Genoma Humano y su estudio

Dra. Tatiana Pardo G.

Laboratorio de Gentica Molecular Unidad de Gentica Mdica Fac. de Medicina, LUZ

Estructura del ADN

Estructura propuesta por Watson y Crick (1953). El esqueleto de la cadena est formado por las pentosas y los fosfatos de manera alterna. Las bases nitrogenadas se unen a los azcares y se proyectan hacia fuera de la cadena. Los nucletidos se unen covalentemente a travs de enlaces fosfodiester entre el azcar de un nucletido y el fosfato del siguiente. El enlace fosfodiester se refiere a las uniones formadas por la reaccin entre el grupo hidroxilo (-OH) del carbono 5 y 3 de la ribosa con el grupo fosfato. Una caracterstica muy importante de las bases nitrogenadas se ve reflejada en la estructura de doble hlice del ADN, ya que las dos cadenas polinucleotdicas permanecen juntas por la accin de puentes de hidrgeno que se forman entre bases nitrogenadas complementarias.

Restricciones estructurales

La complementariedad entre las obedece a las siguientes razones:

bases

Las purinas siempre se enfrentan a las pirimidinas. El emparejamiento entre los dos anillos fusionados de una purina con el anillo sencillo de una pirimidina aseguran dimensiones estables en la doble hlice de la molcula de ADN.
El tamao molecular de las bases. La ubicacin de los extremos en donde se establecen los puentes de hidrgeno. Las dos cadenas de ADN estn en disposicin antiparalela, es decir que van en direcciones opuestas y de esta manera se pueden mantener las hebras juntas.

ADN

ARN

PROTEINA

ARN
CAP CAP
AAAAAAA

AAAAA A RN m

AAAAAA

GENOMA HUMANO
TRADUCCIN

GENOMA HUMANO
CODIGO GENTICO

GENOMA HUMANO
LOCALIZACIN
Ncleo

Mitocondria

Clula

Diferencias entre G. Nuclear y G. Mitocondrial

G Nuclear G Mitocondrial

Tamao
N de Mol Dif. Forma

3000 Mb
22 (XX) o 23 (XY) Lineal

16,6 Kb
1 Molcula Circular

N total de Mol

23 en haploides 46 en diploides Histonas

Miles

Protenas asociadas
N de genes

Ninguna

30.000

37

Diferencias entre G. Nuclear y G. Mitocondrial

G Nuclear
Densidad ADN repetitivo 1/30 1/60 Kb Abundante

G Mitocondrial
1/0,45 Kb Escaso

Transcripcin
Intrones ADN Codificante Recombinacin Herencia

Individual
Presentes 1,5 % Presente Mendeliana

Policistrnica
Ausentes 95 % Ausente Materna

GENOMA HUMANO
FUNCION
1,5 % EXONES 98,5 % CODIFICADOR GENES NO CODIFICADOR

SEC EXTRAGNICAS INTRONES

GENOMA HUMANO
ORGANIZACIN ADN COPIA NICA
60% del GH

GENES

ADN COPIA REPETITIVA

40% GH

DISPERSO
30%

SINEs (SEC Alu) LINEs (SEC Kpn) MINISATLITE

ADN SATLITE
10%

ALFA SATLITE
(14-500 pb/VNTRs)
(1-13 pb/STRs)

MICROSATLITE

Variaciones en el Genoma
Mutaciones o polimorfismos
Puntuales
Deleciones

RFLPs (SNPs)
De longitud

Inserciones
Inversiones Expansiones

Mutaciones

Mutaciones

Mutaciones
Transicin: es la sustitucin de una purina por una

purina o de una pirimidina por otra pirimidina.

Transversin: es la sustitucin de una purina por una pirimidina o viceversa.

Mutaciones
Silenciosa: No hay alteracin de la funcin o de la

cantidad. Cambio de un aminocido por otro de igual

naturaleza o por el mismo aminocido.

Mutaciones
Sin sentido: producto inactivo o incompleto. Codn de terminacin prematuro.

Prdida del sentido: Producto defectuoso, Sentido

errado, cambio de un aminocido por otro.

Mutaciones
Error en el marco de lectura: se agregan o se

elimina una base o un grupo de bases que no es

mltiplo de 3.

Mutacin Puntual
5 6 7

A:

pro CCT
CCT pro

glu glu GAG GAG

GTG val GAG glu

S:

C:

CCT pro

AAG GAG lys glu

Gen del FVIII: Deleciones

Mutacin: Inversin de Secuencia

AATCCGATGCCGGAATATGACTCT TTAGGCTACGGCCTTATACTGAGA AATAGGCCGTAGCCATATGACTCT TTATCCGGCATCGGTACTGAGAGA

Mutacin tipo Inversin

F8A F8A 1 22 23 26

qter
1Mb

FVIII

100 Kb

FVIII

F8A F8A

qter

22 23 26

Mutacin: Expansin
Genes: FRAXA FRAXE Xq27.3 Xq27 CGG GCC
N: 6 56 CGG N: 6-25 GCC

FMR1

FMR2

Polimorfismos
RFLPs

Polimorfismos
De longitud

FUNDAMENTO DEL ANLISIS DE ADN

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Obtencin millones de copias de un fragmento mediante la amplificacin selectiva in vitro de ADN, basada en las propiedades de desnaturalizacin, renaturalizacin e hibridacin del ADN.

FUENTES DE OBTENCIN DE ADN

Sangre Manchas Mdula sea Piel Tejidos congelados. Tejidos cultivados. Pulpa dental Apndices pilosos con o sin bulbo Uas, Cutculas Orina, Heces Hisopado bucal, saliva Hisopados vaginales, rectales Lquido amnitico Lquido seminal Restos seos Restos calcinados Biopsias, Tumores

DIAGNSTICO MOLECULAR
(a travs de la vida)
Pre-implantacin

Pre-concepcin
Portadores

Fecundacin

Prenatal

Durante la vida
Neonatal Pre-sintomtico Post-sintomtico

Muerte
Post-mortem

Diagnstico Molecular de Enfermedades Hereditarias

Anlisis Directo (Mutaciones especficas)

Diagnstico Molecular de Enfermedades Hereditarias

Anlisis Directo (Mutaciones especficas)

Diagnstico Molecular de Enfermedades Hereditarias

Anlisis Directo (Mutaciones especficas)

Diagnstico Molecular de Enfermedades Hereditarias

Anlisis Indirecto (polimorfismos asociados)

Determinacin de vnculo biolgico

Paternidad* Maternidad* Hermandad To-sobrino Abuelo-nieto Entre primos hermanos Entre primos segundos Entre dobles primos segundos Gemelos idnticos

* Casos de Deficiencias

CASO DE PATERNIDAD: D1S80

Gracias.