proteinasa K que est presente en los animales afectados con EETs. Tanto los Western Blot como los ELISA, requieren de procesamientos previos de las muestras, consistentes en la homogeneizacin de los tejidos en tampones adecuados y su posterior digestin con proteinasa K, lo que permite reconocer la PrPSc mediante la inmunoreaccin con el primer anticuerpo PrP especfico y la reaccin inmunolgica correspondiente, dependiendo del tipo de prueba utilizada. En el caso de la deteccin de PrPSc por inmunohistoqumica (IHQ), las muestras de tejido nervioso deben ser previamente procesadas y preparadas (fijadas en formalina e incluidas en parafina) para realizar los cortes histolgicos, que posteriormente son sometidos a la inmunoreaccin utilizando un primer anticuerpo PrP especfico y un mtodo de deteccin adecuado. Encefalopata transmisible del visn (ETV)

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Esta patologa, afecta al SNC de visones criados en granjas. Se detect inicialmente en USA en el ao 1947, no volvindose a presentar nuevos brotes hasta principios del ao 1960. Desde entonces se han descrito nuevos casos en Canad, Europa Occidental y en repblicas de la antigua Unin Sovitica. La fuente de infeccin es exgena, siendo expuestos los visones a travs de alimentos contaminados con priones. De esta forma, se cree que la causa de algunos brotes es la inclusin en la alimentacin, en los visones de crianza, de los desperdicios de mataderos y de cadveres de animales sin tratar. Sin embargo, an no ha sido posible demostrar como causa la alimentacin con material ovino o bovino infectado en todos los brotes. El perodo de incubacin para esta patologa en esta especie es en promedio de 7 meses. Mientras que las caractersticas clnicas pueden permanecer entre los 3 das y hasta 6 semanas. Entre los signos ms tempranos se observan un aumento de la suciedad de la madriguera y dispersin de residuos por toda la jaula. A medida que la enfermedad progresa, el animal se muestra ms excitado y manifiesta una descoordinacin severa, con espasmos pronunciados en los miembros traseros. La infeccin natural y experimental muestra una microvacuolizacin de la materia gris en el crtex cerebelar, cuerpo estriado y cerebro medio. Enfermedad del desgaste crnico (EDC) An cuando el origen de esta patologa no se ha dilucidado completamente, est se presenta como una EET que afecta a ungulados domsticos y salvajes. El primer caso se describe en 1967, en un ciervo mula (Odocoileus hemionus) cautivo en Colorado. La enfermedad se present como una prdida de peso crnica que terminaba con la muerte del animal. Prcticamente, todos los casos reportados se han presentado en USA y no se ha demostrado transmisin entre la EDC y otras EETs descritas en los animales o en el hombre. Esta patologa se presenta en animales de ambos sexos, entre los 2,5 a 7 aos de edad. Las caractersticas clnicas consisten en una prdida de peso progresiva, deshidratacin, apata, depresin, ataxia, cada de la cabeza y orejas, sialorrea, polidipsia y poliuria. Adems, se altera el comportamiento disminuyendo el temor a los humanos y la interaccin con otros individuos del grupo. El animal muere a los 6 meses de aparecer los signos clnicos. Los datos recopilados desde las epidemias de EDC en los ungulados cautivos, proveen una fuerte evidencia que la enfermedad es contagiosa y transmitida lateralmente. Sin embargo, el mecanismo exacto de transmisin es an desconocido. Microscpicamente se observan lesiones en el cerebro y en la mdula espinal con microcavitaciones de la sustancia gris y presencia de placas amiloides. Encefalopata Espongiforme Felina (EEF) Se diagnostic por primera vez en 1990 en un gato domstico en Inglaterra (Wyatt et al., 1990). Su incidencia en el Reino Unido es de 10 a 15 gatos infectados en un milln. Adems se han descrito casos en pumas, ocelotes y tigres. La transmisin de la infeccin se debera al consumo de alimento contaminado con tejidos de bovinos infectados con EEB. Las manifestaciones clnicas estn caracterizadas por alteraciones nerviosas progresivas como tremor muscular generalizado, ataxia, hiperreactividad, dilatacin pupilar, las que invariablemente terminan con la muerte del animal. La mayor parte de los casos diagnosticados han aparecido en individuos con una edad comprendida entre los 4 y 9 aos. El examen histopatolgico revela cambios confinados al SNC, que consisten en vacuolizacin en la materia gris del cerebro y medula espinal. Por otra parte, estudios inmunohistoqumicos han evidenciado la presencia de PrPSc en el cerebro y en la mdula espinal.

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5. Conclusin Las enfermedades de causadas por priones son, por mltiples razones, patologas sin precedente. Son enfermedades neurodegenerativas de carcter espordico, infeccioso y hereditario; el mecanismo de transmisin de stas contradice el Dogma Central de la Biologa Molecular ya que el agente etiolgico es capaz de replicarse a s mismo en ausencia de cido nucleico, y adems, viola el principio biolgico que establece que la secuencia de aminocidos de una protena determina de manera unvoca el plegamiento o estructura terciaria de sta. La generacin de estos nuevos conocimientos fue motivo del otorgamiento de dos premios Nobel; al doctor Carleton Gajdusek en 1976 por haber demostrado la transmisibilidad del kuru, y al doctor Stanley Prusiner en 1997 por descubrir la naturaleza qumica del agente causal de estas enfermedades. Sin embargo, el evento clave en el desarrollo de las EPRs, el cambio conformacional de la protena prin, permanece en el mbito de las hiptesis. De esta manera, se pone de manifiesto la necesidad de involucrar esfuerzos para la generacin y rectificacin de conocimiento concerniente a este fenmeno.

6. Bibliografa a. Textos Lehninger, Principios de Bioqumica Ediciones OMEGA Quinta edicin. Harper. Bioqumica Ilustrada Editorial Manual Moderno Dcimo stima edicin.

b. Electrnico

http://www.mad-cow.org/~tom/prion_evol.html http://www.sciam.com/askexpert/medicine/medicine14.html
http://www.sciam.com/0896issue/prion.html

http://www.hhmi.org/science/genetics/lindquist.htm http://www.hhmi.org/news/lindquist.htm http://www.bio.vu.nl/thb/users/ingeborg/Prion2.html http://www.cnb.uam.es/~biblio http://ourfood.com/bse.html http://www.mad-cow.org/00/nov00_late_news.html http://www-micro.msb.le.ac.uk/335/Prions.html http://www.life.anu.edu.au/viruses/Ictv/fs_prion.htm http://www.adeci.org.ar/educacion/priones.htm http://neurologia.rediris.es/congreso-1/conferencias/priones

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