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UTAD
2007
ii
NDICE
1 - INTRODUO .....................................................................................................................................5
2 - FISIOLOGIA E ENDOCRINOLOGIA DO CICLO STRICO ............................................................6
2.1 - FASES DO CICLO .................................................................................................................................9
2. 1. 1 - Pro-estro ...............................................................................................................................10
2. 1. 2 - Estro......................................................................................................................................13
OVULAO E PERODO FRTIL ......................................................................................................15
FECUNDAO ...............................................................................................................................16
2. 1. 3 - Diestro ..................................................................................................................................17
2. 1. 4 - Anestro .................................................................................................................................19
2.2 - FACTORES QUE INFLUENCIAM O INTERVALO INTERSTRICO ...............................................................21
3 - DETERMINAO DO PERODO FRTIL ......................................................................................22
3.1 - CRITRIOS SUBJECTIVOS: SINAIS CLNICOS E ALTERAES COMPORTAMENTAIS ...............................24
3.2 - DETERMINAES ENDCRINAS .........................................................................................................26
3.2.1 - Determinao dos nveis circulantes de LH ........................................................................27
3.2.2 - Determinao dos nveis circulantes de Progesterona ......................................................28
3.2.3 - Outras determinao: o estradiol..........................................................................................31
3.3 - CITOLOGIA VAGINAL ..........................................................................................................................31
3. 3. 1 - Tcnica de realizao de um esfregao vaginal ...............................................................36
MATERIAL NECESSRIO ................................................................................................................36
OBTENO DA AMOSTRA ..............................................................................................................37
PREPARAO E COLORAO DO ESFREGAO ..............................................................................37
OBSERVAO DA CITOLOGIA VAGINAL: TIPIFICAO DAS CLULAS ...............................................41
INTERPRETAO DA CITOLOGIA VAGINAL: ESTADIAMENTO DO CICLO ............................................47
DETERMINAO DO MOMENTO IDEAL PARA A BENEFICIAO ........................................................51
3.4 - OUTROS CRITRIOS SECUNDRIOS ...................................................................................................54
3.4.1 - Vaginoscopia e endoscopia vaginal .....................................................................................54
3.4.2 - Deteco ecogrfica da ovulao.........................................................................................55
3.4.3 - Impedncia das secrees vaginais.....................................................................................57
3.4.4 - Determinao da glucose nas secrees vaginais .............................................................58
4 - COMENTRIOS FINAIS...................................................................................................................58
5 - BIBLIOGRAFIA .................................................................................................................................60
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1 - INTRODUO
O maneio reprodutivo na cadela tem como principal objectivo a obteno de uma gestao
com um nmero de crias adequado a cada raa.
Na cadela, de um modo geral, a fertilidade ronda os 50 a 60%, um valor muito mais baixo do
que seria de esperar em condies ideais. Esta baixa fertilidade pode ser explicada por um
lado pela existncia de causas de infertilidade tanto no macho como na fmea, mas tambm
porque em cerca de 80% dos casos, est associada a um mau maneio de beneficiao, que
se reflecte num afastamento entre a monta (ou inseminao artificial) e o momento da
ovulao, contrariando assim uma eventual fecundao.
Um dos primeiros objectivos dos procedimentos relacionados com o maneio reprodutivo
determinar se a cadela est saudvel e se previsvel a obteno de uma fertilidade normal
para uma determinada beneficiao. Alm da idade, da histria reprodutiva anterior da
cadela e do macho, dever ainda ponderar-se uma avaliao ginecolgica, tanto mais
importante se a cadela for colocada reproduo pela primeira vez.
Mas os cuidados de maneio reprodutivo no se limitam aos aspectos clnicos prvios ao
acasalamento ou beneficiao. frequente todos os preparativos de uma beneficiao
acabarem por no se traduzirem na obteno de uma gestao com a prolificidade habitual
para essa raa por o maneio do cio no ter sido o mais correcto. De facto, existe uma ideia
generalizada por parte da maioria dos criadores de que o ciclo strico da cadela rgido, e
consequentemente o acasalamento deve ser realizado sem falta entre os dias 10 e 13
aps o incio do corrimento sanguinolento. Esta rigidez imposta no regime de beneficiaes
tem sido um dos principais responsveis por infertilidade aparente imputada a certas
cadelas, quando no final o proprietrio quem condiciona o contacto entre os parceiros aos
momentos menos adequados fecundao.
Para determinar o perodo frtil devemos desvalorizar critrios subjectivos, como a durao
do corrimento, a aceitao da monta ou o desvio lateral da cauda, e favorecer critrios mais
objectivos, de entre os quais destacamos a realizao de citologia vaginal e a determinao
das concentraes circulantes de progesterona.
a designao cio em linguagem comum engloba, no caso da cadela, as fases de pro-estro e estro,
ao contrrio do que acontece quando este termo aplicado s fmeas de espcies pecurias, em
que corresponde apenas ao perodo de estro.
O ciclo strico das cadelas apresenta caractersticas bastante distintas do das outras
espcies domsticas. A cadela uma fmea monostrica, ou seja apenas apresenta um
ciclo strico completo por cada poca reprodutiva. Alm disso, o seu ciclo caracteriza-se por
apresentar uma fase ltea de durao similar em fmeas gestantes e no-gestantes, e por
apresentar um perodo de anestro, ou quiescncia, entre dois ciclos consecutivos (Figura 1).
A durao total do ciclo strico muito varivel, no s com a raa mas tambm com a linha
gentica. Em mdia, as cadelas apresentam um ciclo a cada 6 meses, embora haja animais
com uma tendncia a apresentarem intervalos interstricos mais curtos (como algumas
linhas de Pastor Alemo e de Rotweiller, que mostram intervalos de 4 meses) ou mais
longos (como os de raa Husky Siberiano, que podem apresentar intervalos de 10 a 12
meses). Assim, no se considera que uma cadela que no apresente intervalos interstricos
de 6 meses seja potencialmente infrtil, desde que seja regular nos intervalos entre ciclos
consecutivos. Deve, isso sim, valorizar-se uma alterao na durao mdia do intervalo
entre cios para uma mesma cadela, pois geralmente acompanha uma patologia endcrina
ou reprodutiva.
Contrariamente ao que vulgarmente se cr, os ces no so uma espcie de reproduo
sazonal; apenas uma raa, o Basenji, e animais hbridos com coiote e com lobo evidenciam
um ritmo reprodutivo sazonal.
Figura 1 - Representao esquemtica da proporo relativa entre as diferentes fases do ciclo nas
cadelas.
As cadelas mantm os seus ciclos ao longo de toda a vida, embora o intervalo entre ciclos
possa vir a aumentar gradualmente em idades avanadas e a sua prolificidade diminua com
a idade. Os vrios factores que condicionam o arranque do ciclo strico na cadela so
apresentados no quadro 1.
INFLUNCIA NA CICLICIDADE
Atraso relativo na puberdade em animais de grande porte ou gigantes.
Idade
Parto
Estado hgido
- O hiperadrenocorticismo
- Doena sistmica grave ou prolongada
- Caritipo anmalo
- Anomalia estrutural congnita do genital
Alojamento
Nvel de actividade
e
hormonoterapia
2. 1. 1 - Pro-estro
O pro-estro o primeiro estadio do ciclo strico, e corresponde fase em que se observa o
desenvolvimento folicular nos ovrios. Esta fase tem uma durao mdia de 9 dias,
embora possa variar entre 1 a 21 dias. Durante este perodo verifica-se o aumento rpido
dos nveis sricos de estrognios, que acompanham o crescimento folicular at ao estadio
pr-ovulatrio, e que alcanam um pico no final do pro-estro. este aumento dos
estrognios
circulantes
que
determina
as
modificaes
clnicas,
morfolgicas
comportamentais que ocorrem nesta fase e que so reconhecidos pelo proprietrio. a ele
que caber, sempre, determinar o incio do cio na cadela.
So vrios os sinais clnicos que evidenciam o incio do pro-estro. Estes compreendem a
congesto e o edema vulvar e o posterior aparecimento de um corrimento vulvar
sero-sanguinolento. Este corrimento tem uma origem uterina, sendo causado pela
diapedese eritrocitria atravs do endomtrio e ruptura dos vasos endometriais. O
aparecimento deste corrimento utilizado para estabelecer a cronologia desse ciclo em
particular, correspondendo ao primeiro dia de pro-estro; esta fase termina quando a fmea
aceita a monta.
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observada nas outras espcies domsticas. A ovulao consecutiva a este pico de LH,
pelo que se designa de espontnea.
Na cadela, a progesterona produzida muito precocemente, ainda antes da ovulao.
sintetizada pelas clulas da granulosa luteinizadas, em folculos maduros. A concentrao
de progesterona comea a aumentar 24h aps o pico de estrognios do pro-estro. No
entanto, os nveis de progesterona no pro-estro so ainda relativamente baixos
(concentraes basais inferiores a 0,5 ng/ml at 24 a 72h antes do final do pro-estro,
quando se elevam acima de 1ng/ml), devendo recordar-se que a administrao de doses
elevadas de progesterona no pro-estro provoca a supresso do estro e da ovulao.
As feromonas so compostos qumicos importantes na fase de pro-estro e na demarcao
da transio pro-estro/estro. So produzidas pela mucosa vestibular sob a influncia do
estradiol e disseminadas por frequentes emisses de urina ou pelos corrimentos vulvares e
tm uma grande importncia na exibio do status sexual. Quando combinados com sinais
de comportamento, as feromonas aumentam a atraco sexual e estimulam a actividade
reprodutiva do macho. Os seus efeitos no se restringem apenas aos machos, pois podem
ter um efeito significativo na antecipao do estro ou na sincronizao de ciclos em outras
fmeas, particularmente em ambiente de canil, o que evidencia que as feromonas podem
influenciar a actividade dos centros de GnRH no hipotlamo, conduzindo, em ltimo grau, ao
aumento da actividade ovrica.
2. 1. 2 - Estro
O segundo estadio do ciclo, ou estro, caracterizado pela receptividade da fmea ao
macho, com reaco de imobilizao quando o co cheira a regio vulvar, afastamento da
cauda e elevao da vulva a fim de permitir a cobrio. Esta fase tem uma durao mdia
de 9 dias, mas tambm aqui se observa uma grande variabilidade individual, podendo durar
entre os 3 e os 21 dias. Embora haja vrios critrios para definir o estro, neste trabalho
consideramos que o estro se inicia com o pico de LH. Pouco tempo depois do pico de LH
ocorre a ovulao de ocitos de tipo I, que so captados pelas trompas, onde passam por
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mais
claro,
embora
esta
ltima
modificao
no seja
observada
de
progesterona
que
considerada
responsvel
pela
14
alterao
do
15
Figura 3 - Representao grfica dos fenmenos fisiolgicos que caracterizam as fases de pro-estro
e estro da cadela (Adaptado de Purswell e Parker, 2000).
FECUNDAO
A aco dos estrognios na mucosa das estruturas genitais est, na maior parte das
espcies, relacionada com a estimulao das secrees que favorecem a sobrevivncia e o
transporte dos gmetas. Os estrognios so ainda responsveis pela estimulao da
excitabilidade do msculo liso, provavelmente por via indirecta, atravs de receptores
adrenrgicos. Este efeito e a estimulao da aco ciliar favorecem o transporte ascendente
dos espermatozides e o transporte dos ocitos ovulados at ao local de fecundao, nos
oviductos.
Posteriormente, e em consequncia do aumento das concentraes plasmticas de
progesterona, surgem alteraes na constituio das secrees da mucosa ao longo do
trato genital, o que prejudica a migrao de espermatozides atravs da crvix. A
progesterona diminui tambm a excitabilidade do msculo liso, e provavelmente atrasa a
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passagem dos embries nas trompas, o que se reflecte num atraso na entrada de embries
no tero at que estejam reunidas as condies mais favorveis implantao.
Os efeitos gerais dos dois principais esterides ovricos so considerados igualmente
vlidos na cadela, apesar de, comparativamente s outras espcies, existir uma diminuio
precoce do ratio estrognios/progesterona, como resultado da luteinizao pr-ovulatria.
Deste modo, na cadela a sobrevivncia dos gmetas, o seu transporte e at a fecundao
parecem estar dependentes de um ambiente esteride misto em que os teores circulantes
de estrognios e de progesterona se encontram relativamente mais elevados em
comparao com o que acontece nas outras espcies domsticas.
Na cadela, semelhana do que se verifica nas outras espcies, a desproporo do ratio
estrognios/progesterona induzida pela administrao exgena de estrognios no perodo
ps-ovulatrio aumenta a motilidade das trompas e os embries chegaro aos cornos
uterinos demasiado cedo, antes do ambiente uterino progestagnico ter ocorrido. Este o
princpio que rege a terapia da induo do aborto com estrognios, embora actualmente
esteja desaconselhada a sua realizao.
2. 1. 3 - Diestro
O diestro a terceira fase do ciclo na cadela, e consecutiva ao estro. Comparativamente
s outras espcies de animais domsticos, em que se reconhece a existncia de uma fase
intercalar entre o estro e o diestro, geralmente designada de metaestro, no caso da cadela o
perodo correspondente formao do corpo hemorrgico e o acrscimo nos valores de
progesterona circulante que caracterizam o metaestro naquelas espcies no existe como
tal. Estes fenmenos integram o estro tardio, pelo que se considera habitualmente que o
metaestro, na cadela, est includo no estro.
A fase de diestro inicia-se quando a cadela rejeita o macho e nega a cpula, normalmente 6
a 8 dias aps o incio do estro, ou seja 8 a 10 dias aps o pico pr-ovulatrio de LH. Esta
fase est associada secreo e dominncia da progesterona e tem uma durao
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2. 1. 4 - Anestro
Basicamente, na cadela no existem diferenas clnicas aparentes entre esta fase do ciclo e
o diestro. Em ciclos gestantes esta fase definida como o intervalo entre o parto e o proestro e, por isso, incorpora normalmente a lactao. Em ciclos no gestantes, o anestro
a fase entre o fim da fase ltea e o incio do pro-estro.
O anestro tem uma durao mdia muito varivel; a durao desta fase que rege a
durao do perodo interstrico, j que as fases anteriores tm uma durao relativamente
constante. Assim, considera-se que o anestro possa ter uma durao de cerca de 1 ms,
em cadelas com intervalos entre cios de 4 meses, a seis meses, em cadelas que
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de
estradiol
comeam
subir,
sendo
detectadas
concentraes
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23
24
A aceitao do macho pela fmea outro dos critrios mais utilizados pelos criadores para
determinao do momento ideal para a cobrio. Como vimos anteriormente, o 1 dia do
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estro concide com o do pico da LH, o que significa que a fmea comea a aceitar o macho
2 dias antes da ovulao, ou seja, um mnimo de 4 a 5 dias antes do incio do perodo frtil.
No entanto, na prtica frequente observarem-se cadelas submissas que permitem a monta
a um macho mesmo no se encontrando no cio e fmeas muito dominantes que nem nas
imediaes da ovulao permitem a aproximao do macho ou s permitem a monta de um
macho com hierarquia social superior (nem sempre o eleito do proprietrio). Assim, o
critrio de aceitao do macho por parte da fmea um critrio demasiado falvel para
poder ser utilizado na determinao do momento ideal para a beneficiao.
Dada a impreciso dos critrios citados na determinao do momento ideal para cobrio,
nos ltimos anos tm-se desenvolvido algumas tcnicas mais precisas e que esto
actualmente ao alcance dos clnicos, como o caso da citologia vaginal e do doseamento
de progesterona.
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Figura 6 - Kit comercial para deteco dos nveis circulantes de LH em ces. Este teste apenas
indica se existem ou no valores de LH superiores a 1 ng/ml.
27
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uma
determinao
rigorosa
do
perodo
ovulatrio.
No
entanto,
os
mtodos
Figura 7 Kit semi-quantitativo para determinao dos teores circulantes de progesterona (A). A
determinao dos teores circulantes de progesterona obtida atravs da comparao
entre a colorao obtida num poo e a escala colorimtrica fornecida pelo fabricante (B).
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O OVULATION TEST, realizado numa membrana, montada num copo e tem uma durao
de mdia de execuo de 15 minutos. A adio dos reagentes ao soro ou plasma resulta
numa reaco que se traduz na evidenciao de uma colorao em gradientes de azul. A
cor obtida comparada com a de 3 padres e um branco, fornecidos pelo fabricante (Figura
7.B): o azul vivo corresponde a uma progesteronemia inferior a 1 ng/ml; um azul intermdio
indica que os valores de progesterona se encontram entre 1 e 2,5 ng/ml, o que corresponde
ao momento do pico de LH; o azul claro indicativo de valores compreendidos entre 2,5 e 8
ng/ml, correspondentes ao momento de ovulao; o branco corresponde a valores de
progesterona superiores aos 8 ng/ml.
Para determinar com alguma preciso o momento frtil, quando a dosagem de progesterona
revelar nveis de entre 4 a 10 ng/ml devem realizar-se dosagens quotidianas ou de 2 em 2
dias at se alcanarem os valores entre 15 a 25 ng/ml, que obtido normalmente 2 dias
aps ter sido ultrapassado o limite 10 ng/ml. Comparando estes valores com os intervalos
referenciados pelo kit facilmente perceptvel que uma das suas limitaes prticas o
limiar superior do kit ( 8 ng/ml) ser um pouco baixo relativamente s indicaes de
progesteronemia que delimitam o pico de fertilidade na cadela sobretudo se se pretende
inseminar (progesteronemia entre 10 e 15 ng/ml).
importante ter em conta que o doseamento de progesterona no permite determinar o fim
do perodo frtil, pois os seus valores continuam a aumentar aps a ovulao, e que os
valores elevados, superiores a 50 ng/ml, so atingidos aps um intervalo varivel. Na
evoluo habitual, necessrio um mnimo de 4 dias para os valores passarem de 10 a 50
ng/ml. H no entanto casos menos frequentes em que a evoluo lenta, sendo necessrio
por vezes mais do que uma semana para serem atingidos os nveis referidos ou, pelo
contrrio, uma evoluo rpida, em que so necessrios menos de 3 a 4 dias.
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32
33
34
+
Infrtil
Corrimento serosanguinolento
ou eritrcitos na citologia
Estado reprodutivo
do
+/
3.5 - 12 ng/ml
Esbranquiada, enrugada e
angulosa
Decrscimo notrio
80 a 100% (a)
Muitos
Infrtil ou raramente
frtil
+/
8 - 25 ng/ml
Manchas rosadas ou
avermelhadas e quase
plana
l0 a 80%
Progesterona circulante
incio
Esbranquiada,
ligeiramente enrugada
Pico
ou
decrscimo
Aumento progressivo
80 a 100% (a)
DIA DO PICO DE LH
poucos
30 a 100%
Indice de queratinizao na
citologia vagina
Leuccitos na citologia
PARMETROS
Quadro 2 - Estado dos vrios parmetros clnicos em cadelas com fertilidade normal em momentos especficos do cio em relao ao pico
pr-ovulatrio de LH (Adaptado de Concannon, 2000).
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inicia-se antes da ovulao e mantm as suas caractersticas para alm das 48 horas
correspondentes ao perodo frtil.
Finalmente, a citologia vaginal pode auxiliar no diagnstico de algumas alteraes
reprodutivas na cadela no-gestante, tais como anomalias do ciclo strico (cios silenciosos
ou cios fragmentados, cios encurtados, cios anovulatrios, pro-estro ou estro prolongados),
na confirmao da existncia de sndrome do ovrio remanescente ou ainda no diagnstico
de infeces na vagina e tero (vaginite, hiperplasia qustica do endomtrio, metrorragia) ou
neoplasias vaginais (como o tumor venreo transmissvel ou o carcinoma das clulas de
transio).
MATERIAL NECESSRIO
- Zaragatoas esterilizadas de algodo (basto com 15 cm)
- Lminas de vidro limpas e desengorduradas
- Fixador (metanol a 95%, lcool puro (etanol a 100%), ou um spray comercial para
fixao citolgica)
- Solues de colorao (corantes derivados do mtodo Romanowsky: Diff-Quick; MayGrunwald Giemsa ou Wright)
- Soluo de colorao tricromtica (Hematoxilina de Harris e soluo de Shorr).
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OBTENO DA AMOSTRA
Os melhores esfregaos so os que se obtm atravs da recolha de material na vagina
cranial.
Os procedimentos necessrios para recolher uma amostra so os seguintes:
1. Humedecer a extremidade da zaragatoa com uma ou duas gotas de soluo
fisiolgica salina estril.
2. Com uma mo, separam-se os lbios vulvares, e introduz-se a zaragatoa
cuidadosamente pela comissura dorsal da vulva (Figura 9.A). A utilizao de um
espculo no necessria. A zaragatoa direccionada em posio quase vertical,
comprimindo-se ligeiramente contra o tecto da vagina a fim de evitar o contacto com
o vestbulo e a fossa do cltoris (Figura 9.B). Deve ter-se em conta que no se deve
recolher material a partir da fossa do clitris: as suas clulas apresentam uma
morfologia diferente da do epitlio vaginal (Figura 10). Alm disso, a introduo da
ponta da zaragatoa neste local doloroso para o animal.
3. Depois de ultrapassada a regio vestibular, a zaragatoa deve avanar em direco
craneo-dorsal at transpor o arco isquitico e alcanar o canal vaginal caudal (Figura
9.C). Realiza-se ento a recolha de material, rodando com suavidade a zaragatoa
para ambos os lados.
4. O material recolhido cuidadosamente espalhado numa lmina, rolando a zaragatoa
de um extremo ao outro da lmina sem a comprimir ou esfregar, para no danificar
as clulas. Habitualmente, realizam-se por cada lmina 2 a 3 linhas separadas de
extenso e duas a trs lminas por cada zaragatoa (Figura 11.A e 11.B).
importante, caso se pretenda seguir um ciclo strico com preciso e detectar variaes
subtis no esfregao, que seja sempre a mesma pessoa a realizar o procedimento. Deste
modo minimizam-se possveis influncias subjectivas associadas ao operador, quer no que
respeita execuo da tcnica, quer leitura e interpretao das lminas.
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Figura 9 Realizao de uma citologia vaginal em cadela. Afastando os lbios vulvares (A), a
zaragatoa introduzida em direco ascendente (B) at ultrapassar a regio vestibular. Ao
atingir o canal vaginal caudal a zaragatoa rodada para obter material exfoliado (C).
Figura 11 Realizao de uma citologia vaginal em cadela: deposio do material na lmina. Sem
exercer demasiada presso, o material recolhido na zaragatoa deve ser transferido, por
rolamento, para a superfcie da lmina (A); habitual realizar duas a trs linhas de
deposio de material citolgico (B). Sempre que possvel, devem realizar-se duas
lminas de cada animal.
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Para a fixao pode utilizar-se quer metanol a 95% (imergir a lmina por 10 a15 vezes, ou
deixar em imerso por 5 minutos), quer alcol-ter (50:50 v/v) ou mesmo acetona fria (a
4C). Pode ainda utilizar-se um fixador comercial para citologias (citospray), o que permite a
conservao do esfregao por perodos prolongados antes de ser corado. O citospray deve
ser aplicado com a citologia ainda fresca; caso se opte por esta fixao, as lminas devem
ser novamente mergulhadas em metanol ou em alcool-ter antes de prosseguir o
processamento.
A colorao do esfregao uma etapa importante, j que deve permitir uma correcta
identificao dos diferentes tipos de clulas. Podem ser utilizados dois tipos de colorao:
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tintorial, a diferenciao das clulas epiteliais vaginais deve basear-se tambm na sua
morfologia: tamanho, citoplasma, aspecto e forma do ncleo.
Quadro 3 Mtodos de colorao citolgica que podem ser aplicados em citologia vaginal
Mtodo
Diff-Quick
Execuo
Imergir 9 a10 vezes em cada uma das trs solues, por esta ordem:
May-Grunwald
Giemsa
Cobrir todo o esfregao com o corante May-Grunwald e deixar incubar durante 1 min.
Remover o excesso e colocar soluo tampo deixando repousar durante 1 min.
Lavar e adicionar o corante Giemsa, deixando a incubar durante 10 min. Lavar com
gua corrente.
Wright
5 minutos
lcool a 70%
10 imerses
lcool a 50%
10 imerses
gua destilada
10 imerses
Hematoxilina de Harris
3 minutos
gua destilada
Uma passagem
lcool amoniacal*
1 minuto
gua destilada
Uma passagem
lcool a 70%
Uma passagem
lcool a 95%
Uma passagem
Corante de Shorr
3 minutos
lcool a 95%
Uma passagem
lcool absoluto
Uma passagem
Aps a colorao, a lmina deve secar-se cuidadosamente com uma toalha de papel. O
esfregao deve ser avaliado com uma objectiva de 10 a 20x (o que corresponde a
ampliaes de 100 a 200x) para determinar se as clulas esto correctamente coradas e
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para realizar o diagnstico. Se as clulas parecem demasiado claras a lmina pode ser
novamente imersa nas solues de colorao, pela mesma ordem, excluindo o passo inicial
no metanol ou no alcool. Para realizar o estadiamento do ciclo raramente se recorre
objectiva de imerso (objectivas de 100x); no entanto, esta poder ser utilizada a fim de
procurar bactrias ou espermatozides na lmina.
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que este tipo de clulas raramente aparece no esfregao vaginal. Estas clulas apresentam
uma proporo ncleo/citoplasma elevada, um ncleo redondo e citoplasma basfilo e
pouco abundante.
Figura 13 Aspecto morfolgico de uma clula parabasal corada pelo Wright ( esquerda) e pela
tcnica de Harris-Shorr ( direita).
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- As clulas intermdias so clulas que variam no seu tamanho e forma, mas que
habitualmente tm um dimetro 2 a 3 vezes superior ao das clulas parabasais. So muitas
vezes chamadas de clulas em ovo estrelado. So adicionalmente classificadas em
clulas intermdias pequenas, de contornos arredondados ou ovais, citoplasma mais
abundante e ncleo proeminente (Figura 14).; e em clulas intermdias grandes tambm
designadas de superficiais intermdias, cujo citoplasma apresenta forma poligonal, bordos
irregulares e angulosos, pequena proporo ncleo/citoplasma e ncleo pequeno e irregular
(Figura 15). Estas ltimas so por vezes confundidas com clulas superficiais, dada a
semelhana de tamanho. No entanto, ambas as clulas intermdias tm ncleo evidente,
semelhante ao de uma clula parabasal, embora o citoplasma v sendo gradualmente
maior, o que faz diminuir a relao ncleo/citoplasma. A sua afinidade tintorial varivel,
tanto podendo ser basfila como acidfila, apresentado habitualmente maior acidofilia na
poro mais interna do citoplasma.
Figura 14 Aspecto morfolgico de uma clula intermdia pequena corada pelo Wright ( esquerda)
e pela tcnica de Harris-Shorr ( direita).
Figura 15 Aspecto morfolgico de uma clula intermdia grande corada pelo Wright ( esquerda) e
pela tcnica de Harris-Shorr ( direita).
43
Figura 16 Aspecto morfolgico que as clulas superficiais podem assumir, coradas pelo Wright (
esquerda) e pela tcnica de Harris-Shorr ( direita).
Alm das clulas epiteliais vaginais, pode encontrar-se um nmero variado de outras clulas
no esfregao vaginal:
44
Figura 17 Clula metastrica corada pelo Diff Quick ( esquerda) e pelo Wrigth ( direita).
45
- O termo clulas espumosas (ou Foam-cells) tem sido uma designao atribuda a
clulas parabasais ou intermdias que apresentam numerosos vacolos citoplasmticos
(Figura 18), e que so habitualmente observadas num esfregao nos primeiros dias do
diestro e durante o anestro. O seu significado ou funo so desconhecidos.
Figura 18 Clula espumosa (Foam cells) corada pelo Diff Quick ( esquerda) e pelo Wrigth (
direita).
46
mais
nuclolos
ntidos,
podendo
ser
multinucleadas
apresentar
vacolos
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50
Quadro 5 - Resumo das relaes entre os parmetros endcrinos e os dados colhidos da citologia
vaginal da cadela ao longo do seu ciclo strico.
Fase do ciclo
Pro-estro
Incio
(9 d)
Fim
Anestro
Cl. epiteliais
Eritrcitos
Neutrfilos
Fundo
+++
++
Muco
Parabasais e
intermdias
Pico de estrognios
Pico de LH
Intermdias
grandes e
superficiais
Lmpido
90% de clulas
superficiais
+/-
Lmpido
estrognios
(9 d)
Citologia Vaginal
estrognios
[Ovulao]
Estro
Diestro
(60 d)
Perfil endcrino
progesterona
Incio
progesterona
superficiais
intermdias e
parabasais
+/-
++
Muco
Fim
progesterona
Intermdias (-) e
parabasais (+)
+/-
muco
Parabasais
+/-
Pouco muco
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Quadro 6 - Previso do perodo frtil com base na associao dos valores de progesterona circulante
e nos dados da citologia vaginal (Adaptado de Kustritz, 2006).
PROGESTERONA (NG/ML)
< 1.0
1.0 - 1.9
2.0 - 2.9
3.0 - 3.9
4.0 - 10.0
EVENTO
Anestro ou pro-estro
Faltam 3 dias para a ovulao
Faltam 2 dias para a ovulao
Falta 1 dia para a ovulao
Dia da ovulao
Momento ideal para beneficiar: 2 dias aps a
ovulao
Diestro
De um modo geral, pode dizer-se que o maneio do perodo de cio na cadela com o objectivo
de obter uma gestao depende da tcnica de beneficiao que se pretende utilizar. ela
que determina a amplitude do perodo que se poder usar para a cobrio ou a inseminaco
artificial, pois cada regime apresenta as suas especificidades e so elas que determinam o
tempo de sobrevivncia do espermatozide no genital da cadela e por consequncia a
probabilidade de ocorrer fecundao.
A monitorizao do ciclo strico compreende assim a realizao sistemtica de citologias
vaginais, que devem ser executadas a cada 2 a 4 dias desde os primeiros dias do proestro,
at ser constatada uma percentagem de queratinizao superior a 70% (clulas
superficiais). Nesse dia deve ser iniciado o doseamento de progesterona. Vrios trabalhos
ilustram que durante o pico de LH os valores de progesterona alcanam os 2,5 ng/mL,
atingindo os 10 ng/mL durante a ovulao, de cerca de 10 a 20 ng/mL durante o perodo de
maturao e entre 20 a 40 ng/mL no perodo de mxima fertilidade. Assim, quando os
valores de progesterona subirem acima dos valores basais, habitualmente acima de 2
ng/mL, este dia deve ser identificado como o dia 0 ou seja, o dia do pico de LH. A partir
deste dia os doseamentos devem realizar-se de 2 em 2 dias. (Figura 24)
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Figura 24 Esquema resumido das principais alteraes endcrinas e citolgicas tpicas da fase
estrognica, na cadela, e sua relao com o perodo frtil (Adaptado de Lofstedt;
http://www.upei.ca/lofstedt/opence/wait.html).
Considerando-se que, numa cadela com ciclo padro (ou seja, com uma durao standard
de pro-estro e estro), o perodo potencial de fertilidade se encontra entre os 3 dias antes e
os 7 dias depois do pico de LH, poderemos ainda precisar que o seu pico de fertilidade se
encontra entre:
- os dias 3 e 6 depois do pico de LH, se for submetida a um regime de monta natural ou a
inseminao artificial com smen fresco, devendo realizar-se um total de 2 a 3 cobries,
com 2 a 3 dias de intervalo (ie nos dias 3 e 6 ou nos dias 2, 4 e 6 ps-pico de LH).
- os dias 4 e 6 depois do pico de LH, se se realizar uma inseminao com smen
refrigerado. Neste tipo de IA h a considerar a diminuio de motilidade e de longevidade
dos espermatozides (3 dias), comparativamente ao ejaculado fresco do mesmo macho,
havendo a necessidade de grande preciso na determinao do perodo ovulatrio. Devem
ser efectuadas 2 inseminaes com intervalo de 48 h (ou seja, nos dias 4 e 6 ps-pico de
LH).
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- os dias 5 e 6 depois do pico de LH, se for inseminada com smen congelado. O smen
descongelado tem uma longevidade de apenas algumas horas. A inseminao deve ento
decorrer quando a maturao dos ocitos estiver terminada. Neste caso tambm devem ser
realizadas 2 inseminaes com 24h de intervalo (nos dias 5 e 6 aps pico de LH), ou seja,
no perodo de maior fertilidade.
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devido luteinizao da sua parede (Figura 25). Aps a ovulao, e apresentando uma
ecotextura varivel de animal para animal, os folculos mudam gradualmente de estruturas
anecognicas delimitadas por tecido regularmente ecognico, para uma populao de
estruturas de ecogenicidade mista (Figura 25). Esta alterao, apenas perceptvel por um ou
dois dias, pode ser detectada com maior exactido se os ovrios forem examinados
diariamente por ecografia. Deve ainda ter-se em conta que este aspecto ecognico
transitrio e que rapidamente os corpos lteos revelam a presena de uma cavidade central,
apresentando um centro anecognico 24 a 48h mais tarde. Nesta fase a diferenciao com
folculo pr-ovulatrio ou anovulatrio nem sempre possvel. Embora os corpos lteos
apresentem paredes mais espessadas que os folculos pr-ovulatrios, a diferenciao
difcil e para um operador menos experiente no possvel a partir de um exame nico
determinar a ocorrncia de ovulao. Alguns dias aps a ovulao a parede do corpo lteo
torna-se progressivamente mais espessa. Todavia, os corpos lteos podem assumir uma
ecogenicidade varivel que pode no diferir muito da ecogenicidade do estroma ovrico.
Tambm o edema do tracto reprodutivo durante o pro-estro pode ser apreciado ecografia
como uma diminuio da ecogenicidade do aparelho genital.
Figura 25 Associao entre o aspecto morfolgico das estruturas dominantes no ovrio (folculos
vs. corpos lteos) e a imagem no ultrassonograma. A imagem da esquerda foi obtido
numa cadela ao 8 dia de cio, e o da direita ao 2 dia do diestro (identificado pela citologia
vaginal).
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4 - COMENTRIOS FINAIS
O estadiamento do ciclo strico na cadela um objectivo importante quer na prtica clnica
quer na gesto reprodutiva nesta espcie animal. Este objectivo no se resume aplicao
da obteno e interpretao da citologia vaginal e/ou da determinao dos teores circulantes
de progesterona. No entanto, estas duas tcnicas quando realizadas em conjunto so bons
auxiliares do diagnstico clnico, no apenas no estadiamento do ciclo e no maneio da
beneficiao, mas tambm no clculo da data de parto, no estudo de ciclos anmalos, no
diagnstico de situaes clnicas como a vaginite e algumas doenas uterinas e ovricas,
quando se pretende a administrao de frmacos especficos com aco sobre genital,
como na induo do aborto ou de um ciclo, e ainda no diagnstico de infertilidade.
Relativamente a esta ltima, uma generalizao possvel a de que a maior parte das
cadelas que se apresentam na prtica clnica com queixa de infertilidade so normais,
saudveis e frteis, e que a sua aparente infertilidade est directamente associada ao
facto de o momento de acasalamento no estar dependente do seu critrio, mas antes ser
determinado pelo seu proprietrio. Este geralmente possui um deficiente conhecimento da
fisiologia do ciclo da cadela, e rege-se por pressupostos ou generalidades ouvidos a
entendidos no assunto.
A monitorizao adequada do ciclo strico de cada cadela individualmente permite estimar
com preciso o momento adequado para a beneficiao. Deste modo ser possvel garantir
uma boa taxa de fecundao e de prolificidade. Adicionalmente, permite no s o maneio da
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5 - BIBLIOGRAFIA
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Proceedings on-line, [acesso a partir da pgina http:www.vin.com; ltimo acesso em
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Gestation. In:
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Linde C, Karlsson I. (1984). The correlation between the cytology of the vaginal smear and
the time of ovulation in the bitch. J Small Anim Pract 25:77-82.
Lofstedt,
R.
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Reproductive
physiology
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artificial
insemination
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